临床病原学检查知识

(六)泌尿生殖道标本
根据不同疾病的特征及检验目的采集不同标 本，如性传播性疾病常取尿道口分泌物、外 阴糜烂面病灶边缘分泌物、阴道宫颈口分泌 物和前列腺液等。对生殖道疱疹常穿刺疱疹 液，盆腔脓肿者则于直肠子宫陷凹处穿刺脓 液。怀疑衣原体感染的标本不应使用木柄拭 子，因为木质对该病原体有毒性作用。除淋 病奈瑟菌保温 送检外，所有标本收集后40℃ 保存直至培养。
它已广泛应用于感染性疾病的实验室诊断 尤其是那些不易分离培养的病原体。由于 PCR具有很高的敏感性，试验影响因素很多， 不适当的标本处理，外源性和内源性 蛋白酶、核酸酶、DNA多聚酶抑制剂等均 可造成假阴性反应。反应体系中极微量待 测DNA序列的污染均可产生假阳性结果， 故操作者必须制订严格的工作程序防止污 染发生，并设立阴性对照。
(二)病原体分离、培养和鉴定
分离培养是病原学检验中确诊的关键步骤，分离出 病原体后，才能进一步鉴定病原体和作药敏试验。 分离培养细菌，应根据可疑菌生长培养特性，选择 合适的培养基，提供合适的气体条件、温度和pH， 使细菌在体外人工培养基中得以生长、繁殖形成菌 落。根据菌落性状(大小、色泽、气味、边缘、光滑 度、色素、溶血情况等)和细菌的形态、染色性，检 测细菌生化反应结果和血清学试验，可对分离菌作 出鉴定。为了尽快地对分离菌作出检验结论，应选 择可靠而适用的特征作为鉴定指标，同时也可借助 于微量鉴定系统，快速简便鉴定分离菌。
(五)病原体抗体检测 是指用已知病原体抗原
检测患者血清中相应抗体的方法诊断感染性 疾病。常用的方法有凝集试验、沉淀试验、 补体结合试验、间接免疫荧光技术、放射免 疫测定、酶联免疫吸附试验等。大多数的抗 体检测试验中，所用的抗原为病原体特异性 抗原(整个病原体、病原体成分或产物)，有一 部分抗体检查使用病原体的共同抗原，如诊 断梅毒病使用牛心提取的类脂抗原，这类试 验为非特异性试验。
那些有正常菌群寄居的腔道分泌物，涂片镜检虽不 能确定诊断，但对进一步检出的步骤、采用的方法 和分离鉴定病原体所需培养基有重要提示作用，如 在米泔水样便的悬滴片动力检查，发现有运动活泼 的鱼群样弧菌，常提示弧菌科细菌感染，可进一步 用碱性蛋白胨水增菌，分离接种于硫代硫酸盐一柠 檬酸盐一胆汁一蔗糖(thiosulfatecitrate-bile saltssucrose，TCBS)选择培养基。组织标本和疱疹分泌 物涂片经瑞特染色后，查见多核巨细胞和核内嗜酸 性包涵体可早期诊断疱疹病毒感染。临床上不常规 应用电镜检查，但对某些病毒感染有确诊价值，如 婴幼儿急性胃肠炎腹泻粪便电镜下查见车轮状的双 层衣壳病毒颗粒即可诊断为轮状病毒感染。常用的 电镜技术有超薄切片标本电镜观察、负染标本电镜 观察和免疫电镜技术。
(三)病原体抗原检测 用已知抗体，借助免疫荧
光技术、酶免疫技术、化学发光技术、胶乳凝 集试验等技术检测标本中未知的病原体抗原即 为病原体的抗原检测。病原体抗原有细菌菌体 抗原、鞭毛抗原、毒素、侵袭性酶、病毒的衣 壳蛋白、包膜抗原等。病原体的抗原成分检测 有助于早期诊断感染性疾病，阳性结果提示某 种感染性病原体的存在，但对那些存在正常菌 群的标本，需考虑共同抗原引起的交叉反应， 必须在有严格对照试验和排除试验时，对阳性 结果才能作出正确判断。
(三)尿液标本
外尿道寄居有正常菌群，故采集尿液时更 应注意无菌操作，常用清洁中段尿作为送检 标本。对于厌氧菌的培养，采用膀胱穿刺法 收集、无菌厌氧小瓶运送。排尿困难者可导 尿，但应避免多次导尿所致尿路感染。
(四)呼吸道标本
鼻咽拭子、痰、通过气管收集的标本均可作 为呼吸道标本。后者可避免正常菌群污染， 为下呼吸道感染病原学诊断的理想标本。鼻 咽拭子和鼻咽洗液可供鼻病毒、呼吸道合胞 病毒、肺炎衣原体、溶血性链球菌等病原学 诊断。不合格的痰 标本(扁平上皮细胞≥25个 ／低倍镜视野)富含上呼吸道正常菌群，在病 原学诊断时需 加以注意。
标本采集和运送 ： 根据各种病原体所致感染性疾病的病程确定
标本采集的时间、部位和种类。所有采集的 标本均置于无菌或清洁容器中，不能接触消 毒剂和抗菌药物。 标本必须注明姓名、年 龄、性别、采集日期、临床诊断、检验项目 等。标本采集后应按要求处理，立即送往病 原学实验室，对于烈性传染病材料的运送需 专人护送。
(一)直接显微镜检查 标本直接涂片、干燥、固定后染色，或经离心浓缩
集菌，涂片染色，置光学显微镜下观察病原体的形 态、染色性或观察宿主细胞内包涵体的特征。另一 种方法是采用悬滴法或压滴法，在不染色状态下借 助暗视野显微镜或相差显微镜观察病原体的生长、 运动方式、螺旋体形态和运动。湿式涂片有助于寄 生虫虫卵检查。直接镜检结果对病原学诊断具有一 定意义，尤其是无菌体液的直接镜检更具有诊断价 值， 如脑脊液涂片中查见革兰染色阴性肾形双球 菌，结合患者发热、喷射状呕吐、剧烈头痛和脑膜 刺激体征，可作出流行性脑脊髓膜炎的诊断。
检测项目
染色标本显微镜检测
1．革兰染色 革兰染色(Gram stain)和显微镜检查(microscopic examination)是细 菌感染快速诊断的简单方法，用于各种渗出液、抽出 液、尿液、脑脊液和血液的细菌检查。2。抗酸染色 抗酸染色(fast-acid stain)适用于痰标本分枝杆菌检查， 对诊断结核病具有重要意义。 不染色标本显微镜检测 l。湿片悬滴法检测 (examination of wet mount)借助暗视野显微镜或相 差显微镜观察标本中病原菌的生长和运动方式，有助 于疾病病原体诊断。2。湿片细菌计数 湿片高倍视 野镜检尿液，若每高倍视野发现1个或1个以上细菌 有诊断其为尿路感染病原菌。
将放射性核素或非放射性物质标记的已知序
列核酸单链探针和固定在固相载体上的标本 中病原体核酸退火形成双链杂交体，通过杂 交标记物的检测，鉴定标本中的相应病原体 基因，此为核酸杂交法。杂交方法以固相法 为多，其技术有斑点杂交、Southen印迹法、 原位杂交法和Northen印迹法等。杂交信号的 检测常用显色法、放射自显影、放射性核素 脉冲数测量和发光法。核酸杂交法适用于目 前尚不能分离培养或很难分离培养的微生物 检测。
(四)病原体核酸检测 核酸检测技术主要有聚
合酶链反应(PCR)和DNA探针杂交技术。 PCR是将待检标本经细胞裂解液裂解后，在 加有引物、四种三磷酸核苷、TaqDNA聚合 酶和含Mg，、缓冲体系中，经变性、退火、 延伸三个不同反应温度进行多次循环，再将 扩增DNA产物通过琼脂糖凝胶电泳染色法、 Southern印迹法、酶谱分析法和序列分析法 四种方法之一，检测出病原体的核酸。PCR 只需在简便条件下，在短短数小时内可将病 原体基因或DNA片段特异地扩增几十万倍。
(七)创伤、组织和脓肿标本
对损伤范围较大的创伤,应从不同部位采集多份标 本。采集部位应首先清除污物,以碘酒,酒精消毒皮 肤,防止表面污染菌混入标本影响 检测结果。开放 性脓肿的采集,用无菌棉拭采取脓液及病灶深部分泌 物。封闭性脓肿,则以无菌干燥注射器穿刺抽取;疑 为厌氧菌感染者,取脓液后立即排净注射器内空气， 针头插入无菌橡皮塞送检,否则标本接触空气导致厌 氧菌死亡而降低临床分离率。用于病毒检测的组织 标本宜放在有灭菌盐水纱布的培养皿内或病毒运送 培养基内运送,用匀浆管匀浆、离心、过滤后,作病 毒分离鉴定。
(二)脑脊液与其他无菌体液标本
无菌采集脑脊液，脑脊液通常离心10000×g
lOmin，取沉淀作显微镜检查。引起脑膜炎的 病原体脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌、流感嗜 血杆菌等其抵抗力弱，不耐冷、容易死亡， 故采集的脑脊液应立即保温送检或床边接种。 胸水、腹水和心包液等因标本含菌量少宜采 集较大量标本送检以保证检出Tc
抗原检查诊断价值常随不同标本各异。若在无菌体
液、血液等标本中，检测出特异性病原体抗原，有 诊断价值，如脑脊液中查到脑膜炎奈瑟菌抗原可诊 断为流行性脑脊髓膜炎；若在宫颈拭子或男性尿道 拭子检出淋病奈瑟菌或沙眼衣原体抗原有诊断意义， 因为这些标本中没有或很少有其他微生物存在；若 在肛拭中检出病原体抗原，则因肛拭中存在有多种 微生物，可因交叉抗原存在而不能肯定诊断。使用 特异性好、效价高的单克隆抗体尤为重要，在有严 格的对照和排除试验时，选择和制备完好的细胞标 本，检测只能在活细胞内增殖的病毒或立克次体、 衣原体，阳性的结果可作出准确的病原学诊断。
细菌感染检查
细菌感染检查
一、检验特点 各种细菌都有一定的 形态、染色特性、生化反应和抗原结构。通过对标本 直接显微镜检查、病原菌的分离培养鉴定、病原菌的 抗原检测、核酸检测和细菌感染后机体免疫应答产物 的测定及药物敏感性试验，对细菌感染性疾病可作出 及时、准确的病原学诊断。在检查项目中，尤以细菌 分离培养鉴定为主，在无菌标本中检查到细菌则此细 菌为感染的病原，如血液中检查到细菌，诊断为败血 症；脑脊液中查到细菌即为细菌性脑膜炎。存在有正 常菌群的标本中检查到细菌，应区分是正常寄居的菌 群或是致病的细菌，常需作细菌定量计数，根据细菌 数判断是否为感染的病原菌，如尿液中分离到革兰阴 性杆菌，若定量在10‘／ml cfu菌落形成单位菌数以上， 则为尿路感染。
(八)血清标本
用于检测患者特异性抗体效价以辅助诊断感 染性疾病。采集血液 置无菌试管中， 自然 凝固、血块收缩后吸取血清，56 ℃加热 30min以灭活补体成分。灭活血清保存于－ 20℃。
检测方法
由实验技术直接或间接获得病原体及病原体 结构成分，是确诊感染性疾病的一个重要依 据。临床实验室中细菌性疾病以培养分离技 术为主，病毒性疾病以免疫学方法为主。
对于不能人工培养的病原体，如病毒、立克 次体、衣原体，可将标本接种易感动物、鸡 胚或行细胞培养，进行病原体分离。接种动 物后，可根据动物感染范围、动物发病情况 及潜伏期，初步推测为某种病原体。接种于 鸡胚的病毒，根据不同接种途径的敏感性及 所形成的特殊病灶，有助于初步鉴定。进行 细胞培养的病毒，因病毒在细胞内增殖后， 可引起细胞病变或红细胞吸附、干扰现象、 血凝性质等特性以缩小病毒的鉴定范围，最 后用血清学方法作最后鉴定。
临床病原学检查
不同病原体(细菌、螺旋体、支原体、放线菌、
衣原体、立克次体、病毒、真菌、原虫、蠕虫) 所致感染性疾病的实验诊断方法各有其特点， 但几乎都遵循以下基本原则：①正确、规范采 集和运送标本；②通过直接显微镜查见病原体 或检出病原体抗原成分；③借助分子生物学的 方法检测病原体核酸；④利用免疫学方法检测 机体对病原体抗原成分产生的免疫产物；⑤对 病原体进行分离与鉴定。在完成病原体的检出 和鉴定任务后，结合病人的病史、症状或体征， 快速作出诊断。并积极参与临床选择抗微生物 药物，指导和监控微生物的治疗方案，避免耐 药菌株的产生。
(五)粪便标本
取含脓、血或粘液粪便置于清洁容器中送检 排便困难者或婴幼儿可用直肠拭子采集。根 据细菌种类不同选用合适运送培养液以提高 阳性检出率，如副溶血弧菌引起腹泻的粪便 应置于碱性蛋白胨水或卡一布运送培养液。 一次粪便培养阴性不能完全排除胃肠道病原 菌的存在，对于传染性腹泻患者需三次送检 粪便进行细菌培养。对疑为寄生虫感染者， 应尽快运送水样便，以保持原虫滋养体活力； 若不及时送检，粪便标本置于含10％甲醛和 聚乙烯醇的小螺口塑料容器内保存。
抗体检测的价值常用敏感性、特异性和预测
值来评价。临床医生必须根据其目的要求达 到确诊某一疾病、排除某一疾病或监测疾病 治疗的效果。理论上所希望的一个高度敏感 的导致高阴性预测值和高度特异的导致高阳 性预测值的试验并不存在，实践中常根据诊 断的两个基本目的，权衡敏感性和特异性选 择试验项目。当目的为排除某一疾病时，即 选择高敏感度、高阴性预测值的试验；当目 的为确诊某一疾病时，即选择高特异度、高 阳性预测值的试验。
来自百度文库 (一)血液标本
疑为菌血症、败血症和脓毒血症患者，一般 在发热初期和高峰期采集，如已用抗菌药物 治疗者，则在下次用药前采集。采样以无菌 法由肘静脉穿刺，成人每次10-20ml，婴儿 和儿童为1-2ml，血液置于盛有抗凝剂聚茴 香脑磺酸钠无菌瓶中送检。大多数菌血症呈 周期性，故血标本也需在24h内周期性收集， 一般24h内收集2-3次血标本分别培养。