注射液有关物质及含量测定方法学验证方案

注射用XX有关物质及含量测定方法学验证方案

样品：

自制XX供试品：批号：

市售品：进口XX 批号：国产XX 批号：

对照品：

XX对照品：自制，批号：xxxxxx，XX含量：51.27% 水分：1.34%

A对照品：来源：批号：

B对照品：来源：批号：

C对照品：来源：批号：

1、方法验证

注射用XX是以XX为原料通过复溶并重新冻干获得，制品期间未加入任何辅料，同时注射用XX有关物质及含量测定方法与原料测定方法完全一致，因此注射用XX有关物质及含量测定方法学验证可与XX原料方法学一致，此次方法学验证使用的样品用原料（批号：xxxxxx）代替。

2、检测方法

含量测定照高效液相色谱法（中国药典2015年版四部通则0512）测定。

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水相-甲醇-乙腈（800：160：16）为流动相；柱温：30℃；检测波长为260nm。取对照品溶液作为系统适用性试验溶液，量取20µl注入液相色谱仪，各杂质峰之间及主成分峰与相邻杂质峰之间的分离度应符合规定，理论板数按XX峰计算应不低于3000。

测定法取本品适量，精密称定，加水溶解制成每1ml 中约含XX 0.2mg的溶液，作为供试品溶液。精密量取供试品溶液20µl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取XX对照品适量，同法测定。按外标法以峰面积计算，按无水物计算，含XX阳离子应为50.0%～54.0%。

有关物质照高效液相色谱法（中国药典2015年版四部通则0512）测定。

取本品，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml中约含XX 0.5mg的溶液，作为供试品溶液；另分别取A、B、XX、C对照品适量，精密称定，加水溶解并定量制成每1ml中约含A 2.5µg、B 2.5µg、XX5.0µg、C 5.0µg的混合溶液，作为对照品溶液。取对照品溶液20µl，注入液相色谱仪，出峰顺序依次为A、B、XX、C，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的10%～30%；再精密量取对照品溶液和供试品溶液各20µl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的6倍。供试品溶液色谱图中如显杂质峰，按外标法以峰面积计算，A峰面积不得大于对照品溶液中A的主峰面积（0.5%），B峰面积不得大于对照品溶液中B的主峰面积（0.5%），C峰面积不得大于对照品溶液中C的峰面积（1.0%），其它单个杂质峰面积不得大于对照品溶液中XX主峰面积的0.1 倍（0.1%），其它杂质峰面积的和不得大于对照品溶液中XX主峰面积的0.5倍（0.5%）。

3、方法学验证项目

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采用自制品（批号：xxxxxx）按照确定的检测方法进行详细的方法学验证。

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A对照品储备液：精密称取A对照品适量，加水稀释制成约0.1mg/ml的对照品储备液

B对照品储备液：精密称取B对照品适量，加水稀释制成0.1mg/ml的对照品储备液。

有关物质检查XX对照品储备液：精密称取XX对照品适量，加水稀释制成约0.5mg/ml的对照品储备液。

C对照品储备液：精密称取C对照品适量，加水稀释制成约0.2mg/ml的对照品储备液。

A杂质定位溶液：精密量取A对照品储备液适量，加水稀释制成约2.5μg/ml的对照品溶液。

B杂质定位溶液：精密量取B对照品储备液适量，加水稀释制成约2.5μg/ml的溶液。

XX定位溶液：精密量取XX对照品储备液适量，加水稀释制成约5.0μg/ml的溶液

C杂质定位溶液：精密量取C对照品储备液适量，加水稀释制成约5.0μg/ml的溶液

杂质对照品溶液（系统适用性溶液）：精密量取A对照品储备液、B对照品储备液、XX对照品储备液、C对照品储备液适量，加水稀释制成含A约2.5μg/ml，B约2.5μg/ml，XX约5.0μg/ml，C 约5.0μg/ml的混合溶液，同时作为系统适用性溶液。

含量测定对照品储备液：精密量取XX对照品(批号xxxxxx)适量，加水溶解并稀释制成约含XX 1.0mg/ml的溶液。

供试品储备液：精密称取XX（批号xxxxxx、市售样品1批号xxxxxx、市售样品2批号xxxxxx）样品适量，加水溶解稀释制成约含XX 5.0mg/ml的溶液。

供试品溶液(1)：精密称取各来源XX样品适量，加水溶解稀释制成约含XX 0.5mg/ml的溶液作为供试品溶液(有关物质检测)。

供试品溶液(2)：精密称取各来源XX样品适量，加水溶解稀释制成约含XX 0.2mg/ml的溶液作为供试品溶液(含量测定)。

对照品溶液：精密量取XX对照品(批号xxxxxx)适量，加水溶解并稀释制成约含XX 0.2mg/ml 的溶液（含量测定）。

4.2方法学验证

4.2.1专属性(1)

（1）空白溶剂干扰试验：

取水溶液20μl，注入液相色谱仪中，记录色谱图，在主成分峰及各已知杂质峰位置应不出现色

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谱峰，以此确定空白溶剂无干扰。

（2）杂质定位试验(DAD检测器)

精密量取A杂质定位溶液、B杂质定位溶液、C杂质定位溶液、XX定位溶液、杂质对照品溶液各20μl，依次注入色谱仪中，记录色谱图。杂质对照溶液中理论板数按XX峰计算应≥3000，各杂质峰之间及主成分峰与相邻杂质峰之间的分离度应符合规定，各已知杂质定位溶液保留时间与杂质对照品溶液各峰保留时间应一致，各杂质对照峰纯度因子应大于980。

（3）供试品溶液与对照品溶液对比试验（DAD检测器）

精密量取XX自制供试品溶液（1），供试品溶液（2）和对照品溶液（0.2mg/ml）各20μl，分别注入色谱仪中，记录色谱图。供试品溶液色谱图中主成分峰与对照品溶液色谱图中主成分峰保留时间应一致，主成分峰与相邻杂质峰应能完全分离，主成分峰的纯度因子应大于980。

专属性(1)试验结果

4.2.2专属性(2)

强制降解试验

4.2.2.1 未破坏样品有关物质检测（DAD检测器）

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