实验一 生化实验基本操作.ppt
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一切物质都会对某些波长的光进行选择性的吸收，有色 溶液之所以呈现不同颜色，就是由于这种对光的选择性吸收 所致。
物质的吸收光谱与它们本身的分子结构有关，不同物质 由于其分子结构不同，对不同波长光线的吸收能力也不同。
每种物质都具有特异的吸收光谱，在一定条件下，其吸 收程度与该物质浓度成正比，因此可以利用各种物质不同的 吸收光谱及其强度，对不同物质进行定性和定量的分析。
Lambert 定律 lgI0/I=K1L
Beer 定律 lgI0/I=K2C
Lambert-Beer 定律 lgI0/I=KCL
令A= lgI0/I 则 A= -lgT= KCL T为透光度； A为吸光度； K为消光系数
Fingure 1. The main elements of spectrometer
端旁；用橡皮球吸液体至刻度上，眼睛看着液面 上升；吸完后用食指顶住吸管顶端；吸管保持垂 直，尖端与试剂瓶接触，用食指控制液体下降至 所需体积的刻度处，液体凹面、刻度和视线应在 同一水平面上；吸管移入准备接受溶液的盛器中， 放开食指，使液体自动流出
二、离心机的使用
➢ 装液 将待离心的液体置于玻璃离心管（刻度离心管） 或短试管中。
➢ 直接计算法： C样=A样/A标*C标
➢ 标准曲线法：浓度为X轴，吸光度为Y轴绘制标 准曲线，在标准曲线上获得未知浓度CoSO4的浓 度。
结果
管号 空白管 1
Abs
0
A
2
3
4 未知
722型分光光度计
λ=500nm 制作人：
日期：
0
？
CoSO4溶液标准曲线
CoSO4(%)
结果
• 计算法结果 • 标准曲线法结果
B：
• A.选用最大刻度的吸管
• B.应选用取液量最接近的刻度吸管
• C.选用最小刻度的吸管
• 3.离心时平衡好放入离心机时
A：
• A.对称放置 B.分开放置 C. 紧挨放置
➢ 停止 到达离心时间后，逐渐减速并切断电源。当离 心机停止转动后，取出离心管和离心套管，倒去离心 套管内的平衡用水，倒置于干燥处晾干。
操作练习
取 1滴 血浆放入小试管 ，加入 10 滴 10% 三氯醋酸。观察现象。
离心3000r/min 5 minutes。 观察离心 后的现象。
三、分光光度法
实验一 生化实验基本操作
移液管、离心机，分光光度计的使用
实验室规则
• 穿实验服 • 仪器使用的安全 • 实验室卫生 • 自己的实验器材的保管与赔偿
实验要求
• 认真做实验 • 认真写实验报告 • 实验与考试
目的
• 熟悉并掌握移液管、离心机、 比色仪的使用
一、吸量管的使用
• 选用原则 ：应选用取液量最接近的刻度吸管 • 使用： 中指和拇指拿住吸管上端，食指置吸管上
➢ 平衡 两只装有待离心液体的离心管分别放入两个完 整的并且配备了橡皮软垫的离心套管之中，置天平两 侧配平，用滴管在较轻一侧离心管和套管之间加水， 直到平衡。
➢ 放置 检查离心机，机内应无异物和无用的套管，并 且运转平稳。将已配平的两管对称地放入离心机的离 心孔内，做好标记，盖好上盖，开启电源。
➢ 离心 顺时针慢慢旋动转速调节钮，增加离心机转速。 当离心机转速达到要求时，记录离心时间。
• 判断题
• 1.离心不用平衡，感觉差不多就行了（×） • 2.用分光光度计测量时吸收值越大，该物质浓度越小（×） • 3.离心时速度为0时即可打开盖子（×）
• 单选题
• 1. 每种物质都具有特异的吸收光谱，在一定条件下，其吸收程度与该 物质浓度成 A 比
• A .正 B .反 C .没关系
• 2. 吸量管选用原则
分光ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ度计的使用
▪ 开机，预热20分钟。调波长。 ▪ 调零：T=0，T=100，A=0。 ▪ 测A。
1. 721 型分光光度计 2. 722 spectrometer ( digital spectrometer)
练习操作
根据4个标准浓度的硫酸钴溶液，使用分光光 度计（波长500nm）获得未知浓度硫酸钴溶液的 浓度。 0.5%、 1.0%、 1.5%、 2.0%
物质的吸收光谱与它们本身的分子结构有关，不同物质 由于其分子结构不同，对不同波长光线的吸收能力也不同。
每种物质都具有特异的吸收光谱，在一定条件下，其吸 收程度与该物质浓度成正比，因此可以利用各种物质不同的 吸收光谱及其强度，对不同物质进行定性和定量的分析。
Lambert 定律 lgI0/I=K1L
Beer 定律 lgI0/I=K2C
Lambert-Beer 定律 lgI0/I=KCL
令A= lgI0/I 则 A= -lgT= KCL T为透光度； A为吸光度； K为消光系数
Fingure 1. The main elements of spectrometer
端旁；用橡皮球吸液体至刻度上，眼睛看着液面 上升；吸完后用食指顶住吸管顶端；吸管保持垂 直，尖端与试剂瓶接触，用食指控制液体下降至 所需体积的刻度处，液体凹面、刻度和视线应在 同一水平面上；吸管移入准备接受溶液的盛器中， 放开食指，使液体自动流出
二、离心机的使用
➢ 装液 将待离心的液体置于玻璃离心管（刻度离心管） 或短试管中。
➢ 直接计算法： C样=A样/A标*C标
➢ 标准曲线法：浓度为X轴，吸光度为Y轴绘制标 准曲线，在标准曲线上获得未知浓度CoSO4的浓 度。
结果
管号 空白管 1
Abs
0
A
2
3
4 未知
722型分光光度计
λ=500nm 制作人：
日期：
0
？
CoSO4溶液标准曲线
CoSO4(%)
结果
• 计算法结果 • 标准曲线法结果
B：
• A.选用最大刻度的吸管
• B.应选用取液量最接近的刻度吸管
• C.选用最小刻度的吸管
• 3.离心时平衡好放入离心机时
A：
• A.对称放置 B.分开放置 C. 紧挨放置
➢ 停止 到达离心时间后，逐渐减速并切断电源。当离 心机停止转动后，取出离心管和离心套管，倒去离心 套管内的平衡用水，倒置于干燥处晾干。
操作练习
取 1滴 血浆放入小试管 ，加入 10 滴 10% 三氯醋酸。观察现象。
离心3000r/min 5 minutes。 观察离心 后的现象。
三、分光光度法
实验一 生化实验基本操作
移液管、离心机，分光光度计的使用
实验室规则
• 穿实验服 • 仪器使用的安全 • 实验室卫生 • 自己的实验器材的保管与赔偿
实验要求
• 认真做实验 • 认真写实验报告 • 实验与考试
目的
• 熟悉并掌握移液管、离心机、 比色仪的使用
一、吸量管的使用
• 选用原则 ：应选用取液量最接近的刻度吸管 • 使用： 中指和拇指拿住吸管上端，食指置吸管上
➢ 平衡 两只装有待离心液体的离心管分别放入两个完 整的并且配备了橡皮软垫的离心套管之中，置天平两 侧配平，用滴管在较轻一侧离心管和套管之间加水， 直到平衡。
➢ 放置 检查离心机，机内应无异物和无用的套管，并 且运转平稳。将已配平的两管对称地放入离心机的离 心孔内，做好标记，盖好上盖，开启电源。
➢ 离心 顺时针慢慢旋动转速调节钮，增加离心机转速。 当离心机转速达到要求时，记录离心时间。
• 判断题
• 1.离心不用平衡，感觉差不多就行了（×） • 2.用分光光度计测量时吸收值越大，该物质浓度越小（×） • 3.离心时速度为0时即可打开盖子（×）
• 单选题
• 1. 每种物质都具有特异的吸收光谱，在一定条件下，其吸收程度与该 物质浓度成 A 比
• A .正 B .反 C .没关系
• 2. 吸量管选用原则
分光ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ度计的使用
▪ 开机，预热20分钟。调波长。 ▪ 调零：T=0，T=100，A=0。 ▪ 测A。
1. 721 型分光光度计 2. 722 spectrometer ( digital spectrometer)
练习操作
根据4个标准浓度的硫酸钴溶液，使用分光光 度计（波长500nm）获得未知浓度硫酸钴溶液的 浓度。 0.5%、 1.0%、 1.5%、 2.0%