30123B VIDAS快速单核细胞增生李斯特菌 (LMX)
单核细胞李斯特菌耐药基因
单核细胞李斯特菌耐药基因
单核细胞李斯特菌（Listeria monocytogenes）是一种革兰氏阳性细菌，能够引起李斯特菌病，包括脑膜炎、败血症和肠胃炎等。
关于单核细胞李斯特菌的耐药基因，以下是一些相关信息：
1. 抗生素耐药性：单核细胞李斯特菌对某些抗生素具有耐药性。
例如，它可能对青霉素、氨苄西林和甲氧苄啶-磺胺甲恶唑等抗生素产生耐药性。
2. 耐药基因：单核细胞李斯特菌的耐药基因可能包括那些编码对抗生素耐药的蛋白质或酶的基因。
这些基因可以通过基因突变、基因水平转移或其他机制在细菌中出现和传播。
3. 监测和研究：由于抗生素耐药性的出现可能对治疗李斯特菌感染造成挑战，因此对单核细胞李斯特菌的耐药基因进行监测和研究是重要的。
这有助于了解耐药机制、追踪耐药趋势，并指导临床医生选择适当的抗生素治疗。
需要注意的是，耐药基因的存在和传播是一个复杂的问题，受到多种因素的影响，如抗生素使用、环境压力和细菌之间的基因交流等。
如果你对特定的单核细胞李斯特菌耐药基因有更详细的问题，建议参考相关的医学、微生物学或传染病学的研究文献，或咨询专业的医生或研究人员。
单核细胞增生李斯特菌内化素G的功能初探
单核细胞增生李斯特菌内化素G的功能初探单核细胞增生李斯特菌内化素G的功能初探李斯特菌（Listeria monocytogenes）是一种革兰氏阳性杆菌，可以引起食物中毒和严重的感染疾病。
在感染宿主细胞过程中，李斯特菌可以通过分泌多种类型的蛋白质来促进其内化和生存。
其中，李斯特菌内化素G（Internalin G）是一个被广泛研究的蛋白质，被认为在李斯特菌的侵袭性中起着重要的作用。
李斯特菌内化素G是一种表面蛋白，能够结合并激活宿主单核细胞的内化过程。
内化素G的结构特点包括一个N端的信号肽序列、多个内源性的抗原结构域和一个C端的细胞外膜锚定序列。
根据先前的研究，内化素G可以在静态环境中与单核细胞表面的受体相互作用，进而激活细胞内信号通路，并引导细胞吞噬李斯特菌。
经过多年的研究，科学家们逐渐揭示了内化素G在单核细胞增生中的功能。
研究发现，内化素G与单核细胞膜上的受体TLR2（Toll-like receptor 2）结合后，可以激活多种信号传导通路，包括MAPK（mitogen-activated protein kinase）通路和NF-κB（nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells）通路。
通过这些通路的激活，内化素G可以诱导单核细胞的增殖和巨噬细胞的分化，并促进细胞对病原体的内化和清除。
内化素G的功能不仅局限于单核细胞的增殖和巨噬细胞的分化，还涉及到炎症反应的调节。
研究发现，内化素G可以诱导多种炎症因子的产生，如IL-1β（interleukin-1 beta）、IL-6（interleukin-6）和TNF-α（tumor necrosis factor-alpha），从而参与抗菌活性和免疫调节。
此外，内化素G还可以激活多种细胞因子和趋化因子的产生，如IFN-γ（interferon-gamma）、IL-8（interleukin-8）和MCP-1（monocyte chemoattractant protein-1），进一步增强单核细胞和巨噬细胞对感染的反应和防御能力。
单核细胞增生李斯特氏菌(Listeriamonocytogenes)
单核细胞增生李斯特氏菌（Listeriamonocytogenes）荧光定量PCR检测试剂盒说明书规格：48份/盒用途：单核细胞增生李斯特氏菌PCR体外检测。
检测原理：试剂盒中含有单增李斯特氏菌特异的引物，当样品中含有单增李斯特氏菌时，前增菌后提取的单增李斯特氏菌DNA通过PCR成指数扩增，在反应过程中单增李斯特氏菌特异的荧光探针跟靶核酸杂交,同时被Taq酶水解,把探针上的荧光基团和淬灭基团分开,从而通过荧光增量来实时判断单增李斯特氏菌的存在。
产品盒组成：试剂盒的保存条件及有效期：1．本试剂盒于-20℃保存。
2．有效期为6个月。
适用仪器：ABI7500，9600系列，MJopticon2，Bio-Rad等荧光定量PCR仪均可。
实验方法：1．取增菌液1ml加到1.5ml无菌离心管中，10,000rpm离心5min，弃去上清；采纳经典酚氯仿提取法，将提取到的模板进行检测或保存于-20℃以待检测。
2．将PCR反应液置室温平衡，融化后取Taq酶,按2U/管加入Taq酶，即每个测试反应体系配制为：PCR反应液22.5ul+0.4ulTaq 酶。
3．加入模板：将保存在-20℃的核酸提取物置室温解冻，以13,000rpm离心5min。
阴、阳性对比使用前置室温解冻。
在每个PCR反应管中分别加入步骤1中处理过的模板或阴、阳性对比各2ul，盖好管盖，置于PCR仪上，记录相应样品号。
4．上机扩增、检测区：反应条件为95℃：3min，1个循环；95℃：5sec，60℃：40sec〔信号采集〕，40个循环。
反应体系设为25ul。
关于多通道荧光PCR仪，信号采集时设定为Fam荧光素。
结果分析：关于MJOpticon2系列荧光定量PCR检测仪进行结果分析时，扣除本底后再输入1-15之间的荧光值，进行Ct值的设置或拖动基线到合适的位置以确定ct值。
关于ABI7500，9600系列荧光PCR检测仪进行结果分析时基线的确定：取3-10或3-15个循环的荧光值，阈值设定原那么为阈值线刚好超过正常阴性对比品扩增曲线的最高点，而不显示Ct值为宜。
单核细胞增多性李斯特菌
1996年至1999年，因单核增生李斯特氏菌回收的食 品种类（来源：USDA及FDA报告）
单核细胞增多性李斯特菌
的直接扩散 ② 通过内在素的介导
单核细胞增多性李斯特菌
单核细胞增多性李斯特菌
免疫性 • 本菌在自然界广泛存在，人粪带菌率高达10%
• 肝细胞是本菌主要寄居细胞之一
单核细胞增多性李斯特菌
流行情况
• 李斯特氏菌广泛分布于环境中：灰尘、土壤、 淡水、海水、家畜、饲料、粪便、屠宰污水等 均存在着李斯特氏菌
• 血清型与症状之间无相关性
• 血清型与地理分布似有一定联系，如北美地区以 血清型4b为主
• 目前全世界90%的病例由1/2a、1/2b、4b型引起
• 血清学分类在流行病学研究中作用不大
• 基因DNA型
• 酯酶型
单核细胞增多性李斯特菌
致病性
• 致病物质 ① 李斯特菌溶血素O（listeriolysin，LLO）
单核细胞增多性李斯特菌
中国医科大学附属第一医院感染科 李冬
单核细胞增多性李斯特菌
李斯特菌以英国外科医生约瑟夫.李斯特的名字命名
1、 单核细胞增多性李斯特菌 (L.monocytohenes) 2、 绵羊李斯特菌 (L.iuanuii) 3、 英诺克李斯特菌 (L.innocua) 4、 威尔斯李斯特菌 (L.innocua) 5、 西尔李斯特菌 (L.seeligeri) 6、 格氏李斯特菌 (L.grayi) 7、 默氏李斯特菌 (L.murrayi)
食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检验能力验证结果分析
食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检验能力验证结果分析作者：彭怡许红玉黄厚强张曲来源：《中国食品》2024年第02期单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes，LM），简称为单增李斯特氏菌，是一种需氧兼性厌氧的食源性病原菌、革兰氏阳性短杆菌，广泛存在于自然界中。
其中，奶制品、肉制品、水产品、海产品、禽类食品、蔬菜等容易受到该菌污染，误食用含有该菌的新生儿、老年人等免疫力低者易患脑膜炎、败血症，孕妇则易发生早产或流产，致死率高达20%-30%，给食品安全造成严重威胁。
近年来，国内外关于单增李斯特氏菌的主要检测方法包括国标法、免疫学检测法、生物传感器检测法等，这些方法各有优缺点。
能力验证通过对实验室间的检验能力进行比对，评价参加者的能力，是证明实验室检验能力的重要方式之一。
资阳市食品药品检验检测中心生物检验科参加了由四川省食品检验研究院组织的“食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检验能力验证”，采用国标法《GB 4789.30-2016 食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验》第一法对样品进行定性检验。
一、材料与方法1.样品。
由四川省食品检验研究院提供3份单核细胞增生李斯特氏菌样品，每份样品包括一瓶白色球状西林瓶装和一袋质量约为25g的奶粉，样品编号分别为LM-029、LM-177和LM-307。
2.菌种。
单增李斯特氏菌ATCC 19115、斯氏李斯特氏菌ATCC 35967、伊氏李斯特氏菌ATCC 19119、英诺克李斯特氏菌ATCC 33090，均由广东环凯生物科技有限公司提供。
3.主要试剂。
脑心浸出液肉汤（BHI）、李氏菌增菌肉汤（LB1，LB2）基础、PALCAM 琼脂、李斯特氏菌显色培养基、SIM生化管、HBI单增李斯特氏菌生化鉴定条（GB），购自青岛高科技工业园海博生物技术有限公司；李斯特氏菌显色培养基、PALCAM琼脂、含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆琼脂（TSA-YE）、血平板、革兰氏染色液试剂盒、3%过氧化氢、单增李斯特氏菌干制生化鉴定试剂盒，购自北京陆桥技术股份有限公司。
单核细胞增生李斯特菌检测技术是什么
龙源期刊网 单核细胞增生李斯特菌检测技术是什么作者：周林来源：《学习与科普》2019年第31期单核细胞增生李斯特菌包含在食源性致病菌范围当中。
就目前来看，免疫学检测方法和分子学检测方法是很多单增李斯特菌检测方法中使用最频繁的两种方法。
免疫学检测方法具有操作简便、时间短的特点，然而其非常依赖高特异性的抗体，结果容易出现失误，需要对检测结果进行详细判定。
和免疫学检测法相比，分子学检测方法具有灵敏度高、省时省力等特点，然而分子学检测方法在使用过程中需要较多的操作经验，同时不能在大批量检测中应用。
一、单核细胞增生李斯特菌概述（一）生物学特征单核细胞增生李斯特菌是一种革兰阳性短杆菌，其对营养的需求量较少，生长温度通常最低不能低于2摄氏度，最高不能超过42摄氏度，同时可以在弱酸、弱碱和6.5%NaCl肉汤中得到快速成长，并且能够形成β-溶血。
在其生长过程中还可以发酵出很多种糖类物质，按照O抗原以及H抗原能够分解成十三中血清型，其中1/2a与4b这两种类型在致病菌株中的占比最大。
（二）污染源及流行病学单核细胞增生李斯特菌是自然界中常见的一种致病菌，抗冻能力非常强，其主要传播路径是通过粪-口这种方式进行。
健康人粪便中的单核细胞增生李斯特菌携带率通常为0.6%至16.0%，然而奶制品、水产品以及家禽中均携带相应的单核细胞增生李斯特菌。
另外，单核细胞增生李斯特菌通过胎盘、黏膜、性以及产道鞥部位都可以进入到体内，从而导致感染。
单核细胞增生李斯特菌的致病性与其具有的毒作用、宿主的免疫状况以及年龄具有密不可分的关系，宿主的细胞免疫可以有效的解除单核细胞增生李斯特菌中存在的病菌。
各种免疫力弱的人群都属于易感人群，比如新生儿、四十岁以上的成人等。
健康成人感染后会出现和感冒相似的情况，然而其他免疫力功能较低的人可能会出现更加严重的症状，乃至会直接死亡。
二、相关检测技术（一）聚合酶链反应技术就目前来看，聚合酶链反应技术得到了广泛的普及与运用。
单核细胞增生性李斯特菌可视化检测方法的建立与评价
单核细胞增生性李斯特菌可视化检测方法的建立与评价单核细胞增生性李斯特菌（Listeria monocytogenes,LM）是一种常见的食源性致病菌。
近年来,由该菌引起的食品安全事件频繁发生,严重威胁着人类的健康和社会经济的发展。
该菌可感染人和动物引发李斯特菌病。
临床症状为脑炎、脑膜炎、败血症等,病死率较高。
因此,对其进行现场监控与快速准确检测已成为公共卫生检测领域的研究热点问题之一。
目前,单增李斯特菌的实验室检测方法,主要有传统分离培养生化鉴定法、免疫学检测方法和分子生物学检测方法,这些方法均存在着耗时长、灵敏性低、对实验条件和操作人员要求较高等不足。
因此开发具有操作简单、快速、灵敏的单增李斯特菌检测新方法,对于李斯特菌病的防控工作具有重要的意义。
本课题研究旨在依据单增李斯特菌的结构性质和致病机制,将分子生物学技术,纳米技术相结合,构建针对食品中单增李斯特菌的快速、灵敏、简便的可视化检测方法。
为环境生物毒素研究提供新思路和新方法,也为食品安全的现场检测提供技术支持。
主要研究内容包括以下四个部分:第一部分单增李斯特菌鸡卵黄抗体IgY的制备及纯化鉴定（1）以单增李斯特菌灭活菌悬液,分别制备弗氏完全佐剂疫苗和弗氏不完全佐剂疫苗。
采用皮下多点注射法将疫苗接种于鸡胸处皮下,收集免疫前后鸡蛋,采用聚乙二醇沉淀法提取卵黄抗体,采用凝胶过滤层析法对卵黄抗体IgY进行分离纯化,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）对所得抗体IgY进行纯度鉴定。
结果显示,纯化前的IgY除目标链之外出现多条杂带,纯化之后的IgY仅有目标链显现,表明纯化后抗体纯度较高。
（2）采用BCA蛋白定量试剂盒测定卵黄抗体蛋白含量。
经测定所提取IgY 的蛋白含量范围为5.51-22.89mg mL<sup>-1</sup>,第15周所提取的IgY的蛋白含量最高,为22.89 mg·mL<sup>-1</sup>。
单核细胞增生李斯特菌InlC基因缺失株的构建及其毒力和环境耐受性的研究
单核细胞增生李斯特菌InlC基因缺失株的构建及其毒力和环境耐受性的研究单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）是一种广泛存在于自然环境中的细菌，可以引起人类和动物的严重感染。
在L. monocytogenes 中，InlC是一个重要的表面蛋白，与细胞内和细胞外的相互作用紧密相关。
本研究旨在构建InlC 基因缺失株，并评估其对宿主细胞的感染能力以及在环境中的耐受性。
首先，我们使用克隆技术成功地构建了 InlC 基因缺失株。
通过PCR 验证，确认了目标基因已被成功删除。
通过Western blot分析来确定 InlC 蛋白在缺失株中的表达情况。
结果显示，与野生型菌株相比，InlC 缺失株中完全没有 InlC 蛋白的表达。
这表明成功构建了 InlC 基因缺失株。
接下来，我们对 InlC 缺失株和野生型菌株进行了宿主细胞感染实验。
使用小鼠巨噬细胞系RAW264.7作为宿主模型，比较了两株菌在细胞内的定殖和复制能力。
结果显示，与野生型菌株相比，InlC缺失株对宿主细胞的入侵和复制能力显著降低。
这表明InlC对于L. monocytogenes进入和繁殖在宿主细胞中起到重要的作用。
为了评估 InlC 缺失株在环境中的耐受性，我们将野生型菌株和 InlC 缺失株分别培养在不同温度和pH值条件下，并评估其生长状况。
结果显示，在较高温度（42°C）下，InlC 缺失株的生长受到抑制，生长曲线明显下降。
然而，在正常的生理温度（37°C）下，两株菌的生长特征没有显著差异。
此外，在不同pH值条件下，两株菌的生长表现也相似。
这些结果表明，InlC 缺失株对环境因素的耐受性与野生型菌株类似。
综合以上结果，我们成功地构建了 InlC 基因缺失株，并证明了InlC 蛋白在 L. monocytogenes 对宿主细胞的感染中发挥重要作用。
此外，我们还发现 InlC 缺失株在较高温度下的生长受到明显抑制，但在正常的生理条件下，其生长特征与野生型菌株相似。
单核细胞增生李斯特氏菌生化鉴定
单核细胞增生李斯特氏菌生化鉴定
李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）是一种革兰氏阳性杆菌，是一种常见的细菌性食物中毒病原体。
单核细胞增生组织均为生化鉴定的一种常见方法。
以下是李斯特氏菌生化鉴定的一些特征：
1. 嗜冷性：李斯特氏菌生长适宜温度为2-45℃，菌株能够在4℃下生长，并在冷藏食品中繁殖。
2. β-溶血素产生：李斯特氏菌能够产生β-溶血素，可以通过血琼脂（Blood agar）培养基上的溶血环进行观察。
3. 乳酸发酵：李斯特氏菌是一种革兰氏阳性乳酸菌，能够进行乳酸发酵。
可以使用乳糖发酵基质（Lactose fermentation medium）进行鉴定，如果产生乳酸则为阳性。
4. 半胱氨酸脱羧：李斯特氏菌具有半胱氨酸脱羧酶活性，可以将半胱氨酸转化为硫代氨基酸。
可使用兰氏差异培养基（LDC medium）进行鉴定。
5. 半乳糖酶活性：李斯特氏菌具有半乳糖酶活性，可以将乳糖转化为半乳糖。
可使用半乳糖发酵基质（Rhamnose fermentation medium）进行鉴定。
此外，李斯特氏菌还可以进行PCR扩增目标基因进行鉴定，
如16S rRNA基因、Internal Transcribed Spacer（ITS）区域等。
需要指出的是，单纯进行生化鉴定可能存在一定的误判率，结合其他检测方法可以提高鉴定的准确性。
此外，由于李斯特氏菌在环境中广泛存在，饮食中也常常带菌，所以对于临床病例的确诊还需要结合患者的临床表现、流行病学调查等综合分析。
单核增生李斯特氏菌检测概述
单核增生李斯特氏菌检测概述单核增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）是一种革兰氏阳性的致病菌，能够在低温下生存繁殖，并在恶劣环境中形成生物被膜，使其对抗不良条件。
该菌可引起人类的李斯特菌病（Listeriosis），也是一种可以通过食品传播的重要病原体。
李斯特菌病在免疫功能低下的人群中很容易引起严重感染，包括孕妇、老年人、免疫抑制患者和新生儿。
检测单核增生李斯特氏菌的方法主要包括传统的培养方法和现代的分子生物学方法。
1.传统培养方法传统的培养方法是检测单核增生李斯特氏菌的主要方法之一、常用的培养基包括PALCAM（Polymyxin, Acriflavine, Lithium chloride and Cycloheximide）和OXOID Listeria Selective Agar等。
培养温度通常在30-37℃之间，因为单核增生李斯特氏菌可以在低温下生长。
在培养过程中，从食品样品或其他可能受污染的样品中提取菌落，并在培养基上进行培养。
培养时间通常为1-2天，培养过程中需要注意去除其他菌落的干扰。
2.分子生物学方法分子生物学方法是现代检测单核增生李斯特氏菌的常用方法，主要包括聚合酶链反应（PCR）和实时荧光定量PCR等。
这些方法的优势在于其高度敏感性和特异性。
通过检测单核增生李斯特氏菌特有的基因或序列，可以快速准确地鉴定与检测其存在。
3.培养与分子生物学相结合的方法为了更好地检测单核增生李斯特氏菌，有些方法将传统培养与分子生物学相结合。
这种方法通常先进行培养，然后使用PCR或实时荧光定量PCR等技术进行进一步检测和鉴定。
这种方法较为耗时，但能够进一步提高检测的准确性。
需要注意的是，由于单核增生李斯特氏菌能够在低温下生存，因此在食品或样品中的检测非常重要。
常见的食品样品包括生肉、海鲜、冷冻食品、奶制品等。
对于食品企业来说，建立完善的食品安全管理体系和进行规范的监测是防止单核增生李斯特氏菌传播的重要措施。
单核细胞增多性李斯特菌
需氧或微需氧菌 生长温度范围：0.5~45 ℃ 一般实验室培养基生长良好 菌落细小，斜射光观察呈现
特殊的蓝绿色
单核细胞增多性李斯特菌
生物学特性
• 该菌对理化因素抵抗力较强：在土壤、粪便、青储 饲料和干草内能长期存活
• 在培养基中放于4℃可存活3～4年 • 对碱和盐抵抗力强，10％～15％NaCl培养基中能生
对氧不稳定的细菌溶血素 LLO可能作用于心肌的收缩和起搏点 LLO是本菌的主要毒力因子，缺失LLO的菌株无毒 由hly基因编码
单核细胞增多性李斯特菌
李斯特菌溶血素O
单核细胞增多性李斯特菌
内在素
• 一种细菌表面蛋白 • 能与上皮细胞、内皮细胞、肝细胞、单核—巨噬
细胞等多种真核细胞结合 • 本菌感染内皮细胞两种机制之一： ① 细菌从感染的单核—巨噬细胞通过细胞与细胞间
长，16％NaCl培养基中可存活一年，25％NaCl环境 中仍可存活 • 60-70℃经5-20min可杀死 • 70%酒精5min、2.5%石炭酸、2.5%氢氧化钠、2.5% 福尔马林20min 可杀死此菌
单核细胞增多性李斯特菌
单核细胞增多性李斯特菌
生物学特性
分型
• 血清型：根据O抗原和H抗原分为16个血清型
单核细胞增多性李斯特菌
致病性
单增李斯特菌进入人体是否得病与菌量和宿主的年龄 免疫状态有关
李斯特氏菌对于高危人群102个/g就可致病，而对于 健康人108个/g也可能安然无恙
易感者为新生儿、孕妇、40岁以上的成人、免疫功能 缺陷者
单核细胞增多性李斯特菌
临床表现：
• 潜伏期：在感染后3-70天出现症状
• 血清型与症状之间无相关性
单核细胞增生李斯特氏菌的研究进展资料
单核细胞增生李斯特氏菌的研究进展摘要:单核细胞增生性李斯特氏菌是人类一种重要的食源性致病菌，单核增生李斯特氏菌的危害近年来引起世界各国食品和卫生部门的广泛关注. 本文主要阐述了单核细胞增生性李斯特氏菌的生长特性，包括生物学特性、流行病学、致病性的一些研究，以及对该菌的传统分离方法、免疫学检测方法、核酸检测等方法的最新进展进行了综述，为进行该菌的准确、快速检测奠定了基础.关键词：单核细胞增生性李斯特氏菌 , 生物学特性 , 检测方法Research Advance on Listeria Monocyto--genesDong QianCollege of Food Science, Southwest University, Chongqing 400715, ChinaAbstract: listeria monocytogenes is one of the important food-derived pathogens for human, and listeria monocytogenes have been paid close attention by public health and food bureaus the world over. The growth characteristic including biological characteristics, epidemiological, pathogenic, epidemiology, and recent advances of listeria monocytogenes detection methods, including traditional detection procedures, immunity detection patterns and nuclear acid assays were reviewed. Thus, a foundation of rapid and accurate detection methods of the bacteria were laid.Key word: Listeria monocytogenes , Biological characteristics , Detection method由近年来关于单核增生李斯特氏菌的相关消息可知，李斯特菌病尤其是由单核增生李斯特氏菌引起的各类疾病已日益成为全球性疾病，引起了国际上的高度重视。
食品中单核细胞增生李斯特氏菌快速检测方法的建立
食品中单核细胞增生李斯特氏菌快速检测方法的建立摘要建立了食品中单核细胞增生李斯特氏菌快速、敏感、特异的PCR 快速检测方法。
选取hlyA 基因作为靶序列设计1对引物,在单核细胞增生李斯特氏菌中能扩增出356 bp 的预期片段,大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌的扩增结果均为阴性,表现出极好的单增李斯特菌种特异性。
纯培养的检测极限为46个细菌。
用该方法对36 份食品样品进行检测,检测结果与分离鉴定方法完全相符,表明该方法可适用于食品中单核细胞增生李斯特氏菌的快速检测。
关键词食品;单核细胞增生李斯特氏菌;PCR快速检测方法单核细胞增生李斯特氏菌(Listeie monocytogenes,简称L.M,单增李氏菌),是一种人畜共患病病原菌[1],使人和动物患脑膜炎、脑炎、败血症及造成怀孕妇女流产、死胎等疾病。
该菌可通过眼睛及破损的皮肤、粘膜进入体内而造成感染,孕妇感染后通过胎盘或产道感染胎儿或新生儿,栖居于阴道、子宫颈的该菌也会引起感染。
单增李斯特氏菌不易被冻融,能耐受较高的渗透压,在土壤、地表水、污水、植物、青贮饲养中均有该菌存在,所以动物很容易食入该菌,并通过口腔—粪便的途径进行传播。
据报道,健康人粪便中单增李斯特氏菌的携带率0.6%~16.0%,有70%的人可短期带菌,4.0%~8.0%的水产品、5.0%~10.0%的奶及其产品、30.0%以上的肉制品及15.0%以上的家禽均被该菌污染。
人主要通过食入软奶酷、未充分加热的鸡肉、鲜牛奶、冻猪舌等而感染,约占85%~90%的病例是由被污染的食品引起的。
近年来,国外报道该菌所致的食物中毒越来越多,病死率高达30%～70%[2-3]。
国内也不断有散发病例,引起了国内医学界的普遍关注。
WHO在20世纪90年代已将其列为食品四大致病菌之一[4-5]。
该菌在自然界分布广泛,以家畜、家禽兽为主要宿主,易污染食品而引起食物中毒和李斯特病暴发[6-7]。
食品是导致人类受单核细胞增生李斯特氏菌感染的主要传播途径,由于该菌在4 ℃冰箱保存的食物中仍可生长繁殖,是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一。
单核细胞增生性李斯特菌快速检测技术研究
单核细胞增生性李斯特菌快速检测技术研究单核细胞增生性李斯特菌快速检测技术研究引言：单核细胞增生性李斯特菌（Listeria monocytogenes）是一种潜伏在食品中常见的致病菌，能引起严重的食物中毒，威胁着人类的健康与生命安全。
因此，研究和发展一种快速、高效的检测技术对于食品安全至关重要。
本文旨在探讨目前关于单核细胞增生性李斯特菌快速检测技术的研究进展，并为进一步的研究和应用提供参考。
一、单核细胞增生性李斯特菌简介单核细胞增生性李斯特菌是一种革兰氏阳性菌，能在广泛的温度（0-45℃）和pH（4.4-9.6）范围内生长，且具有金属抗药性。
在食品中，该菌可以通过肉类、蔬菜和奶制品等途径传播，使其成为食品安全的重要隐患之一。
由于该菌对常规的煮沸和加热处理具有一定的抵抗能力，因此需借助有效的检测技术对其进行快速、准确的检测。
二、传统检测方法的局限性目前常用的单核细胞增生性李斯特菌检测方法主要包括传统培养方法、蛋白酶结合效应（ELISA）和分子生物学方法等。
然而，这些方法存在着以下局限性：1. 传统培养方法耗时长，需要较长的培养时间才能获得结果，无法快速检测；2. ELISA方法虽然具有较高的灵敏度和特异性，但其需要复杂的样品处理和实验步骤，使得检测过程繁琐；3. 分子生物学方法虽然能够提供较快的检测结果，但其仪器成本高，技术要求较高，限制了其在实际应用中的推广。
三、快速检测技术的研究进展随着科学技术的发展，研究人员不断探索和开发更为快速、准确的单核细胞增生性李斯特菌检测技术。
以下是几种常见的快速检测技术：1. 荧光定量聚合酶链反应（qPCR）技术：该技术以其高效、精确和快速的特点，被广泛应用于单核细胞增生性李斯特菌的检测。
qPCR技术可以快速扩增和定量样品中的特定基因片段，结合荧光定量技术实现李斯特菌的快速检测和定量。
2. 微生物芯片技术：微生物芯片是基于生物芯片技术的一种新型检测平台，可实现对多种菌种的快速识别和检测。
食品微生物检验——单增李斯特菌
食品微生物检验——单增李斯特菌食品中单增李斯特检测技术李斯特氏菌属包括七个种：单核细胞增生李斯特氏菌绵羊李斯特氏菌英诺克李斯特氏菌威尔斯李斯特氏菌西尔李斯特氏菌格氏李斯特氏菌默氏李斯特氏菌其中单核细胞增生李斯特氏菌对人类致病性强，绵羊李斯特氏菌对人类也有一定的致病性，其余李斯特氏菌无致病性。
单核细胞增生李斯特氏菌是一种人畜共患病的病原菌。
它能引起人畜的李氏菌的病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。
它广泛存在于自然界中，食品中存在的单增李氏菌对人类的安全具有危险，该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一，因此，在食品卫生微生物检验中，必须加以重视。
该菌为革兰氏阳性短杆菌，大小约为0.5μmх 1.0-2.0μm,直或稍弯，两端钝圆，常呈V字型排列，偶有球状、双球状。
兼性厌氧、无芽胞，一般不形成荚膜，但在营养丰富的环境中可形成荚膜，在陈旧培养中的菌体可呈丝状及革兰氏阴性。
该菌有4根周毛和1根端毛，但周毛易脱落。
该菌营养要求不高，在20--25℃培养有动力，穿刺培养2－5天可见倒立伞状生长，肉汤培养物在显微镜下可见翻跟斗运动。
该菌的生长范围为2--42℃（也有报道在0℃能缓慢生长），最适培养温度为35--37℃，在pH中性至弱碱性（pH9.6）、氧分压略低、二氧化碳张力略高的条件下该菌生长良好，在pH3.8－4.4能缓慢生长，在6.5% NaCl 肉汤中生长良好。
在固体培养基上，菌落初始很小，透明，边缘整齐，呈露滴状，但随着菌落的增大，变得不透明。
在5-7%的血平板上，菌落通常也不大，灰白色，刺种血平板培养后可产生窄小的β-溶血环。
在0.6%酵母浸膏胰酪大豆琼脂(TSAYE)和改良Mc Bride(MMA)琼脂上，用45度角入射光照射菌落，通过解剖镜垂直观察，菌落呈兰色、灰色或兰灰色。
该菌触酶阳性，氧化酶阴性。
发酵多种糖类，产酸不产气。
如发酵葡萄糖、乳糖、水杨素、麦芽糖、鼠李糖、七叶苷、蔗糖（迟发酵）、山梨醇、海藻糖、果糖。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
REF3012314226B-zh-2009/11 VIDAS快速单核细胞增生李斯特菌(LMX)仅供实验室用VIDAS®快速单核细胞增多李斯特菌（LMX）分析是在VIDAS®上采用酶联荧光免疫分析(ELFA)方法，对人类食品和环境样本的单核细胞增多李斯特菌进行特异性检测。
概述李斯特氏菌属现分为6个种，包括单核细胞增生李斯特菌、英诺克李斯特菌、绵羊李斯特、西尔李斯特、威尔斯李斯特菌及格氏李斯特（1）。
单核细胞增生李斯特菌是唯一对人致病的菌。
人类李斯特氏菌病包括脑炎、脑膜炎、败血症和流产。
高危人群包括孕妇、新生儿、免疫损伤患者及老年人（2，3）。
单核细胞增多李斯特菌在环境中分布广泛，对未加工原料、部分加工食品及发酵食品具有潜在危害。
VIDAS®快速单核细胞增生李斯特菌（LMX）试验是一种快速筛选试验，将取代费时的传统方法，可直接筛选人类食品（如肉类、乳制品、海产品和蔬菜）或环境样本中的单核细胞增生李斯特菌。
原理VIDAS®快速单核细胞增生李斯特菌是一种采用自动化VIDAS®系统（参见用户手册）作为酶联荧光免疫分析（ELFA）方法，对李斯特菌抗原进行检测的酶联免疫方法。
固相容器（SPR®）是一个类似于加样头的一次性装置，起加样器的作用。
SPR®内壁用单核细胞增生李斯特菌单克隆抗体包被。
各种测试试剂为即用型，均预先放置在密封的试剂条内。
VIDAS®系统自动完成全部实验程序。
反应底物在SPR®内外循环数次。
将部分增菌肉汤加于试剂条上，样本中的单增李斯特菌抗原与SPR®内面包被的抗单增李斯特菌抗体结合，未结合的样本则被洗去。
与酶结合的的抗体也在SPR®内外循环，并与固定于SPR内壁的单增李斯特菌抗原结合。
测生物素的存在。
酶复合物由孵育的碱性磷酸酶标记的二抗检测。
最后洗去未结合的酶复合物。
最后在SPR®.中加入荧光底物，磷酸4-甲基伞型物。
在SPR内面的酶催化下底物分解为荧光产物（4-甲基伞形酮）。
在450nm处测定荧光强度。
试验完成，仪器自动分析结果并生成每个样本的测试值，将测试值与标准进行比较（阈值）并解释结果（阳性或阴性）。
包装(60人份/盒)60LMX试剂条STR成品试剂60LMX SPR®s SPR成品试剂。
SPR®s内部包被抗单增李斯特菌特异性抗原包被。
LMX标准(1x6ml)S1成品试剂纯化并已灭活的单增李斯特菌抗原+防腐剂+蛋白稳定剂MLE卡上“S1值范围”栏下表示荧光值的可信区间范围LMX阳性质控(1x3ml)C1成品试剂纯化并已灭活的单增李斯特菌抗原+防腐剂+蛋白稳定剂MLE卡上“质控C1(＋)值范围”栏下表示荧光值的可信区间阴性质控(1x6ml)C2成品试剂TRIS缓冲盐水(TBS)(150mmol/l)-Tween pH7.6+防腐剂MLE卡上“质控C2(－)值范围”栏下指出最大可接受值。
1张MLE卡片包含校正测试所需的工厂校正数据。
1份说明书SPR®SPR®内壁包被抗单增李斯特菌特异抗原的抗体。
每一个SPR®上均标有“LMX”。
从包装袋中取出所需数量的SPR®后要及时封闭包装袋。
试剂条包含10个以铝箔封的孔，并覆以标签，标签上有条形码，显示测试种类、试剂盒批号、有效期等。
第一层孔上的铝箔需穿孔，每个试剂条的最后一孔是荧光测度用比色杯。
中间孔含测试用的各种试剂。
LMX试剂条说明孔试剂1样本孔：此孔加入250ul增菌肉汤、标准品或质控2前洗涤液(600µl)：TRIS缓冲盐水(TBS)(150mmol/l)–Triton×100pH7.6+防腐剂3-4-7-8-9洗涤液(600µl)：TRIS缓冲盐水(150mmol/l)－吐温pH7.6+防腐剂5酶结合物(400µl)：酶标记抗单增李斯特菌抗体+防腐剂6碱性磷酸酶标记的二抗(400ul)10含底物的比色杯(300µl)：4-甲基-伞形磷酸盐(0.6mmol/l)+二乙醇氨*(DEA)(0.62mol/l or6.6%,pH9.2)+防腐剂*刺激性试剂-R36:对眼睛有刺激-S26:一旦入眼，立即以大量清水冲洗并就医。
更多信息，请索取材料数据表（MSDS）。
未提供但需具备的试剂和材料•0.25ml和500µl加样枪•VIDAS®Heat and Go干式加热器(bioMérieux 货号93554或93555或93556;与bioMérieux销售代表联系)或水浴箱(95-100°C)或同等系统•无粉一次性手套•均质搅拌器•带过滤装置的均质袋•LMX肉汤添加剂(LMX SUPP)(bioMérieux货号42648)•LMX肉汤(bioMérieux货号42647)•LX肉汤10ml管装(bioMérieux货号42120)以下货号作为参考：•配方为Ottaviani-Agosti的李斯特琼脂(bioMérieux货号43641)•API®Listeria试剂条(bioMerieux货号10300)注意事项•仅作为专业用途。
•请将VIDAS系统放置在微生物检测的专用房间。
•试剂盒内的产品来源于动物。
源于动物及/或卫生情况的证明不能完全证明其中不含有传播性病原体，因此建议将所有产品视作具有潜在传染性并需做好常规的安全预防措施（禁止吞入或吸入）。
•不要使用包装袋破损的SPR®。
•不要使用包装明显破损的STRs(铝箔或塑料损坏)。
•不要使用超出标签上有效期的试剂。
•不同批号试剂请勿混合使用。
•请使用无粉手套，据报道粉末可引起某些酶免疫检测结果不正确。
•试剂中含有叠氮钠，该物质可与铅或铜管道反应形成爆炸性金属叠氮物。
如果在管路系统中处理含叠氮钠的液体，要用大量的水冲洗以避免形成金属叠氮物。
•孔中的培养基含有刺激性试剂（6.6％二乙醇氨），参照以上的标记R和S。
•处理后的溢出物需用液体清洁剂和至少含0.5％次氯酸钠家用漂白液彻底清洗。
参见使用手册中清洁仪器上或仪器中的溢出物一节。
不要使用含有漂白剂成份的高压灭菌溶液。
•定期清洁和消毒VIDAS®和mini VIDAS®仪器(参阅VIDAS使用手册)。
•孕妇及年老体弱者要特别注意单核细胞增生李斯特菌。
建议这些敏感人群不要接触单增李斯特菌。
要特别注意，处置污染的材料前必须先高压灭菌。
保存•2-8℃下保存VIDAS®LMX试剂盒。
•切勿冷冻试剂。
•所有未使用过的试剂保存在2-8℃。
•试剂盒打开之后检查SPR®包装是否完整且无破损，若不完整或有破损，请勿使用。
SPR®s的稳定性，使用后放入干燥剂再重新密封，保存温度保持2-8。
•如果按照推荐的方法保存试剂，所有试剂在标签所示有效期内稳定性不变。
样本准备推荐以下方案。
增菌肉汤在使用之前需在37±1°C预热。
人类食品（生奶酪制品除外）和环境标本的一般处理方案•采用无菌操作使用前将500ulLMX肉汤添加剂（货号42648）加入至在预热225ml的LMX肉汤瓶中。
注1:每次使用前用涡旋振荡仪将添加剂均质。
注2:按上述比例将LMX肉汤添加剂加入LMX肉汤中后可直接放置于均质袋中保存。
•无菌操作将9Xml的LMX肉汤（已加入LMX肉汤添加剂）加到X g(或X ml)样品中。
注1:收集环境标本的装置应先用含10%中和剂（如卵磷脂-聚山梨醇酯-L组氨酸-硫代硫酸钠混合物）的无菌稀释液（如缓冲蛋白胨水）湿润。
采集完后，将该装置放入含添加剂的适量LMX 肉汤中（如，将拭子放入10ml肉汤，药棉块放入100ml肉汤）。
注2:待检测样本量不能超出25g。
•在带过滤装置的均质袋中混合样品。
•在下孵育27±1小时。
•孵育完后将增菌肉汤混匀。
若使用VIDAS®干式加热器，取0.25ml增菌肉汤至试剂条的样本孔内。
加热5±1分钟（参照VIDAS®热地快使用指南），然后将试剂条取出冷却10分钟。
如果使用水浴，取1-2ml增菌肉汤至试管内，密封试管。
95-加热5±1分钟后冷却试管。
将煮沸的肉汤混匀，然后取0.25ml肉汤至VIDAS®试剂条的样本孔内。
•VIDAS®试剂条上机检测。
将未加热的增菌肉汤置于2-保存，以备确认实验之需。
注：未加热的增菌肉汤在VIDAS®上机检测前可在2-保存72小时。
上机检测寄确认实验无论如何也得在孵育结束的72小时之内进行。
阳性结果确认所有VIDAS®LMX阳性结果都必须确认。
使用未加热的于2-保存的增菌肉汤进行确认试验，孵育末72小时之内必须着手开始确认试验。
第1种确认方法：可在显色培养基上进行分离确认。
用CEN或lSO标准中的传统方法（包括纯化）(4)鉴定1至5的典型菌落。
第2种确认方法：可接种显色平板，此法也是确认阳性结果的AFNOR认证方法之一。
从LMX肉汤中分离出典型的单增李斯特菌落足以证明单增李斯特菌的存在。
第2种确认方法：可接种Ottaviani和Agosti-型琼脂，如果能分离出单独的菌落，则不需纯化即可上API®试剂条确认典型的李斯特菌菌落。
如果结果有差异（可选择的方法（LMX）阳性，但CEN或lSO标准中的提及方法未能确认），实验室必须采取必要的步骤以确保结果的正确性。
例如，推荐下述补充方法：•取1ml未加热的LMX肉汤至10ml LX肉汤中。
•在下孵育22-26小时后，转种至选择性琼脂上分离菌落。
使用说明更多完整的说明请参见VIDAS®或mini VIDAS®用户手册输入VIDAS®PTC协议数据信息当初次使用该试剂盒时，在读MLE卡前，首先要用VIDAS®或mini VIDAS®条形码阅读器扫描代码（位于包装盒内说明书末端）。
读码后VIDAS®PTC 协议数据会传输到VIDAS®PC和/或mini VIDAS®仪器软件中，以便于升级。
只需在初次使用试剂盒时读取数据。
输入MLE卡信息注：第一次检测前，必须在读取MLE卡之前输入VIDAS®PTC协议数据（条形码位于说明书末端）。
如果在读取VIDAS®PTC协议数据之前就已经读取了MLE卡，则需重新输入MLE卡信息。
使用新一批试剂前，首先将试剂盒中的MLE卡（规格表）上的规格输入到仪器（VIDAS®或mini-VIDAS®）中，否则仪器将无法打印结果。