临床病原学检查PPT

㈡尿 液
无菌采集清洁中段尿 导尿或膀胱穿刺获得
㈢粪 便
取含脓、血或粘液粪便置于清洁容 器内
排便困难者或婴幼儿可用直肠拭子 对传染性腹泻须三次送检
㈣呼吸道标本
1.痰：⑴自然咳痰法 ⑵气管镜采集法
2.鼻咽拭标本：同痰标本用清水漱口 后采集
㈤脑脊液与其他无菌体液
脑脊液标本应立即保温送检 胸腹水等体液标本应抽取2-5ml送检
培养基选择 生长条件：一般大气条件
厌氧条件 微需氧条件
2.病原体诊断的基本方法
➢ 鉴定技术： 生化鉴定 血清学鉴定 数码鉴定 自动化鉴定
2.病原体诊断的基本方法
➢ 血清学诊断：查特异性抗体——肥达氏 试验
➢ 病原体特异性抗原检测 ➢ 病原体核酸检测：查特异基因片段
DNA/RNA——PCR、DNA探针杂交技术
临床病原学检查
[目的要求]
掌握：感染性疾病的诊断和治疗原则 熟悉：感染性疾病病原学实验诊断及
抗生素治疗的主要实验室监测方法 了解：病原学诊断的重要性，现代感
染的类型和病原微生物的变迁
病原体检查的作用
1.感染性疾病的明确诊断 2.通过药敏试验指导临床合理用药 3.病原体监控和耐药性监控
第一节 标本采集、运送和检查方法
1.定义:病人入院时不存在,也不处于潜伏 期，而在医院内发生的感染，包括医院 内获得而在出院后发病的感染。
医院感染检查
2.医院感染常见病原体（细菌）：革 兰阴性杆菌、革兰阳性球菌 （MRSA）、厌氧菌和深部真菌等
医院感染检查
结果表示:S-Susceptible I-Intermediate R-Resistant
②稀释法（MIC） ③Etest ④联合药敏试验
一.抗微生物药物敏感性试验 （AST）
⑵自动化仪器 Vitek，Microscan ⑶分子试验 PCR直接检测mecA基因 ⑷补充试验 Nitrocefin
一.抗微生物药物敏感性试验（AST）
二.耐药机制及耐药性监测试验
⑷耐药基因检测 如MRSA中mecA基因检测
耐药性统计和分析
100
WHONET 80
60
东部
西部
40
北部
20
0 第一季度 第二季度 第三季度 第四季度
建立本院、本地区和本国的细菌耐药 性监测数据库和网络
第三节
医院感染检查（Nosocomial Infection）
医院感染检查
二.耐药机制及耐药性监测试验
3.耐药性监测的特殊试验 ⑴ -内酰胺酶检测
方法:头孢哨噻吩滤纸片法(nitrocefin) 意义: -内酰胺酶检测阳性,即对青霉素、
氨卞西林等抗生素耐药
二.耐药机制及耐药性监测试验
⑵超广谱-内酰胺酶检测（ESBL） 定义：是水解青霉素，一代、二代和三代 头孢菌及单酰胺类药物的酶，产生ESBL 的细菌对上述抗生素耐药。 ESBL主要存在于大肠杆菌和肺炎克雷伯 菌等革兰阴性菌中。
㈥泌尿生殖道标本
性传播疾病取尿道口分泌物、阴道 宫颈口分泌物
生殖道疱疹常穿刺取疱疹液
来自百度文库创伤、组织和脓肿标本
开放性脓肿：无菌棉拭采集脓液 封闭性脓肿：无菌注射器穿刺抽取
二.病原体检查的基本方法
1.临床标本细菌检验一般程序
一般程序
直接涂片，染色镜检
标本
分离培养
需氧培养
二氧化碳培养
观察菌落形态
3.药敏试验结果与临床抗生素剂量关系 敏感(S)——一般剂量有效，推荐使用该抗生素用于
临床治疗 中介(I)——大剂量有效，提示药物MIC接近体液或组
织可达到药物浓度 耐药(R)——大剂量无效,即常规用药剂量不能达到
MIC
一.抗微生物药物敏感性试验（AST）
4.K-B纸片扩散试验的影响因素 琼脂厚度 与抑菌圈直径成反比 菌液浓度 与抑菌圈直径成反比 药敏试纸 含量–与抑菌圈直径成反比
1.耐药菌株： 耐甲氧西林葡萄球菌（MRS） 耐青霉素肺炎链球菌（PRSP） 耐万古霉素肠球菌（VRE） 质粒介导的超广谱-内酰胺酶（ESBL） 多重耐药的铜绿假单胞菌、嗜麦芽假单 胞菌和不动杆菌
二.耐药机制及耐药性监测试验
2.耐药机制： ⑴药物渗入细菌减少 ⑵产生灭火酶和钝化酶(-内酰胺酶) ⑶细菌抗生素结合蛋白发生改变（PBP） ⑷代谢拮抗剂产生
一.标本采集和运送
采集标本注意点： 1.标本容器必须无菌或清洁容器 2.选择最佳时间采集标本，在抗菌药物使
用前 3.获取标本时，须严格无菌操作 4.标本采集后，应尽快送实验室
㈠血 液
发热初期和高峰期采集 抗菌药物治疗前 成人每次10-20ml，婴幼儿1-2ml 标本不用抗凝剂 24小时内，可在不同部位采血3次
第二节 细菌耐药性检查
一.抗微生物药物敏感性试验（AST）
1.定义：对敏感性不能预测的临床分 离菌株进行药敏试验，以指导临床 选择治疗药物和了解区域或医院内 常见病原菌耐药性变迁，有助于临 床经验性治疗选药。
一.抗微生物药物敏感性试验（AST）
2.常用敏感性试验方法 ⑴手工试验:①K-B纸片琼脂扩散法
保存温度–20℃，使用前室温平衡 30min后开启 湿度-密封容器，硅胶防潮 NCCLS标准 培养种类(MH),厚度(4mm) 接种量(0.5MF) 选药标准,判读标准,质控标准
质控参考菌
金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 铜绿假单胞菌
ATCC 25923 ATCC 25922 ATCC 26853
二.耐药机制及耐药性监测试验
单个菌落
血清学鉴定
生化鉴定
增菌培养 厌氧培养
涂片、染色镜检 药敏试验
确定致病菌发出报告
2.病原体诊断的基本方法
➢ 直接显微镜检测（microscopic examination） ⑴染色标本检查法：革兰染色和抗酸染色 ⑵不染色标本检查法：悬滴法和压滴法
2.病原体诊断的基本方法
➢ 病原体分离培养(isolation and culture)和鉴定(identification)
二.耐药机制及耐药性监测试验
⑵超广谱-内酰胺酶检测（ESBL） 方法：纸片扩散法和稀释法 意义：ESBL阳性预示对头孢泊肟、头孢
他啶、头孢噻肟、头孢曲松和氨曲南等 抗菌药物无效。
二.耐药机制及耐药性监测试验
⑶琼脂筛选试验（agar screen test） 是以单一药物单一浓度检测细菌耐药性， 如耐甲氧西林葡萄球菌和耐万古霉素肠 球菌检测。