菌种的管理和保藏

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四、菌种的管理
1、使用菌种的单位，应具备从事微生物工作的 条件和设备。 菌种应由专人负责管理，管理人 员应具有微生物专业知识和技术水平，并应具有 较强的责任心。
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⒉实验室必须建立菌种保存和使用文件化的程序管理 制度 ⒊详细记录 ⒋建立菌种带出实验室，外单位索取、购买制度 ⒌菌种建立菌种处理操作规程。
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工作菌株不可代替标准菌株，标准菌株的商业 衍生物仅可用作工作菌株。
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不同的微生物，应根据其生物特征来选择最适 宜的保藏方法，菌种的保藏方法一般分四个阶 段：
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⑴ 挑选特征典型的菌落。 ⑵确定保藏的合适菌体。 ⑶选择最适宜的方法。 ⑷定期进行检查。
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4 、菌悬液制备后应在2小时内使用，若保存在
2～8℃的菌悬液可以在24小时内使用。黑曲霉 也可制成稳定的孢子悬液保存在2～8℃，在验 证过的贮存期内替代对应量的新鲜孢子悬液使用。
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菌种保藏的重要性
菌种保藏是微生物学检验工作中的 一项常规技术，菌种的科学保藏和管 理直接关系到检验结果的正确性。
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菌种的来源
药品微生物检验用的试验菌应来自认 可的国内或国外菌种收藏机构的标准菌株， 或使用与标准菌株所有相关特性等效的商 业派生菌株。
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菌种保藏ຫໍສະໝຸດ Baidu中心任务
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培养
需气菌培养法 厌氧培养法
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培养后微生物的生长判断
固体培养基：有菌落生长或沿穿刺线扩散 生长。 液体培养基：浑浊、菌膜、沉淀等。
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三、菌种的检查与复壮
菌种的衰退 控制菌种的衰退方法 ⑴控制传代次数 ⑵创造适宜的培养条件 ⑶用不同类型的细胞进行传代 ⑷采用有效的保藏方法 ⑸定期检查 ⑹菌种的复壮
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二、菌种的传代和使用
工作菌种的传代次数应严格控制， 不得超过5代，（从菌种保藏中心获 得的标准菌株为第0代）防止过度的 传代造成菌种变异。
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细菌的接种、分离和培养
接种方法 涂布法 划线法 穿刺法 直接加入法等
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分离
分离方法主要有分段划线法、连续 划线法、涂布分离法、倾注分离法 等。
菌种的保藏和管理
国家药典委员会 杜平华
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前言
试验过程中，生物样本可能是最敏感的，因 为它们的活性和特性依赖于合适的试验操作和 贮藏条件。实验室菌种的处理和保藏的程序应 标准化，使尽可能减少菌种污染和生长特性的 改变。
按统一操作程序制备的菌株是微生物试验结 果一致性的重要保证。
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3 、接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂
斜面培养基中，培养5～7天。
加入3～5ml 含0.05％（v/v）聚山梨酯80的 0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，用 适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含 0.05％（（v/v）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠 溶液制成每1ml含孢子数50～100cfu的孢子悬 液。
⒈广泛收集各种有用的微生物菌种。 ⒉选择最适宜的保藏方法。
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常用菌种保藏方法
菌种保藏的原则
降低微生物细胞的代谢强度，使 细胞基本上处于休眠状态，生长 繁殖受到抑制但不至于死亡，以 减低菌种的变异率。
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常用菌种保藏方法
标准菌株的复活或培养物的制备应按供应商 提供的说明或按验证的方法进行。 标准储备菌株 工作菌株
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菌悬液的制备与保存
菌悬液的制备方法与保存
采用经验证的方法制备菌悬液，除另有规定外，微生 物限度试验用菌悬液的制备如下：
1、接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌 的新鲜培养物至营养肉汤培养基或营养琼脂培养基中， 培养18～24小时. 2、接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或 改良马丁琼脂培养基中，培养24～48小时。 上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数 为10～100cfu的菌悬液。