动物实验的基本操作方法

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腹腔注射要点
⑴ 针头刺入部位不宜太接近上腹部或太深，以免刺 破内脏； ⑵ 针头与腹腔的角度不宜太小，否则容易刺入皮下； ⑶ 所用针头不要太粗，以防药液注射后从注射针孔 流出。注射后用棉球按一下注射部位。为避免注射后 药液从针孔流出，也可以在注射时先把针头在皮下。 向前推3-5mm，再将注射器沿45°角斜向穿过腹肌进 入腹腔。
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实验动物的给药途径和方法
用左手拇指和食指抓住鼠两耳和头部皮肤， 将鼠抓持在手掌内，使其腹部向上，头部 向上有一定的倾斜度，右手持注射器，从 小鼠口角插入口腔，压其头部，使口腔和 食管成一直线，再紧沿上腭和咽后壁慢慢 插入食管，使其前端到达膈肌位置，然后 把药液灌入胃内。灌时若很通畅，表示针 头已进入胃内；若不通畅，动物有呕吐动 作或强烈挣扎，表示针头未插入胃内，要 立即拔出并按上述方法重操作。
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实验动物的给药途径和方法
针尖很容易刺穿血管的；推药时，要缓 推。要注意不能有气泡进入，否则将导 致动物死亡。注射完毕拔出针头，随即 用左手拇指按住注射部位，右手放下注 射器，取一棉球按压注射部位，使血液 和药液不流出。至于能否穿进，个人手 感如何，全靠自己啦。多练习，一定很 快掌握的！
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实验标本的采集方法
1、实验动物血液的采集
左手捏住针头，右手抽动注射器，刚开 始慢一点，约有0.1ml血进入针管时可以 快一点，一般抽取0.4ml即可。有时抽取 的过程中上血会一下子止住，这个时候 小心地晃动一下针头或是左手轻捏老鼠 的身体会好一点，但是动作一定要轻， 如果反复试过无效的话就要将针头拔出 重新穿刺。
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实验动物的麻醉
1、吸入麻醉 异氟烷（Isoflurane）为恩氟烷的异构体， 为无色的澄明液体，易挥发，具有轻微气味， 属吸入性麻醉药，麻醉诱导和复苏均较快。 麻醉时无交感神经系统兴奋现象，可使心脏 对肾上腺素的作用稍有增敏，有一定的肌松 作用。在肝脏的代谢率低，故对肝脏毒性小。 吸入麻醉异氟烷的雾化器要严格校准以使能 准确控制投入的麻醉剂的浓度。
在技能练习中慢慢体会。
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如何标记小鼠
耳钉标记法：用左手食指及拇指抓紧鼠 左耳及左半边脸和颈部，背部朝上，用 酒精棉擦拭一下右耳，右手持装好耳钉 的耳钉夹，将耳钉开口夹住尽量平展的 右耳，最好夹住耳朵中部到根部的位置 防止太边上容易脱落，用力握紧耳钉夹， 使耳钉尖端扣入凹槽。注意动作要轻要 稳以防用力过猛扯坏小鼠的耳朵；耳钉 有数字的一面尽量朝外方便读数。建议 两个人共同完成。
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实验动物的给药途径和方法
2、注射给药
腹腔注射（ip） 用左手大拇指及食指抓住动物两耳及头 部皮肤，腹部朝上，必要时可用左手无 名指及小指夹住鼠尾，为避免伤及内脏， 应尽量将动物头处于低位，使脏器移向 横膈处，右手持注射器从下腹左或右侧 向头部方向刺入腹腔，抽注射器，如无 回血或尿液，表明针头未刺入肝、膀胱 等脏器，即可进行注射。
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尾静脉注射的 注意要点 注射前尾静脉尽量充盈；针 头刺入后，务必使其与血管 走行方向平行
操作者要动作轻快而熟练，争取一次成功
当针头进入顺利无阻时，要把针头 和鼠尾一起固定好，切勿晃动，以 免出血造成血肿或溶液溢出；注射 部位尽量选用尾下1/4-1/3处
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实验动物的给药途径和方法
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肿瘤细胞皮下接种
接种时鼠体尽量拉直，皮肤拉平，由裸鼠体 侧腰部稍靠上的部位进针，要保证与接种点 的距离小于针头的长度，向头部方穿行，不 能刺到皮内或者刺破肌肉层，当针头到达接 种位点时注射，退出针头，这样操作的目的 是为了避免漏液和减少污染。针头在皮下穿 行一段后，接种点离进针点较远，最大限度 减少污染的可能。其实熟练后，不需要皮下 穿行也不会漏液，主要是避免污染。
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实验动物的给药途径和方法
2、注射给药
静脉注射（iv） 小鼠一般采用尾静脉注射 1、固定： 用小鼠固定器将小鼠固定好, 将尾巴拉直，绷紧，这是成功的第一步。
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实验动物的给药途径和方法
2、血管的选择：小鼠尾部有三条静脉， 左右两边的静脉比较浅，容易穿刺；中 间一条位置较深，建议不选择。穿刺先 远后尽，不要一开始就从尾根部，这样 的好处是万一一次扎不进，还可以继续 使用此血管。选择尾下1/4-1/3处比较好 （约距尾尖2-3cm，因为尾梢端皮薄静脉 浅，易于刺入；但不可离尾尖太近，防
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灌胃抓法 要点
这种抓法不要抓得太紧，以 免颈部皮肤向后拉，勒住食 管，灌胃针不易插直或容易 损伤食管；也不能抓得不紧， 否则鼠在受压迫时容易挣脱 掉而咬伤操作者的手指。也 可用左手食指及拇指抓紧鼠 右耳的方法来避免上述缺点
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灌胃要点
动物要固定好；进针方向正确， 要沿着口角进针，再顺着食管方向插入胃内， 绝不能进针不顺而强行向里插，否则会捅破食管， 甚至注入肺内而造成动物死亡。 常用灌胃量为0.1-0.2ml/10g。
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实验动物的麻醉
1、吸入麻醉 乙醚(ether)为吸入性麻醉药，可用于各种 动物，尤其是时间短的手术或实验。将棉球 塞入50ml离心管中，倒入乙醚，浸润棉球即 可，倒置时不要有乙醚流下。将要麻醉的小 鼠塞入管中，头朝内，利用其挥发的性质， 经呼吸道进入肺泡，对动物进行麻醉。吸入 后2-3 min开始发挥作用。操作时要特别注 意通风，注意安全。其优点：麻醉深度易于 掌握，比较安全，术后动物苏醒较快。
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尸检
剖检应在动物死亡后尽快进行。
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肿瘤大小测量
1.测量肿瘤长径和宽径（一般是长径垂直方 向上的最短径）。 2.计算公式：（长X宽＾2)/2
3.测量工具：数显游标卡尺
4.测量手法：不要卡得太紧，也不要卡得太 松，每次测量要从测同一个位置，卡得松紧 度也要一样。从实验开始到结束，测量工作 由同一人完成。
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实验动物的给药途径和方法
1、经口给药
灌胃（po） 这是一种用处较多的给药方法。有些药 物采用其他注射方法效果不好，而用此 法反而效果好；有些药物（如临床上的 口服药用于动物实验）不能采取静脉注 射、肌肉注射等方法而必须采用此法。
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动物实验的基本操作 方法
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报告主要内容
实验动物的识别 抓取
标记方法
给药途径和方法
肿瘤细胞皮下接种 肿瘤大小测量
实验动物的麻醉
实验动物的处死 实验标本的采集
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如何判断小鼠性别
成年鼠性别很易区分，雄鼠的阴 囊明显；雌鼠可见阴道开口和五对乳 头。生殖器与肛门的距离也可判定， 近者为雌性，中间无毛；远者为雄性， 中间有毛。仔鼠或幼鼠则主要从外生 殖器与肛门的距离判定。
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实验标本的采集方法
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实验标本的采集方法
2、肿瘤的采集
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实验标本的采集方法
3、肝、肾、肺的采集
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实验动物的处死方法
1、颈椎脱臼法：用手抓住鼠尾用力向后拉， 同时另一手拇指和食指用力向下按住鼠头部， 使其脊髓和延髓离断。 2、安乐死法：把小鼠置于一密闭的容器， 向其内通CO2使其窒息而死。 3、空气栓塞法：将空气急速注入静脉致死， 小鼠0.2ml即可。
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如何抓取小鼠
先用右手抓住鼠尾并提起，放在实验台 上，在其向前爬行时，顺势用左手的拇 指和食指抓住其两耳和头颈部皮肤，然 后把鼠体翻转向上置于左手心中，把后 肢拉直，用左手的无名指及小指夹住鼠 尾部即可。对于操作熟练者，可采用左 手一手抓住法，右手可不必放下注射器 等工具。操作时应小心被小鼠抓咬。不 同的操作也对应着不同的抓取方式，需
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实验动物的给药途径和方法
如果针头在血管中前进，可明显地感觉 到针行通畅，毫无阻力；若手感针行有 阻力，注射部位皮下发白，说明针头未 刺入静脉内，应换部位重刺。但要尽量 做到一次注射成功，因为重刺会增加注 射的困难；另外，第二次重刺，也可能 失去了尾静脉注射的最佳位置。进血管 后注意保持稳定，左手的三指捏住尾巴， 并连针头和鼠尾一起捏住，以防鼠活动 时针头脱出。
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实验标本的采集方法
1、实验动物血液的采集
心脏采血 将鼠麻醉，头部套在锥形管中，仰卧， 左手拇指和食指轻捏住小鼠胸腔，右手 持针，于小鼠剑突三角区剑突右窝以约 30度角进针，当针头正确刺到心时，鼠 血由于心搏力量自然进入注射器，当看 到针管中有血星冒出则随即可进行取血。
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止尾巴碎断或不好固定）。
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实验动物的给药途径和方法
熟练的话看哪里血管清晰就扎哪里。 一 般用75%酒精反复擦拭穿刺血管，使其充 盈，并且使皮肤角质层软化，利于穿刺。 或者在注射之前用约50度温水泡大约2分 钟，使血管充分舒张，用干棉球擦干。 或者直接用手握住尾巴，用手心的温度 使其血管充盈。
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实验动物的麻醉
2、注射麻醉 动物麻醉后，常因麻醉药作用、肌肉松弛和 皮肤血管扩张，致使体温缓慢下降，所以应 设法保温。巴比妥类对呼吸中枢有较强的抑 制作用，麻醉过深时，呼吸活动可完全停止。 故应注意防止给药过多、过快。对心血管系 统也有复杂的影响，故这类药物不用于研究 心血管功能的实验动物麻醉。
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实验动物的麻醉
1、吸入麻醉
缺点：需要专人管理，在麻醉初期常出 现强烈兴奋现象，对呼吸道有较强的刺 激作用，使粘液分泌增加，易阻塞呼吸 道而发生窒息。对于经验不足的操作者， 用乙醚麻醉动物时，容易因麻醉过深而 致动物死亡。另外乙醚易燃、易爆，对 人亦有作用，使用时应避火、通风，并 注意安全。（已少用）
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实验动物的麻醉
2、注射麻醉 戊巴比妥钠(sodium pentobarbital)在实验 中最为常用。该品为白色粉末，常配成1％3％水溶液由静脉或腹腔给药。一次给药麻 醉的有效作用时间持续为3-5 h，属中效巴 比妥类。我们是配成2%水溶液腹腔注射，注 射体积为BW（g）*3ul。静脉注射时，前1/3 剂量可快速注射，以快速度过兴奋期；后 2/3剂量则应缓慢注射，并密切观察动物的 肌肉紧张状态、呼吸频率和深度及角膜反射。
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实验动物的给药途径和方法
3、针的选择：4号1ml注射器 4、注射手法：注射时左手扯尾，用左手 的食指,中指,无名指及大拇指将小鼠尾 巴固定。右手持注射器，从中指及无名 指与拇指接触处稍上方进针，进针时针 尖朝下，使针头与尾部近似平行刺入尾 静脉（针头与尾部夹角小于10°）在尾 静脉内平行推进少许。针扎入时有落空 感，针头沿血管进入，肉眼可关察到血 液充盈针尖的那一瞬间，这是关键。
2、注射给药 皮下注射（sc 或H）
用左手拇指和食指轻轻提起动物颈背皮 肤，右手持注射器，使针头水平刺入皮 下，若针头容易摆动，证明针头已在皮 下，推送药液使注射部位隆起，拔针时， 以手指轻按针孔片刻，可防止药液外漏。 若两人合作，一人左手抓住小白鼠头部 皮肤，右手拉住鼠尾，另一人左手提起 背部皮肤，右手持注射器刺入。
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如何标记小鼠
无耳钉标记法： 1、剪耳法 在小鼠双耳的不同部位上剪一三角口来表 示不同号码。一般习惯是：左上为1，左下 为2，右上为3，右下为4，左耳两刀为5， 左右耳各一刀为6，右耳两刀为7，不剪为8 2、画尾巴法 一横为1，两横为2，三横为3，四横为4， 一竖为5，一竖一横为6，一竖两横为7，一 竖三横为8，一竖四横为9，不画为10。
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实验标本的采集方法
1、实验动物血液的采集 小葛：在左侧3-4肋间，用左手食指摸到 心搏，右手取连有4-5号针头的注射器， 选择心搏最强处穿刺。
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实验标本的采集方法
1、实验动物血液的采集
眼静脉取血 左手固定好小鼠，轻轻向下压迫颈部两 侧，引起头部静脉血液回流困难使头部 充血。右手取带尖头的铁片，在鼠下颚 静脉丛软骨处扎一下，这时血会一滴滴 冒出，将血滴入加有抗凝剂的离心管内， 等取够血量至不流为止，用棉花按住止 血。