2.13 基因工程制药-基因工程药物的制造实例
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0.05%NaCl，0.01%NH4Cl等。发酵培养基加入氨
苄青霉素，防泡剂。30℃发酵8h，然后在42℃诱
导2-3h可完成发酵。每隔不同的时间取发酵液，离 心称量湿菌体。
2、产品的提取与纯化
1）冷却后离心，除上清液，得湿菌体悬浮于缓冲液中，冰
浴条件下超声破碎； 2）离心，取沉淀部分；加尿素、缓冲液和二巯基苏糖醇 溶液溶解。搅拌抽提2h，离心取上清。 3）加入复性缓冲液，离心，除去不溶物。
4）超滤器浓缩后，经Sephadex G50 分离。
5）经SDS-PAGE检查。 6）再经DE-52柱纯化。
三、质量控制标准和要求
1、半成品检定 ⑴干扰素效价测定 ⑵蛋白质含量测定
⑶比活性
⑷纯度测定
⑸相对分子量测定
⑹残余外源性DNA含量测定 ⑺残余血清IgG含量测定 ⑻残余抗生素活性测定 ⑼紫外光谱扫描 ⑽肽图测定 ⑾等电点测定 ⑿除菌半成品应做干扰素效价测定、无菌试验、热 原试验。
2、成品检定
⑴物理性状
⑵鉴别试验
⑶水分测定
⑷无菌试验 ⑸热原试验 ⑹干扰素效价测定 ⑺安全试验
小
结
2003 年抗非典期间，江南大
学与丽珠集团苏州新宝制药
厂合作攻关，通过发酵工程 和生物制药工程研制成功了 重组人 α-2b 干扰素口鼻腔喷 雾剂，解决了干扰素常温保 存稳定性问题。在疫区特殊 人群捐赠使用，效果显著。
一、基因工程菌的组建 二、基因工程干扰素的制备
启开种子 制备种子液 发酵培养 粗提
干扰素是人体防御系统的重要组成部分。根据分子结构 和抗原性的差异分为α、β、γ、ω等4个类型。α型干扰 素在分为α1b、α2a、α2b等亚型，其区别仅表现为个别 氨基酸。 是我国已经批准上市的基因工程药物。 早期获得方法：用病毒诱导人白血球(白细胞)产生，产 量低，价格贵。300L人血才提取1mg 。
基因工程制药
基因工程药物制造实例
高明华
呼伦贝尔学院
干扰素
概念：（interferon，IFN） 干扰素是一种细胞因子，它是机体感染病毒时，宿主细胞
通过抗病毒应答反应，而产生的一组结构类似、功能相近
的低分子糖蛋白。
发现：干扰素是1957年英国科学家Isaccs等发现的。他们
把灭活的流感病毒作用于小鸡细胞，结果发现这些细胞产 生了一种可溶性物质，这种物质能抑制流感病毒，并且能 干扰其它病毒的繁殖，因此，称之为“干扰素”。
Ⅱ型干扰素：干扰素γ（IFN)
来源：活化的T细胞和NK细胞产生 功能：免疫调节
提高单核巨噬细胞、树突状细胞的抗原提呈能力
增强Tc细胞和NK细胞的杀伤活性
抑制TH2细胞形成，下调体液免疫应答
趋化作用 抗病毒和抗肿瘤作用（次要）
第十三节 基因工程药物制造实例
干扰素是真核细胞对各种刺激作出反应而自然形成 的一组复杂的蛋白质。 干扰素除具有广谱抗病毒活性，还具有抑制细胞分 裂，特别是抑制肿瘤细胞生长和免疫调节等功能， 作为一种生物活性蛋白有着良好的临床应用价值。
干扰素
后来科学家们进一步发现，机体对入侵的异种核酸（包括 病毒）都产生干扰素以进行防御。当机体细胞受到病毒感 染时，机体细胞产生干扰素，干扰病毒复制，它是机体抗 病毒感染的防御系统。
天然干扰素分类
Ⅰ型干扰素： IFNα、IFNβ、IFNΒιβλιοθήκη Baiduτ、IFN ω
来源：白细胞、成纤维细胞、病毒感染的组织细胞等 功能 ：抗病毒感染、抗肿瘤生长、疫调节(较弱） 其中IFN-α为多基因产物，有23种以上的亚型。
精提
冻干
半成品制备
成品检定
半成品检定
成品包装
分装
重组人α-2b干扰素生产过程
1、发酵
工程菌：SW-IFNα-2b/E.coli DH5α，质粒用PL启
动子，含氨苄青霉素抗性基因。种子培养基含1%蛋
白胨0.5%酵母提取物0.5%NaCl。制备种子液作为 发酵罐种子使用。
发酵培养基：1%蛋白胨，0.5%酵母提取物，
苄青霉素，防泡剂。30℃发酵8h，然后在42℃诱
导2-3h可完成发酵。每隔不同的时间取发酵液，离 心称量湿菌体。
2、产品的提取与纯化
1）冷却后离心，除上清液，得湿菌体悬浮于缓冲液中，冰
浴条件下超声破碎； 2）离心，取沉淀部分；加尿素、缓冲液和二巯基苏糖醇 溶液溶解。搅拌抽提2h，离心取上清。 3）加入复性缓冲液，离心，除去不溶物。
4）超滤器浓缩后，经Sephadex G50 分离。
5）经SDS-PAGE检查。 6）再经DE-52柱纯化。
三、质量控制标准和要求
1、半成品检定 ⑴干扰素效价测定 ⑵蛋白质含量测定
⑶比活性
⑷纯度测定
⑸相对分子量测定
⑹残余外源性DNA含量测定 ⑺残余血清IgG含量测定 ⑻残余抗生素活性测定 ⑼紫外光谱扫描 ⑽肽图测定 ⑾等电点测定 ⑿除菌半成品应做干扰素效价测定、无菌试验、热 原试验。
2、成品检定
⑴物理性状
⑵鉴别试验
⑶水分测定
⑷无菌试验 ⑸热原试验 ⑹干扰素效价测定 ⑺安全试验
小
结
2003 年抗非典期间，江南大
学与丽珠集团苏州新宝制药
厂合作攻关，通过发酵工程 和生物制药工程研制成功了 重组人 α-2b 干扰素口鼻腔喷 雾剂，解决了干扰素常温保 存稳定性问题。在疫区特殊 人群捐赠使用，效果显著。
一、基因工程菌的组建 二、基因工程干扰素的制备
启开种子 制备种子液 发酵培养 粗提
干扰素是人体防御系统的重要组成部分。根据分子结构 和抗原性的差异分为α、β、γ、ω等4个类型。α型干扰 素在分为α1b、α2a、α2b等亚型，其区别仅表现为个别 氨基酸。 是我国已经批准上市的基因工程药物。 早期获得方法：用病毒诱导人白血球(白细胞)产生，产 量低，价格贵。300L人血才提取1mg 。
基因工程制药
基因工程药物制造实例
高明华
呼伦贝尔学院
干扰素
概念：（interferon，IFN） 干扰素是一种细胞因子，它是机体感染病毒时，宿主细胞
通过抗病毒应答反应，而产生的一组结构类似、功能相近
的低分子糖蛋白。
发现：干扰素是1957年英国科学家Isaccs等发现的。他们
把灭活的流感病毒作用于小鸡细胞，结果发现这些细胞产 生了一种可溶性物质，这种物质能抑制流感病毒，并且能 干扰其它病毒的繁殖，因此，称之为“干扰素”。
Ⅱ型干扰素：干扰素γ（IFN)
来源：活化的T细胞和NK细胞产生 功能：免疫调节
提高单核巨噬细胞、树突状细胞的抗原提呈能力
增强Tc细胞和NK细胞的杀伤活性
抑制TH2细胞形成，下调体液免疫应答
趋化作用 抗病毒和抗肿瘤作用（次要）
第十三节 基因工程药物制造实例
干扰素是真核细胞对各种刺激作出反应而自然形成 的一组复杂的蛋白质。 干扰素除具有广谱抗病毒活性，还具有抑制细胞分 裂，特别是抑制肿瘤细胞生长和免疫调节等功能， 作为一种生物活性蛋白有着良好的临床应用价值。
干扰素
后来科学家们进一步发现，机体对入侵的异种核酸（包括 病毒）都产生干扰素以进行防御。当机体细胞受到病毒感 染时，机体细胞产生干扰素，干扰病毒复制，它是机体抗 病毒感染的防御系统。
天然干扰素分类
Ⅰ型干扰素： IFNα、IFNβ、IFNΒιβλιοθήκη Baiduτ、IFN ω
来源：白细胞、成纤维细胞、病毒感染的组织细胞等 功能 ：抗病毒感染、抗肿瘤生长、疫调节(较弱） 其中IFN-α为多基因产物，有23种以上的亚型。
精提
冻干
半成品制备
成品检定
半成品检定
成品包装
分装
重组人α-2b干扰素生产过程
1、发酵
工程菌：SW-IFNα-2b/E.coli DH5α，质粒用PL启
动子，含氨苄青霉素抗性基因。种子培养基含1%蛋
白胨0.5%酵母提取物0.5%NaCl。制备种子液作为 发酵罐种子使用。
发酵培养基：1%蛋白胨，0.5%酵母提取物，