氟喹诺酮类兽药残留分析方法的综述

世纪 ８ ０年代来迅速发展起来 ， 继磺胺类药物之后人 类 在 合 成抗 生 素 方 面最 重 要 的 突 破 ，是 喹 诺 酮 类 药 物 第 三代 产 品。主要 代 表有 环 丙沙 星 （ Ｃ Ｉ Ｐ） 、 诺 氟 沙
星 （ Ｎ Ｏ Ｒ） 、 依 诺沙星 （ Ｅ Ｎ Ｏ） 、 培 氟沙 星 （ Ｐ Ｅ Ｆ） 、 氧 氟沙星 （ Ｏ Ｆ Ｌ） 等。 与 前 两代 喹诺 酮 类药 物相 比 ， 第 三 代 抗 菌谱 更 为 扩 大 ， 抗 菌作 用 强 ， 较 低 浓 度 即显 抗 菌 活 性 。可对抗 耐 药性 葡 萄球 菌 等革 兰 氏 阳性 菌 ， 对 革 兰 氏 阴性 菌 疗 效 更 佳 ， 而且价格适 中， 因此 ， 被 广 泛 地 应用 到食 源 性 动物 的饲 养 过程 中【 ” 。但 是 ， Ｆ Ｑ Ｎ ｓ 在 食 源 性 动 物 中 的滥 用 和 使 用 不 当现 象 也很 严 重 ， 造 成 Ｆ Ｑ Ｎ ｓ 残 留 在 动 物源 性 食 品 中导 致 人 体 内病 原 体 的耐药 性 ， 而且 某 些 Ｆ Ｑ Ｎ ｓ 具 有 潜 在 的致癌 性 。因此 ， 其 残 留 问题 已引 起 了 国 内外 的 广 泛关 注 ，包 括 我 国 在 内 的许 多 国家 对 几 种 临 床 上 常 用 的 Ｆ Ｑ Ｎ ｓ 药 物 都
强、 灵敏 度 高 、 高效 、 快速 的检 测方 法 。随着广 大人 民 群 众 生 活水 平 的提 高 ，我 国居 民 的 肉蛋 奶 摄 人量 明 显提高 ， 兽 药残 留检 测 已经 到 了高 速 发展 的时 期 ， 我 国对 氟 喹诺 酮类 药 物 残 留检 测 的研 究 还处 于初 级 阶
收率在 ７ ０ ％～ １ ０ ７ ％之 间 ， 变异 系数 在 １ ０ ％以内。 恩诺 沙 星和 环丙沙星 的最低检 出限分别为 ２ 、 ５纳克 ／ 克。
效分 离材 料 改 变 了常规 薄层 色 谱 （ Ｔ Ｌ Ｃ） 在 灵 敏 度 和 重现 性方 面 的不 足 ， 但保 持 了 Ｔ Ｌ Ｃ的大 的优 点 ， 可使 用 正 相或 反 相板 ， 因此可 以广 泛应用 在氟 喹诺 酮 多残
较适
闻 建立 了固相 萃取 一反相
匿 样 品 中 ４种 Ｆ Ｑ Ｎ ｓ 残 留
高 效
量 的
取及其在 Ｃ １ ８固相萃取
养殖技术顾 问 ２ ０ １ ４ ． ４
哼 研 究 与 综 述
柱 上 的净 化条 件进 行 了研 究 ，采用 荧 光检 测 器 检测 ，
己烷 淋 洗 ， ４ ％氨 水 甲醇 洗 脱 。４种 药 物 的 回收 率 为
物， 这表明 Ｈ Ｐ Ｉ ＡＣ柱具 有很 好 的选择 性 。 样 品 回收率 大于 ９ ５ ％， 重 现性 也很 高 。
皿法 （ Ｆ ｏ ｕ ｒ — Ｐ ｌ ａ ｔ ｅ Ｔ ｅ ｓ ｔ ， Ｆ ） ， 检测 市 场 上 零 售 肉 中恩
诺 沙 星 和环 丙 沙 星 的残 留 。 四平 皿法 虽 能 检 测 高 浓
中抑 制微 生 物 的生 长 。Ｏ ｋ ｅ ｒ ｍ ａ ｎ ｔ ２ １ 用 改 进 的 欧洲 四平
其特异性强 ， 纯化效率较高。Ｈ ｏ ｌ ｔ ｚ ａ ｐ ｐ ｌ ｅ 等圈 用Ｈ Ｐ Ｉ — Ａ Ｃ同 时检 测 了牛血 清 中的环 丙 沙 星 、恩 诺 沙 星 、 沙 拉沙星和二氟沙星 ， 用荧光检测器检测 ， 激发波 长和 发 射 波 长 分别 为 ２ ８ ０ 、 ４ ４ ４纳米 。样 品进 柱前 需 用 磷 酸盐缓 冲液进行 ｌ Ｏ 倍稀释 ，并经 ０ ． ２ 微米滤膜过滤 以除 去 微 粒 物质 。从 样 品矩 阵观 察 不 到 显著 的 干扰
报 道 了 测 定 鱼 饲 料 和 组 织 中 恶 喹 酸 、 氟 甲 喹 的 Ｈ Ｐ Ｔ Ｌ Ｃ方 法 。 ＨＰ Ｔ Ｌ Ｃ的斑点 原 位扫描 定量 、 定 性和 高
液， 脱脂 ， 浓 缩 至干 ， 用０ ． １ 摩尔 ， 升 磷 酸液 （ ｐ Ｈ值 为 １ ２） 溶解。Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ条 件荧 光 检 测 器 ， 激发波长 ２ ８ ０纳
７ ５ ． ９ ％～ ９ １ ． ６ ％， 最低检测限范围为 ５ ｌ ～ １ ０ ０微克 ／ 千 克。
外 标 法 定 量 。鸡 蛋样 品 中 ４种 沙星 的加 标 回收率 为
７ ８ ． １ ％～ ９ ５ ． ７ ％， 相对标准偏差 （ Ｒ Ｓ Ｄ） 为４ ． １ ％ １ ６ ． ２ ％。环 丙 沙星 、 恩 诺 沙星 、 沙拉 沙星 的最低 检 出限 （ Ｌ Ｏ Ｄ） 为 １ ０微 克 ／ 千克 ， 达 氟沙 星 的 Ｌ ０ Ｄ为 ２ 微克／ 千 克 。仲 锋 懒 过 同 时 检 测 鸡 组 织 中恩 诺 沙 星 和 环 丙 沙 星 残
段 ，应该 在 以后 的科 研 中努 力 研发 更 现代 化 的检 测
技术 ， 为我 国的畜牧 业及食 品安全 保 驾护航 。
参 考 文献 ：
［ １ 】 蔡卓倩 ， 陆基 宗． 喹诺酮类抗菌素 的新进展 和临床应用 ［ Ｊ Ｊ ．药品评
价， ２ ０ ０ ６ ， ３ （ ３ ） ： ２ ２ ０ — ２ ２ ２ ．
立 了检 测 肉鸡 组 织 中环 丙 沙 星 残 留 的 微 生 物 法 ， 各 组 织 样 品 中 的检 出限 为 ２ ５ ７ ５微 克 ／ 千克。
２ 免 疫 分 析 法
该 法 是 以抗 原 与 抗 体 的 特异 性 、可 逆 性 结合 反 应 为基 础检 测 各 种 物质 （ 药物、 激素 、 蛋 白质 、 微 生物
留量 的 方法 研 究 ， 采 用荧 光检 测 高 效液 相 色 谱 法 ， 以
０ ． １ 摩尔 ／ 升磷 酸液 （ ｐ Ｈ值 为 １ ２） 与 乙 晴 作 为 提 取
高， 具有分辨效率高 、 分析时间短 、 灵敏度高 的特点 ， 在兽 药 多 残 留检 测 中有很 好 的应 用 前景 。Ｖ ｅ ｇ ａ等１ １ ｏ ｌ
［ ２ １ Ｏｋ ｅ ｒ ｍ ａ ｎ ＬＨｏ ｏ ｆ Ｊ Ｖ ， Ｄ ｅ ｂ ｅ ｕ ｃ ｋ ｅ ｌ ａ ｅ ｒ ｅ Ｗ． Ｄ ｅ ｂ ｅ ｕ ｃ ｋ ｅ ｌ ａ ｅ ｒ ｅ Ｗ． Ｅ ｖ ａ ｌ ｕ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ
留快速筛查 。
４ 结 论
检测 Ｆ Ｑ Ｎ Ｓ在动 物食 品 中的残 留 ， 应选 择 特异 性
３ ． ２液相质谱联 用法 （ Ｌ ｃ— Ｍ Ｓ）
液质 联用 技术 结 合 了色谱 、 质谱 两 者 的优点 。质 谱 作 为 理 想 的色 谱 检测 器 ，将 色 谱对 复 杂样 品 的高 分离能力 ， 与质 谱具 有 高选 择 性 、 高 灵 敏度 及 能 够 提 供 相 对 分 子 质量 与 结构 信 息 的优 点结 合 起 来 ，在 药 物 分 析 、食 品分 析 和环 境分 析 等 许 多 领域 不 仅 特 异 性强 ， 而 且灵 敏 度极 高 ， 在Ｆ Ｑ Ｎ ｓ 药物 的残 留分 析 中 ， 以Ｌ Ｃ — ＭＳ作为 检 测手段 愈加 广泛 。 Ｔ ｏ ｕ ｓ ｓ ａ ｉ ｎ ｔ 等【 ｓ 噪 用 Ｌ Ｃ — ＭＳ对 猪 肾 中 １ １种 喹诺 酮类 药 物 同 时 定 量 和 确 证， 最 低检 出限 小于 或 等于 ５ Ｏ微 克 ／ 千克 ， 低 于欧 盟 规 定 的农 药最 高残 留限量 。陈笑梅 等 建立 了液相 色 谱 串联 质谱 法 测 定鳗 鱼 中恩 诺 沙 星 、 环丙沙星 、 诺 氟
研 究 与 综 述
氟 喹 诺 酮 类 兽 药 残 留 分 析 方 法 的 综 述
于 永 王 新 ３
（ １ ． 黑龙 江八 一农 垦大 学动物 科技 学 院 黑龙 江大庆 １ ６ ３ ３ １ ９ ， ２ ． 萝 北 出入境检 验 检 疫局 黑龙 江萝 北 １ ５ ４ ２ ０ ０ ， ３ ． 黑龙 江八 一农 垦 大 学动物科 技 学院 黑龙 江 大庆 １ ６ ３ ３ １ ９） 摘要 ： 氟喹诺 酮类 药物 （ Ｆ ＱＮｓ ） 在 动 物 源性 食 品 中导致 人体 内病 原 体 的耐 药性 。Ｆ ＱＮｓ 兽 药残 留
等） 的分析技术 ， 免疫分析法用于兽药残留分析可使 分 析过 程 大大 简化 。
２ ． １ 酶联 免 疫 分析 法 （ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ）
在使用 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ法 测 定抗 生 素 残 留时 ， Ｆ Ｑ Ｎ ｓ 结 构
中 的羧 基 与 载体 蛋 白质 游 离 氨基 发 生 缩 合反 应 。 因
３ ． ４ 高效 薄层 色谱 法 （ ＨＰ Ｔ Ｌ Ｃ）
高 效 薄 层 色 谱 采 用 粒 度 分 布 很 窄 的 微 粒 硅 剂 （ ５ ～ １ ０微米 ） 制备 高效 薄层 板 ， 用 程 序多级 展 开 或 园 形 展 开 技 术 使 薄 层 色 谱 的灵 敏 度 和 分 辨 率 大 大 提
米， 发射波长 ４ ５ ０ 纳米。流动相为 ０ ． ０ ５ 摩尔 ／ 升磷酸 三 乙胺 缓 冲液 （ ｐ Ｈ值为 ２ ． ４） 和 乙腈 。恩 诺 沙星 和环 丙 沙星 标 准 曲线线性 范 围为 ５ － ５ ０ ０纳克 ／ 毫升 。对脂
肪、 肝脏 、 肌 肉、 肾脏 的 ４种浓度 进行 回收率 测定 ， 其 回
１ ９微 克 ／ 升。
２ ． ２ 高效免 疫亲和 色谱 法 （ ＨＰ Ｉ ＡＣ）
该方 法利用抗原抗体反应提取所分 析的药物 ，
制定了相应 的最高残 留限量 。因为其残 留分析检验
工 作 的深 入开 展 ， 近 年来 各种 分 析方 法得 以发展 。
１ 微 生 物 法
该 法 适 用 于对 畜 禽 组 织 中 的抗 生素 进 行 快 速 筛 选 检 验 ，在 规 定 条 件下 选 用 适 当微生 物 可 以测 定 某 物 质含 量 。虽 然 能检 测 高浓 度 的残 留 ， 但检 测 限高 于 样 品所 规定 的最 大残 留限量 （ ＭＲ Ｌ） 。通 常 的操作 方 法 是 将 组织 和 抗 微 生物 药 物 均 匀 分散 到 琼 脂 培 养皿
３ 色 谱 分 析 法
３ ． １ 高效液相 色谱 法 （ ＨＰ 源自文库 Ｃ）
对于高沸点难挥发 的、 受热不稳定易分解的 、 分 子量大 、 极性较强的物质分析效果较好。Ｇ Ｃ方法仅
能 解决 ２ ０ ％左 右有 机 物分 析 ，而 ８ ０ ％左 右 的有 机物
可用
度氟喹诺酮类药物的残 留 ， 但 该法的检测限高于 Ｅ Ｃ 所规定的 Ｍ Ｒ Ｌ 。 邢应寿等［ ３ １ 以藤黄微球菌为工作菌建
此将 Ｆ Ｑ Ｎ ｓ 与 载体 连 接合 成 人工 抗 原 的方 法简 单 、 快 速， 非常 适 于 大 量样 品的 同 时检 测 ， 并 使 分析 过 程 大 大 简 化 。魏 东等 ［ ４ １ 以沙 拉 沙 星为 半 抗 原 ， 牛血 清 白蛋 白偶联 后 免 疫兔 ， 获 得 对 多种 Ｆ Ｑ Ｎ ｓ 药 物有 特异 性 的 广 谱 性 抗 体 。 以沙拉 沙 星 与 卵清 白蛋 白的偶 联 物 作 包 被原 ， 建 立 了间接 竞 争 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ检 测 方法 ， 对沙 拉 沙 星 检测 限达 １ ９微 克 ／ 升， 且 对诺 氟 沙 星 、 环 丙 沙 星 和 恩 诺 沙 星 均有 特 异性 识 别 ，检 测 限 分别 是 ２ ２ 、 ２ ６和
分析 方 法 包括微 生物 法 、 免 疫 分析 法 、 色谱 分 析 法。 我 国对 Ｆ ＱＮｓ 残 留检 测 的研 究还 处 于初 级 阶段 ， 应 在 以后 的科研 中努 力研 发 更现 代化 的检 测技 术 。
关键 词 ： 药物残 留 ； 氟喹 诺 酮 ； 检测 氟喹 诺 酮类 药 物 （ Ｆ ｌ ｕ ｏ ｒ ｏ ｑ ｕ ｉ ｎ ｏ ｌ ｏ ｎ ｅ ｓ ， Ｆ Ｑ Ｎ ｓ ） 是 ２ ０