细菌性疫苗的生产工艺

菌种的选择
• 菌种必须具有特定的抗原性，能使机体诱发特定 的免疫反应；菌种应具有典型的形态、培养特性 和生化特性，并在传代的过程中，能长期保持这 些特性；菌种应易于在人工培养基上培养；制备 灭活菌苗，菌种在培养过程中应产生较小的毒性； 制备活菌苗，菌种在培养过程中应无恢复原毒性 的现象；制备毒素，菌种在培养过程中应能产生 大量的典型毒素。
• ⒊PH值
• 同一细菌能在不同的PH值下生长。培养的PH值 不同，细菌的代谢产物有可能不同。因此，在 培养细菌时，应严格控制培养基的PH值，以使 它们按预定的要求生长、繁殖和产生代谢产物。
• ⒋光线
• 制备生物制品的细菌，一般都不是光合细菌， 不需要光线的照射。故培养不应在阳光或X射
线下进行，以防止核糖核酸分子的变异，从而
半数有效量常以效应指标命名，如效应 指标为死亡，则成为半数致死量（LD50）
Ending….
法将病原菌杀死后仍保持
疫活菌苗等。制备活菌苗
免疫原性可制备死菌苗。
的关键在于获得减毒或无
常用的死菌苗有霍乱、伤
毒菌株，但该菌株应保持
寒、副伤寒甲、乙混合菌
免疫原性。活菌苗接种后， 苗、百日咳菌苗等。死菌
在体内有一定的生长繁殖
苗大多需要多次接种才能
能力，类似经型或隐性感
获得较好的免疫效果。为
染。一般只需接种一次，
细胞培养，pH=7.4,与人体血液等渗，主要成
分为磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠及氯化
钾。
杀菌
•
灭活疫苗制剂在制成原液后需要用物理或化学
方法杀菌，各种菌苗所用的杀菌方法不相同，但杀
菌的总目标是彻底杀死细菌而又不影响菌苗的防病
效力。以伤寒菌苗为例，可用加热杀菌、甲醛溶液 杀菌、丙酮杀菌等方法杀死伤寒杆菌。我国多采用
菌种制备
• 菌种使用前应进行培养特性、血清学特性、 毒力试验、毒性试验、抗原性试验、免疫 力性试验的检定。
• 一代种子：冻干菌种接种于适宜的培养基 上，于37℃±1℃培养一定的时间。wenku.baidu.com
• 二代种子：一代种子接种于适宜的培养基 上，于37℃±1℃进行扩大培养。
• 菌种开启后用于生产时不能超过规定的传 代数。
减少死菌苗的接种次数，
且需量较小，但引起的免
现常将不同种类的死菌苗
疫效果好，且能维持较长
作合理混合，制成联合菌
时间。
苗，如伤寒菌、甲、乙型
副伤寒菌混合的三联菌苗。
类毒素
• 又称减力毒素，变性毒素。一 些经变性或经化学修饰而失去 原有毒性而仍保留其免疫原性 的毒素。医学微生物学中将类 毒素定义为：将细菌外毒素用 0.3%~0.4%甲醛处理脱去其 毒性，保存其免疫原性即为类 毒素
改变细菌的生物学特性。
收菌
• 固体培养法培养的细菌，在采集时应逐瓶检验，
污染杂菌的废弃，未污染的将军苔刮入含PBS
的大瓶中。液体培养时，将培养液直接收集到
大瓶或其他容器中，逐瓶进行无菌试验，污染
杂菌的废弃。
°°
• PBS:全称Phosphate Buffered Saline.在医 学词汇中表示磷酸盐缓冲液，用于分子克隆及
培养
• 根据不同的菌种和要求选择适合的培养基，常用的 培养方法有固体培养法和液体深层培养法。大规模 生产多采用液体深层通气培养法。细菌培养时应注 意下述4种因素的控制。
• ⒈气体
• 各种细菌在生长时对痒的要求不同。在培养特定的 细菌时，必须严格控制培养基环境的氧分压。
• ⒉温度
• 致病菌的最适培养温度大都接近人体的正常温度 （35~37℃）。在制备菌苗时，必须先找出菌种的 最适培养温度，在生产工艺中加以严格控制，以获 得最大的产量和保持细菌的生物学特性和抗原性。
细菌性疫苗与类毒素的 生产工艺
制作人：
细菌性疫苗
• 对某一特定传染病产生或增加 人工免疫力的制剂,包括死亡的 微生物(死毒)、活的但减弱其毒 性的(弱毒)以及活的毒性充分的 (强毒)三种 。一般分为活菌苗 及死菌苗两类。
分类
• 活菌苗：常用者有预防结 • 死菌苗：用化学或物理方
核病的卡介（BCG）、鼠
• 制备菌苗和类毒素的菌种，应该是生物学特性稳 定，能获得安全性好、效力高的生物制品的菌种。
培养基的营养要求
• 除碳源、氮源和各种无机盐类等培养微生 物所需要的一般营养要素外，由于某些微 生物生理上的特殊性，往往需要某些特殊 营养物才能生长。例如结核杆菌需以甘油 作为碳源；有些分解糖类能力较差的梭状 芽孢杆菌需以氨基酸作为能量及碳与氮的 来源。培养致病菌时，在培养基中除应含 有一般碳源、氮源和无机盐成分外，往往 还需添加某种生长因子。
稀释、分装和冻干
• 经杀菌的溶液，一般用含防腐剂的缓冲生 理盐水稀释至所需浓度，然后在无菌条件 下分装于适当的容器，封口后在2～10℃保 存，直至使用。有些菌苗，特别是活菌苗， 亦可于分装后冷冻干燥，以延长它们的有 效期。
• ED50（半数有效量）：指在量反应中能引起 百分之五十最大反应强度的药物剂量；在 质反应中是指引起百分之五十实验动物出 现阳性反应的药物剂量。
典型且无杂菌。 3、凝集试验 用相应血清做定性凝集试验，呈阳性反应。
4、无菌试验 需氧菌、厌氧菌及真菌试验呈阳性。 5、免疫力试验 以一定菌数的剂量免疫小鼠，再用
致病菌攻击小鼠，观察并记录小鼠死亡数，计算 ED50或LD50结果，达到要求即合格。 6、原液保存 2~8℃保存。 自采集之日起有效期一般为3～4年
甲醛作为杀菌剂，甲醛的终浓度不超过1 ％（体积 分数，ml/ml），置37℃一定时间或2~8℃一定时间
杀菌。
• 杀菌后的原液还要进行无菌检查，方法是：取样 接种于不含琼脂的硫乙醇酸盐培、养基琼脂斜面及
碱性置各1支，置37℃培养5天，应无本菌生长。
原液检定与保存
1、浓度测定 应按《中国细菌浊度标准》测定浓度 2、镜检 涂片染色镜检，至少观察10个视野，应该菌形