高中生物选修一-微生物培养

微生物培养技术[1][培养基技术]

成分

分类

条件：pH、氧气、特殊营养物质

常见培养基

消毒与杀菌

无菌技术的目的：

•防止实验室的培养基被其它外来微生物污染•防止实验操作人员被污染

培养基使用完后的处理：

•进行高压蒸汽灭菌，然后丢弃

目的：分离细菌，得到单菌落[平板划线法]

[稀释涂布平板法]

稀释涂布平板法

•用稀释涂布平板法进行接种

•选用一定的稀释范围，使菌落数在30-300之间

•稀释倍数通常为103-106

•两个或多个细胞有时会连在一起，只形成一个菌落。因此，统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。

•统计结果一般用菌落数而不用活菌数表示

显微镜直接计数法/血细胞计数板计数法

•显微镜直接计数/血细胞计数板计数法也是测定微生物数量的常用方法

•由于观测到的细胞包括死细胞，因此统计结果偏大

滤膜法

•将已知体积的水过滤

•将滤膜放在鉴别培养基上培养

•根据培养基上菌落的数目，计算出水样中目标细菌的数量

选择培养

•筛选出所需要的微生物

•增加所需要的微生物的浓度鉴别培养

观察菌落特征

•形状

•大小

•隆起程度

•颜色

临时保藏

接种→培养→冰箱保藏→转移→保藏

•将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，在合适的温度下培养•菌落长成后，将试管放入4℃的冰箱中保藏

•每3-6个月，要重新将菌种从旧的培养基转移到新鲜的培养基上❖保存时间不长，菌种容易被污染或产生变异

甘油管藏

装甘油→灭菌→加菌液→混匀→冷冻箱保存

•在3mL的甘油瓶中装入1mL甘油，灭菌

•将1mL培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀

•放在-20℃的冷冻箱中保存

❖供长期保存菌种

[7][实验原则]

检测是否有杂菌污染/检测培养皿灭菌是否合格

❖设置空白对照

•取一个空白的培养皿，滴加无菌水，置于相同条件下

•若没有菌落生成，说明没有杂菌的污染

判断选择培养基是否起到筛选作用

❖用全培养基作为对比

•若全培养基中的菌落数明显多于选择培养基的菌落数，说明选择培养基起到了筛选作用

进一步鉴定分离出来的菌种

❖部分微生物可以利用其它微生物的代谢分解产物，从而在不含某些必要营养物质的培养基上存活

❖运用生物化学的方法进行鉴定