胃癌MKN45细胞培养液上清对腹膜间皮细胞损伤的实验研究那迪

胃癌MKN45细胞培养液上清对腹膜间皮细胞损伤的实验研究

那迪，刘福囝，姜成钢，徐昊，王振宁，徐惠绵

Experimental study on destruction of gastric cancer MKN45cells culture medium to peritoneum mesothelial cells

Na Di，Liu Funan，Jiang Chenggang，Xu Hao，Wang Zhenning，Xu Huimian

Department of Oncology，The First Affiliated Hospital，China Medical University，Liaoning Shenyang110001，China．【Abstract】Objective:To examine the mechanism by which the gastric cancer cells lead to early peritoneal metas-

tasis．Methods:HMrSV5cells were co－incubated with the supernatants of gastric cancer cells．Morphological chan-

ges of HMrSV5cells were observed．The cell damage was quantitatively determined by MTT assay．The apoptosis of

HMrSV5cells was observed under transmission electron microscope．Acridine orange/ethidium bromide－stained con-

densed nuclei was detected by fluorescent microscopy and flow cytometry．The expressions of Bcl－2and Bax was im-

munochemically evaluated．Results:Conspicuous morphological changes of apoptosis were observed in HMrSV5cells

24h after treatment with the supernatants of gastric cancer cells．The supernatants could induce apoptosis of HMrSV5

cells in a time－dependent manner．The supernatants could up－regulate the expression of Bax and suppress that of

Bcl－2in HMrSV5cells．Conclusion:Gastric cancer cells can induce the apoptosis of HPMCs through supernatants

in the early peritoneal metastasis．The abnormal expressions of Bcl－2and Bax may contribute to the apoptosis．

【Key words】peritoneal carcinomatosis;stomach neoplasms;mesothelial cell;apoptosis

Modern Oncology2013，21(02):0235－0238

【摘要】目的：建立胃癌腹膜转移早期间皮细胞的损伤模型，探讨胃癌腹膜转移早期癌细胞对间皮细胞的损

伤与细胞凋亡的联系，以及凋亡程度与相关蛋白表达。方法：将人胃癌细胞培养液上清，与人腹膜间皮细胞

系HMrSV5共培养。观察间皮细胞形态、增殖改变，透射电镜观察细胞凋亡，流式细胞仪和荧光染色判断凋亡

比例。免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl－2和Bax表达情况。结果：接触胃癌培养液上清24h后，间皮细胞

大片脱落并出现典型凋亡表现。胃癌细胞的分泌物明显抑制间皮细胞的生长。胃癌细胞培养液上清可诱导

间皮细胞凋亡、抑制细胞增殖，呈程度－时间依赖性地抑制间皮细胞抗凋亡蛋白Bcl－2的表达；并能增加促

凋亡蛋白Bax表达。结论：胃癌细胞在腹膜转移早期可以通过其分泌物诱导间皮细胞损伤、凋亡，凋亡机制与

Bcl－2和Bax的失调有关。提示保护间皮细胞，抗间皮细胞凋亡在胃癌腹膜转移治疗中可能有一定应用价

值。

【关键词】腹膜癌转移；胃癌；间皮细胞；细胞凋亡

【中图分类号】R730．23；R735．2【文献标识码】A DOI：10．3969/j．issn．1672－4992．2013．02．04

【文章编号】1672－4992－（2013）02－0235－04

临床上腹膜转移是胃癌根治术后面临的棘手问题。腹膜为癌细胞转移提供了所需的炎性介质，在癌腹膜转移早期，由癌细胞，成纤维细胞，间皮细胞等分泌的细胞因子作用于间皮细胞，使间皮细胞在形态结构功能上发生改变，为腹膜转移提供“土壤”［1］。在对癌细胞浸润间皮组织的研究中，Buck等把癌细胞接种到间皮细胞受损的小鼠腹腔内后，

【收稿日期】2012－08－22

【修回日期】2012－09－21

【基金项目】国家自然科学基金资助项目（编号：81071956）

【作者单位】中国医科大学附属第一医院肿瘤外科，辽宁沈阳

110001

【作者简介】那迪（1982－），男，辽宁人，主治医师，博士，主要从事胃癌腹膜转移研究。E－mail：dawangmo@yahoo．cn 观察到癌细胞在受损区域迅速种植生长，而间皮细胞完好的小鼠却很少发生转移［2］。目前的研究发现，在癌细胞黏附到间皮细胞之前，间皮细胞就已经发生了改变：间皮细胞变圆或半圆形，进而细胞脱落导致间皮下结构暴露，形成裸区，癌细胞进而黏附种植［3－5］。我们认为间皮细胞的上述损伤改变与癌细胞诱导的细胞凋亡相关。基于上述假设，我们拟建立胃癌细胞黏附到间皮细胞之前所释放的细胞因子对腹膜间皮细胞的损伤模型，并检测细胞凋亡是否参与了上述损伤。

1材料与方法

1．1实验材料

试剂：FCS、DMEM、Bcl－2，Bax抗体及二抗、MTT、吖啶橙、溴乙啶（AO/EB）、PI均购自Sigma公司。细胞系：人胃癌细胞株MKN45由中国医科大学细胞生物学教研室提供。人