真菌(1-3)-β-D葡聚糖

附1真菌(1-3)-β-D葡聚糖检测标准操作规程
1.目的
规范真菌(1-3)-β-D葡聚糖检测的操作规程，保证结果准确性。

2.原理
实验条件下，来源于某些真菌细胞壁的(1-3)-β-D葡聚糖能够特异性地激活本试剂盒反应试剂的酶促凝集系统，使反应溶液的透光度发生变化。

利用(1-3)- β-D葡聚糖标准品建立β-D-葡聚糖生物效应与透光度变化关系的标准曲线，便可定量地测定人血液的(1-3)- β-D葡聚糖含量。

3.试剂
真菌（1-3）-β-D葡聚糖检测试剂盒，湛江安度斯生物有限公司。

试剂盒包装规格：20人份/盒。

复溶后的试剂溶液应在10分钟内使用。

若当次试验有剩余，可将剩余的试剂溶液置-20℃以下冷冻保存，一周内使用。

不能反复冻融试剂溶液。

4.检测设备：LKM动态试管检测仪。

5.实验用具：250 μl无热原吸头、20-200 μl移液器、75℃试管恒温仪、旋涡混合器、塑料试管架、
无热原真空采血管（肝素抗凝剂）。

6.标本采集及送检要求
6.1标本采集要求
6.1.1采集过程要求无菌操作，用指定的肝素类抗凝、无菌、无β葡聚糖采血管；
6.1.2常规住院病人早上用药前空腹采血，血透患者透析前采血。

6.2标本的送检和保存要求
标本采集后应在半小时内离心，4小时内检测完。

若当日不能及时检测的标本应将离心后的血浆转移至无β葡聚糖的容器内-20℃以下冷冻保存，一周内使用。

7.实验操作
7.1在试验开始前，先开启LKM动态试管检测仪，预热，一段时间后发出哔的一声，试管仪温度
达到37℃，待用；
7.2取本试剂盒所配的无热原真空采血管取受试者静脉血1～2 ml，以400 g离心10分钟；
7.3取富含血小板的血浆100 μl，加到样品稀释瓶中，在旋涡混合器上轻轻混匀，然后插入75℃
试管恒温仪中加热10分钟；
7.4加热10分钟后，将样品稀释瓶从75℃试管恒温仪中取出，使其降至室温即可，即为1:10稀释的样品供试溶液；
7.5取β-G试剂1支，开启；
7.6取β-G试剂复溶液1支，开启后用移液器取0.25 ml加入β-G试剂中，轻轻摇匀，澄清后得试
剂溶液备用；
7.7打开检测软件连接LKM动态试管检测仪，进入临床检查采集数据界面，点击“开始”按钮，使
检测软件进入待采集状态；
7.8取本试剂盒所配的专用反应试管，先取已制备好的样品供试溶液100 μl加入反应试管中，然
后加入50 μl试剂溶液，每个样品供试品溶液平行两管；
7.9加样完毕，依次拿起试管在旋涡混合器上轻点一下，使试管中的溶液均匀混合，然后把各试
管逐一插到LKM动态试管仪中，反应开始，37℃反应75分钟，在反应结束前填写试验相关的信息；
7.10反应完毕，检测软件将自动处理数据，计算出样品供试溶液中的（1-3）-β-G葡聚糖测量值，
进入“临床检查数据报告”可查看检验结果，进入“临床检查数据分析”可查看反应曲线。

8.假阳性因素
8.1(1-3)-β-D葡聚糖污染。

使用非试剂厂家提供的采血管、反应试管、吸头等容易受(1-3)-β-D葡
聚糖污染；
8.2某些纤维素透析膜污染，如血液透析、腹膜透析等；
8.3G试验前注射过香菇多糖、脂肪乳等药物；
8.4手术后使用纱布。

9.假阴性因素
9.1不敏感菌：某些真菌如接合菌（毛霉菌、根霉菌）细胞壁没有（1-3）-β-D 葡聚糖成分；隐球
菌细胞壁外有荚膜致使（1-3）-β-D 葡聚糖释放不出，这些真菌G试验不能检测。

有临床症状，但G试验阴性时，临床医生可考虑这两种真菌感染的可能。

9.2定植菌：研究显示，定植真菌不引起患者血液的（1-3）-β-D 葡聚糖升高，即使是严重定植。

因此G试验阴性可以区分真菌定植或侵袭性感染。

10.结果分析
表1 结果分析表
11.反应曲线分析
表2 反应分析曲线
正常的真菌阳性曲线异常的真菌阳性曲线
正常的真菌阳性曲线走势呈反“S”形，曲线终点的RT值较低。

异常的真菌阳性曲线走势呈“S”形，曲线前段突然下降，曲线后段趋平，曲线终点的RT 值较高。

1、异常的真菌阳性曲线一般是临床用药产生的干扰，建议排除干扰后重新检测；
2、对达限时间短（<700s），测量值高（>6000pg/ml）的阳性结果，应做反应曲线分析；
3、为对患者负责，建议对检测阳性结果都做反应曲线分析。

12.注意事项
12.1预热采集在进行试验之前，LKM动态试管检测仪一定要提前预热30分钟左右，使其达到工
作温度37℃后，打开检测软件连接试管仪，在加样反应前点击“开始”按钮，使软件进入待采集状态。

12.2取样与保存①可检测的样本：血液、尿液、腹水等；②采集要求：采样过程要求无菌操作，
无热原真空采血管采血；③保存：样品采集后应在半小时内离心，若4小时内不用，可分离出血浆置-20℃以下冰箱中进行冷冻保存30天。

12.3样本预处理及加样反应①采有血液的无热原真空采血管应以400g离心10分钟；②取已分
离的血浆上清液的中部；③75°C加热应为时间10分钟，加热完毕后冷却至室温；④插管要一次性插到底，插入后不能再触碰；⑤每个样本的平行两管必须插入仪器的连续两孔；⑥可在插入管反应后再填写相关的试验信息，但一定要在试验结束前填写，否则数据将不保存。

13.临床意义
13.1G试验可以早期、快速诊断侵袭性真菌病（IFD），可用于真菌感染早期筛查；
13.2适用于念珠菌，曲霉，肺孢子菌，镰刀菌，地霉，组织胞浆菌，毛孢子菌等侵袭性感染检测，
不适用于检测隐球菌和接合菌感染；
13.3与GM试验（半乳甘露聚糖检测）联合可区分曲霉菌或其他真菌感染；
13.4高危患者建议每周检测2-3次。

参考文献
1.真菌(1-3)-β-D葡聚糖检测试剂盒说明书。