植物提取物分离流程

植物提取物分离流程

一、浸膏：

1．植物样品粉碎, 留样200-500g，将样品直接用氯仿浸提3次，每次7天，抽滤后将溶剂减压回收，得到氯仿部分浸膏；

2．氯仿浸提后的残渣用甲醇浸泡3次，每次7天，然后抽滤回收溶剂得到甲醇部分浸膏；

3．在浸提中，浸提次数至少3次，根据滤液的颜色判断是否需要增加浸提次数，最多浸提4次。

二、粗分离：

1．氯仿部分的分离：氯仿部分视全部浸膏数量决定留取多少，一般留样5g左右，以备活性筛选，如果浸膏大于100g，留样10g左右。

2．留样后，将浸膏用丙酮溶解，以硅胶60-100目拌样，样品与硅胶的比例一般为1：1，但也不绝对，要以样品完全被硅胶吸附，但又不浪费为原则；

3．第一次柱层析使用200-300目的硅胶，硅胶用量与样品比例为30：1，如果样品量很大，则选择10：1左右，采用干法装填柱子

4．装填好硅胶柱后，采用石油醚洗脱，一般洗脱3-5个柱体积（100g硅胶就洗脱300-500ml），但有时因为样品超载也需要经验判断是否加极性。

5．当需要增加极性时，首先选用100：1的石油醚丙酮，依照4中的操作进行，依次改变极性为80：1；60：1；40：1；20：1：10：1；8：2：7：3当溶剂比例达到8：2的时候，就需要TLC检测判断是否再进行7：3的比例了。一般到达10：1的时

候，氯仿部分基本上就可以结束洗脱；

6．甲醇部分也同氯仿部分，需要在拌样前留取样品，然后拌样上200-300目的硅胶柱（干法装填）作同氯仿部分，当完成3-5个柱子体积的洗脱后，根据回收溶剂后回

收瓶中提取物的多少判断改变极性，以100：1氯仿甲醇开始，逐步过度到80：1；

60：1；40：1；20：1；10：1；8：2；7：3；当达到7：3时，需要TLC检测是否

还有样品点；

三、精分离

1．氯仿部分各个回收段用TLC检测判断是否合并，并将合并部分用不同系统的溶剂进行TLC检测选择柱子洗脱所需要的比例，一般是石油醚+乙酸乙酯系统；石油醚

+丙酮系统；系统选择好以后，用60-100目硅胶拌样（比例依旧是1：1，尽可能少

用拌样硅胶），将拌样样品用湿法上硅胶H常压柱子，装填时，硅胶H溶解在石油

醚中，并至少静置12小时。

2．用选择的系统洗脱，每次收集一个柱体积馏分，回收后转移至试管中，经验上，一般洗脱5个柱体积后就需要改变溶剂的极性，极性的改变也是逐步加大。

3．2中柱子洗脱结束后，将回收在试管中的各个样品TLC检测，以荧光、碘显色、硫酸显色判断是否合并为同一馏分，一般荧光和碘显色是辅助检测，以硫酸显色为根

本判断。

4．合并后的馏分TLC检测选择继续分离。此次分离需要用减压柱子，填料依旧是硅胶H，填料与样品比例一般是50：1，样品在TLC中以展开3-4次，rf大小在0.2-0.3

之间最合适，一般只需要洗脱30柱子体积就可以结束分离。

5．减压柱层析中已经接近为单体化合物，有时也可以得到纯品。将减压的各个馏分TLC检测是否可以进行合并，并将合并的部分上Saphdex-LH20，一般用乙酸乙酯、丙酮进行装填凝胶柱，并以装填溶剂进行洗脱，凝胶柱都是以湿法上样。

6．此时，已经在得到纯品化合物。

7．甲醇部分操作基本与氯仿部分相同，只是洗脱系统的选择是氯仿+丙酮；氯仿+甲醇；

或者氯仿+甲醇+水；凝胶的装填与洗脱也以甲醇或者氯仿+甲醇为主。

四、其他分离方法：

1．制备薄层

2．RP-18柱子

3．MCI