蚕豆根尖微核检测
环境污染物的蚕豆根尖微核试验
环境污染物的蚕豆根尖微核试验实验内容随着工农业生产的迅速发展，新的化学物质和工业“三废”不断地进入人们的生活环境，它们中有许多可能对遗传物质产生损害并造成致癌、致畸、致突变等遗传毒理效应的环境致突变物，可对人类健康和生存构成严重危害。
微核试验(Themicro nucleu stest, MN T)是以动植物为材料，采用细胞生物学手段，观测其出现的微核率来表示材料受遗传损伤程度的一种检测遗传毒物的方法。
微核是无着丝点的染色体断片，在有丝分裂后期不能向两极移动，所以游离于细胞质中，在间期细胞核形成时，即可在它附近看到一到几个很小的圆形结构，直径大约是细胞直径的 1 ／20 － 1 ／ 5 ，这就是微核（micronucleus ）。
微核是常用的遗传毒理学指标之一，指示染色体或纺锤体的损伤。
由于这种损伤会因细胞受到的外界诱变因子的作用而加剧，而微核产生的数量又可与诱变因子剂量的强弱呈正比，因此可以用微核出现的频率来评价环境诱变因子对生物遗传物质的损伤程度。
蚕豆(Vicia faba)是一种理想的细胞遗传学研究材料。
蚕豆的染色体大，数量少(2n=12),根尖中含有较多的分裂相细胞，非常适合显微观察，而且蚕豆根尖细胞周期中的大部分时间对诱变剂敏感，便于遗传毒性检测实验，因此，早在1959年，放射生物学家已经用蚕豆的根尖细胞来进行X射线的遗传损伤研究。
到了上世纪70年代，蚕豆根尖染色体畸变技术已发展得相当成熟，作为一种检测化学品遗传学毒性的方法为人们所知并被广泛采用。
蚕豆根尖微核试验在1986 年已被中国环保局列为一种环境生物测试的规范方法，它作为一种环境变异的检测手段，在我国不少地区的环保部门和医疗卫生系统中都有广泛的应用。
蚕豆根尖微核试验在对水体污染物、空气污染物、农药、重金属、化妆品、工业化学品等的致突变性检测方面，都得到了较广泛的应用，在此仅以农药污染的蚕豆微核实验为例介绍其相应的实验方法与步骤，学生在具体开展相关环境污染物的蚕豆根尖微核试验时可参考使用。
蚕豆根尖微核监测法
12.2.5 组装前的注意事项
取出豆种，用调温水浸洗 3 次，每次 5 min，
按照规定的条件恢复培养24 h。
处理6h
处理过程中，根尖如出现相关的急性毒性症
状，则按要求增加试样急性毒性预试验；否 则，直接进行后续试验。
实验步骤
4.根尖固定
用卡诺氏液固定
切取顶端 l.0 cm 左右根尖置于具盖指管内（同一试样处理 的根尖放入一个指管），加卡诺氏液固定 2 h。固定时间 最长不超过 24 h。
8．插拔时不要抓住线缆拔插头，以免损伤线缆。
12.2.6 台式计算机组装基本步骤
1．主机的安装 （1）准备好机箱并安装电源，主要包括打开空机箱和安装电源； （2）驱动器的安装，包括硬盘、光驱的安装； （3）CPU和散热器的安装，在主板处理器插座上安装CPU及散 热风扇； （4）内存条的安装，将内存条插入主板内存插槽内； （5）主板的安装，将主板固定在机箱内； （6）显卡的安装，根据显卡接口类型将显卡安装在主板上合适 的扩展槽内； （7）声卡等的安装，根据声卡的总线类型选择合适的扩展槽将 它们安装在主板上； （8）机箱与主板间连线的连接，是指各种指示灯、电源开关线、 PC喇叭等面板插针的连接，以及硬盘、光驱。
用乙醇保存
如不能及时染色制片，则弃去卡诺氏液，用实验用水洗净， 加入乙醇溶液浸没，于冰箱内冷藏，72h内染色镜检。
33
浸洗根尖
诱变物质的微核检测技术—蚕豆根尖微核检测与应用
v 更多问题……
五、 实验流程——准备工作 ——
v 每个自然班分成4个组
§ §
人数基本相同、确定每小组的组长 确定试验目的、各小组所用的处理因素(阴性 对照、阳性对照、两种污水处理) 上报分组名单(组长)、试验目的、因素 实验开始前提交试验方案(班内协调、统一时 间安排)
§ §Leabharlann 实验工作时间安排参考§
若干种待测诱导物(如不同来源的污水)，由各 组同学采集 阳性对照(NaN3)：已证明可诱导微核形成 阴性对照(洁浄水样)：微核形成率接近于0
§ §
五、 实验流程
准备工作 § 查阅文献 § 确定研究目的 • 如：待测物、蚕豆品种差异等 § 制订试验方案 v 蚕豆发根、取材 v 处理与恢复培养 v 取材制片、镜检观测 v 结果分析、撰写报告(论文)
诱变物质的微核检测技术 诱变物质的微核检测技术
——蚕豆根尖微核检测与应用 —— 蚕豆根尖微核检测与应用 (综合型实验) (
四川农业大学 普通遗传学课程组
提 纲 纲
1. 实验目的 2. 实验原理 3. 实验材料 4. 用具与药品 5. 实验流程
一、 实验目的
v v v
了解诱变物质微核检测技术原理与应用 掌握蚕豆根尖微核检测技术 了解研究性试验开展的基本环节
§ §
实验教学角度：综合性实验 实验内容角度：研究性试验(非验证性实验)
二、 实验原理
u u u
微核的概念与形成 微核检测技术 微核检测的应用
（一）微核的概念与形成
v
微核(micronuclei, MN/MCN)
天数 工作内容 方案、材料与待测物准备 1 2 3 5 6 7 8+ 浸种(其间换水两次) 第一阶段催芽 第二阶段催芽(其间检查水分) 诱导处理 恢复培养 根尖取材、固定 解离、制片观察 结果分析与报告写作 24h 12~24h 36~48h 12~24h 22~24h 24h 2~4h 大致时间 注意 班、组 自然班 组 组 组 组 组 组 组
实验06 蚕豆根尖微核检测技术
实验六蚕豆根尖微核检测技术一、实验目的⒈了解微核测试原理和毒理遗传学意义。
⒉学习蚕豆根尖的微核测试技术。
二、实验原理微核（micronucleus,MCN）是真核生物细胞经各种理化因子作用后引起染色体畸变，在间期细胞中的一种表现形式。
在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3～1/10，染色与主核一样或稍浅。
一般认为微核是由无着丝粒的染色体断片或落后染色体，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。
当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即微核。
三、实验器材和药品松滋青皮蚕豆、显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、烧杯、Carnoys固定液、1mol／L盐酸、改良苯酚品红染液、NaN3。
四、方法与步骤⑴浸种催芽：择饱满、均匀的种子，洗净后用蒸馏水常规浸种、催芽24～30h，此期至少换水2次；待种子充分吸胀后，移入铺有干净、双层湿纱布的托盘内培养。
⑵用被检测液处理根尖：当初生根长到1～2cm时，选初生根生长良好的蚕豆6～8粒，分别放入蒸馏水（CK）、0.４mmol／L、0.８mmol／L、1.2mmol／L的NaN3中染毒8～12h。
⑶根尖细胞恢复培养：处理后的种子用蒸馏水（自来水）浸洗3次，每次2～3 min；将处理液洗净后，置于湿棉花上恢复22～24h；同时均设蒸馏水处理为空白对照组。
以上温度均为25℃。
⑷根尖细胞固定：将恢复后的种子，从根尖顶端切下1～1.5cm长的幼根，用Carnoys 固定液固定20～24h。
固定后的根如不及时制片，可换入70%的酒精溶液中置4℃冰箱中保存备用。
⑸酸解：用1mol／L盐酸在60±5℃下酸解8min，幼根软化即可。
⑹染色：吸去盐酸，用蒸馏水浸没幼根3次，每次1～2分钟。
最后浸于水中。
制片前取出置载玻片上，截下1～2mm左右长的根尖，滴1-2滴改良苯酚品红染液染色10～15min 后，加上盖玻片，覆以吸水纸常规压片。
实验四 蚕豆根尖微核监测技术
实验四蚕豆根尖微核监测技术（VMT）一、实验目的学习如何利用高等植物间期体细胞遗传检测系统以监测环境中的致突变物。
二、原理在细胞分裂早期，若受到有害理化因子的攻击，使染色体发生断裂，产生染色体片段。
在这些片段中，有些可能重新愈合恢复正常，随细胞分裂进入子细胞，有些则由于缺乏着丝点，不能移向细胞的极部而变成圆球体，像卫星一样分布在主核的周围，这便是微核，由于染色体片段的大小和数量不一，所以微核的大小和数量也不相同。
而蚕豆根尖细胞的染色体大，DNA含量多，因而对诱发物的反应敏感，通过显微镜下的观察和计数，便可监测环境污染。
三、器材与试剂（一）显微镜、温箱、恒温水浴箱、冰箱、手揿计数器、解剖盘、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、试剂瓶、烧杯等显微镜压片实验用具。
（二）试剂1.5N HCl、45%醋酸、卡诺氏液（无水乙醇3份加冰醋酸1份配成，固定根尖时随用随备）、Schiff试剂、SO洗涤液。
2四、操作步骤1、蚕豆浸种催芽（1）浸种：将当年或前一年的松滋青皮豆种子按需要量放入盛有有自来水的烧杯中，臵25℃温箱内，浸泡20~30小时，此期间至少换水2次，换用的水最好事先臵于25℃温箱中预温。
（2）催芽：待种子吸胀后，用纱布松松包裹臵解剖盘内，保持温度，在25℃的温箱中催芽12~24小时。
待种子初生根露出2~3mm时，再选取发芽良好的种子，放入铺有薄层温脱脂棉的解剖盘内，仍臵入25℃的温箱中继续催芽，注意保护湿度。
再经24~36h，种子大部分初生根长至2~3cm，根毛发育良好，这时就可用来作为监测水源样品或药物溶液突变效应之间。
2、被监测液处理根尖（1）每一处理选取6~8粒初生根尖生长良好，根长一致的种子，放入盛有被测液的培养皿中，被测液浸泡住根尖即可，用自来水处理作对照，方法相同。
（2）处理时间4~6h。
3、根尖细胞恢复培养：（1）将处理的种子，用自来水浸洗8次，每次2~3min。
（2）洗净后的种子再放入新铺好湿脱脂棉的解剖盘内，按前述培养条件使根尖细胞恢复22~24h。
实验六蚕豆根尖微核检测技术学时综合性设计性
一、实验目的 1．了解染色体畸变的各种类型、微核测试的原理和 毒理遗传学在实际生活与工作中的应用范围及意义 2．学习蚕豆根尖的微核测试技术
二、实验原理
微核简称(MCN)，是真核生物细胞中的一种异常结构， 往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生。在细胞间 期微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外、大小应在主 核1／3以下。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核 一样。一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的断 片产生的，但有些实验也证明整条的染色体或多条染色 体也能形成微核。这些断片或染色体在细胞分裂末期被 两个子细胞核所排斥便形成了第三个核块。已经证实微 核率的大小是和用药的剂量或辐射累积效应呈正相关， 这一点和染色体畸变的情况一样。所以可用简易的间期 微核计数来代替繁杂的中期畸变染色体计数。
五、实验方法
1．实验材料的培育 蚕豆根尖细胞的染色体大，DNA含量高，因而对
诱变因子反应敏感。松滋青皮豆是从不同蚕豆品种中 筛选出来的一种较为敏感的品种。本品种引入后在栽 培繁殖时要注意不要同其它蚕豆品种种在一起，不喷 洒农药、以保持该品种较低的本底微核值。也可用其 它蚕豆品种，但是必须设置对照组。种子成熟后，晒 干贮藏于干燥器内或4℃冰箱内备用。
6．酸解：
从70％乙醇中取出固定好的根尖→流水冲 洗３min→吸水纸吸干→放入盛有适量1 mol/L HCl，60±0.5℃水浴保温的青霉素瓶中→解离 10min。
7．染色 改良石炭酸品红染色：
解离后材料水洗3min并吸干，挑取1个根 尖的乳白色分生组织于载玻片上夹碎捣烂，滴 加1～2滴染液，染色10～15min，压片。
3． 处理
每一处理选取6-8粒初生根生长良好、根长一致的 种子，放入盛有待测物溶液的培养皿中，浸没根尖。 阳性因子可采用CrO3（1.0和2.5 mol/L）、NaN3 （0.5、1.0和1.5mol/L）或EMS（150和200 mol/L）， 另取一处污水作待检测物质，用自来水作对照，共9 个处理，处理根尖6～24h(处理时间可视实验需要和 被测液浓度而定)。
蚕豆根尖微核检测技术
蚕豆根尖微核检测技术实验名称: 方便面面饼液对蚕豆根尖微核率的影响专业年级: 2010级级生物科学成员: 尹忠围安树珺谢林芝刘伟指导教师:实验时间: 2013年4 月一、摘要用蚕豆根尖细胞微核技术检测不同种类方便面面饼液微核的诱变效果。
设置了阴性对照:自来水处理组，实验组:康师傅、统一、老坛，麻老表四组饼液分别处理蚕豆根尖，阳性对照:用0.02g/L的醋酸铅溶液处理。
发现方便面面饼液在诱导微核产生方面影响明显，醋酸铅溶液具有诱导微核产生的作用。
关键字:蚕豆根尖，方便面面饼，微核千分率，污染指数二、实验背景和目的随着现代社会的发展，越来越多的化学物质运用到人们的日常生活之中，如种类繁多的食品添加剂。
而其中有些物质具有较强的危害，如致畸，致癌，致突变等。
为了检测已存在或潜在的危害，各种检测技术应运而生。
微核试验是检测染色体或有丝分裂器损伤的一种遗传毒性试验方法。
无着丝粒的染色体片段或因纺锤体受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期仍留在子细胞的胞质内成为微核。
用微核试验来评价药物、放射线、有毒物质等对人体细胞或体外培养细胞遗传学损伤仍是一个直观有效可行的方法,在遗传毒理、医学、食品、药物、环境等诸多方面得到了广泛的应用。
微核计数经济,迅速,简便,不需要特殊技能,可以统计更多的细胞并实现计算机自动计数。
我们采用蚕豆作为实验材料，采用植物微核技术来检测方便面面饼中添加剂对人体是否产生危害。
方便面是日常生活中经常接触到的食品，其市场占据快餐食品的大壁江山，在超市中油炸方便面与非油炸方便面占到快餐食品的60%到70%。
另一方面，在各媒体的报道中，经常出现有关方便面的食用危害，而且很有争议，所以这也是我们进行本实验的一个原因。
三、实验原理微核是间期细胞中在细胞核之外存在的一个或多个圆形或杏仁状结构，大小在主核的1/3以下，是有丝分裂后期丧失着丝粒的落后的染色体片段形成。
20世纪70年代初，Matter和Schmid等首先用动物骨髓细胞微核率来测定怀疑具有诱变活力的化合物，并称之为微核。
实验蚕豆根尖微核检测技术优秀PPT
也可以采用“污染指数”判别：此方法可避免因实验 条件等因素带来的MCN‰本底的波动，方法如下：
污染指数在0－1.5区间为基本没有污染； 污染指数在1.5－2区间为轻度污染； 污染指数在2－3.5区间为中度污染； 污染指数在3.5以上为重度污染； 如果对照本底MCN‰为10 ‰以上，可采用t检验（被 测样品较少时）检测处理液致畸效果是否明显，或以 F检验（被测样品较多时）检测各处理之间是否具有 显著的差异。
3． 处理
每一处理选取6-8粒初生根生长良好、根长一致的 种子，放入盛有待测物溶液的培养皿中，浸没根尖。 阳性因子可采用CrO3（1.0和2.5 mol/L）、NaN3 （0.5、1.0和1.5mol/L）或EMS（150和200 mol/L）， 另取一处污水作待检测物质，用自来水作对照，共9 个处理，处理根尖6～24h(处理时间可视实验需要和 被测液浓度而定)。
4．根尖细胞恢复培养
将处理后的种子用蒸馏水浸洗三次，每次2－3min。 将洗净的种子再放入铺好滤纸或脱脂棉的白磁盘内 25℃温箱中恢复培养22－24小时。
5．固定根尖细胞及制片(参考根尖压片法)
(1)将恢复培养后的种子，从根尖顶端，切下1cm长的 幼根。用卡诺氏液固定24h，固定后如果不及时制片， 可换入70% 的乙醇中，置4℃冰箱内保存备用。
凡数值在上下限时，定为上一级污染。
第三片
各自观察的细胞 细胞数 微核数 阳性因子可采用CrO3（1.
MCN‰在18‰－30‰区间，则表示有中度污染；
细胞数 微核数 细胞数 微核数
数或微核数 阳性因子可采用CrO3（1.
只有真核的测试系统更能直接推测诱变物质对人类或其它高等生物的遗传危害，在这方面，微核测试是一种比较理想的方法。
蚕豆根尖微核监测技术
实验三蚕豆根尖微核监测技术（MVT）一、目的学习如何利用高等植物间期细胞遗传检测系统以监测环境中的致突变物。
二、原理在细胞分裂早期，若受到有害因子的攻击，从使染色体发生断裂，产生染色体片断。
在这些片断中，有些可能愈合恢复正常为，随细胞分裂进入子细胞，有些则由于缺乏着丝点，不能移向细胞的级部而变成圆球体，象卫星一样分布在主核的周围，这便是微核，由于染色体片段的大小的数量不一，所以微核的大小和数量也不相同，而蚕豆根尖细胞的染色体大，DNA含量多，因而对诱变物的反应敏感，通过显微镜下的观察和计数，便可以监测环境污染。
三、器材与试剂：（一）显微镜、温箱、恒温水浴箱、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、试剂瓶、烧杯等显微压片试验用具。
（二）试剂5N HCl 、45%醋酸、卡诺氏液化、席夫氏试剂、SO2 洗涤剂四、操作步骤1、蚕豆浸种催芽。
2、被监测液处理根尖。
3、根尖细胞恢复培养。
4、固定根尖细胞。
(这四步由实验人员完成)5、孚尔根染色（1）固定后的幼根，在青霉素瓶中用蒸馏水浸泡2次，每次5分钟。
（2）吸净蒸馏水，再加入5N HCl 将幼泡住，连瓶放入28度的水浴锅中水解幼根25分钟左右，至幼根被软化即可。
（3）用蒸馏水浸泡幼根2次，每次5分钟。
（4）在暗室或遮光条件下加席夫试剂，每瓶用量以淹住幼根液面高出两毫米为好。
浸洗衣两次（5）除去染液，用SO2洗涤剂浸洗衣两次，每次五分钟。
（6）用蒸馏水浸洗一次，五分钟（7）将幼根放入新换的蒸馏水中，置4度的冰箱内保存，可供随时制片之用。
6、制片（1）将幼根放在擦净的载玻片上，用解剖针截除根寇区，截留一毫米的根据尖分生区。
（2）滴上少许的45%醋酸溶液，用解剖针将根尖捣碎。
（3）加盖一清洁盖玻片，注意不要有气泡。
（4）再在盖玻片上加一小块滤纸，轻轻敲打压片。
7、镜检及微核识别标识：将制片先置于显微镜低倍镜下，找到分生组织区细胞分分散均匀，膨大，分裂相较多的部位，于转到高倍镜下进行观察。
蚕豆根尖细胞微核实验
蚕豆根尖细胞微核实验蚕豆根尖细胞微核技术检测洗衣粉的毒性姓名：马丽同组者：李哲指导教师：郝雪峰（太原师范学院生物系112班）摘要微核（micronucleus,MCN）是真核生物细胞经各种理化因子作用后引起染色体畸变，在间期细胞中的一种表现形式。
在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3～1/20，染色与主核一样或稍浅。
一般认为微核是由无着丝粒的染色体断片或落后染色体，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。
当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即微核。
[1] Abstract Micronucleus (MCN, micronucleus) is eukaryotic cells by various physical and chemical factors caused by chromosome aberration, and in a form of interphase cells. In interphase cells micronucleus assumes the circular or elliptic, free from the main nuclear, nuclear 1/3 ~ 1/20 size should be in the main, dyeing and the main nuclear as or slightly shallow. Generally considered microkernel byacentric chromosome fragment or lagging chromosomes, in the late division could not enter the nucleus, formed the main nuclear nuclear block. When the cells into the next phase split between, they condense into main small nuclear nuclear, namely the microkernel.[1]关键词蚕豆根尖微核洗衣粉染色体畸变千分率Keyword Broad bean root tipMicronucleus Washingpowder Chromosomalaberration Permillage引言掌握蚕豆根尖细胞微核检测技术的一般方法。
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实验六蚕豆根尖微核检测技术一、实验目的⒈了解微核测试原理和毒理遗传学意义。
⒉学习蚕豆根尖的微核测试技术。
二、实验原理微核（micronucleus,MCN）是真核生物细胞经各种理化因子作用后引起染色体畸变，在间期细胞中的一种表现形式。
在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3～1/10，染色与主核一样或稍浅。
一般认为微核是由无着丝粒的染色体断片或落后染色体，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。
当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即微核。
三、实验器材和药品松滋青皮蚕豆、显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、烧杯、Carnoys固定液、1mol／L盐酸、改良苯酚品红染液、NaN3。
四、方法与步骤⑴浸种催芽：择饱满、均匀的种子，洗净后用蒸馏水常规浸种、催芽24～30h，此期至少换水2次；待种子充分吸胀后，移入铺有干净、双层湿纱布的托盘内培养。
⑵用被检测液处理根尖：当初生根长到1～2cm时，选初生根生长良好的蚕豆6～8粒，分别放入蒸馏水（CK）、0.４mmol／L、0.８mmol／L、1.2mmol／L 的NaN3中染毒8～12h。
⑶根尖细胞恢复培养：处理后的种子用蒸馏水（自来水）浸洗3次，每次2～3 min；将处理液洗净后，置于湿棉花上恢复22～24h；同时均设蒸馏水处理为空白对照组。
以上温度均为25℃。
⑷根尖细胞固定：将恢复后的种子，从根尖顶端切下1～1.5cm长的幼根，用Carnoys固定液固定20～24h。
固定后的根如不及时制片，可换入70%的酒精溶液中置4℃冰箱中保存备用。
℃下酸解8min，幼根软化即可。
⑸酸解：用1mol／L盐酸在60±５⑹染色：吸去盐酸，用蒸馏水浸没幼根3次，每次1～2分钟。
最后浸于水中。
制片前取出置载玻片上，截下1～2mm左右长的根尖，滴1-2滴改良苯酚品红染液染色10～15min后，加上盖玻片，覆以吸水纸常规压片。
7,8,9综合实验蚕豆根尖微核检测技术
实验目的
1.了解微核检测的原理和毒理遗传学 2.学习蚕豆根尖微核检测技术
实验原理
微核（micronucleus，MCN）：
是真核生物细胞内遗传物质的一种异常结构
微核率（ MCN ‰）与作用因子的剂量或累积
效应呈正相关
污染指数
实验材料
蚕豆根尖
实验步骤
1、浸种催芽：将实验用蚕豆按需要量放入盛有自来水的杯中，浸 泡24h，此间至少换水两次。种子吸胀后，25℃催芽，置于铺 有湿润滤纸的培养皿中，经36—48h，大部分初生根长至1— 2cm。 2、用被检测溶液处理蚕豆根尖：每一处理选取3-5粒初生根生长 良好的已萌发种子，放入盛有被测的培养皿中，被测液浸没根 尖即可。阳性检测因子可采用CrO3、NaN3、重铬酸钾、EDTA为加 强阳性效果可适当加大溶度，如1.0—2.5mol/L CrO3和0.5— 1.5mol/L NaN3、溶液。另外可取一污水作被检液之一，用自来 水（或蒸馏水）处理作对照。处理根尖12—24h，此时间也可 视试验要求和被检液溶度而定。
实验结果
若进行污水检测，根据污染指数鉴定出你所测水样的污染程 度，也可以计算被检化学药剂的污染指数。 污染指数（PI)=样品实测MCN ‰平均值/对照组（标准水） MCN ‰平均值 污染指数在0.50—1.50区间基本没 有污染； 1.51—2.00区间为轻度污染； 2.01—3.50区间为中度污染； 3.51以上为重度污染。
实验步骤
5、酸解：用蒸馏水浸洗固定好的幼根两次，每次5min，吸净蒸馏 水，加mol/L盐酸将幼根浸没，室温下解离10min至根尖软化。
6、染色：吸去盐酸，用蒸馏水浸没幼根3次，每次1—2min。最后 浸于水中，制片前取出置于载玻片上，截下1—2mm长的根尖，滴 一滴石炭酸品红，染色10min，加一盖玻片，压片观察。
[小学]蚕豆根尖微核试验
![[小学]蚕豆根尖微核试验](https://img.taocdn.com/s3/m/c158301b81c758f5f71f677b.png)
[小学]蚕豆根尖微核试验学生设计性实验论文毒物对蚕豆根尖细胞的微核诱变效应姓名雷旭红学号2013131203专业生物科学班级 132相关实验课程名称细胞生物学实验,指导教师郝雪峰实验学期 2014-2015 学年第二学期太原师范学院教务处编印洗衣粉、洗衣露诱发蚕豆根尖细胞微核实验研究摘要掌握蚕豆根尖细胞微核检测技术的一般方法。
根据微核诱导的原理，利用蚕豆根尖细胞微核检测技术对洗衣粉的毒性状况给出客观评价。
结果表明:洗衣粉会诱导微核的产生，说明洗衣粉、洗衣露在超过一定浓度内对生物细胞是有毒的。
Abstract :Broad bean root tip cells micronucleus general method detection technology to master. According micronucleus induction principle, the use of nuclear civia toxicity testing technology gives an objective assessment of the situation detergent. The results showed that: detergent will produce micronuclei induction, indicating that exceed a certain concentration of detergent in a biological cell is toxic关键词蚕豆根尖细胞洗衣粉洗发露微核诱导作用损伤Key words : Civia detergent rinse micronuclei induced damage引言人类在发展经济的同时，对自然生活资源的肆意了开发和对环境的无偿利用，已造成了全球生态破坏、资源浪费和短缺、环境污染等重大问题。
为了探明环境污染物对生物机体是否有蓄积毒作用，必须从环境的一致性着手。
实验 蚕豆根尖微核检测技术(共25张PPT)
细胞数
微核数
污染指数在0－1.
数或微核数 在没有空调恒温设备时，如室温超过30℃，MCN本底可能有升高现象，但可经污染指数法数据处理，不会影响检测结果。
7．染色 改良石炭酸品红染色：
阳性因子可采用CrO3（1.
5mmol/L 3种浓度。
目前微核测试已经广泛应用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、染色体遗传疾病及癌症前期诊断等各方面。
CrO3 污水：
五、实验方法
1．实验材料的培育 蚕豆根尖细胞的染色体大，DNA含量高，因而对诱变
因子反应敏感。松滋青皮豆是从不同蚕豆品种中筛选出来 的一种较为敏感的品种。本品种引入后在栽培繁殖时要注 意不要同其它蚕豆品种种在一起，不喷洒农药、以保持该 品种较低的本底微核值。也可用其它蚕豆品种，但是必须 设置对照组。种子成熟后，晒干贮藏于干燥器内或4℃冰箱 内备用。
六、实验数据的统计处理和污染程度划分
将实验数据按以下步骤进行统计学分析处理：
1． 计算各测试样品（包括对照组）微核千分率（MCN‰ ） 如果对照本底MCN‰为10 ‰以下，可采用如下标准进行分析 以确定样品的污染程度： MCN‰在10‰以下，表示基本没有污染； MCN‰在10‰－18‰区间，则表示有轻度污染； MCN‰在18‰－30‰区间，则表示有中度污染； MCN‰在30‰以上，则表示有重度污染；
6．酸解：
从70％乙醇中取出固定好的根尖→流水冲洗 ３min→吸水纸吸干→放入盛有适量1 mol/L HCl ，60±0.5℃水浴保温的青霉素瓶中→解离10min 。
7．染色 改良石炭酸品红染色：
解离后材料水洗3min并吸干，挑取1个根尖的 乳白色分生组织于载玻片上夹碎捣烂，滴加1～2 滴染液，染色10～15min，压片。
蚕豆的根尖实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 观察蚕豆根尖的结构；2. 学习并掌握蚕豆根尖的制片技术；3. 探讨不同处理对蚕豆根尖细胞的影响。
二、实验原理蚕豆根尖是植物学研究的重要材料，其结构简单，易于观察。
根尖包括根冠、分生区、伸长区和成熟区。
本实验通过观察蚕豆根尖的结构，了解不同处理对根尖细胞的影响，从而为后续研究提供依据。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜蚕豆、酒精、盐酸、醋酸洋红染液、载玻片、盖玻片、镊子、剪刀、解剖镜、显微镜等。
2. 实验试剂：95%酒精、15%盐酸、醋酸洋红染液。
四、实验步骤1. 取新鲜蚕豆，用剪刀剪去根尖，放入装有95%酒精的试管中浸泡30分钟，以固定细胞。
2. 将浸泡好的蚕豆根尖放入装有15%盐酸的试管中，在室温下处理30分钟，以解离细胞。
3. 将解离好的蚕豆根尖取出，用蒸馏水清洗3次，去除多余盐酸。
4. 将清洗干净的蚕豆根尖放入装有醋酸洋红染液的试管中，染色5-10分钟。
5. 将染色的蚕豆根尖取出，用蒸馏水清洗3次，去除多余染液。
6. 将清洗干净的蚕豆根尖放在载玻片上，用镊子轻轻压扁，盖上盖玻片。
7. 在显微镜下观察蚕豆根尖的结构，记录不同处理对根尖细胞的影响。
五、实验结果与分析1. 根尖结构观察（1）根冠：位于根尖的最前端，细胞排列紧密，具有保护作用。
（2）分生区：位于根冠之后，细胞较小，排列紧密，细胞核较大，具有强烈的分裂能力。
（3）伸长区：位于分生区之后，细胞停止分裂，开始迅速伸长，是根伸长最快的地方。
（4）成熟区：位于伸长区之后，细胞停止伸长，分化形成导管和根毛，是根吸收水分和无机盐的主要部位。
2. 不同处理对根尖细胞的影响（1）空白对照组：蚕豆根尖细胞结构正常，无异常现象。
（2）酒精处理组：蚕豆根尖细胞结构出现变形，部分细胞核变大，染色体凝聚。
（3）盐酸处理组：蚕豆根尖细胞结构出现严重变形，部分细胞核破碎，染色体断裂。
（4）醋酸洋红染液处理组：蚕豆根尖细胞结构正常，染色体染色均匀。
实验蚕豆根尖微核检测技术
6．酸解：
从70％乙醇中取出固定好的根尖→流水冲 洗３min→吸水纸吸干→放入盛有适量1 mol/L HCl，60±0.5℃水浴保温的青霉素瓶中→解离 10min。
7．染色 改进石炭酸品红染色：
解离后材料水洗3min并吸干，挑取1个根 尖的乳白色分生组织于载玻片上夹碎捣烂，滴 加1～2滴染液，染色10～15min，压片。
实验五、蚕豆根尖微核检测技术〔３学时〕 〔综合性、设计性实验〕
一、实验目的 1．了解染色体畸变的各种类型、微核测试的 原理和毒理遗传学在实际生活与工作中的应用
范围及意义 2．学习蚕豆根尖的微核测试技术
二、实验原理 微核简称(MCN)，是真核生物细胞中的一种异常 构造，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产 生。在细胞间期微核呈圆形或椭圆形，游离于主 核之外、大小应在主核1／3以下。微核的折光率 及细胞化学反响性质和主核一样。一般认为微核 是由有丝分裂后期丧失着丝粒的断片产生的，但 有些实验也证明整条的染色体或多条染色体也能 形成微核。这些断片或染色体在细胞分裂末期被 两个子细胞核所排斥便形成了第三个核块。已经
由于大量新的化合物的合成，原子能应用，各种各 样工业废物的排出，使人们需要有一套高度灵敏、技术 简单的测试系统来监视环境的变化。只有真核的测试系 统更能直接推测诱变物质对人类或其它高等生物的遗传 危害，在这方面，微核测试是一种比较理想的方法。且 有研究显示以植物进展微核测试与以动物进展的一致率 可达99%以上。目前微核测试已经广泛应用于辐射损伤、 辐射防护、化学诱变剂、新药试验、染色体遗传疾病及 癌症前期诊断等各方面。
六、实验数据的统计处理和污染程度划分 将实验数据按以下步骤进展统计学分析处理： 1． 计算各测试样品〔包括对照组〕微核千分率 〔MCN‰〕 如果对照本底MCN‰为10 ‰以下，可采用如下标 准进展分析以确定样品的污染程度： MCN‰在10‰以下，表示根本没有污染； MCN‰在10‰－18‰区间，那么表示有轻度污染； MCN‰在18‰－30‰区间，那么表示有中度污染； MCN‰在30‰以上，那么表示有重度污染；
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蚕豆根尖微核检测
一、实验背景和目的
本组实验运用蚕豆根尖微核检测技术，分别用不同牌子0.25mg/mL洗发露（欧莱雅、力士、沙宣）对蚕豆根尖做处理，同时以0.25mg/mL的醋酸铅溶液处理蚕豆根尖做阳性对照，自来水作阴性对照。
洗发露是我们生活中的日用品，洗发露主要成分为：界面活性剂，也就洗干净的成分。
以SLS及sls的乙基衍生物类：月桂醇聚醚硫酸酯钠盐、十二酯硫酸铵（月桂酸硫酸酯纳）为主，SLS争议很多，主要表现在对皮肤的刺激性，容易让你头皮变得敏感，虽然SLS也有用在牙膏中，但是在舒适达等国外牙膏中，是没有SLS的存在的，从这一点上，也看出SLS的刺激性是厂商的心知肚明的。
微核（micronucleus, 简称MCN），也叫卫星核，是真核类生物细胞中的一种异常结构，是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。
微核往往是各种理化因子，如辐射、化学药剂对分裂细胞作用而产生的。
在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以下。
微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样，也具合成DNA的能力。
一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断片产生的。
有实验证明，整条染色体或几条染色体也能形成微核。
这些断片或染色体在分裂过程中行动滞后，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。
当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即形成了微核。
已经证实，微核率的大小是和作用因子的剂量或辐射累积效应呈正相关，这一点与染色体畸变的情况一样。
所以许多人认为可用简易的周期微核计数来代替繁杂的中期畸变染色体计数。
由于大量新的化合物的合成，原子能的应用，各种各样工业废物的排出等都存在污染环境的可能性，欲了解这些因素对机体潜在的遗传危害，需要有一套高度灵敏，技术简单易行的测试系统来监测环境的变化。
只有真核类的测试系统更能直接推测诱变物质对人类或其它高等生物的遗传危害，在这方面，微核测试是一种比较理想的方法。
目前，国内外不少部门已把微核测试用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、食品添加剂的安全评价，以及染色体遗传疾病和癌症前期诊断等各个方面。
微核检测技术灵敏度高，可靠性强；技术简单，易于操作，而且有显而易见的实用性；实验周期短，且蚕豆根尖细胞周期中大部分时间处于对诱变剂敏感
的间期，便于遗传毒性检测试验，精确度也比较高。
本实验为不同牌子洗发露的毒性提供了理论依据，同时引起人们的高度重视，也希望有关部门对日用品中的有害物质含量进行严格控制和检测。
二、实验部分
1．材料与试剂仪器
材料：蚕豆 (为当年生无虫饱满，大小均一蚕豆种子)、3种不同牌子的洗发露（欧莱雅、力士、沙宣）
试剂：5mol/L盐酸，甲醇，醋酸铅，CrO3,NaN3处理液，甲基磺酸乙酯（EMS），蒸馏水，冰醋酸，卡诺氏固定液，乙酸乙酯
仪器：显微镜，计数器，镊子，载玻片，盖玻片，烧杯，磁盘，培养箱，分析天平，水浴锅，酒精灯，剪刀，解剖针，滤纸，铅笔，标签纸，胶水等。
2.实验预处理
实验流程图：
3．实验步骤
3.1 浸种催芽 选择粒大饱满、大小均匀的蚕豆种子按需要量放入盛有自来水的烧杯中 ,在 25 ℃下浸泡 24 h, 期间至少换水 2 次。
种子吸胀后 , 用纱布松散后裹置瓷盘中 , 保持湿度 ,在25 ℃恒温培养箱中催芽12 ～ 24 h , 待初生根长2～ 3mm ，取发芽良好的种子，放入铺满滤纸的瓷盘中25 ℃继续催芽，经约36 ～ 48 h, 大部分初生根长至 1 ～ 2cm ，根毛发育良好，这时即可用于检测了。
3.2 诱变剂处理
取不同洗发露浓度为0.25mg.mL-1；分别称取洗发露样约0．25 g 加水至1L 混匀，放置离心机(2000 r ／min)中离心20 min ，此溶液含洗发剂0.25mg/mL ，取适量体积置于培养皿中用于处理蚕豆根尖。
取和洗发水等体积的自来水作阴性对照，用0.25mg ／L 醋酸铅溶液作阳性对照。
当初生根长到2～3cm 时，各选初生根生长良好的蚕豆6～8粒，分别放入四个培养皿中中，染色24～27h 。
3.3 恢复培养 处理后的种子用自来水和蒸馏水共浸洗 3 ～ 5次 , 每次 2 ～ 3 min ，洗净后，再置入铺有湿润滤纸的瓷盘中中,25 ℃恢复培养 22 ～ 24 h 。
3.4 取材、固定 将恢复培养后的种子，从根尖顶端，切下1cm 长的幼根。
用卡诺氏液固定24h 。
3.5解离、制片观察 用蒸馏水浸洗两次，每次5min ，吸干，加入6mol/L 盐酸将幼根浸没，室温下酸解10min ，幼根软化即可。
吸取盐酸，用蒸馏水浸洗三次，每次1～2min ，最后浸于水中；取根置于载玻片上，截下1～2mm 长的根尖，滴一滴醋酸洋红染液，染色5～8min ，加盖玻片压片观察。
3.6 微核计数
微核是游离于蚕豆根尖细胞浆中圆形或椭圆形小体．其太小不
超过主核1／3，染色性与主核相一致。
每组随机取3个根尖，高倍镜观察l000个间期细胞，统计徽核数及徽核率，然后用方差分析做统计学处理。
4．结论
4.1、实验结果与分析
通过镜检后得到的实验数据如下表所示：
根据上表中的数据可进一步计算污染指数［污染指数=样品实测微核千分率平均值/对照组（自来水）微核千分率平均值］
分析：由上面数据可知，自来水微核率最低，在10‰以下，说明基本没有污染，二阳性对照醋酸铅的微核率最高，明显污染最大，微核率大于30‰,属于重污染。
还有相同量的力士、欧莱雅、沙宣微核率沙宣最高，其次是欧莱雅，最后是力士，说明使用相同量的三种洗发水，毒性：沙宣＞欧莱雅＞力士。
均在10‰-19‰内，所以都属于轻污染。
4．2、综述
综上可见，使用一定剂量的三种洗发露洗发也不会有很强的毒性，但如果使用频繁，对人体细胞的诱导作用加强，很可能会致癌。
本实验通过不同牌子洗发露对染色体的危害进行了研究，进而推断出其对人体的危害，以引起人们的高度重视，同时也为以后选用洗发露提供了依据。
显微镜下的微核自来水：
欧莱雅：
（以上纯属个人小组实验，对各洗发水无任何偏见，谢谢！）。