《细菌分离与鉴定方》PPT课件

• 赤皮病病原菌划线分离：
用刀片刮除病灶腐烂部分后用接种环挂取病料，
在普通营养琼脂培养基上平板划线。28℃培养24h。
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细菌的生长状况观察
原理
◆细菌于适宜条件下在不同的培养基上生长，其生长状 态不同。不同细菌在同一种培养基中生长，生长特点也 不相同。这些区别称之为培养特征，是鉴别细菌和细菌 分类的依据之一。
试验的阳性菌，不仅需氧而且能产生过氧化氢酶。氧化酶并
不是直接与试剂起反应，而是先使细胞色素c氧化，然后此
氧化型细胞色素c再使对苯二胺氧化，产生颜色反应，因而
本试验实际也是测定细胞色素c是否存在。
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氧化酶试验
• 试剂
1%盐酸二甲基对苯二胺水溶液或1%二盐酸四甲基对苯二胺水溶 液。
• 方法
细菌分离与鉴定方法
—嗜水气单胞菌分离鉴定
分离方法
细菌的生长状况观察
氧化酶试验
AHM鉴别培养
吲哚试验
革兰氏染色法
糖发酵试验
脱脂奶平板试验（酪蛋白胨精化选课试件验ppt）
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分离方法
用途:
• 在检查含两种或两种以上的待检材料（如肝、脾、肾、 心、肌肉等）中的某种细菌时，须先将待检材料进行 分离培养。常用的分离培养方法是琼脂平皿分区划线 法，是借划线将混杂的细菌在琼脂平皿表面分散开来， 使个别的细菌能固定在某一点，经培养生长繁殖后形 成单个菌落，以达到分离获得纯种细菌的目的。
枸椽酸铁胺
0.5g
溴甲酚紫
0.02g
琼脂
3.0g
蒸馏水
1000mL
★制法
将各种成分（除溴甲酚紫外）溶化于1升水中，调pH6.7，加入溴甲酚紫，混
匀煮沸。分装于13×100mm试管，每管 5.0ml，于121℃，灭菌15分钟。
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• 含糖培养基灭菌条件115℃，10～15分钟 • 一般培养基灭菌条件121℃，15～20分钟
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细菌的生长状况观察
• 在无菌平皿中，倒入溶化后50℃普通营养琼脂培养基，每 皿约 20毫升，水平静置待凝固。用接种环挑去待分离菌 株分区划线，28℃培养24h。
• 菌落形态观察： 大小：以毫米计。 形状：圆形、不规则形、放射状等。 表面：光滑、粗糙、圆环状、乳突状等。 边缘：整齐、波形、锯齿状等。 色素：有颜色，颜色，是否可溶等。 透明度：透明、半透明、不透明。
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图1 接种环的握持方法
1区
2区
4区
3区
图2 平皿的握持方法
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图3 划线分离的方法 左：分区 右：培养后的结果
分离方法
• 接种完毕，盖好平皿盖，在平皿底玻璃上用记号 笔注明标本名称、接种时间、接种者等。然后将 平皿的底朝上，放置在37℃孵箱内孵育24h。
• 取出后观察琼脂表面的菌落分布情况（见图3），
琼脂
15.0g
蒸馏水
1000mL
混匀，加热溶解，调PH至7.6分装，112kPa高压灭菌15min，
冷却至45℃倾注灭菌平板。直径90cm平皿每皿倾入15～20ml培
养基，培养基过少，划线分离时细菌的营养较少，菌落生长过小，
菌落形态不易观察，培养基也易于干燥，不易在数天内对菌落形
态进行观察。
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注意观察最后1～2区内是否分离出单个菌落，并
观察记录菌落特征（如菌落大小、形状、透明度、
色素等情况）。
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• 烂鳃病病原菌平板划线分离：
取病鱼鳃丝一小块，置于滴有无菌水的载玻片 的边缘，10分钟，用接种环蘸水，在胰胨琼脂培养 基上划线。
• 肠炎病病原菌划线分离：
用70%酒精棉球擦拭鱼体，无菌条件下，取病 鱼的肝或脾或肾或心于普通营养琼脂基划线分离。
嗜水气单胞菌为阳性。
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注意事项
氧化酶试验
• 二甲基对本二胺溶液易于氧化，一般于冰箱中储存两周。 如溶液颜色转红褐色，则不宜使用。
• 铁、镍等金属可催化二甲基对苯二胺呈红色，故不宜用以 上材料取菌苔。如无白金丝，可用玻棒或灭菌牙签取菌苔 涂抹。
• 在滤纸上滴加试液已刚刚湿润为宜。如滤纸过湿，妨碍空
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分离方法
具体操作方法如下：
• 点燃酒精灯，右手执笔式握持接种环（见图1），在酒精灯火焰上烧灼接种环， 待冷，取待测菌液一环。
• 左手抓握琼脂培养基平皿，用手掌将平皿的底固定，用手指将平皿的盖略抬
起一些，进行接种（见图2）。或者，将平皿的盖留在实验台上，尽量直立平
皿靠近酒精灯火焰，右手持接种环在琼脂表面的一端（即1区，约占整个平皿
气与菌苔接触，延长显色时间，造成假阴性。
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AHM鉴别培养
AHM为Aeromonas Hydrophila Medium 的缩写。 用于可疑气单胞菌菌落的鉴定。
AHM鉴别培养基
★成分
蛋白胨
5.0g
酵母提取物
3.0g
胰蛋白胨
10.0g
L-盐酸鸟氨酸
5.0g
甘露醇
1.0g
肌醇
10.0g
硫代硫酸钠（Na2S2O3·5H2O） 0.4g
嗜水气单胞菌菌落为百度文库滑、微凸、圆整、无色或淡黄
色，有特殊芳香气味。 精选课件ppt
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氧化酶试验
原理
氧化酶亦即细胞色素氧化酶，为细胞色素呼吸酶系统
的终末呼吸酶，系由细胞色素a和a3所组成，一般仅存于需
氧菌和兼性厌氧菌中，它使细菌能利用氧作为氢的最终受体，
使分子氧还原为过氧化氢，过氧化氢的积累会有毒性，固本
的1/6～1/5）涂布，划线时，接种环与琼脂表面呈 30°～40°的角度轻轻接
触，利用腕力动作，切忌划破琼脂表面。烧灼接种环，待冷后，将接种环通
过1区划线数次，在2区作连续划线，各线条间隔要小，但不能重叠。划满平
皿的1/5～1/4区域，划完2区不需烧灼接种环，继续通过2区数次，在3区作连
续划线，如此反复至划完整个平皿（如图3）。
在干净的培养皿中放一张滤纸，滴上二甲基对本二胺的1%水溶 液，仅使滤纸湿润即可，不可过湿。用白金丝接种环（不可用镍 铬丝）取18～24小时的菌苔，涂抹在湿润的滤纸上，在10s内涂 抹菌苔现红色者这为阳性，(四甲基对本二胺呈蓝色)，10～60s 现红色者为延迟反应，60s以上现红色者不计，按阴性处理。
◆ 把细菌接种在固体培养基上，在适宜的条件下经过一 定时间的培养，在培养基表面（或内部）形成肉眼可见 的有一个细菌大量繁殖后而成的集团，称之为菌落。不 同细菌的菌落大小、光浊度、色泽均有其特征。
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普通琼脂平板
牛肉膏
3.0g
蛋白胨
10.0g
氯化氯化钠（NaCL）
5.0g
磷酸二氢钾（KH2PO4） 1.0g