论述植物制片技术

论述植物制片技术

摘要：

植物制片技术是组织学，胚胎学，生理学以及细胞学等学科研究观察细胞，组织的生理病理形态变化的一种主要方法。经过制片就可以在显微镜下清楚地看到生物材料不同区域组分状态，切片也便于保存。植物制片技术分为非切片法和切片法两类。植物制片技术是生物学中的基本技术，但由于生物材料的个体差异，化学试剂的多样性，因此操作技术相当细致复杂，方法也很多，每一步骤的失误都可导致整体的失败，因此需要耐心细致，不断总结经验。本文介绍几种制片方法及其注意事项。

正文：

这学期我们学习了生物显微技术，了解了显微镜发展历史、种类、结构特点和应用范围以及植物制片技术。而植物制片技术是植物显微技术的一个重要组成部分。在显微镜下观察植物体内部的细微结构之前,必须根据植物材料的特性,采用不同的方法,对植物材料进行处理,把材料制成透明的玻片标本.根据材料的性质和制作法的不同,常用的植物显微制片技术可以分为切片法与非切片法两大类,前者常用的有徒手切片法,滑走切片法，冰冻切片法, 石蜡切片法，火棉胶切片法等,其中以石蜡切片法最为常用.后者包括压片法，整体封藏法,涂布法等.

1、徒手切片法是指手拿刀片把植物新鲜材料切成薄片，所作的切片通常不经染色或经简单染色后，制成临时的水装片用于观察，也可以通过脱水与染色制成永久制片。

徒手切片的优点是简单、方便，不需要复杂的设备，不经过化学药物的处理，基本上保留了植物活体的状态。

要点：实验材料软硬适中，便于手持。用左手拇指、食指和中指拿住材料，拇指略低于食指与中指，并使材料略为突出在指尖上面，以免切伤手指。右手持刀，将刀片平稳地放在左手食指之上，与材料切面平行，然后以均匀的动作，自左前方向右后方，斜着向后拉切，切时用臂力而不用腕力。切下许多薄片后，用湿毛笔将这些薄片放人培养皿中。用毛笔挑选透明的薄片，放在载玻片上，用滴管滴一滴水在载玻片上，盖上盖玻片，制成临时装片进行观察。

注意：在切片前，要不断地用水湿润材料和刀片。切片时，两只手应该保持活动状态，，且用力不要过猛，不能用刀片挤压材料或来回切割材料。动作要敏捷，材料要一次切下，。

2、滑走切片法是利用滑走切片机切新鲜的或保存的材料。此法切出的切片厚薄均匀、结构完整，适用于一些比较坚硬的材料。

滑走切片机由机身、升降夹物装置、切片刀的夹刀滑行部分等组成。先把切片刀固定在夹刀上，然后将材料固定在切片机的夹物装置上。调好材料的高度，使刀刃靠近材料的切面，并使材料与刀刃尽力平行。用毛笔将材料沾湿。切片时用左手扶切片刀的夹刀滑行部分，均匀用力往自己方向移动，刚开始由于材料平面不均匀，所以要多切几次直到得到较完整的切面。将刀片擦干净，再次沾湿材料。转柄转一圈，向内推动刀片，切片便被切下并粘在刀的表面上。用湿毛笔把切片取下，放入盛水的培养皿里，然后把刀推回。当把刀向后推时，再次转动转柄。如此循环往复。可将切片制成临时装片或进行简单的显微化学染色后观察，也可以通过固定、脱水、染色和封固等程序，制成永久制片。

注意每次用完滑走切片机要将刀片保护装置推上以免锋利的刀片刮伤人

3、石蜡切片法是以石蜡作包埋剂,用旋转切片机将材料切成薄片,经一系列处理制成永久制片的方法.在研究植物的细胞,组织,胚胎以及形态等方面石蜡切片法是最理想的制片方法。它的操作程序包括：取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、修块、切片、粘片、染色和封片。

它的优点是能够切出薄而均匀的连续切片。

4、涂片和压片是进行植物染色体观察研究常用的制片方法。其中涂片是将新鲜的材料或者是经过固定的材料于载片上，托涂成均匀一层，经染色后盖上盖玻片镜检。压片法是植物的器官或组织未经处理或经过处理后，被涂抹或压在载玻片上，使细胞成一薄层，便于进行观察的一种制片方法。压片法的实验步骤包括：取材、预处理、固定、解离、染色、压片、镜检和制成永久制片等。

近年来植物制片的新技术：激光显微切割技术。用于激光显微切割的植物组织制片技术也进行了改进。切片方法的选择与优化：一般显微切割技术的样品采用快速的冰冻制片法。该方法整个过程简便、耗时短,只需将组织用固定液固定之后再用包埋剂包埋,最后在冰冻切片机上完成切片。激光显微切割技术切割动物组织时优先选用冰冻制片法。但是冰冻切片法也存在一些缺点,如频繁的冷冻会使组织内产生大的冰晶从而破坏了组织学特征,增加了形态辨认的难度。植物样品比动物样品的含水量要大得多,成熟的植物细胞中央大液泡可占据细胞体积的90 %以上, 其中的水分在样品的冷冻过程中极易形成冰晶,从而破坏细胞结构。因此常规冰冻切片法容易造成植物切片卷曲或断裂及细胞破碎等问题。若对常规冰冻制片方法加以改进,使组织在制片过程中保持完好,则冰冻制片法就可以适合植物切片。如快速冷冻法能使水分在毫秒或者更短的时间内结晶,由于结晶的过程非常迅速, 致使细胞内外的介质变得更为黏稠, 无法形成较大的冰晶, 因而植物样品能保持良好的形态结构。另外,还可以采用添加冷冻保护剂的方法。冷冻保护剂的作用机理是保护剂与组织细胞中的水分结合, 降低细胞内溶液的冰点, 使形成冰晶或较大冰晶的机会减小,从而减轻细胞内冰晶对细胞及其组分的损伤。

另一种制片方法是石蜡制切片法。虽然石蜡切片能保存完好的组织形态学特征,但是固定液可能会改变大分子的结构从而影响它们的完整性和可提取性。实验表明,加入沉淀类固定剂可以改善石蜡切片的性能。

目前用于激光显微切割的植物组织制片方法在不断改进和创新以适应激光显微切割技术的应用。

有时植物制片过程会比较繁琐，周期长，所以开始制作之前要做好充分的计划和准备工作。制作中药有足够的耐心，细致的完成每一步骤，因为每一个细节都可能影响到最终结果。足够认真，多多练习并不断吸取教训总结经验就会得到满意的结果。除此以外，创新也是很有必要的，不断地推陈出新植物制片技术才会不断完善。

参考文献：

1、陆叶,席梦利,刘光欣,徐进,施季森，激光显微切割技术在植物细胞和分子生物学研究中的应用进展（J），南京林业大学学报，2007， 31（2 ）：113-117

2、石蜡切片法的详细过程和注意事项（OL）,soso问问，2009-09-15

3、园艺植物制片方法（OL），生物在线，2007-3-23

4、河北大学细胞生物学实验室，显微标本制片技术（OL），百度文库，2010-04-07