实验七_黑曲霉发酵柠檬酸

实验步骤
菌种获得
孢子悬液制备
取约5mL无菌水至黑曲霉平板上，用灭菌 滴管轻轻刮下孢子，振荡数下制成孢子悬 液。
液体深层发酵
取约4mL孢子悬液接种于玉米粉摇瓶发酵 培养基中。在转速为200rpm旋转摇床上， 30℃培养5～6天。
牛肉膏蛋白胨培养基
（1.5L，分装10只
250mL三角瓶） 牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g,琼脂15g， 水1000mL, pH7.4～7.6。制法：溶解分装后 121℃灭菌20min。
改良CHALMERS培养基（1.5L，分装10只
250mL三角瓶） 大豆蛋白胨5g，牛肉浸膏5g，酵母浸膏5g ，葡萄糖10g，乳糖20g，碳酸钙10g，琼脂 15g，水1000mL， pH7.4～7.6 ，1%中性红 溶液5mL。制法：溶解分装后121℃灭菌 20min。
灭菌自来水
（20mL，于50mL三角瓶） 每组2瓶，其中一瓶放置数颗玻璃珠 （每组1套） 小包装1.5mL离心管、蓝色黄色枪头若干， 培养皿每组1包（每包不少于6个）
实验七 黑曲霉发酵生 产柠檬酸
实验目的
了解产物发酵生产的机理；
柠檬酸发酵的发酵条件
掌握发酵过程步骤

柠檬酸的发酵的过程
80%的糖代谢走EMP途径
黑曲霉中存在TCA的酶系
柠檬酸发酵的条件
1、合适的碳源（淀粉、麦芽糖、甘露糖等），高浓度的糖； 2、限制有机氮源、选择适量的无机氮源（铵盐）； 孢子培养基 ：要求能使菌体迅速生长，产生较多优质的孢子，所以 营养不要太丰富； 发酵培养基 ：既要使菌体能迅速生长，达到一定的菌丝浓度，又要
其他灭菌物品
问题Biblioteka Baidu思考
影响黑曲霉发酵生产柠檬酸的因
素有哪些？
黑曲霉柠檬酸pH控制
黑曲霉柠檬酸生产菌生长发育适宜PH3～ 7。在含糖合成培养基中，分生孢子在 PH6.8—7.2发芽良好．若起始pH较低(例 如4.5以下)，会强烈抑制它的发育。在 PH2.5以下，分生孢子不膨胀．当pH大于 7.5时分生孢子会剧烈膨胀，甚至破裂。一 般认为柠檬酸发酵在菌种生长期，pH维持 在4.5，而柠檬酸积累时即产酸期的最适 PH 2.0～3.0，pH 3.0以上容易产生草酸
使长好的菌体能迅速合成所需产物 ；
3、合适的pH值，黑曲霉在pH为2～3的环境中发酵糖，产物以柠檬酸 为主；当pH接近中性时则大量产生草酸， 而柠檬酸产量很低；
4、发酵液中溶氧量要高（摇床的转速250r/m）； 5、限制重金属离子，如Mn2＋缺乏促进EMP途径畅通， 控制Fe2＋含 量使顺乌头酸酶活力降低，使柠檬酸积累 。