高铁血红蛋白Hb还原试验
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评价:本试验简便易行,是G-6-PD缺乏的过筛试验。
率降低; 百度文库. 细菌污染可产生亚硝酸盐而造成假阳性; 4. 不稳定Hb、 HbH、高脂血症等均可出现假阳性; 5. 血标本应充分混匀; 6. 抗凝剂应用枸橼酸钠或ACD液,比例要恰当; 7. pH降低可使Hi还原速度减慢而出现假阳性。
结果判断:
健康人: Hi还原率≥75%;脐血≥77%
临床意义:
① G -6-PD缺乏时,Hi还原率下降; ② 蚕豆病和伯氨喹型药物溶血性贫血等,Hi均可下降; ③ G-6-PD杂合子还原率为31~74%,脐血为41~76%; ④ G-6-PD纯合子还原率≤30%,脐血<40% 。
4. 取未加试剂的孵育血标本0.1mL,按3同样测定 吸光度为B;再加入亚硝酸钠葡萄糖混合液1滴, 混匀后放置5min ,再测定其吸光度为St ,此为 Hi对照;
5. 计算: Hi还原率(%)= (1- SA-B ) 100%
St-B
6.参考值:还原率≥ 75%
注意事项:
1. 波长应准确,一般St>B 8倍以上; 2. 贫血者应将Ht调整在0.35~0.40,Ht过低,Hi还原
高铁血红蛋白还原试验
实验要求:
1. 掌握高铁血红蛋白还原试验的原理、结 果判断和临床意义;
2. 熟悉实验的操作方法、注意事项及评价。
原理:
在血液中加入亚硝酸盐使红细胞内的亚 铁Hb氧化为高铁Hb(Hi)。正常RBC的G-6-PD 催化戊糖旁路使NADP变成NADPH,在递氢 体亚甲蓝的参与下, Hi还原成Hb。当G-6-PD 缺乏时, Hi还原率下降,甚至不还原。通过 比色测定Hi,可观察Hi还原的多少和还原的 速度,从而间接反映G-6-PD的活性。
操作方法:
1. 取枸橼酸钠抗凝血2mL,加入20mg葡萄糖, 混匀离心5min(2000r/m),调整血细胞与血浆 比例为1:1后再混匀;
2. 取处理后的血标本1mL,加亚硝酸钠-葡萄糖 液和美蓝各 0.05mL,颠倒混合15次,加塞 37℃水浴3小时,未加试剂的血标本同置;
3. 取孵育后混匀标本0.1mL,加入pH7.4缓冲液 10mL,混匀放置2min ,以缓冲液调零,测定 吸光度(635nm) SA ;
率降低; 百度文库. 细菌污染可产生亚硝酸盐而造成假阳性; 4. 不稳定Hb、 HbH、高脂血症等均可出现假阳性; 5. 血标本应充分混匀; 6. 抗凝剂应用枸橼酸钠或ACD液,比例要恰当; 7. pH降低可使Hi还原速度减慢而出现假阳性。
结果判断:
健康人: Hi还原率≥75%;脐血≥77%
临床意义:
① G -6-PD缺乏时,Hi还原率下降; ② 蚕豆病和伯氨喹型药物溶血性贫血等,Hi均可下降; ③ G-6-PD杂合子还原率为31~74%,脐血为41~76%; ④ G-6-PD纯合子还原率≤30%,脐血<40% 。
4. 取未加试剂的孵育血标本0.1mL,按3同样测定 吸光度为B;再加入亚硝酸钠葡萄糖混合液1滴, 混匀后放置5min ,再测定其吸光度为St ,此为 Hi对照;
5. 计算: Hi还原率(%)= (1- SA-B ) 100%
St-B
6.参考值:还原率≥ 75%
注意事项:
1. 波长应准确,一般St>B 8倍以上; 2. 贫血者应将Ht调整在0.35~0.40,Ht过低,Hi还原
高铁血红蛋白还原试验
实验要求:
1. 掌握高铁血红蛋白还原试验的原理、结 果判断和临床意义;
2. 熟悉实验的操作方法、注意事项及评价。
原理:
在血液中加入亚硝酸盐使红细胞内的亚 铁Hb氧化为高铁Hb(Hi)。正常RBC的G-6-PD 催化戊糖旁路使NADP变成NADPH,在递氢 体亚甲蓝的参与下, Hi还原成Hb。当G-6-PD 缺乏时, Hi还原率下降,甚至不还原。通过 比色测定Hi,可观察Hi还原的多少和还原的 速度,从而间接反映G-6-PD的活性。
操作方法:
1. 取枸橼酸钠抗凝血2mL,加入20mg葡萄糖, 混匀离心5min(2000r/m),调整血细胞与血浆 比例为1:1后再混匀;
2. 取处理后的血标本1mL,加亚硝酸钠-葡萄糖 液和美蓝各 0.05mL,颠倒混合15次,加塞 37℃水浴3小时,未加试剂的血标本同置;
3. 取孵育后混匀标本0.1mL,加入pH7.4缓冲液 10mL,混匀放置2min ,以缓冲液调零,测定 吸光度(635nm) SA ;