酵母基因组DNA提取试剂盒(离心柱型)

酵母基因组DNA提取试剂盒（离心柱型）

GK109150Preps

GK1092100Preps

GK109320Preps

一.试剂盒组成

Components GK1091

50Preps

GK1092

100Preps

GK1093

20Preps

gDNA Recovery Column 2.0-ml Collection Tube

LysisY buffer Digestion Solution(a)

Wash Solution(b)

PB Solution

Ext Solution

Elution Buffer(c)

TE(pH8.0)

Boiled RNase A

Proteinase K(d)

Lyticase(e)

Buffer CBS

50

50

10ml

20ml

12ml

20ml

20ml

10ml

15ml

240ul

250ul

250ul

15ml

100

100

20ml

40ml

24ml

40ml

40ml

20ml

25ml

480ul

500ul

500ul

30ml

20

20

10ml

8ml

12ml

8ml

8ml

10ml

15ml

120ul

100ul

100ul

6ml

protocol111

(a)Digestion Solution低温时可能出现沉淀，请于55℃适当加温溶解后使用，不会影响实验结果。

(b)首次使用前，必须在Wash Solution瓶中加入4倍体积的无水乙醇，充分混匀后使用。每次使用后将瓶

盖盖紧，以保持Wash Solution中的乙醇含量。如果发现Wash Solution由于运输或保管不当造成体积严重不准，请用量筒定容后再加入4倍体积的无水乙醇。

(c)Elution Buffer为2.5mM Tris-HCl,pH8.5，请4℃保存。TE(pH8.0)或者水（pH>7.0）均可以使用，但是

DNA的洗脱效率通常要低20%左右。

(d)Proteinase K分装冻存，不得将Proteinase K直接加到Digestion Solution中，以免酶失活。

(e)请于-20℃分装保存Lyticase，减少反复冻融的次数，以免酶失活。

二．产品简介

酵母细胞有一层坚硬的细胞壁，妨碍了研究人员从酵母细胞中快速有效地分离提取基因组DNA。本试剂盒提供可以高效酶解酵母细胞壁的Lyticase和能够特异结合DNA的离心吸附柱，用于提取酵母细胞中的基因组DNA。同时本产品对经典的SDS裂解液进行了改良，并使用PB Solution与Ext Solution处理细胞裂解液，再经过能高效、专一吸附DNA的离心柱吸附后，可最大限度去除杂质蛋白以及脂类物质。

三．主要用途

从酵母等真菌中小规模抽提基因组DNA。

四．主要特点

1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，重复性好。

2.不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。

3.快速，简捷，单个样品操作一般可在2小时内完成。

4.多次柱漂洗确保提取酵母基因组的高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达50Kb～

100kb，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应。

五．需自备试剂

无水乙醇

六．保存方法及注意事项

试剂盒于常温运输，Proteinase K、Lyticase以及Boiled RNase A请于-20℃保存，其它组分室温（15-25℃）保存，有效期为一年。

Digestion Solution中含有刺激性的化合物，操作过程中应穿上实验服，戴好乳胶手套，避免沾染皮肤。眼睛和衣服，防止吸入口鼻。沾染皮肤或眼睛后，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。

七．操作步骤

1.取1-2ml过夜培养的酵母菌液，加入至1.5ml离心管中，室温8,000rpm离心1分钟，尽量吸除上清，收

集菌体。

2.在gDNA Recovery Column加入200μl Buffer CBS,10,000rpm离心1分钟，弃透过液，备用。

3.向菌体中加入200ul LysisY Buffer，加入5ul Lyticase,充分混匀，30℃温育30min。

4.8,000rpm离心5min，弃上清，收集沉淀。

注意：以上为5×107酵母细胞的Lyticase用量，实验时应根据酵母的菌株和酵母细胞的数量的不同，对Lyticase的浓度和温育时间进行适当调整。

5.向沉淀中加入200ul TE溶液重悬沉淀，充分混匀。

6.在200ul TE悬浮样品中，加入300ul Digestion Solution，混匀；加入4ul RNase A混匀，55℃保温10分

钟；再加入4µl Proteinase K，55℃保温10～30分钟。

注意：（1）应按次序加入，不得将Proteinase K先加入Digestion Solution，再加到样品中。

（2）保温时间取决于样品的类型。对于细胞样品，55℃保温10分钟足以使细胞裂解，释放出

基因组DNA。降解完全的样品应是透明粘稠液体。

7.依次加入300ul Ext溶液和300ul PB溶液，充分摇动混匀，12000rpm室温离心5分钟，溶液将分为上下两

层，上层溶液为蓝色，基因组DNA存在于下层溶液中，两层中间可能会有一些沉淀物。然后用1ml Tip头伸到下层，将下层中溶液全部转移到套放于2ml收集管内的gDNA Recovery Column,注意尽量不要吸到上层溶液和中间层沉淀。

注意：此步骤加入Ext和PB溶液后，一定要充分摇匀，否则后面离心时杂质不容易分层。

8.8,000rpm室温离心1分钟。取下gDNA Recovery column，弃去收集管中的废液。

9.将gDNA Recovery Column放回收集管中，加入500ul Wash Solution，8,000rpm，室温离心1分钟。取下

gDNA Recovery Column，弃去收集管中的废液。

10.重复步骤8一次。

11.将gDNA Recovery Column放回收集管中，12,000rpm，室温离心1分钟，以去除残留的Wash Solution。

注意：此步骤高速空离是为了去尽残留的乙醇，请勿省略，否则可能因所纯化的核酸中残留有乙醇而影响后续的实验效果。

12.将gDNA Recovery Column放入新的洁净的1.5ml离心管中，在gDNA Recovery Column中央加入50～

100ul Elution Buffer，室温或37℃放置2分钟。

注意：（1）为提高洗脱效率，可以将Elution Buffer预热到55～80℃。

（2）如果样品中基因组DNA含量很低，用30ul Elution Buffer洗脱可以提高洗脱液的样品浓

度，但产率有所下降。

13.12,000rpm，室温离心1分钟。离心管中的液体即为基因组DNA。根据用途，样品可以4℃或-20℃保存。

注意：重复步骤11～12，将洗脱液再次加入到吸附膜上，重新洗一次，可以提高产率10%～20%。

八.DNA浓度及纯度检测

得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。

DNA应在OD260处有显著吸收峰，OD260值为1相当于大约50ug/ml双链DNA、40ug/ml单链DNA。

OD260/OD280比值应为1.7-1.9,如果洗脱时不使用本试剂盒提供的Elution Buffer，而去使用去离子水，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

Product Use Limitation:

This product is developed,designed and sold exclusively for research purpose and in vitro use only.