用显微镜进行花粉活力的测定

用显微镜进行花粉活力的测定
用显微镜进行花粉活力的测定用显微镜进行花粉活力的测定实验类型：基础内容：一、实验目的1.学习用碘-碘化钾染色测定法测定花粉活力，了解可育和不育花粉的形态、生理特征。

2.学习用过氧化物酶测定法测定花粉活力，了解可育和不育花粉的形态、生理特征。

3.学习用氯...
内容：
1.学习用碘-碘化钾染色测定法测定花粉活力，了解可育和不育花粉的形态、生理特征。

2.学习用过氧化物酶测定法测定花粉活力，了解可育和不育花粉的形态、生理特征。

3.学习用氯化三苯基四氮唑法测定花粉活力，了解可育和不育花粉的形态、生理特征。

（一）碘一碘化钾染色测定法
水稻正常花粉呈圆球形，并积累淀粉较多，通常可用I-KI染成蓝色；发育不良的花粉常呈畸形，不积累淀粉，用I-KI染色，不呈蓝色，而呈黄褐色。

具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶。

此酶能利用过氧化氢使各种多酚及芳香族胺发生氧化而产生颜色，依据颜色可知花粉有无活性。

（三）氯化三苯基四氮唑法(TTC法)
2、3、5-氯化三苯基四氮唑(TTC)的氧化状态是无色的，被氢还原时成红色的TTF。

具有生命力的种子，由于呼吸作用产生的氢能使TTC还原成TTF，因此胚部便染成红色；而无生命的种子没有呼吸代谢活力，TTC不被还原，因而胚部不着色。

所以，可根据种子胚部染不染成红色来判断种子有无生命力，从而测定种子发芽率。

2. 试剂:
(1)I-KI溶液
(2) 0.5％联苯胺：将0.5g联苯胺溶于100m150％乙醇中。

(3)0.5％a一萘酚：将0.5ga一萘酚溶于100ml 50％乙醇中。

(4)0.25％碳酸钠：将0.25g碳酸钠溶于100ml水中。

(5)0.3％过氧化氢，即试剂Ⅱ。

(6)试剂I：由0.5％联苯胺、0.5％a一萘酚和0.25％碳酸钠溶液各10ml混合配成。

(7)0.5％TTC溶液。

3.器材：、载玻片、盖玻片、镊子、恒温箱。

1.花粉采集、置载玻片上、滴加试剂
3.计算
1、四氮唑液最好现配现用，如要贮存必须放在棕色瓶中，并放在阴凉黑暗处。

2、花粉采集时期要适宜，取充分成熟将要开花的花朵带回室内，取其内部的花粉。

六、思考题
1.用3种方法统计不同植物的花粉活力百分率。

2.试比较用3种方法测定的同一花粉的活力百分率是否相同，分析其原因。

实验35 花粉活力的测定
在作物杂交育种、作物结实机理和花粉生理的研究中，常涉及花粉活力的鉴定。

掌握花粉活力快速测定的方法，是进行雄性不育株的选育、杂交技术的改良以及揭示内外因素对花粉育性和结实率影响的基础。

一、花粉萌发测定法
【原理】
正常的成熟花粉粒具有较强的活力，在适宜的培养条件下便能萌发和生长，在显微镜下可直接观察计算其萌发率，以确定其活力。

【器材与用具】
载玻片；显微镜；玻棒；恒温箱；培养皿；滤纸。

【试剂】
培养基：10%蔗糖，10mg/L硼酸，0.5%的琼脂。

称10g蔗糖、1mg硼酸、0.5g琼脂与90ml 水放入烧杯中，在100℃水浴中熔化,冷却后加水至100ml备用。

【方法】
1.将培养基熔化后，用玻棒蘸少许，涂布在载玻片上，放入垫有湿润试纸的培养皿中，保湿备用。

2.采集丝瓜、南瓜或其他葫芦科植物刚开放或将要开放的成熟花朵，将花粉洒落在涂有培养基的载玻片上，然后将载玻片放置于垫有湿滤纸的培养皿中，在25℃左右的恒温箱（或室温20℃条件下）中孵育，5~10min后在显微镜下检查5个视野，统计其萌发率。

【注意事项】
1.不同种类植物的花粉萌发所需温度、蔗糖和硼酸浓度不同，应依植物种类而改变培养条件。

2.此法也可用于观察花粉管在培养基上的生长速度以及不同蔗糖浓度，离体时间，环境条件等因素对花粉活力的影响。

3.不是所有植物的花粉都能在此培养基上萌发，本法适用于易于萌发的葫芦科等植物花粉活力的测定。

二、碘-碘化钾染色测定法
【原理】
多数植物正常的成熟花粉粒呈球形，积累较多的淀粉，I2-KI溶液可将其染成蓝色。

发育不良的花粉常呈畸形，往往不含淀粉或积累淀粉较少，I2-KI溶液染色呈黄褐色。

因此，可用I2-KI溶液染色来测定花粉活力。

【器材与用具】
显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。

【试剂】
I2-KI溶液：取2g KI溶于5～10ml蒸馏水中，加入1g I2，待完全溶解后，再加蒸镏水300ml。

贮于棕色瓶中备用。

【方法】
采集水稻、小麦或玉米可育和不育植株的成熟花药，取一花药于载玻片上，加一滴蒸馏水，用镊子将花药捣碎，使花粉粒释放，再加1～2滴I2-KI溶液，盖上盖玻片，在显微镜下观察。

凡是被染成蓝色的为含有淀粉的活力较强的花粉粒，呈黄褐色的为发育不良的花粉粒。

观察2～3张片子，每片取5个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的育性。

【注意事项】
此法不能准确表示花粉的活力，也不适用于研究某一处理对花粉活力的影响。

因为三核期退化的花粉已有淀粉积累，遇碘呈蓝色反应。

另外，含有淀粉而被杀死的花粉粒遇I2-KI也呈蓝色。

三、氯化三苯基四氮唑（TTC）法
【原理】
具有活力的花粉呼吸作用较强，其产生的NADH2或NADPH2可将无色的TTC（2,3,5-氯化三苯基四氮唑）还原成红色的TTF（三苯甲）而使其本身着色，无活力的花粉呼吸作用较弱，TTC的颜色变化不明显，故可根据花粉吸收TTC后的颜色变化判断花粉的生活力
【器材与用具】
显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；恒温箱；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。

【试剂】
0.5%TTC溶液：称取0.5g TTC放入烧杯中，加入少许95%酒精使其溶解，然后用蒸馏水稀释至100ml。

溶液避光保存，若发红时，则不能再用。

【方法】
采集任何植物的花粉，取少许放在干洁的载玻片上，加1~2滴0.5%TTC溶液，搅匀后盖上盖玻片，置35℃恒温箱中，10~15min后镜检，凡被染为红色的花粉活力强，淡红次之，无色者为没有活力或不育花粉。

观察2~3张片子，每片取5个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的活力百分率。

【思考题】
1.上述每一种方法是否适合于所有植物花粉活力的测定？
2.哪一种方法更能准确反映花粉的活力？。