病毒感染的诊断与防治立克次氏体和衣原体

(二)微生物特性
1. 比细菌小，呈多形态性，在感染细胞内聚 集成团,分布在胞质内, Gimenez法染色后 呈红色，外表含有微荚膜结构。
2. 必须在真核细胞内才能生长繁殖，培养时 需要C02。通常采用5-9日龄鸡胚作卵黄囊 接种，于32℃-35℃孵育4～13d内死亡，鸡 胚死亡时间与接种剂量大小呈直接相关。普 氏和莫氏立克次体能在多种单层细胞上生长 繁殖。豚鼠可作立克次体的初代分离。
引物R17-1、-2在65℃条件下能扩增普氏和莫 氏立克次体 DNA。在琼脂凝胶上产生一条 340bp的核酸带；
引物R169-1、-2仅能扩增普氏立克次体DNA， 产生一条432bp的核酸带。两种引物同时使 用，扩增后普氏可产生340bp和432bp两条带， 而莫氏只产生340bp一条带。
该法敏感性可达0．05ngDNA水平，重复性 好，操作方便，对两型立克次体早期、鉴别 诊断以及自然生态宿主调查研究具有较大价 值。
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3．分离培养
(1)动物接种
选用健康雄性豚鼠接种以便观察阴囊肿胀现 象。每日测体温，至40℃发热时采血或脏器 悬液、接种鸡胚卵黄囊或细胞培养以分离立 克次体；
感染莫氏立克次体豚鼠在发热1—2日内出现 阴囊红肿，解剖可见腹股沟淋巴结肿大、充 血、脾大2-3倍，有腹水；有阴囊反应者，睾 丸有小出血点，鞘膜充血并有浆液性渗出物 等。鞘膜涂片可查到立克次体。
第一节 立克次体
对人致病的立克次体有五个属立克次体属、 柯克斯体属、东方体属、埃立克体属和巴 通体属。
共同特点
①大多是人畜共患病原体，引起人类发热和出 疹性疾病；
②以节肢动物为传播媒介或为储存宿主； ③大小介于细菌与病毒之间，光镜下呈多形态
性，主要为微，杆状或球杆状，革兰阴性； ④除了少数外全是专性活细胞内寄生； ⑤菌体内同时含有DNA和 RNA两类核酸； ⑥以二分裂方式进行繁殖； ⑦对抗生素敏感。
(1)外斐反应
除Q热、立克次体痘及罗沙利马体感染为阴性 外，其他为阳性。 患者OX凝集素上升较晚，在病程2周左右方出 现阳性，病程中双份血清试验，若效价有4倍 增长，方有诊断意义。
有些病例在病程中效价不见上升，约15％的 经疫苗接种后感染斑疹伤寒的病例。有些 轻症斑疹伤寒或某些发病严重者，其他血 清学试验阳性，但外斐反应可为阴性。
一、斑疹伤寒立克次体
(一)临床意义
1．普氏立克次体是流行性斑疹伤寒(又称虱传 斑疹伤寒)的病原体。 病人是惟一的传染源，体虱是主要传播媒介， 而非储存宿主。 传播方式为虱-人-虱，体虱仅是传染媒介。
莫氏立克次体
地方性斑疹伤寒(又称鼠型斑疹伤寒)的病原 体。啮齿类动物是主§宿主，传播媒介是鼠 蚤或鼠虱。
②细胞培养：选鸡胚、成纤维、人羊膜、 HeLa等细胞，接种培养、鉴定后将立克 次体大量繁殖的感染细胞置-70℃储存。
4．抗体检测
立克次体病常用的血清学诊断方法除外斐 反应、间接免疫荧光(IFA )试验、酶联免 疫吸附试验(ELISA)外，还有补体结合(CF) 试验、微量凝集(MA)试验、间接血凝(IHA) 试验、胶乳凝集(LA)试验等 。
(1)免疫荧光检测 用于脏器检查。制备标本片 薄而均匀，组织结构清晰，固定后用荧光抗 体染色, 常见脾、肺及心瓣膜中有立克次体， 也可在肝、肾及皮疹活检组织中检出。
(2)核酸检测 PCR敏感性高，所需样品量只需 ELISA实验的1／5。以编码17kD蛋白的基因 和编码普氏和莫氏立克次体169kD蛋白的基因 作为扩增靶区。
+
斑点热
++++/+ +/+ +++
恙虫病
-
-
腺热
-
-
变形杆菌 OXk ++++ ++
(三)微生物检验
1.标本采集 (1)病人血液标本：发热期均有立克次体血症，
在急性期较易检出立克次体。争取在用抗生 素前采血，立即床侧接种。 (2)活检或尸检材料：肺、肝、脾、淋巴结、心 瓣膜等标本。
2.标本直接检查
鼠蚤叮咬人体时，常排粪于皮肤上，斑疹伤 寒立克次体从抓破的伤口进入人体。若有人 虱寄生，可通过人虱为传播媒介，继发性地 在人群中传播。
致病物质
有两种，其一是内毒素，主要成分为脂多糖 (LPS)；其二为磷脂酶A,能损伤宿主细胞膜 及溶解胞内吞噬体膜，以利于病原体穿入宿 主细胞并在其中生长。
普氏和莫氏立克次体所致的斑疹伤寒症状相 似，以高热、头痛、全身皮疹为主要特征。 伴有神经系统、心血管系统等症状和实质性 器官损伤。
斑点热病人外斐反应效价通常为OX19高于 OX2，但也有OX2较高者。若仅出现OX2 阳性，则对诊断斑点热有特殊意义。
(2)IFA试验
为现在诊断立克次体病常用的方法。用已知 立克次体抗原(感染鸡胚卵黄囊或细胞培养 悬液)制片，以低稀释度的病人血清初筛， 有呈典型立克次体形态的明亮荧光颗粒者， 判为阳性。再将病程早期及晚期血清分别作 双倍或4倍稀释以测效价，如呈4—8倍增长 者可明确诊断。
3.有群特异性和种特异性两种抗原。大部分 立克次体与普通变形杆菌X菌株的菌体耐 热多糖抗原有共同的抗原性，故可用这些 菌株代替立克次体抗原进行凝集反应去检 测抗体，这种交叉凝集试验被称为外斐反 应，可供辅助诊断。
外斐反应
立克次体病
变形杆菌 变形杆菌
OX19
OX2
流行性斑疹伤寒 ++++
+
地方性斑疹伤寒 ++++
(2)鉴定
用免疫荧光法鉴定感染动物脏器、鸡胚卵 黄囊、细胞培养物中的特异性抗原以已知 抗原测定动物恢复期血清中的相应抗体。 必要时用补体结合试验、微量凝集试验等， 作群和种的鉴定。
(3)分离株繁殖及保存
①鸡胚卵黄囊培养 收获卵黄囊，经涂片染 色镜检, 含立克次体较多而又未发现细菌 的卵黄囊膜，或将其作成适当浓度的悬 液置-70℃冰箱保存，或冰冻干燥保藏；
(3)ELISA
检测IgM抗体对早期诊断有价值。
立克次体抗原吸附于载体。泛影葡胺梯度离心纯化 抗原为优，检出血清的抗体效价高，纸上ELISA测 定抗体，方法简便。将感染卵黄囊悬液加于玻片 (经氯仿·甲醇洗净)上，凉干、固定，加稀释血清 于抗原点上，每张玻片上包括阳性和阴性对照，加 酶标兔抗人IgM/G于抗原·血清点作用后，将浸透新 鲜配制的底物无灰滤纸覆盖在玻片上约4-6min，可 见滤纸条上阳性对照点位置显紫棕色，取下滤纸条 (即终止反应)，观察是否显色，与对照比较判定结 果。此法简便，并可保存实验记录。