二硝基苯肼法测定柑橘和苹果中维生素C的含量

2，4-二硝基苯肼法测定柑橘和苹果中维生素C的含量

摘要：利用2，4-二硝基苯肼法测定苹果和柑橘中维生素C含量，在待测样品中加草酸处理过滤后于490nm处作紫外分光光度测定。结果得出了柑橘和苹果种维生素C 的含量。表明了结果的可靠性。

关键词：2，4-二硝基苯肼；柑橘；苹果；维生素C

Abstrat:Use 2, 4-2 determination of nitrobenzene hydrazine in apples and oranges in vitamin C content, for the samples 490nm after adding oxalic acid treatment filter where ultraviolet spectrophotometric. The results concluded that citrus and apple kind of vitamin C content .The

results showed the reliability.

Key words:2, 4-2 nitrobenzene hydrazine; Citrus;Apple ; Vitamin C

引言

维生素C又称为抗坏血酸，是所有抗坏血生物活性的化合物的统称。它在人体内不能直接合成，必须依靠膳食供给[1]500。维生素C不仅具有广泛的生理功能，能防止坏血病，关键肿，促进外伤愈合，使机体增强抵抗能力[2]489。而且在食品工业上常用作抗氧化剂，酸味剂及强化剂[3]673-676。因此，测量食品中维生素C的含量以评价食品品质及食品加工过程中维生素C的变化情况具有重要的意义。

抗坏血酸在机体同具有广泛的生理功能，已知体内许多重要物质的代谢反应都需要抗坏血酸的参与。它是脯氨酸羟基化酶的辅酶，故有增进胶原蛋白合成的作用。机体中许多含疏基的酶，需要依赖于作为还原剂的抗坏血酸的保护，使酶分子的疏基处于还原状态，从而维持其催化活性。由于抗坏血酸的氧化还原作用，它可促进免疫球蛋白的合成，增强机体的抵抗力。同时还能使氧化型谷胱甘肽转化为还原型谷胱甘肽（简称GSH），而GSH可与重金属结合而排出体外，因此维生素C常用于重金属的解毒。此外，抗坏血酸尚有许多其他生理功能，但其作用机理还不十分清楚。抗坏血酸是一种不饱和的多羟基内酯化合物，稍有酸味的糖类白色晶体，易溶于水，故属于水溶性维生素。在溶液中其分子内C2和C3之间的烯醇式羟基上的氢极易解离并释放出H+ ，而被氧化成脱氢抗坏血酸，氧化后仍具有维生素C的生理活性，但它易分解为二酮古洛糖酸，此化合物不再具有维生素C的生理活性。维生素C有很强的还原性，在碱性溶液中加热并有氧化剂存在时，易被氧化而破坏。还原型和氧化型抗坏血酸可以互相转变，在生物组织中自成一氧化还原系统。由于维生素在营养学和临床方面的重要意义，故对食物和生物材料中维生素含量的测定是十分必须的。

维生素C纯品为白色无臭晶体，熔点在190-192℃，易溶于水微溶于丙酮，在乙醇中溶解度更低，不溶于油剂[4]41-42。结晶抗坏血酸在空气中稳定，但它在水溶液中易被空气和其他氧化剂氧化，生产脱氢抗坏血酸；在碱性条件下易分解见光加速分解，在弱酸

条件中较稳定[6]90-91。

维生素C含量的测定方法很多。一般方法有2，6-二氯靛酚测定法；2，4-二硝基苯肼比色法；荧光分光光度法；电化学和高效液相色谱法。

维生素C广泛存在于植物组织中，新鲜的水果、蔬菜中含量较多。水果、蔬菜维生素C含量的测定依国标GB/T 6195-1986 是采用2，6-二氯靛酚测定法[5]。根据维生素C的氧化还原性质，从样品溶液由蓝色转变为粉红色来辨别其终点的到达。但是多数水果、蔬菜样品其提取液都具有一定的色泽，有的即使用硅藻土也很难脱色，因此，滴定终点不易辨认。而GB/T 6195-1986附录A 二甲苯-二氯靛酚比色法虽然适用于测定深色样品还原型抗坏血酸，但由于萃取液二甲苯为有机溶剂，有很强的毒性，既不用利于操作人员的健康，也不利于环境保护、故不推荐此测试方法。紫外分光光度快速测定法是根据维生素C具有对紫外产生吸收和对碱不稳定的特性，于波长490nm处测定样品溶液与碱处理样品两者吸光度之差，通过查标准曲线，即可计算样品中维生素C的含量。此法操作简单、快速准确、重现性好、结果令人满意。特别适合深色样品的测定。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

1.1.1 仪器

分光光度计；100ml的容量瓶；1000ml容量瓶；恒温箱；捣碎机；烧杯；玻璃1.1.2 试剂

（1）4.5mol/l的硫酸：取250mL浓硫酸，慢慢加于700mL水中，冷却后用水稀释 1000mL. （2）85%的硫酸:谨慎地加900mL浓硫酸于100mL水中。

（3）2%2,4-二硝基苯肼：称取2g2，4-二硝基苯肼溶于100mL4.5moL/L硫酸溶液中，过滤后贮于冰箱内备用，每次用前必须过滤。

（4）2%的草酸：溶解20g草酸于700mL水中，用水稀释至1000mL。

（5）1%的草酸：溶解10g草酸于700mL水中，用水稀释至1000mL。

（6）1%的硫脲：溶解硫脲5g于500mL草酸溶液（10g/L）中。

(7) 2%的硫脲：溶解硫脲10g于500mL草酸溶液（10g/L）中。

（8）1mol/L的盐酸

（9）抗坏血酸标准溶液：溶解100mg纯抗坏血酸于100mL草酸溶液（10g/L）中。（10）活性炭：将100g活性炭加到1mol/L盐酸750mL中，在水浴上煮沸回流1-2h,抽气过滤，用水洗至滤液无高价铁离子为止，然后置于110℃烘箱中烘干

1.2 实验原理

维生素C(抗坏血酸)化学名称为3一氧代一L一古龙糖酸呋喃内脂，其分子式为

C 6H

8

6

，相对分子质量为176．12，属于水溶性维生素，是一种对机体具有营养、调节和

医疗作用的生命物质。维生素C在医药上和化学上的应用非常广泛，是分析化学中常用