双向免疫扩散

2009.11.3
2009.11.3
主要的试剂和器材
• 抗体：抗IgG 抗体： • 抗原：IgG 抗原： • 巴比妥缓冲液 • 1.5％琼脂（巴比妥缓冲液配制） 1.5％琼脂（巴比妥缓冲液配制） • 载玻片、打孔器、微量进样器 载玻片、打孔器、 • 37℃水浴箱 37℃水浴箱
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实验步骤
用移液管吸取4 4.5ml的琼脂 的琼脂， 制板 用移液管吸取4-4.5ml的琼脂，将其放到 水平放置的载玻片上，待冷凝。 水平放置的载玻片上，待冷凝。 打梅花孔，各孔间的距离为0.7 0.8cm。 0.7打孔 打梅花孔，各孔间的距离为0.7-0.8cm。
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见下表） 倍比稀释抗体 （见下表） 用微量进样器在各孔加样品10ul 10ul， 加样 用微量进样器在各孔加样品10ul，中央孔 加抗原，周围6 加抗原，周围6孔分别加不同稀释度的抗体 将玻片放在湿盒中， 18将玻片放在湿盒中，37℃ 18-24h
画出实验结果图并判断效价
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注意事项
玻片要清洁，边缘无破损。 玻片要清洁，边缘无破损。 浇制琼脂板时要均匀、无气泡。 浇制琼脂板时要均匀、无气泡。 孔要打得圆整光滑，边缘不要破裂。 孔要打得圆整光滑，边缘不要破裂。 加样时应尽量避免气泡或加到孔外， 加样时应尽量避免气泡或加到孔外，以保证结果 的准确性。 的准确性。 注意微量进样器每加一个样品之后，就得清洗。 注意微量进样器每加一个样品之后，就得清洗。
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生理盐水 抗IgG
2 25
3 25 25
4 25 25
5 25 25
6 25 25
50
25
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实验结果
在抗原和抗体孔之间会看到白色的沉淀线。 在抗原和抗体孔之间会看到白色的沉淀线。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
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实验结论
将出现白色沉淀线的最高血清稀释度作为该抗体 的效价。 的效价。 例：该血清中抗IgG抗体的效价为1：4。 该血清中抗IgG抗体的效价为1 IgG抗体的效价为
双向免疫扩散试验
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实验原理
可溶性抗原与相应抗体在琼脂介质中相互扩散 与相应抗体在琼脂介质中相互扩散， 指可溶性抗原与相应抗体在琼脂介质中相互扩散， 彼此相遇，在比例适当处形成沉淀线。 彼此相遇，在比例适当处形成沉淀线。 沉淀线 根据沉淀线的有无、形状和位置对抗原或抗体进 根据沉淀线的有无、 定性分析 也可用于抗体的半定量 分析， 半定量检测 行定性分析，也可用于抗体的半定量检测 本次实验利用此原理进行抗体效价的测定。 本次实验利用此原理进行抗体效价的测定。 抗体效价的测定
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