非侵入性产前诊断——母体血中胎儿DNA检测

用于临床检测 。通过Ｙ 染色体的靶序列分析进行胎 儿性别鉴定 ， 而筛选性连锁遗传病 ， 从 如血友病和 杜 氏肌 营养不 良 。Ｓｍｐｏ ｏ 出在 管理 先 天． ｉ ｓｎ ｌ 提 Ｉ 生 肾上腺增生胎儿时应用胎儿性别检测 ， 从而及时让 鉴别 出的女Ｊ 陛胎儿使用糖皮质激素预防男性化 。
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３ ０８・
国际生殖健康 ／ 计划生育杂志
２ １ ７月第 ３ ０２年 １卷第 ４期 Ｊｎ ｅｒ ａｈＦｍ Ｐａ ，ｕｙ ０２ Ｖ １３ ， ｏ４ ｔ ｐｏ Ｈｅｈ／ａ ｌｎ Ｊｌ２ １， ｏ． １Ｎ ． ＩＲ ｄ
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综 述・
非侵入性产前诊 断—— 母体血 中胎）Ｄ Ａ Ｌ Ｎ 检测
规临床诊断 ， 对单基因遗传病 和非整倍染色体的诊
断也 在快 速发 展 中 。
垦堕 鳇壅 计 宣苤壹 ２１年７ 生堕 生 ０ ２ 月第３卷第４ ＪｎＲｐｄ ｅｔＦ Ｐ ｎＪｙ０ ，ｏ ３，ｏ４ １ 期 ｌ ｅｏＨａ ／ ｍ ｌ ， ｌ １ Ｖ１ １Ｎ． ｔ ｒ ｌ ａ ａ ｕ ２ ． ｈ ２
Ｃｉｉ， ｉＦ ｒ ｏｉｉ ｅａｔ ｅｔＪ ａ ｏ ｍ ｄ Ｊ ａ ５ ０２ Ｃ ｉａ（ ＵＪｎ ； ｅ ａ ｍ ｎ ｏ ｂｔ ｒ ｓ ｌ ｃＡｒ ｏ ｅＬｇ ｔｓ ｐ ｒ ｎ， ｎｎＣ ｍ ａ ， ｎ ２ ０ ０ ，ｈｎ Ｙ ｕ ）Ｄ ｐ ｒ ｅｔｆＯ ｓ ｔ ｎ ｃ ｓｃ Ｄ ｍ ｉ ｎ ｉｎ ｔ ｅｉ ｃ ａｄＧ ｎｃｌ ｙ ｔ ｅ ｒ ｏｐｔ ｔｅＰ ｏｌ ｉｅａ ｏ ， ｅ ｉ ０ ８３ Ｃ ｉａ（ ＵＦ ｇ ｎ ｙ ｅｏ ｇ ， ｅＧ ｎ ａ Ｈ ｓｉｄｏ ｈ ｅｐｅ ｂｒｔ ｎ ｒ Ｂ ｉｎ １０ ５ ， ｈｎ Ｇ ａ ） ｏ ｈ ｅ ｌ ｃｆ Ｌ ｉ Ａ， ｊｇ ｎ Ｃ ｒ ｓｏ ｄｎ ｕ ｏ： ＵＦ ｇ Ｅ ｍ ｉ ｇｆ ｇ ０ ＠ ６ ． ｒ ｏｒ ｐ ｎ ｉ ａｔ ｒＧ ａ ，— ａｌ ｕ ３ １ １ ３ ｏ ｅ ｇ ｈ ｎ ： ａ ｎ ｃｎ 【 ｂｔａ ｔ Ｉ ｔｅｃ ｒ ｎ ｐｅ ａ ｌｐｏｒｍ ｓｄ ｆ ｉｖ ｉｇｏｉ ｏ ｔ ｅ ｅｃ ｏ ｈｏ ｓｍａ Ａ ｓ ｃ】 ｎ ｈ ｕｒ ｔ ｒｎｔ ｒｇａ ｍｅ，ｅ ｎｔｅ ｄａｎｓ ｆｆ ａ ｇｎ ｔ ｒｃ ｒ ｏ ｌ ｒ ｅ ａ ｉ ｉ ｓ ｅｌ ｉ ｍｏ
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作者单位 ：５ ０ ２济南 ， ２００ 济南军区空军后勤部卫生处（ 于 君 ） ； 中国人 民解放军总 医院妇产科（ 谷 芳） 通信作者 ： 芳 ， － ａｌｇ ｆｎ３ １ ６ ． ｒ 谷 Ｅ ｍ ｉ：ｕａｇ ０ ＠１３（ｅ ２ ｏ
母体 Ｄ Ａ 乏 的胎 儿特 异 核苷 酸 序列 的检 测 ， 如 Ｎ 缺 例 男性 胎 儿Ｙ 色体 上特 异核 苷酸 序 ￣［１ 据 胎儿 染 ｌ 。根 Ｊ ４ Ｄ Ａ Ｎ 进行 性别 和 Ｒ Ｄ ｈ 血型鉴 定 在 欧美 国家 已属 于常
于 君 综述 谷 芳 审校
【 摘 要】 目前产前诊断主要通过 绒毛取样或羊膜腔穿刺获得胎儿遗传 物质 ， 可能会对妊娠妇女和
胎儿造成影响。近年来 ， 通过检测母血 中胎） Ｄ Ａ Ｌ Ｎ 进行非 侵入性产前诊 断飞速发展 ， 胎儿性别和Ｒ Ｄ ｈ 血型
鉴定 已广泛应用于临床， 单基因遗传病和非整倍 体的准确诊断也进行了实验论证 。相信在未来几年 ， 检测
ｃ ｏ ｓ ｔｈ ｎ ； ｎ ｔ ｉｅ ｓ ｓ ｉ ｂ ｒ Ｌ ｂ ｒｔ ｒ ｅ ｈ ｉ ｕ ｓａ ｄ ｐ ｏ ｅ ｕ ｅ ； ｙ ｏ ｅ ｅｉ ｎ ｌｓｓ ｒ ｓ ｍａｃ ｉ ｇ Ｇｅ ｅ ｉ ｄ ｓ ａ ｅ ，ｎ ｏｎ； ａ ｏ ａｏｙ ｔ ｃ ｎ ｑ ｅ ｎ ｒ ｃ ｄ ｒ ｓ Ｃ ｔｇ ｎ ｔ ａ ａｙ ｉ ｃ ｃ
背景 下 明确 分 离 出胎 ３ Ｄ Ａ， Ｌ Ｎ 研究 者 最 开 始着 眼于
细胞在产后几年内长期存在于母体血液中嘲 因此 ， ，
如何 富集 如 此 微 量 的胎 儿 细 胞 是 非 侵 入性 产 前 诊 断技 术 面 临 的瓶 颈 。 目前 的 富集 技术 比较 复杂 ， 且 成 本较 高 ， 仍不 能广 泛应用 于 临床［ ３ １ 。
８ ％ 。然后 该 研 究 组 通 过 实 时 定 量 聚合 酶链 反 应 ０
脐 静 脉 穿刺 ， 这 些侵 入性 产 前诊 断 技 术都 有 造 成 但 妊娠 妇女 流产 的风 险ｌ ｌ ｌ 。因此 ， 近年来 非侵 人性产 前 诊 断技术 的研究 备 受关 注 。 大 量研 究表 明 ， 胎儿 细胞 和胎 儿 游离 Ｄ Ａ 在 Ｎ 存 于母体外周血 中， 从而使利用母体外周血获取胎儿 遗 传物 质 进行 非 侵 人性 产前 诊 断成 为 可 能 。然 而 ， 胎 儿 细胞 在母 体 外 周血 中含量 极 少 ， 其有 核 红 细胞 占母体 外 周 血 中有 核 细胞 的 １１５１１ ／０－／０，而且 胎儿
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１ 母体 血 中胎 儿特 异序 列的检 测
１ 胎 儿Ｙ染 色体 的ＤＮ ． １ Ａ分 析 用 于胎 儿性 别 鉴 定
组织 中为低 甲基化 ，在母体血细胞 中为高甲基化 ，
应 用 甲基 化 特异 性 Ｐ Ｒ（ Ｐ 技 术 可 以将 胎 盘来 源 Ｃ ＭＳ ） 的Ｓ Ｒ ＩＢ 从 母 体 血 浆 中鉴 别 检 测 出来 。但 是 ， Ｅ ＰＮ ５ ＭＳ 技术 需要 一 个特 殊 的化 学处 理 过程— — 亚硫 酸 Ｐ
Байду номын сангаас
（Ｃ Ｐ Ｒ）技 术 检测 到胎 ） Ｄ Ａ 度 占母 体 血 循 环 总 ＬＮ 浓
Ｄ Ａ的３ ％一 ． 随妊娠 时 间 的增 加 而增 加 ， 提 Ｎ ． ６２ ４ ％， 并
示从妊娠７ 周开始就可以在母体外周血中检测到胎
）Ｄ Ａ 。 Ｌ Ｎ ｍ 与胎Ｊ ｔ 胞 相 比 ， Ｌ Ｎ 在产后 ２ｈ Ｌｌ ￣ 胎） Ｄ Ａ 内消
失 。近年 来 ， 研究 组 又提 出了一 种 检测 母 体 血 液 该 中胎 ） Ｄ Ａ的 高 效 新 方 法 — —微 流 体 数 字 Ｐ Ｒ技 ＬＮ Ｃ
术， 相对于传统方法更精确 ， 偏差更小 。胎）Ｄ Ａ ＬＮ
已经成 为从 母 体 血 液 中获 取 胎 儿 遗 传 物 质 进 行 非 侵入 性 产前 诊 断 的重要 来 源 ， 了在大 量 母 体 Ｄ Ａ 为 Ｎ
ｄ ｖ ｌｐ ｄ ｆ ｓｌ．Ｔ ａｅ ｆ ｔｌ ｓ ｘ ａ ｄ ｒ ｅ ｕ ｓａｕ ｄ ｔｒ ｎ ｔ ｎ ｂ ｉ ｕ ａｉ ｇ ｆｔ ｌ ＮＡ ｎ ｌ ｓ ｓ ｅ ｅｏ ｅ ａ ｔ ｙ ｏ ｄ ｔ ，ｅａ ｅ ｎ ｈ ｓ ｓ Ｄ ｔ ｔ ｓ ｅｅ ｍｉａ ｉ ｙ ｃｒ ｌｔ ｅ ａ ｏ ｃ ｎ Ｄ ａ ａｙ ｉ ｉ ｓ
（ ｎ ｅ ｏ ａ ｈＦ ｍ ｌ ， ０ ２， １ ３ ８ ３ １ ＪｌｔＲ ｐｒｄ Ｈｅ ｈ ／ ａ Ｐ ａ ２ １ ３ ： ０ — １ ） ｎ
近年来 ， 随着 围生儿死亡率和出生缺陷率的逐 渐 降低 ，产 前诊 断 逐渐 成 为 产科 的重 要 组 成部 分 。 目前 ， 临床 上胎 儿 先 天性 缺 陷或遗 传 性 疾病 的诊 断
母 血中胎Ｊ Ｄ Ａ Ｌ Ｎ 进行非侵入性产前诊 断将在 临床上有更广泛 的应用 。
【 关键 词 】 产前诊 断 ； 色体 ； Ｎ 非整倍体 ； 染 Ｄ Ａ； 性别预 选 ； 血型鉴定和交叉 配血 ； 遗传性疾病 ， 天 先
性； 实验 室 技 术 和 方 法 ； 胞遗 传 学 分 析 细
Ｎｏ － ｎ ａ ｉｅＰｒ ｎ ｔｌＤｉｇ ｏ ｉ ｙＦｅａ ｃｅｃＡｃｄ Ａｎ ｌｓｓｉ ａｅ ｎ ｌＰ ａ ｍａ ＹＵ ｕ ＧＵ Ｆ ｎ ． ｎ ｉｖ ｓｖ ｅ ａａ ａ ｎ ｓｓｂ ｔｌ Ｎｕ ｌｉ ｉ ａｙ ｉ ｎ Ｍ ｔｒ ａ ｌｓ Ｊ ｎ， ａ ｇ
敏 感度 和特 异度基 本 达到 ９％以上 ， 目前 已常规 应 ４
钠修饰 ， 将非 甲基化或低 甲基化 的胞嘧啶转化为尿 嘧啶 ，而 甲基化 的胞 嘧啶保 持 不变 ，再 进行 Ｐ Ｒ Ｃ 扩 增， 如果 Ｃ Ｇ 位 测 序 为胞 嘧 啶 ， 为 甲基 化 ， ｐ部 则 如为
胸腺 嘧啶 ， 为非 甲基化 状 态 。然而 ， 则 研究 表 明亚硫
１ 胎 儿Ｒ Ｄ血型 鉴 定 ． ２ ｈ 母 胎 Ｒ 血 型不 合 可 导 致 ｈ
酸盐转化能 降解样本 中９ ％的Ｄ Ａ ５ Ｎ 核苷 酸分子 。
于是 ，ｈｕ 出第 ２ 表 观遗 传 标记 物一 肿瘤 抑 Ｃ ｉ等【提 ７ １ 种 制 基 因Ｒ Ｓ １其 甲基 化 状态 与Ｓ Ｒ Ｉ Ｂ 正相 反 ， ＡＳ Ｆ ， Ｅ ＰＮ ５ 即ｍｌ５ ｌ 胎 盘组织 为 高 甲基 化状 态 ， Ｆ在 ５ 在母 体 血细 胞 中为低 甲基化 状 态 。使 用 甲基 化 敏感度 限制 性酶 酶切后 ，母 体血 细胞 中低 甲基化 的Ｒ Ｓ １ 清除 ， ＡＳ Ｆ 被
ｔ ｌｎｉｓｅ ｔ ｎ ｉｅｙ． ｈｅ ｃｉ ｃ ｘ ｅ ｓｖ ｌ
【 ｙｗ ｒｓ Ｐｅａ ｌ ｉ ｎｓ ；ｈｏ ｓｍ ｓＤ Ａ； ｎｕ ｌｄ ；ｅ ｒｓｌ ｔ ｎ Ｂｏｄｇｏｐｎ ｎ Ｋｅ ｏ ｄ 】 ｒｎｔ ａ ｏｉ Ｃ ｒ ｏ ｅ ； Ｎ Ａ ｅｐｏ ｙＳ ｘｐｅｅｅ ｉ ； ｌ ｒｕ ｉｇａｄ ａｄ ｇ ｓ ｍｏ ｉ ｃｏ ｏ
主要 通 过 侵 入 性 手 段 进 行 ， 如绒 毛取 样 、 膜 腔 或 羊
１９ 年 ，ｏ ［ 先 在 男 性 胎 儿 的 妊 娠母 体 血 ９７ Ｌ 等 ４ １ 首 浆 和 血 清 中 发 现 了胎 ） Ｙ染 色 体 特 异 Ｄ Ａ序 列 ， Ｌ Ｎ ｌ Ｌ 浆 或 血 清 中胎 Ｊ Ｄ Ａ的 检 出 率 高 达 ７ ％ ０ 血 ＬＮ ０
的Ｙ染 色 体 靶 序 列 有 Ｓ Ｙ Ｄ Ｓ４ Ｄ Ｓ， Ｙ Ｉ Ｒ ， Ｙ １ ， Ｙ ＩＤ Ｚ 和 Ｄ Ｚ 等， ｅａｅ等同 Ｙ ３ Ｄ ｖｎｙ 通过 系统评价和Ｍ ｔ ｅ 分析方法 ａ 对 利 用胎 Ｊ Ｄ Ａ鉴别 胎 儿性 别 进 行评 价 ， 娠２ 周 ＬＮ 妊 ０ 后 使 用实 时 定量 Ｐ Ｒ 术检 测 Ｙ 色 体 特异 序 列 的 Ｃ技 染
ｐ ｒ ｒ ｄ ｃ ｉｉ ａｌ ｎ ｍａ ｙ ｃ ｎ ｒ ｓ ｔａｅ ｉｓ ｆｒｔ ｅ ｎ ｎ ｉｖ ｓ ｅ ｄ ａ ｎ ｓ ｆｍｏ ｏ ｅ ｉ ｉｅ ｓ ｓ ａ ｄ ｆ ｔｌ ｅｆ ｍｅ ｌ ｃ ｌ ｉ ｎ ｅ ｔｅ ．Ｓｒ ｔ ｇｅ ｏ ｈ ｏ － ｎ ａ ｉ ｉｇ ｏ ｉ ｏ ｎ ｇ ｎｃ ｄ ｓ ａ ｅ ｎ ｅａ ｏ ｎ ｙ ｖ ｓ ａ ｅ ｐ ｏ ｄ ａ ｅｂ ｅ ｃ ｉｖ ｄ Ｗ ｅｂ ｌ ｖ ｈ ｔｍａ ｙ ｏ ｅ ｎ ｎ ｉ ｖ ｓｖ ｒ ｎ ｔ ｌ ｅ ｔ ｏ ｌ ｅ ｉｔｏ ｕ ｅ ｏ ｎ ｕ ｌｉ ｙ ｈ ｖ ｅ ｎ ａ ｈ ｅ ｅ ． ｅｉ ｅｔ ａ ｅ ｎ ｆｔ ｏ — ｎ ａ ｉｅ ｐ ｅ ａａ ｓｓｃ ｕ ｄ ｂ ｎ ｒ ｄ ｃ ｄ ｔ ｈ ｔ