水产品中组胺的检测

水产品中组胺的检测

20091231 汪欣

一、目的与要求

1.了解偶氮试剂比色法测定水产品中组胺的方法原理；

2.掌握正戊醇提取组胺的操作技术；

3.学会用偶氮试剂比色法检测水产品中组胺的检测技术。

二、实验原理

水产品中组胺用正戊醇提取，遇偶氮试剂显橙色，与标准系列比较定量。组胺是水产品中游离的组氨酸在组氨酸脱羧酶作用下，发生脱羧反应而形成的一种胺类物质。脱羧酶来自一些含有组氨酸脱羧酶的微生物，如某些肠杆菌、弧菌属等，其中最重要的是摩根变形杆菌和组胺无色杆菌。当水产品受到这些细菌污染后，会产生大量组胺，从而反映出水产品受微生物污染的程度。

三、仪器与试剂

⑴正戊醇；三氯乙酸溶液（100g/L）；碳酸钠溶液（50g/L）；氢氧化钠溶液（250g/L)；盐酸（1+11）。

⑵偶氮试剂

①甲液：称取0.5对硝基苯胺，加5ml盐酸溶液溶解后，再加水稀释至200ml，置于冰箱中。

②乙液：亚硝酸钠溶液（5g/L），临用现配。

甲液5ml、乙液40ml混合后立即使用。

⑶磷酸组胺标准贮备液准确称取0.2767g于（100±5）℃干燥2h的磷酸组胺，溶于水，移入100ml容量瓶中，加水至刻度。此溶液每毫升相当于1.0mg组胺。

⑷磷酸组胺标准使用液吸取1.0ml磷酸组胺标准贮备液，置于50ml容量瓶中加水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于20μg组胺。

四、实验步骤

⒈样品处理

称取5.00～10.00g切碎样品，置于具塞锥形瓶中，加入15ml～20ml三氯乙酸溶液，浸泡2h～3h，过滤。吸取2.0ml滤液置于分液漏斗中，加氢氧化钠溶液使呈碱性。每次加入3ml正戊醇，振摇5min，提取三次。合并正戊醇提取液并稀释至10.0ml。吸取2.0ml正戊醇提取液于分液漏斗中，每次加3ml盐酸（1+11）振摇提取三次，合并盐酸提取液并稀释至

10.0ml。备用。

⒉测定

吸取2ml盐酸提取液于10ml比色管中。另吸取0、0.20ml、0.40ml、0.60ml、0.80ml、1.0ml组胺标准使用液（相当于0、4μg、8μg、12μg、16μg、20μg组胺），分别置于10ml 比色管中，加水至1ml，再各加1ml盐酸溶液。样品与标准管各加3ml碳酸钠溶液、3ml偶氮试剂，加水至刻度，混匀，放置10min后用1cm比色环以零管为参比，于480nm波长处测

吸光度，绘制标准曲线比较，或与标准系列目测比较。

五、结果计算

计算公式

X=m1 / m2×2/V1×2/10×1000 ×100

X为样品组胺含量，mg/100g；V1为加入三氯乙酸，ml；m1为测定时试样中组胺含量，μg；m2为试样质量，g。报告算数平均值精确至小数点后一位。

六、分析讨论

⒈本方法的最低检出浓度为5mg/100g，允许相对误差《10%。

⒉用正戊醇提取三氯乙酸溶液中的组胺时，必须用氢氧化钠溶液调PH至碱性，以便于游离组胺的提取。