中药的含量测定(精)

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第二节 含量测定样品的处理
样品处理的主要作用有： 将被测成分有效地从样品中释放出来，并制成便 于分析测定的稳定试样。 除去杂质、纯化样品，以提高分析方法的重现性 和准确度。 富集浓缩或进行衍生化，以测定低含量被测成分。 衍生化不仅可提高检测器的灵敏度，还可以提高方法的 选择性。 使试样的形式及所用溶剂符合分析测定的要求。
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第二节 含量测定样品的处理
⒍离子交换树脂： 憎水基质的离子交换树脂兼有离子交换 剂及大孔树脂的一些性质，所以对于在水中 溶解度不大的药物、洗脱剂中需含一定量的 有机溶剂。 离子交换树脂柱可用于除去样品中的离 子，防止组分分解，更常用于萃取样品液中 可离解化合物。
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第二节 含量测定样品的处理
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第二节 含量测定样品的处理 ⒌硅藻土、纤维素： 它们为常用的亲水型填料，其原理为分配 作用。填料作为支持剂，多以水基质液作为 固定相，与水不混溶的有机溶剂为流动相， 较亲脂的成分从固定相转移到流动相，而被 洗脱，达到萃取的目的。其萃取率较高（一 般大于 80% ），无浓集作用，萃取液较纯净， 但洗脱剂用量较大（一般大于5ml） 硅藻土柱则用干柱直接上样，柱可再生。 常见牌号为 Extretut。纤维素柱的使用与硅 藻土柱相似。
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第二节 含量测定样品的处理 ⒊大孔树脂：它可分为极性和非极性型
极性 非极性 丙烯酰胺聚合物; 苯乙烯和二乙烯苯的共聚物.
其吸附性质与烷基键合相硅胶相似，通过疏水作用 对非极性水溶性成份有吸附力。例如在测定复方归芪剂 中的黄芪甲苷时，用大孔树脂除去水溶性的多糖杂质， 再用30%乙醇洗脱黄芪甲苷。大孔树脂的主要特点是表 面积极大，传质速率较高和具有不同的极性及适于吸附 较大分子。
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第二节 含量测定样品的处理 ⒉键合相硅胶：
十八烷基键合相硅胶（简称C18或ODS）是常用的固体萃取 剂，其次有烷基、苯基、氰基键合相硅胶，可用来分开脂溶性 和水溶性杂质或成分。也常用于萃取，纯化水基质体液中憎水 性药物。该类LSE的一般操作程序为： 1)柱的活化。用2ml甲醇冲洗以润湿键合相和除去杂质，再用0.5 毫升水洗去柱中的甲醇。 2)上样。 3)清洗。用2～5ml的水清洗以除去弱保留的亲水成分，如无机盐、 氨基酸、亲水的蛋白质、糖以及中等保留成分的极性化合物、 低肽等。 4)洗脱。用2～5ml甲醇或甲醇-水洗脱大分子的肽、甾体、较亲脂 的药物等强保留的待测组分。
树脂在使用前需要前处理：用甲醇、乙醇、丙酮等 有机溶剂除去杂质，有时还需用酸、碱清洗。该填料用 量常为1～2g，有时也用100～150mg来萃取血、尿中药 物，操作程序类似ODS填料。
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第二节 含量测定样品的处理
⒋聚酰胺：
它是常用的有机吸附剂，主要通过与 溶质形成氢键而产生吸附作用。
常用于含酚、酸、醌类药物样品液的 净化分离， 如测定黄酮时，用样品的乙醇提取液 上柱，水洗去部分杂质，以95%乙醇洗脱总 黄酮后测定。
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第三节 常用定量分析方法
（二）滴定分析法 滴定分析法分为酸碱滴定法、沉淀滴定法、配位滴定法 和氧化还原滴定法。 1、酸碱滴定法 适用于测定中药制剂中所含有的生物碱、有机酸、内酯 类等酸、碱组分的含量。 ①直接滴定：对于K·C≥10-8的酸、碱组分，可在水溶液 中直接滴定。如：止喘灵注射液中总生物碱的含量测定、颠 茄酊中生物碱的含量测定。 ②间接滴定或非水滴定法：如大山楂丸中总酸性物质的 含量测定、草乌注射液中生物碱的含量测定等。 2、沉淀滴定法 主要用于生物碱、生物碱的氢卤酸盐及含卤素的其他有 机成分的含量测定。


对样品进行有机破坏，常用于中药制剂中重金属的检查。 常用的破坏方法有湿法消化和干法消化法。
⒈湿法消化：根据所用试剂不同，下面介绍三种常见的消 化方法。 （1）硝酸—高氯酸法 该法破坏能力强，反应较激烈，故 进行破坏时，必须严密注意切勿将容器中的溶液蒸干，以免发 生爆炸。本法适用于血，尿、组织等生物样品和含动植物药制 剂的破坏，经破坏后所得无机金属离子均为高价态，本法对含 氮杂环类有机物破坏不够完全。 （2）硝酸—硫酸法 该法适用于大多数有机物质的破坏， 无机金属离子均氧化成高价态，与硫酸形成不溶性硫酸盐的金 属离子的测定，不宜采有此法。
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第二节 含量测定样Fra Baidu bibliotek的处理
⒈硅胶、氧化铝等：
它们是传统的吸附剂，多以0.07～0.15mm(200～100目)的 颗粒1～5g用于样品的净化处理，其作用机制为溶质在吸附剂 表面的极性吸附作用。通常是当溶于有机溶剂的样品加到柱上 时非极性或低极性的杂质先被洗出色谱柱，再用适当极性的溶 剂洗脱被测成分，而强极性的杂质仍保留在柱上。 氧化铝能将黄酮类吸附在柱上，用于生物碱、苷类等的 测定。例如用ＵＶ法（吸收系数法） 硅胶适合于分离中性或酸性化合物，强烈保留碱性化合 物。若把样品提取液加到柱上，依次用极性由小到大的溶剂洗 脱，则可以将杂质和被测成分分离。
此外，近年来发展起来的固相微 萃取(Solid-Phase microextraction, SPME)和液相微萃取(Liquid- Phase microextraction,LPME)技术有良好 的应用前景。SPME是一种无溶剂的萃 取技术，取样方式有直接取样和顶空 取样。
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第二节 含量测定样品的处理 （五）消化法
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第二节 含量测定样品的处理 ⒉干法消化
本法是将有机物灼烧灰化以达分解的目的，将适量样品置 于瓷坩锅、镍坩锅或铂坩埚中，常加无水Na2CO3或轻质MgO等以 助灰化，混匀后，先小火加热，使样品完全炭化，然后放入高 温炉中灼烧，使其灰化完全即可。本法不适用于含易挥发性金 属（如汞、砷等，）有机样品的破坏。 应用本法时要注意以下几个问题： 1）加热灼烧时，控制温度在420℃以下，以免某些被测金 属化合物的挥发。 2）灰化完全与否，直接影响测定结果的准确度。如欲检查 灰化是否完全，可将灰分放冷后，加入稍过量的稀HCl-水（1:3） 或硝酸-水（1:3）溶液，振摇。若呈色或有不溶有机物，可于 水浴上将溶液蒸干，并用小火炭化后，再行灼烧。 3）经本法破坏后，所得灰分往往不易溶解，但此时切勿弃 去。
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第三节 常用定量分析方法
3、配位滴定法 包括EDTA法和硫氰酸铵法，在中药制剂分析中， 用以测定鞣质、生物碱及含Ca2+、Mg2+、Fe3+、 Hg2+等矿物类制剂的含量。如①万氏牛黄清心丸等 的含量测定就采用硫氰酸铵法；②牛黄解毒片中石 膏的含量测定。 4、氧化还原滴定法 适用于测定具有氧化还原性的物质，如含酚类、 糖类及矿物药Fe、As等成分的中药制剂。如①磁朱 丸中全铁的含量测定采用铈量法；②牛黄解毒片中 雄黄的含量测定；③丹皮酚注射液中丹皮酚的含量 测。
第三节 常用定量分析方法
特点 ①对仪器要求高，使用该法时， 应注意仪器波长、空白吸收的 校正，吸收度准确度的检定和 杂散光的检查 ②无需对照品，方法简便 对仪器要求较高
测定所配供试品溶液在规定波长的吸 收度，根据被测成分的吸收系数 （E1%1cm）计算其含量
对照品比较法
在同样条件下配制对照品溶液和供试 溶液，且使前者中所含被测成分的量 应为后者中被测成分的量的 100%±10%，用规定波测定二者的吸 收度，则可计算出供试品中被测成分 的浓度或含量
第四章 中药的含量测定
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第一节 含量测定的目的与意义
• 中药的含量测定与化药有很大区别 • 中药组成复杂，产生疗效的不是某单一成分，检测 任何一种活性成分均不能反映中药的整体疗效。 • 但是借鉴化药质量控制模式，测定某一味药味的有 效成分、活性成分、指标性成分的含量的方法，对 于控制中药质量起着不可替代的重要作用。 • 通过测定中药中有效成分、毒性成分或某些指标性 成分的含量来衡量其制剂工艺的稳定性和中药材的 质量优劣，以保证中药的质量，达到临床用药安全、 有效的目的。
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第二节 含量测定样品的处理
一、样品的粉碎
1.目的： ① 是保证含量测定所取样品均匀而有代表性，提高测定结果的 精密度和准确度； ② 是使样品中的被测组分能更快地完全提取出来。 2.粉碎时注意事项： ① 不要粉碎得过细。样品粉碎得过细，在样品提取时，会造成 过滤困难，因此可视实际情况进行粉碎过筛。 ② 避免污染样品。在粉碎样品时，要尽量避免由于设备的磨损 或不干净等原因而玷污样品， ③ 防止粉尘飞散或挥发性成分的损失。 ④ 过筛时，通不过筛孔的部分颗粒决不能丢弃，必须反复粉碎 或碾磨，让其全部通过筛孔。
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第三节 常用定量分析方法

分类重量分析和滴定分析。 化学分析法所用仪器简单，结果准确。
主要用于测定制剂中含量较高的一些成分及 含矿物药制剂中的无机成分，如总生物碱类、总 酸类、总皂苷及矿物药制剂等。
化学分析法有一定的局限性，其灵敏度低， 操作繁琐、耗时长，专属性不高，对于微量成分 准确性不理想。
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第三节 常用定量分析方法
二、可见一紫外分光光度法
该法是中药及其制剂含量测定的一种常 用方法,具有灵敏度高，精度好和操作简便 等优点。 该法要求被测成分本身或其显色产物对 可见—紫外光具有选择性吸收。按测定波长 数目不同分为单波长光谱法和多波长光谱法。
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（一）单波长光谱法
分类 吸收系数法 方法
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第二节 含量测定样品的处理 二、样品的提取 对于中药材和固体制剂样品，在粉碎后，取粉末适 量精密称定，首先用溶剂进行提取，使被测组分和某些 共存组分从中溶解出来（前者必须完全溶出），与滤渣 分离后，再对被测组分进行含量测定。
常见的提取方法：

冷浸法 回流提取法


连续回流提取法
超声提取法 超临界流体提取法
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第二节 含量测定样品的处理 （3）硫酸—硫酸盐法 本法所用硫酸盐为硫酸钾或无水硫酸纳，加入 硫酸盐的目的是为了提高硫酸的沸点，以使样品破 坏加速完全。同时防止硫酸在加热过程中过早地分 解为SO3而损失。经本法破坏所得金属离子，多为 低价态。本法常用于含砷或锑的有机样品的破坏， 破坏后得到三价砷或锑。 湿法消化所用的仪器，一般为硅玻璃或硼玻璃 制成的凯氏瓶（直火加热）或聚四氟乙烯消化罐 （烘箱中加热）。所用试剂应为优级纯，水应为去 离子水或高纯水，同时必须按相同条件进行空白实 验校正。操作时应在通风橱内进行。

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第三节 常用定量分析方法 （一）重量分析法
重量法可分为挥发法、萃取法和沉淀法。 1、挥发法可测定具有挥发性或能定量转化为挥发性物质 的组分含量。如：①供试品的干燥失重测定；②水分测定均属 挥发法；③中药制剂分析中灰分及炽灼残渣的测定等。 2、萃取法是根据被测组分在互不相溶的两相中溶解度的 不同，达到分离的目的。如①冰硼散中冰片的含量测定；②地 奥心血康胶囊中甾体总皂苷含量测定；③昆明山海棠片中总生 物碱的含量测定；④甘草浸膏中甘草酸的含量测定即采用萃取 法。 3、沉淀法是将被测组分定量转化为难溶化合物，测定其 含量的方法，适用于制剂中纯度较高的成分。如①西瓜霜润喉 片中西瓜霜的含量测定；②苦参片中苦参总碱的含量测定；③ 复方元胡注射液总碱的测定。
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第二节 含量测定样品的处理
三、样品的分离净化 （一）沉淀法 （二）蒸馏法 （三）液一液萃取法（LLE）
（四）色谱法
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第二节 含量测定样品的处理 （四）色谱法
吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱和凝胶色谱皆可作为中 药制剂分析中的净化分离方法，其操作方式有柱色谱，薄层色谱 和纸色谱。 其中经典微柱色谱，也称固相萃取或液—固萃取（LSE）具 有设备简单，使用方便，快速，净化效率较高而最常用，将在此 做一简介。 LSE通常是指样品溶液加到装有合适固定相（净化剂）的长 5`～15cm，内径0.5～1cm的色谱柱中，将被测成分保留于柱上， 洗去杂质后，再洗脱被测成分进行测定，或者是使杂质强烈保留 于柱上，直接洗脱被测成分进行测定。用这种选择性好而柱效较 低的方法进行样品的净化分离，尤其适用于一类总成分的含量测 定，也可将色谱柱流出的样品进一步用GC、HPLC、TCL分离后测 定。 LSE的常用净化剂（填料）有氧化铝、氧化镁、硅藻土、硅 胶、活性炭、大孔树脂离子交换树脂、键合相硅胶C8、C18、聚 酰胺等。视其性质可分为亲脂型、亲水型和离子交换型填料。