血友病基因诊断的研究

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２２ｉｎｖｅｒｓｉｏｎｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｕｓｅｏｆｌｏｎｇ — ｄｉｓｔａｎｃｅＰＣＲ（ＬＤ－ＰＣＲ）ｆｉｒｓｔｌｙ； ② Ｉｎｔｒｏｎ１ｉｎｖｅｒｓｉｏｎ：ｉｎｔｒｏｎ
【关键词】血友病甲；血友病乙；基因突变；测序；多重连接探针
ＴｈｅｓｔｕｄｙｏｆｔｈｅｈｅｍｏｐｈｉｌｉａｇｅｎｅｄｉａｇｎｏｓｅＬＡＩＤｏｎｇｂｏ，ＭＡＯＢｉｔａｏ，ＬＩＲｕ，ＳＵＮＸｉｎ．Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ
２６个外显子和外显子．内含子交界区设计引物，采用ＰＣＲ直接测序法检测点突变；（４）大片段缺失检测：对前三步检测阴性的患者，进一步采用多重连接探针扩增技术（ＭＬＰＡ）检测大片段缺失。
ｔｅｓｔｉｎｇｏｆＦ８ｇｅｎｅｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｉｎｅｍｏｐｈｉｌｉａＡｐａｔｉｅｎｔｓ：① Ｉｎｔｒｏｎ２２ｉｎｖｅｒｓｉｏｎｄｅｔｅｃｔｉｏｎ：ｉｎｔｒｏｎ
ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３— ５３２３．２０１６．０５．００３
论
著
血友病基因诊断的研究
赖东波毛碧涛李茹孙新
【摘要】目的
对２０名血友病甲患者和４例血友病乙患者进行基因诊断。方法
ＷｏｍｅｎａｎｄＣｈｉｌｄｒｅｎＭｅｄｉｃａｌＣｅｎｔｅｒ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１００００，Ｃｈｉｎａ
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＳｕｎＸｉｎ，Ｅｍａｉｌ：ｄｏｃｔｏｒｓｕｎｘｉｎ＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｅｏｍ
１血友病甲
患者Ｆ Ⅷ基因检测：（１）内含子２２倒位检测：首先采用长距离ＰＣＲ（ＬＤ — ＰＣＲ）对患者Ｆ Ⅷ基因内含子２２倒位进行检测；（２）内含子１倒位检测：对内含子２２倒位突变阴性患者，采用序列特异性ＰＣＲ进行内含子１倒位突变检测；（３）点突变检测：对内含子２２和１倒位突变阴性患者，针对ＦＮ基因
中国小儿血液与肿瘤杂源自文库２０１６年ｌＯ月第２ｌ卷第５期
ＪＣｈｉｎａＰｅｄｉａｔｒＢｌｏｏｄＣａｎｃｅｒ，Ｏｃｔｏｂｅｒ２０１６，Ｖｏｌ２１，Ｎｏ．５
・２３７・
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｍａｋｅｇｅｎｅｔｉｃｄｉａｇｎｏｓｉｓｉｎｈｅｍｏｐｈｉｌｉａｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ１．Ｇｅｎｅｔｉｃ
１ｉｎｖｅｒｓｉｏｎｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｕｓｅｏｆｓｅｑｕｅｎｃｅｓｐｅｃｉｉｃｆＰＣＲｉｎｉｎｔｒｏｎ２２ｉｎｖｅｒｓｉｏｎｎｅｇａｔｉｖｅｐａｔｉｅｎｔｓ；
③ ｐｏｉｎｔｍｕｔａｔｉｏｎｄｅｔｅｃｔｉｏｎ：ｐｒｉｍｅｒｓｗｅｒｅｄｅｓｉｇｎｅｄｔｏａｍｐｌｉｆｙｔｈｅ２６ｅｘｏｎｓａｎｄｅｘｏｎ－ｉｎｔｒｏｎｂｏｕｎｄａｒｉｅｓ，
２血友病乙患者ＦＩＸ基因检测：（１）点突变检测：针对Ｆ Ⅸ 基因的启动子、８个外显子和外显子一内含
子交界区设计引物，采用ＰＣＲ直接测序法检测点突变；（２）大片段缺失检测：对点突变检测阴性者，
进一步采用ＭＬＰＡ检测大片段缺失。结果
２０例血友病甲患者，共检出内含子２２倒位８例，内含
子１倒位１例，错义突变５例，插入突变ｌ例，大片段缺失１例，剪切突变４例。４例血友病乙患者
检测出错义突变２例，缺失伴插入突变１例，大片段缺失突变１例。其中新发现Ｆ Ⅷ基因突变３例
（ｃ．１００９＋２Ｃ＞Ｔ，Ｃ．６７０＋１Ｇ＞Ｃ，Ｃ．４７９８ｄｅｌＡ），Ｆ９基因突变１例（Ｃ．９３８— ９３９ｉｎｄｅｌＴ）。结论本
研究对血友病甲和血友病乙患者的基因诊断阳性率为１００％。