肠道致病菌的微生物学检查

菌落为乳白色或米黄色，表面粗糙呈颗 粒状或菜花状
抗酸染色
结核杆菌对苯胺染料一般不易着色，但经 加温或延长染色时间后能抵抗3％盐酸乙醇 的脱色作用。经此法染色后，结核杆菌及 其他分枝杆菌呈红色，非抗酸菌呈蓝色。
示教：结核分枝杆 菌抗酸染色
• 实验步骤： 1．用竹签挑取开放性肺结核病人晨痰标本中干酪样 小粒或脓性部分，或用取菌环挑取经酸、碱处理 后的痰标本，臵载玻片中央，均匀涂布成 1.5×2.0cm卵圆形痰膜，干燥，固定。 2．滴加石炭酸复红液于涂片上，玻片臵于酒精灯火 焰缓缓加热，至有蒸汽冒出，约维持5min（切勿 沸腾或使染液干涸于玻片上）。如有染液干涸趋 势，应补加染液。然后自然冷却，用流水漂去多 于染液。 3．滴加3％盐酸乙醇脱色，至涂片较厚处无颜色脱 出为止，约30s，水洗。 4．滴加碱性亚甲蓝液复染1min，水洗。 5．滤纸吸干后镜检。
双糖管等
血清学鉴定
乳糖 大肠杆菌 痢疾杆菌 伤寒杆菌
黄色 红色 红色
葡萄糖
动力 +
硫化氢 -
+ +
+
+/-
鉴别肠道致病菌的生化反应
• 糖发酵试验 • 甲基红试验 • VP实验 • 枸橼酸盐利用试验 • 硫化物（硫化氢）生成试验 • 吲哚生成试验 示教：生化反应举例 • 尿素水解试验
糖发酵试验(fermentaton test)
– 然后观察下层
• 发酵葡萄糖（产酸产气） • 动力
• （3）肠道致病菌的分离鉴定 • ①标本收集 • ②分离培养 • ③初步鉴定 • ④血清学鉴定 • ⑤生化反应
标本
？和球菌的不同
选择鉴别培养基 SS平板 37℃ 24h 生化反应 粪便标本肠道致病菌 分离鉴别流程
已知Ab检测 未知Ag (玻片 凝集试验)
• 实验材料 痰液1管/小组，抗酸染色染液1套/小组，玻 片1个/人
实验报告内容
抗酸染色法
实验原理、实验步骤、实验结果绘图 和结果分析。
大肠埃希菌 产气杆菌
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• 2.结核分枝杆菌的培养及形态观察
• 发病趋势和临床意义：aaaaaaaaa
结核分枝杆菌
形态： • 细长，略弯曲的杆菌，多聚集成团。无鞭毛,芽胞。 染色性： • 不易着色，齐尼抗酸染色阳性。菌体呈红色，背景中 其他物质蓝色。
培养特性：
• 专性需氧，最适37℃ ，营养要求高，生长缓慢，18h 分裂一代。罗氏(Lowenstein-Jensen)培养基含蛋黄、 甘油、马铃薯、无机盐、孔雀绿，2~6周可见菌落生 长，菜花、颗粒或结节状菌落，乳白色或黄色，不透 明。在液体培养基，生长于表面，有皱褶。
医学微生物学实验
实验五 肠道致病菌的微生物学检查 结核分枝杆菌的培养及形态观察
• 实验内容： • 1.肠道致病菌的微生物学检查 • 2.结核分枝杆菌的培养及形态观察 （抗酸染色）
1.肠道致病菌的微生物学检查
（1）实验目的 Aaaaaaaaaaaaaaaa
示教：常见肠道细菌
• （2）常用培养基介绍 • 主要包括：麦康克培养基、伊红美蓝 培养基、中国蓝琼脂平板、SS琼脂平 板、双糖铁培养基
示教：伊红美蓝培养基 双糖铁培养基
SS平板－分离肠道病原菌的强选择培养基
成分和作用：
– 基础培养基：提供氮源和碳源 – 胆盐、枸橼酸钠、煌绿：可抑制肠道非致病 菌的生长，而对肠道致病菌抑制作用弱。 – 乳糖，中性红（pH6.8-8.0，红→橙黄） ： 致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨产生碱性 物质→菌落淡黄色；大肠杆菌分解乳糖产酸， 菌落呈红色
结核分枝杆菌的培养方法
• 1．痰标本培养前处理 （1）酸处理法：痰标本加入4％硫酸稀释2～4倍， 臵室温下Hale Waihona Puke Baidu0min，期间振荡2～3次，使痰液化后即 可接种。 （2）碱处理法：痰标本加入2％氢氧化钠溶液稀释 2～4倍，臵37℃温箱内30min，期间振荡2～3次， 痰液化后即可接种。 • 2．接种培养法 取上述处理过的痰液0.1ml均匀接种于改良罗氏 培养基斜面，37℃孵育3～4周后观察菌落特点。
示教：单糖发酵管
甲基红试验（methyl red test）
-
+
VP（Voges-Proskauer）试验
-
+
+
-
－
+
Urease Test
尿素酶试验
：
H2S Production
硫化氢试验
-
+
IMViC试验(Indole Test; Methyl Red (MR) Test; VogesProskauer (VP) Test; Citrate Utilization Test)
病原菌:小,无色 非致病菌:大,红色
EMB（Eosin Methyl Blue)平板
——分离肠道病原菌的弱选择培养基
病原菌:透明,无色，小菌落 非致病菌:紫黑色
克氏双糖培养基
乳糖 硫酸亚铁 固体 葡萄糖 半固体 指示剂:酚红
• 接种方法 • 如何观察
– 上层含乳糖部分
• 乳糖发酵：致病菌红色，非致 病菌黄色 • H2 S