性病实验室检方法2

常用淋病检测方法

直接显微镜检查
分离培养淋球菌
直接显微镜检查

原理：男性淋菌性尿道炎患者 常有大量黄白色脓性分泌物，
其多形核白细胞内可找到革兰
染色阴性的双球菌。

方法：革兰染色为一传统方法
，革兰染色将菌分为二大类， 即染成紫色的革兰阳性菌及染 成红色的革兰阴性菌。
直接显微镜检查的临床意义

视野显微镜下，光线从聚光器的边缘 斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮 光，从而可根据其特殊形态和运动方 式进行检测。

方法：病原学检查的主要方法有暗视 野显微镜检查、镀银染色法和直接荧
光法
暗视野显微镜检查
标本采集部位：

一期或二期梅毒的皮肤或粘膜损害
有痂者去痂，先用无菌棉球或纱布蘸生理盐水，将皮损拭净，轻压 皮损至渗液（避免出血）。然后用载玻片印取渗液，立即检查，未 破溃者用手术刀刮破皮疹，取渗出液。
性病的实验室诊断
性病实验室的组织管理
1. 有实验室负责人，实验人员分工明确 2. 实验室人员应该定期参加培训、进修 或专业研讨会 3. 有实验室各项管理制度 4. 制定常规实验室标准操作程序（SOP ）
性病实验室质量管理


1．仪器、设备 实验室所有使用仪器应有使用、保养及维修记 录有温控的仪器需每天记录温度 2．培养基及试剂 ⑴ 严格按配方及技术要求配制培养基及试剂 ⑵ 对配制的培养基及试剂应有质检 ⑶ 购买的试剂盒应为经国家有关部门检验 合格的产品（附有关证明） ⑷ 所有培养基及试剂的保存都应符合要求
男性淋菌性尿道炎的尿道标本 敏感性及特异性可高达95%～99%，具诊断价值。 宫颈标本、无症状男性尿拭子及取自直肠的涂片时 敏感性仅40～70%。 不推荐直接显微镜检查诊断直肠和咽部淋球菌感染。 亦 不能用于疗后判愈。如果在多形核细胞外见到形态典型 的革兰阴性双球菌，需做培养进行确证。


直接显微镜检查的临床意义
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性传播疾病(STD)/性传播感染(STI)
病 种
淋病 梅毒: 生殖器疱疹: 生殖道沙眼衣原体感染: 尖锐湿疣: HIV感染/艾滋病: 软下疳: 性病性淋巴肉芽肿: 念珠菌性阴道炎: 滴虫性阴道病: 疥疮: 阴虱病: 肝炎（乙、丙）： －－－
病原体
淋球菌 梅毒螺旋体 生殖器疱疹病毒
生殖道沙眼衣原体 乳头瘤病毒
③反应板要清洁干净，孔内无异物。
④试剂保存于2~10℃，不可冻结，不同批号试剂间不可混 用。
梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义

作为非梅毒螺旋体抗原血清试验(如TRUST等)初
筛阳性标本的确证试验。

梅毒患者经过抗梅治疗后，TPPA等梅毒螺旋体 抗体试验仍可阳性，故TPPA等试验阳性不能作 为疗效观察的指标。
可以作为淋球菌的鉴定依据之一。 2、方法特点：


敏感性 81~100%。
特异性 100%
淋球菌培养

培养条件 ： 35 ℃ ～36℃，含 5%～10% CO2，湿润（70%湿 度）的环境。 CO2环境可由CO2培养箱、CO2 产气袋及烛缸提供。使用烛缸时，

应使用白色、无芳香味的无毒性蜡
烛。在烛缸底部放些浸水棉球以保 持一定的湿度。
*敏感性和特异性低于螺旋体抗原试验，BFP反应和前带 现象
非特异性血清试验的假阴性：
1）有25%~40%的未治梅毒在晚期隐性期可自然逆转 为阴性，约30%的心血管和神经梅毒呈阴性。 2）前带现象（the prozonphenomenon）, 即为抗 原抗体量比例不适，抑制阳性反应。一般易发生在滴 度在1：500以上的标本中。 1%的II期梅毒会出现前 带现象。 3）操作人员应注意实验的温度，试剂盒从冰箱取出 后应恢复至室温，室温过低（〈10℃）可能出现假阴 性或结果不准确。
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梅毒血清学试验结果的临床意义总汇
TRUST RPR VDRL
_ + + _ + +
TPPA TP-ELISA TP-RT
意义
排除梅毒 一期梅毒的早期 现症梅毒(梅毒孕妇所生 的婴儿除外) 生物学假阳性 早期梅毒经治疗后
以临床诊断为目的的检测策略一
非梅毒螺旋体抗体试验（具体方法）
阳性 阴性
报告检测方法及阴 性结果

女性病人敏感性低，其影响因素较多。 宫颈分泌物中杂菌较多，有的在形态上 类似于淋球菌

简便、有效、价格低廉
淋球菌的生物学特性



淋球菌为需氧生长菌 用普通培养基不易培养成功 营养要求高,需在含有动物蛋白的培养基 中能生长好 生长时的营养要求不一 营养需要不同的原因在于不同的菌株其 生物合成酶有缺陷
敏感性和特异性较好。适用于大量人群的筛查。

早期梅毒硬下疳出现1周-2周后，血清可呈阳性。 经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗 效观察、判愈、复发或再感染的指征。
梅毒螺旋体抗原血清试验
1、原理：用梅毒螺旋体特异蛋白为抗原，检测梅毒患者血中
特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体
2、方法：


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梅毒实验室操作要求
梅毒血清学试验操作和结果分析 ⑴标本的采集和分离
①编号或姓名登记
②采血、分离血清和贮存
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梅毒实验室操作要求
⑵试剂准备 ①温度、器具的校正
②试剂、血清和反应板恢复到试验温度
③试剂鉴定
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梅毒实验室操作要求
⑶试验操作 ①血清量的控制
②试剂量的控制
③旋转仪速度和时间的控制
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培养时间：24~48小时
淋球菌的初步鉴定
初步鉴定淋球菌的依据

菌落特征


氧化酶试验
革兰染色
3 细菌培养
选择性培养基上培养——典型
菌落——氧化酶试验阳性——镜检革
兰氏阴性双球菌。
淋球菌培养的临床意义

培养法为诊断淋病的金标准. 用于女性感染者、亚临床感染者、以及 来自直肠和咽部的感染的确诊试验。
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淋球菌的生物学特性





淋球菌喜潮怕干，干燥的条件下1～２小时就 死亡 不完全干燥的条件下，附着衣服或被褥中生存 18～24h 室温则1～2天内死亡 -30℃可保寸2～3个月 -70℃为6个月 ph：7.0～7.5
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淋球菌培养
1．原理：淋球菌在适宜的培养基上可生长出特征性的菌
落，根据菌落大小、形态、光泽、边缘、颜色等情况，
非梅毒螺旋体抗原血清试验
1、原理： 梅毒螺旋体感染人体后，宿主会产生抗类脂 抗原的抗体，可检测梅毒患者血中的抗类脂抗原的抗 体 2、方法：

快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR) 甲苯胺红不加热血清试验（TRUST） 性病研究实验室试验 (VDRL)
RPR
定性试验 •在纸卡圆圈中加入50μL待检血清，涂满整 个圆圈 •使用滴管和专用针头（60滴/mL），加1 滴抗原悬液 •旋转100rpm 8min •立即判断结果
原理：用经纯化及超声裂解处理的梅毒螺 旋体为抗原，或重组抗原包被固相，检 测特异性梅毒螺旋体抗体

•其敏感性和特异性有待进一步评价
快速试验-免疫渗滤法



在试纸条上包被螺旋体特异性抗原成份， 如47kD、15kD抗原，利用免疫渗滤技 术，将试纸条插入待测血清，观察血清 与特定抗原成份的反应 •可在10分钟之内得到结果，快速、方 便 •是特异性螺旋体实验 •需要进一步验证方可用于临床诊断
HIV病毒 杜克雷噬血杆菌 衣原体 念珠菌 滴虫 疥虫 阴虱 肝炎病毒 －－－
主要常见性病实验室检测介绍

梅毒
淋病 生殖道沙眼衣原体感染
常用梅毒检测方法

病原学检测 血清学检测

病原学检查

原理：一期、二期梅毒时，取硬下疳、 扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液 或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗
非梅毒螺旋体抗原血清试验的优缺点：
优点： *敏感性特异性好 *不需要昂贵设备，简单易行 *适用于大量人群的血清筛查 *有效治疗后血清滴度可下降并阴转，故可作疗效观察、 判愈、复发。 *20分钟可获得实验结果。 *试剂与方法均已标化，各实验室间结果可比较。 *试验可被内部质控和外部质控监控进行。 缺点：
梅毒螺旋体抗原血清试验
◆梅毒螺旋体颗粒凝集试验：用整菌和其 片断做抗原致敏的明胶颗粒，此致敏颗 粒与人血清或血浆中的梅毒螺旋体抗体 结合，产生肉眼可见的凝集反应。敏感 性和特异性接近最佳，分别为95%和 99.9%。容许做梅毒的精确诊断。
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[ 注意事项]
①新溶解的“C”“D”应置30分钟以上才能使用，已溶解的 “C”“D”液用前需恢复至室温并充分摇匀。专用滴管应标 明不能混用，不能用来稀释血清。 ②未致敏孔不发生凝集，否则试验无效。如果标本与非致 敏和致敏颗粒均产生凝集，需作重吸收试验。

TPPA等阳性不能区分既往感染和现症感染，应 结合非梅毒螺旋体抗原血清试验结果进行诊断。
讨论



RPR检测抗心磷脂IgM/IgG抗体 TPPA检测抗梅毒螺旋体IgM/IgG抗体 TP-IgM-ELISA试验检测抗梅毒螺旋体IgM抗 体 IgM抗体最早产生并随疾病的治疗而逐渐下降 或消失 IgM试验可用早期诊断

淋巴结穿刺液 以无菌操作法用注射器吸取0.3-0.5ml生理盐水，穿刺入淋巴结，再 回吸数次，最后将吸取液涂玻片上，立即检查。
暗视野显微镜检查


制片 标本置于载玻片上，加一滴生理盐水，盖上盖 玻片，在暗室中于暗视野显微镜上油镜观察 观察 先用低倍镜，再转至高倍镜 梅毒螺旋体在暗背景上呈白色发光，螺旋整齐， 运动规律（旋转、伸缩或蛇行运动）