改良后的邻苯三酚自氧化法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性

改良后的邻苯三酚自氧化法

A.1试剂的制配

A.1.1A液：pH8.200.1mol/l三羟甲基氨基甲烷（Tris）-盐酸缓冲溶液（内含1mmol/L EDTA·2Na）。

称取1.2114g Tris和37.2mg EDTA·2Na溶于62.4ml0.1mol/L盐酸溶液中，用蒸馏水定容至100ml。

A.1.2B液：4.5mmol/l邻苯三酚盐酸溶液。

称取邻苯三酚（A.R）56.7mg溶于少量10mmol/L盐酸溶液，待邻苯三酚完

全溶解后，用10mmol/L盐酸溶液定容至100ml。

A.1.310mmol/l盐酸溶液。

A.1.4供试品溶液：

取1ml于500ml容量瓶中，用蒸馏水定容到500ml。即得供试液。

A.1.5蒸馏水：双重石英蒸馏水。

A.2仪器

紫外-可见分光光度仪，精密酸度计（精密度0.01pH），试管数支，100μl

移液枪，1000μl移液枪，10ml移液枪。

A.3方法

A.3.1调零在25℃左右，取2支试管，分别依次加入A液2.35ml，蒸馏水2.15ml；在325nm波长条件下，调零。

A.3.2邻苯三酚自氧化速率测定△A325在25℃，取2支试管（A管和B管），A 管中依次加入A液2.35ml，蒸馏水2.00ml；B管中分别加入B液0.15ml，把A

管倒入B管中，迅速摇匀，倾入比色皿，以A液2.35ml+蒸馏水2.15ml作为空

白对照，在325nm波长下每隔30s记录一次A值，共测6次，要求自氧化速率控制在0.060（±0.003）OD/min。

A.3.3酶活测定在25℃，在试管中加入A液2.35ml，蒸馏水1.8ml，在25℃

的水浴中预热5min,然后加入Vml的样液，再加入0.15mlB液，迅速摇匀，倾入比色皿，以A液2.35ml+蒸馏水2.15ml作为空白对照，在325nm波长下每隔30s 记录一次A值，共测6次。在此条件下，每分钟抑制邻苯三酚自氧化速率50%的酶量定为1个活力单位，即△A′325=1/2△A325。

A.4结果计算

ᳪ活力U/ml ྘Ẻ ྘Ẻ ྘Ẻ ྘྘

Ẻ྘ ྘Ẻ ᳪ·····式（1）

式中：

U/ml——SOD酶活力单位；

△A325——邻苯三酚自氧化速率；

△A′325——供试液抑制邻苯三酚自氧化速率；

V——所加供试液体积，单位为毫升（ml）；

D——供试液稀释倍数；

4.5——反应液总体积，单位为毫升（ml）。

计算结果保留3位有效数字。