实验四 血清甘油三脂的测定

三、【实验仪器】
（1）试管
3支
（2）水浴箱
1台
（3）试管架
1个
（4）洗耳球
1个
（5）微量五档可调移液器 2支
（6）刻度吸量管（5ml） 1支
（7）72-2型分光光度计 1台
四、【实验试剂】
• 1、三脂酰甘油酶试剂的组成：
• ①、PH7.6 Tris-HCl缓冲溶液150mmol/L; • ②、脂肪酶或脂蛋白脂酶3000U/L； • ③、甘油激酶250U/L； • ④、磷酸甘油氧化酶3000U/L； • ⑤、ATP 0.5mmol/L； • ⑥、过氧化物酶（辣根）1000U/L； • ⑦、胆酸钠 3.5mmol/L； • ⑧、MgSO4 17.5mmol/L； • ⑨、4-AAP 1mmol/L；⑩4-氯酚 3.5mmol/L；
甘油三酯 H 2O LPL甘油 3脂肪酸 甘油 ATP GK,Mg2 3 磷酸甘油 ADP 3 磷酸甘油 O2 2H 2O GPO磷酸二羟丙酮 2H 2O2 H 2O2 4 AAP 4 氯酚 POD苯醌亚胺 2H 2O HCl
POD、4-AAP、4-氯酚三者合称PAP，故本法称GOD-PAP法。 500nm波长处测定吸光度，对照标准计算出TG含量
11.0mmol/L • ——（用生理盐水稀释后重新测定，测定结果乘于稀释
倍数）
六、【临床意义】
TG升高：
1、随年龄增长有上升趋势，体重超标者。 2、高脂血症、糖尿病、肾病综合症、动脉粥样硬化、
甲状腺功能减退等。 3、先天性脂蛋白脂酶缺陷，脂肪肝及其他肝病。
4、妊娠后期，糖原累积病。
TG降低：
甲亢、肾上腺皮质功能降低、肝功能严重低下等。
低高密度脂蛋白血症：血清 HDL－C 水平降低, HDL－C < 0.91mmol/L
7
高脂血症的危害
冠状动脉粥样硬化使 血管腔狭窄或阻塞
冠心病，急性心肌梗塞
8
高脂血症的危害
肾动脉粥样硬化 肾功能衰竭 尿毒症
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高脂血症的危害
脂肪肝 肝硬化 胆石症 胰腺炎 眼底出血
失明 周围血管疾病
跛行
高尿酸血症
五、【操作步骤】
（3）计算：
TG (mmol/L)
测定管吸光度（Au）
=
× 标准液浓度
标准管吸光度（As）
参考值：
1.13mmol/L
0.56~1.70mmol/L
六、【注意事项】
• 1.标本要求是餐后12-14h的空腹血液 • ——（血清TG易受饮食影响）。 • 2、标本存放4℃不宜超过3天 • ——（避免TG水解而释放出甘油）。 • 3、本法的线性关系上限为11.4mmol/L，若所测TG值超过
• 2、1.13mmol/L三脂酰甘油水溶液标准液
五、【操作步骤】
（1）取试管3支，标号，按下表加入各反应物：
加入物 空白管（O） 标准管（S） 测定管（U）
待测血浆
——
——
10µL
标准液
——
10µL
——
生理盐水
10µL
——
——
酶试剂
1.00mL 1.00mL
1.00mL
（2）混匀，置37℃水浴保温15min，在波长为500nm处比色， 以空白管调“0”，读取各管吸光度。
高胆固醇血症：血清TC水平增高
TC> 5.72mmol/L , TG <1.70mmol/L
混合型高脂血症：血清TC与TG水平均增高
临
TC > 5.72mmol/L ,TG >1.70mmol/L
床
上
高甘油三酯血症：血清TG水平增高,>1.70mmol/L
而TC含量正常，即TC < 5.72mmol/L
实验四 血清甘油三脂测定实验 ——酶法
检验教研室：吕鹏
【目的要求】
• 1、掌握酶法测定甘油三脂的原理和操作步骤； • 2、掌握移液器的Fra Baidu bibliotek用； • 3、掌握分光光度计的使用。
正常？
一、概述
机体脂类代谢
血脂
异常？
3
血脂代谢异常 ??? 疾病
动脉粥样硬化
不稳定型心绞痛
血脂代谢异常
冠脉猝死
急性心肌梗塞
4
什么是血脂 ?
血脂：血浆或血清中所含的脂类（质）的总称
血脂
总胆固醇（TC） 胆固醇酯(CE)
游离胆固醇(FC)
三酰甘油酯（TG） 磷脂（PL）
游离脂肪酸（FFA）
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脂蛋白结构示意图
使脂蛋白颗粒稳定、均匀地分散在血浆，可与酶及细胞表面的受体接触， 在脂蛋白代谢中起关键作用
载脂蛋白
磷脂 游离胆固醇
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高脂血症高危人群警惕沉默
杀手
有高脂血症家族史
高血脂、糖尿病、 肥胖者
冠心病、脑血管疾病或周围 动脉粥样硬化病的人群
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高脂血症高危人群警惕沉默
杀手
男性>40岁和 绝经后的女性
饮食不当、运动量少、长期静坐者
生活无规律、情绪容易激动、 精神处于紧张状态者
长期吸烟、酗酒者
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二、【实验原理】
(一) 三酰甘油脂测定——酶法（GPO-PAP法）
.血清中三酰甘油经脂蛋白酶（LPL）作用，水解 生成甘油和脂肪酸。甘油在甘油激酶催化下，生成3磷酸甘油，再经甘油磷酸氧化酶（GPO）作用，氧化 生成磷酸二羟丙酮和H2O2，然后，H2O2在POD作用 下与4-AAP及4-氯酚（三者合称PAP）反应，生成红 色醌类化物。
二、【实验原理】
(一) 三酰甘油脂测定——酶法（GPO-PAP法）
载脂蛋白
载脂蛋白 非极性 脂内核
胆固醇酯
甘油三酯
大致为球形颗粒，由两大部分组成，即疏水性的内核和亲水性的外壳。内核
由不同量的CE与TG组成，表层由载脂蛋白、PL及FC组成，FC及PL的极性基团向外
露在血浆中，载脂蛋白是兼性化合物，它的疏水部分掩蔽在脂蛋白中，而亲水部
分突出于脂蛋白颗粒的表面
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高脂血症的分类？