生化制药学-电泳精品PPT教学课件

操作
1 薄膜的处理与放置
2 点样
平衡
3 电泳：E 10~25V/cm，0.5～2h
4 显色
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五 薄层电泳
将支持物与缓冲液调制成适当厚度 的薄层进行电泳。
常用支持物：淀粉、琼脂、纤维素 粉、硅胶等
操作：
1 缓冲液选择
离子强度较高的缓冲液
2 支持物处理
精制品
3 薄层板制作
4加样：挖沟、混合样品、填埋
5 电泳
2020/126/6 分析：印染法
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六 凝胶电泳
支持物：多孔凝胶 聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶等 具有电泳和分子筛的双重作用，分辨力高 最常用聚丙烯酰胺凝胶，原因： 机械强度好，透明有弹性，稳定，无吸附作用
和电渗作用，可制成不同孔径的凝胶。 分类：垂直管型盘状电泳、垂直板型电泳； 连续、不连续、梯度、SDS凝胶电泳
缺点：需无盐溶液，不适用于在等电点不 溶解或发生变性的P。
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1 稳定的pH梯度的形成 2 两性电解质载体
要求： 由多乙烯多胺与丙烯酸加成制备（有不同 pH范围的商品两性电解质载体） 3 支持pH梯度的介质 密度梯度溶液（用于自由电泳） 凝胶（如聚丙烯酰胺凝胶） 4 操作要点 pH梯度支持介质的制备 聚焦电泳 检测 两性电解质载体的除去
4 电泳条件：水溶液（缓冲液）、支持物 （区带电泳）、电场（电泳仪、电泳槽）
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一 电泳的基本原理
电泳分离： 移动方向：带电性质决定 泳动度：带电颗粒在单位电场强度下的移动
速度。 μ ＝v/E=(d/t)/(V/l)=(dl)/Vt 影响μ的因素： 1颗粒本身：带电、大小、形状 2 外界因素：电场强度E、pH、离子强度I、
干法、湿法
4 电泳
电桥水平、加盖、电压稳定、注意时间
5 显色及分析
蛋白：溴酚兰、氨黑10B、偶氮胭脂红B
Aa：茚三酮、靛红
核酸：紫外光下观察
一般洗脱定量
பைடு நூலகம்2020/12/6
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第一课件网
四 薄膜电泳 ( )
支持体：薄膜
优点：分辨力较高、简便、快速、区带清晰、 易于定量、便于保存
广泛应用于蛋白质和同工酶等的分离分析
电渗、缓冲液粘度及温度等。
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二 电泳的分类
分为自由电泳（无支持体）和区带电泳 （有支持体）两大类。
自由电泳包括Tise-leas式微量电泳、显微 电泳、等电聚焦电泳、等速电泳及密度 梯度电泳。
区带电泳包括滤纸电泳（常压及高压）、 薄层电泳（薄膜及薄板）、凝胶电泳 （琼脂、琼脂糖、淀粉胶、聚丙烯酰胺 凝胶）等。
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电泳技术
第一课件网 ()
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1 电泳：带电粒子在电场中向着与其本身 电荷相反的电极移动的过程。
2 电泳技术优点：快速、准确、重现性好
3 电泳方法分类
按电场分：常压（<500V，适用大分子）、 高压（>500V，适用小分子）
支持体分：自由电泳、区带电泳
仪器装置分：水平式、垂直式、悬架式
日期：
演讲者：蒝味的薇笑巨蟹
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七 等电点聚焦电泳
电泳系统中加进两性电解质载体，当通已 直流电时，两性电解质载体即形成一个由 阳极到阴极连续增高的pH梯度。P进入时， 不同的P移动到与其等电点相当的pH位置 上，从而使不同等电点的P得以分离。
优点：分辨率高，区带清晰、窄，加样部 位自由，重现性好，可测定P或多肽的等 电点。
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电泳技术思考题
1名词解释 电泳、电泳分离技术、泳动度、电渗、 区带电泳、相对迁移率
2 影响泳动度的主要因素有哪些？ 3 区带电泳的操作步骤一般有哪些？
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凝胶电泳的操作要点
1 凝胶制备
2 电极缓冲液
第一课件网
3 样品处理及加样 ( )
4 电泳
5 染色与固定
6 脱色
7 分析
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烟曲霉菌中抗真菌活性肽类物质的分离与纯化
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三 纸电泳
以滤纸为支持体的电泳技术 操作要点： 1 选择缓冲液 对显色剂和紫外光吸收等观察区带的方法
无影响
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2 滤纸的选择与处理
层析用滤纸，纸宽2～3cm/样品组分，长短影响电场 强度。
3 点样
点圆点（量少）、点条状（一般），点中间（未知样 品）、点一边（已知样品）