植物制片法
实验二植物染色体制片及有丝分裂观察
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ遗传学实验
植物染色体制片及有丝分裂观察
实验目的：
① 学习并掌握植物染色体玻片标本的制作方法; ② 观察植物细胞有丝分裂过程及各个时期的染色 体行为；
预习要求
实验目的
• 学习并掌握植物染色体玻片标 本的制作方法;
预习要求
流程: 材料要求,取材方法,实验 流程和各操作步骤实施原因 发根→预处理→固定→解离→ 低渗→ 软化→染色→压片→镜 检
解离的目的？如何判断解 离的效果？其他的解离方 法？
5 软化：将解离好的根尖冲洗后，放入45%醋酸 中软化10min左右。
请问解离与软化 的目的是什么？
6 染色：切取1-2mm的分生区，用改良苯酚品 红染液染色10-20min。
为保证染色的 充分要注意哪 些问题？
7 压片：盖上盖玻片，在酒精灯上烤片。然后 固定盖玻片，用铅笔垂直、用力敲击盖片几下，将 材料压成一层细胞。
取材时间？
• 2 预处理：将剪取的新鲜材料于0.02%秋水仙素溶 液中室温下处理3-4h。
预处理的目的？ 还有其他方法吗？
实验步骤：
3 固定：将经过预处理和未经预处理的材料冲 洗后转移至卡诺氏固定液中，室温下处理24h。水 洗放入70%乙醇中保存。
固定的作用？固定剂的组 成？对固定剂配制的要求？
4 解离：将冲洗后的根尖放入0.1mol/L的HCl 中， 60℃下处理8-10min（可视具体情况而定）。
实验材料
• 洋葱、大蒜的鳞茎，玉米、蚕豆的种子等。本实 验选用大蒜。
实验用品
• 用具：显微镜、剪刀、镊子、解剖针、载玻片、 盖玻片、水浴锅、酒精灯、铅笔、吸水纸等。 • 药品：蒸馏水、卡诺氏固定液、45%醋酸、秋水 仙素、改良苯酚品红染液等。
植物制片技术
二、杀死、固定、保存
✤固定液的选择 根据观察目的和对象，选择固 定剂。同时，要充分考虑植物 种类、不同器官的特性。
二、杀死、固定、保存
✤固定液的渗透力 1）选择固定剂时，要充分考虑 固定液的性质、浓度和温度对 渗透力的影响。 2）植物材料的大小和组织紧密 程度对渗透的影响。
二、杀死、固定、保存
一、选 材
• 叶的切取：横切面。
第二章 植物制片技术原理步骤
第一节 选材
第二节 杀死、固定与保存
第三节 清洗与脱水 第四节 透明与过渡
第五节 渗蜡与包埋
第六节 切片
第七节 粘片与展片
第八节 染色
第九节 封片
二、杀死、固定、保存
杀死：迅速终结植物材料的生命。要 求越快越好，使用渗透力强的药剂。
固定：在杀死基础上，组织或细胞保 持生活的状态，并在以后制片的过程 中不发生变化。
放入冷水中，促进石蜡短时间内凝 固。 （3）过夜后，取出备用。
五、浸透和包埋
第二章 植物制片技术原理步骤
第一节 选材
第二节 杀死、固定与保存
第三节 清洗与脱水 第四节 透明与过渡
第五节 渗蜡与包埋
第六节 切片
第七节 粘片与展片
第八节 染色
第九节 封片
六、切片
（1）修块： 将包有材 料的蜡块 修成一个 上窄下宽 的台体。 粘在木块 上，即可 切片。
植物显微技术
绪论
一、什么是植物显微技术 用于观察研究植物内部精细结
构的技术方法，包括制片技术、 光学显微镜技术和显微摄影技术， 是一门建立在生物学、化学以及 物理等多门学科基础之上的综合 性技术性学科。
绪论
二、植物显微技术的任务和目的 根据材料的自然特性，观察
植物石蜡切片法显微制片技术
取材
用锋利的刀片切取新鲜的植物材料，选定适宜的材料，立即固定。 取材的注意事项如下： （1）取材料要新鲜。动作要迅速，以免挤压损坏组织；取病理材料时，应设置
对照材料。 （2）所取材料大小要适当：根和茎一般直径≤5mm，切取成5-10mm小段；叶
片一般取过中脉处，切成2-5mm宽、5-8mm长。在切材料时，必须注意 刀片与中轴成直角，两切面平行，否则制成的切片细胞是斜的。 雌、雄 蕊一般不需分割。 （3）取材时间可根据切片要求有所区别。如：在进行植物发育的研究过程时， 需要找到细胞分裂相，一般在晴天的早晨9：00-10：00时取材，此时植 物细胞分裂活动较明显。 （4）取材不易过老，否则制片有难度（过老的材料须在滑走切片机上进行）； 对纵切的材料适当多取材，如根尖、茎尖等，因为切到材料正中的概率 较低。
（五）脱水
• 材料经洗涤后含有部分水分，会使材料分 解。而且透明剂与水是不相混合的，不利 于材料的透明和包埋等后期处理。因此需 用脱水剂逐渐除去材料中的水分，以便让 石蜡渗透进细胞。所以，脱水是制片的关 键环节。脱水剂要求能与水混合，而且能 与其他有机溶剂互相替代。
• 脱水必须在有盖的玻璃器皿中进行，防止 吸收空气中的水分；在更换高一级的脱水 剂时，最好不要移动材料，以免损坏材料。
• 浸蜡是一个渐进的过程，常用的正丁醇。
• 每次浸蜡的时间，视材料大小而调节。
（八）包埋
• 材料经过足够时间的浸蜡后，需包入蜡 块，以备切片。
• 操作方法：根据切片材料大小，确定所 需纸盒的尺寸，用表面光滑的磅纸预先 叠好纸盒。
（九）切片
• 即（二）固定
• 将已切好的材料尽快地浸入相当于材料10-15倍体积的固 定液中。借助固定液的作用，使细胞的新陈代谢瞬时停止， 并保持细胞或组织的形态构造及其内含物的状态不发生变 化。从而达到使组织变硬从而便于切片、增强内含物的折 光度、令细胞易于着色的目的，同时具有防腐作用。以新 鲜配制固定液效果较好。固定的时间依材料的种类、性质、 大小等而定。材料固定完毕，保存于加盖的容器内，贴上 标签。
植物切片制作
植物组织制片技术是随着显微镜的出现而发展起来的技术，是人们认识植物体结构的有效手段，已成为植物生物学的重要组成部分。
植物制片技术已建立了许多方法，现简要介绍如下几种最常见的制片技术：徒手切片法、滑走切片法、离析法、压片法、石蜡制片法和冰冻切片法。
徒手切片法徒手切片法是指手拿刀片把植物新鲜材料切成薄片，所作的切片通常不经染色或经简单染色后，制成临时的水装片用于观察，亦可以通过脱水与染色制成永久制片。
优点：简单、方便，不需要复杂的设备，不经过化学药物的处理，基本上保留了植物活体的状态。
用品与材料显微镜、载（盖）玻片、刀片、毛笔、培养皿、吸水滤纸、滴管、ddH2O或清水、1%番红水溶液、菜叶、胡萝卜、马铃薯实验材料对于软硬适中，便于手持的材料，可将实验材料截成适当小块，一般以长2~3cm，切片断面不超过3~5mm2为宜。
对于过于柔嫩的器官（如叶片等），一般可选用胡萝卜根、土豆块茎等作为支撑物，包被住材料后再进行切片。
有时也可将叶片卷成圆筒后再进行切片。
实验步骤1、在小培养皿中放入ddH2O或清水。
2、用左手拇指、食指和中指拿住材料，拇指略低于食指与中指，并使材料略为突出在指尖上面。
3、右手持刀，将刀片平稳地放在左手食指之上，与材料切面平行，然后以均匀的动作，自左前方向右后方，斜着向后拉切，切时用臂力而不用腕力。
4、切下许多薄片后，用湿毛笔将这些薄片放人培养皿中。
用毛笔挑选透明的薄片，放在载玻片上，用吸管滴一滴水在载玻片上，盖上盖玻片，制成临时装片进行观察。
注意事项1、在切片前，要不断地用水湿润材料和刀片。
2、切片时，两只手应该保持活动状态，不要使它们紧靠身体或实验台，且用力不要过猛，不能用刀片挤压材料或来回切割材料。
3、动作要敏捷，材料要一次切下，不要追求切片形状的完整。
简单的组织化学染色经徒手切片法切下的薄片，可以进行简单的组织化学染色，这样更容易分辨细胞的结构，同时可以观察到细胞各部分的化学成分。
植物制片的一般原理
植物制片的一般原理
细胞核染料（碱性染料）： 苏木精，亚甲蓝，中性红，碱性品红，洋 红，地衣红，结晶紫，番红，甲苯绿，碱 蓝。 细胞质染料（酸性染料）： 酸性品红，亮绿，苯胺蓝，固绿，刚果红， 橘红G，曙红，贾纳斯绿，孔雀绿，甲基橙。
植物制片的一般原理
3. 染色方法
⑴死细胞染色。 ⑵活细胞染色。 选无毒性染料。 观察细胞质流、精子或流动孢子等。
植物制片的一般原理
5. 封边剂
石蜡，油漆，指甲油。
植物制片的一般原理
四、染色 一般做成永久切片观察的材料， 都需要染色。
植物制片的一般原理
1. 染色原理
很复杂，难以解释。 ⑴物理学的解释 ①毛细作用或渗透作用而进入组织的内部——因 为组织材料有孔隙。 ②电子吸附作用——因而染色牢度有强有弱。 ⑵化学上的解释 组织或细胞中的各部分，或是酸性的（结合阳离 子，即碱性染料），或是碱性的（结合阴离子， 即酸性染料）。但没有新物质形成。
植物制片的一般原理
⑶醋酸（乙酸，CH3COOH） 单独使用，浓度为0.3－5%。 特点：渗透力大，固定十分迅速，但易使 细胞发生膨胀。 常与甲醛（易引起收缩）混合使用。
植物制片的一般原理
⑷锇酸（OsO4） 四氧化锇，灰黄色结晶，中性，昂贵——白金。 使用浓度为1－2%。 强氧化剂，配制水要超净，不宜与还原性固定剂 配合。 特点： ①最好的固定剂，对细微结构的固定良好，是脂 肪性物质唯一的固定剂。
植物制片的一般原理
④不改变原生质原来的体积（膨胀或缩 小）； ⑤增加细胞内含物折光程度，易于鉴别； ⑥可增加媒染作用和染色能力； ⑦又能有保存作用。 单一的化学药品难以具备以上所有条件； 而几种药品混合，可成近似理想的混合固 定剂。
植物制片的一般原理
徒手切片技术
植物病理徒手制片技术徒手制片的方法有整体封藏法、徒手切片法、组织透明制片法和涂抹制片法等多种。
限于时间本实验实践最为常用的整体封藏法和徒手切片法两种。
(一)整体封藏法对于生长在植物病部表面或培基上的菌丝体、分生孢子、分生孢子梗和其他孢子器官以及线虫等，可直接择取少许封藏在适当的浮载剂中，在显微镜下观察，根据材料的特点和观察的目的可采用不同的方法封藏制片。
常用方法的概括为挑、刮、拨、撕四种。
1挑：对于在植物受病部位或基质表面生长繁茂的霉状病原体(如霜霉菌)粉状病原体(如锈菌、白粉菌)以及培养基上的许多培养菌，可用尖细的解剖针等直接挑取封埋制片，挑取病原体的量，在保证选材典型的前提下，越少越好，以免互相重叠，分辨不清。
2刮：对病部病原体稀少，或用放大镜也难辩认霉层的病害标本，可采用两侧具刀的三角刮针(或可用刀片代替)刮取病原物制片。
刮的方法是，用刮针的一刃，蘸浮载剂少许，在病部顺同一个方向刮取2—3次，将刮得的病原体蘸在载玻片的浮载剂中封片镜检。
浮载剂在保证浮载质量的前提下要尽量少，否则少量的病原体在大滴的浮载剂中极易分散漂流，在显微镜下难以寻找。
3拨：对于产生在植物表皮下或半埋生于基物内的病原体孢子器官。
如子囊壳、分生孢子器、闭囊壳等，可将病原体连同寄主组织一同拨下，放入浮载剂中，用两支解剖针，一支稳定材料，另一支拨出植物组织，使病原体外露制片。
4撕：对于寄生在植物表皮细胞上的病原真菌，也可以将此有病原物的表皮撕下来制片镜检，这种方法不仅能看到病原物形态，而且可以观察病原物与寄主的解剖学关系。
用刀片割破叶背表皮再用小镊子轻轻撕下，放在浮载剂中制片镜检白粉病菌分生孢子梗、分生孢子和吸器形态。
(二)徒手切片法欲观察受病组织病变，病菌侵入和寄主体内扩展过程，以及埋生在基物内真菌子实体的形态结构等，都需将有关材料切成薄片，进行镜检，徒手切片是最常用的简便易行的方法，不需要特殊的设备，而且节省时间，切成的片子不仅可作临时观察，也可进一步制成永久性玻片标本。
植物学实验三切片法及根形态
** 封片：染色后，加水封片。（或制成永久标本）
** 观察：去多余液体后，显微镜下观察。
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7
滑走切片：
----利用滑走切片机切片；切片不连续、较厚；多用 于木本茎的切片。
一般步骤：
** 取材：选择用于切片的茎，将其切成小段。
** 软化：用软化剂将材料软化。
方法：A、沸水中煮2小时。
B、50%乙醇/甘油（1：1）浸1-2周。
----以塑料作为包埋剂，在超薄切片机上切片。
切片不连续，薄1 um。
一般步骤：P教材18-23
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9
植物根的形态结构
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10
根系：
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11
根尖分区：
成熟区（根毛区）
伸长区
分生区
根冠区
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小麦根尖分区的观察：
** 载玻片上滴一滴水； ** 取一段小麦根尖（1cm）于载玻片的水中； ** 盖上盖玻片压片后观察。 ** 加碘液后再观察。
5、初生木质部；6、髓
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双子叶植物次生根
1
2
1、表皮
2、皮层
3
3、中柱
4、内皮层
4
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单子叶植物根
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侧根的形成
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根瘤
菌菌 根 可编辑ppt
菌
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1、徒手切片法的学习 ----芹菜叶柄
（观看录像）
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20
2、根的徒手切片方法
1）取一段植物根（成熟区）1cm于载玻片上； 2）加一滴番红染色1分钟，加水清洗后备用； 3）取萝卜块按要求修整， 4）将根夹在萝卜块中按徒手切片法进行切片， 5）选择好的切片不进行染色处理直接装片观察。
植物制片的染色及显微化学鉴定方法
植物制片的染色及显微化学鉴定方法Revised as of 23 November 2020植物制片的染色及显微化学鉴定方法一、目的与要求1、学习植物制片的一般染色方法。
2、学会并掌握常用显微化学鉴定法，即细胞壁化学组成及细胞内主要后含物性质的鉴定方法。
二、材料和用品1、自备材料：植物叶片、芹菜叶柄、土豆块茎、花生种子等等，解剖器、剃刀或双面刀片。
2、其它材料和用品：显微镜、载玻片、盖玻片、纱布、吸水纸、蒸馏水、染色缸；%番红、% 固绿或1%苯胺蓝等染液、中性树胶、二甲苯、酒精、碘—氯化锌、盐酸—间苯三酚、苏丹Ⅲ、碘—碘化钾、10%氯化铁、盐酸等。
三、实验内容1、植物制片的染色方法2、常用显微化学鉴定法四、实验方法1、植物制片的染色方法用徒手切片法切得的薄片，如果仅仅是为了临时观察，制成临时装片即可，这种临时制片不能长久保存，只能作临时观察之用，又由于没经过染色，结构显示的也不够清晰。
为了求得更清晰地显示其细微结构及化学成分，并能够较长时间的保存，可以进一步染色及其它处理以至封片，从而可制成半永久或永久制片。
常用的染色方法是番红—苯胺蓝（或固绿）二重染色法，具体操作方法有二：方法一：（1）将植物切片材料放入30%酒精中，5分钟后移入水中。
（2）用%番红水溶液染色12—24小时。
（3）倒去番红液，用清水冲洗数次后，再放回50%酒精中浸泡5分钟。
（4）将材料从50%酒精中转入70%酒精中脱色，直至硬木质化的细胞壁呈现红色，其它部分呈粉红色或近于无色时为止。
（5） 1%苯胺蓝（用70%酒精配制）对染2—5分钟。
若用%固绿对染，则仅需半分钟左右即可。
注意：此步染色，要不时地在显微镜下检视，切忌染色过深，当木质化细胞壁呈红色，其它部分为淡蓝或淡绿色时，即可停止。
（6）用95%酒精冲去多余染液，再经无水酒精脱水5分钟。
（7）放入等量无水酒精与二甲苯溶液中及纯二甲苯中透明各3分钟。
（8）将切片材料移入载玻片上，在二甲苯未干时立即加一滴中性树胶封片，尔后将玻片平放，自然凉干或置于摄氏35度温箱中烘干。
植物制片的一般原理与方法
植物制片的一般原理与方法第一章植物制片的方法及预备植物制片技术是植物显微技术课的一个重要组成部分，在有关植物形态建成、植物杂交育种、作物病虫害防治、药用植物的培育和鉴别以及林木材性鉴定等多方面的讨论和教学工作中，都需要应用显微制片技术，由于各种作物器官的性质差异以及讨论目的的不同，就需要不同的制片方法，但因限于学时及篇幅，本书仅依据常用的基本原理及教学中行之有效的方法加以介绍。
第一节植物制片的基本要求与主要制片方法植物内部结构不能用大而厚的组织块置于显微镜下观看，必需进行制作切片，才能供显微镜下观看应用。
石蜡（或徒手）切片，是将植物切成薄的材料，按下列主要步骤与要求制成永存切片。
1.采样：材料的选择与分割2.杀生、固定与器皿清洗3.冲洗（有的不经此步）4.脱水（各级酒精）5.透亮6.渗透（例如浸蜡）7.包埋（石蜡包埋）8.切片（切片机或徒手切片）9.粘片10.烘片11.脱包埋剂（石蜡）12.经各级酒精（脱水）13.染色14.分色15.脱水16.透亮17.封藏成永存片从上述主要环节来看，首先将材料加以处理（1、2、3项），其次步进行制片基础的处理工作（4、5、6、7项），在保证质量完成这两类工作基础上，方可顺当完成切片工作（包括8、9、10项），也就是说切出符合规格的薄片来，然后再对组织进行染色、脱水、透亮等一系列工作，才可制成透亮清楚、染色艳丽、适合显微镜观看摄影，并作教学、科研长期保存的永存片。
其具体制片过程与方法，在以后章节内加以介绍。
通常制片分两大类型。
其次节溶液的配制（一）各级酒精浓度的配制在植物制片中常用各级酒精，一般以95%酒精来配制，为节省起见，避开用无水酒精来配制各级酒精（表1一2）。
在试验中使用酒精量较大，每次以量筒量液花费时间多，可在500ml细口瓶有玻璃塞的瓶上贴一条宽1cm与瓶等长的白色纸条，仅在第一次用量筒量酒精与蒸馆水的用量处划上刻度，以后每当瓶内溶液用完，即以纸条上刻度分别倒入酒精和蒸馆水的各用量即可。
植物制片的染色及显微化学鉴定方法
植物制片的染色及显微化学鉴定方法植物制片是植物解剖学研究的基础，主要包括了样品的采集、处理、包埋和切片等步骤。
制片的质量直接影响着后续染色和显微化学鉴定结果的准确性和可靠性。
以下是植物制片的一般步骤：1.采集样品：根据研究需要，采集符合实验要求的植物部件，如叶片、茎、花粉等。
2.处理样品：对采集到的植物样品进行初步处理，如去除杂质、保持新鲜等。
3.包埋样品：将处理后的样品进行包埋，使用适宜的包埋剂，如石腊、低熔点石蜡等。
4. 切片样品：将包埋好的样品进行切片，使用微tome等工具进行切割，制备出适当厚度的切片。
一旦制片完成后，接下来需要进行染色和显微化学鉴定。
染色方法可以增强显微镜下的观察效果，常见的染色方法包括常规染色和特殊染色。
1.常规染色方法：最常用的染色方法是使用苏丹精、碘红等生物染料，用于染色细胞壁、细胞核等常见组织结构。
常规染色方法可以提供植物组织的基本信息。
2.特殊染色方法：特殊染色方法主要用于特定的组织结构或化学物质的染色。
如使用苏木精-伊红染色对木质部和木质纤维进行染色，使用布氏染色对淀粉进行染色等。
显微化学鉴定方法是通过对制片样品进行特定试剂处理，以便于观察和检测特定化学物质的存在与否。
常用的显微化学鉴定方法包括：1.反应性染色：使用生化试剂或化学试剂与组织中的化学物质进行反应，产生特定的颜色或沉淀。
如使用碘酸钾溶液对淀粉进行碘反应形成蓝色物质。
2.酶反应：通过加入适当的酶试剂，使显色底物发生氧化还原反应，形成显色产物。
如使用过氧化氢试剂对过氧化物酶进行酶反应产生氧气和水。
3.化学反应：使用特定化学试剂，对特定化学物质进行识别。
如使用铁氰化钾试剂对根际紧矿质进行化学反应，生成蓝色的沉淀。
植物制片的染色及显微化学鉴定方法，通过染色和试剂处理等手段，可以使植物组织结构变得更加清晰和可见，从而更好地研究和识别植物的组织结构、化学成分和功能。
这些方法对于植物科学研究和植物学教学有着重要价值。
实验指导一简易植物制片、细胞的结构观察和生物绘图
实验指导一 简易植物制片、细胞的结构观察和生物绘图一、目的学会徒手切片法，简易装片法和生物绘图法。
二、用品显微镜、植物学盒（内装刀片、小剪、镊子、解剖针各l把；载玻片、盖玻片各6片）、培养皿、滴管、纱布、毛笔、吸水纸、蒸馏水、75%乙醇、染色液（1％番红、碘液、龙胆紫）。
三、材料玉米幼茎或蚕豆幼茎、洋葱鳞叶、胡萝卜（或萝卜、马铃薯块茎）、小麦叶片或其它叶片。
四、方法步骤（一）简易装片法1. 擦拭玻片 载玻片和盖玻片用前均要擦拭干净。
正确方法是用左手拇指和食指夹住玻片的两边，右手拇指和食指衬两层纱布夹住玻片的一半，进行擦拭，然后再擦拭另一半，使整个玻片干净为止，如玻片太脏，可用纱布蘸些水或酒精擦拭，再用干纱布擦干。
2. 取材 用镊子撕下洋葱鳞叶的内表皮．剪成长约5mm宽约3mm的小片。
3. 装片 在载玻片上滴一滴清水，将剪好的表皮浸入水滴内，并用解剖针挑平，再加盖玻片。
加盖玻片时先使一边接触水滴；另一边用针托住慢慢放下，以免产生气泡。
如盖玻片内的水未充满，可用滴管吸水从盖玻片的一侧滴入，如果水太多溢出盖玻片外，可用吸水纸将多余的水吸去。
这样装好的的片子就可以进行镜检。
（二）徒手切片法徒手切片是制作切片中的一种简单的方祛。
制作时只需要一把刀片和一个培养皿即可开展工作。
对草本植物器官的观察一般都可以用徒手切片法进行，甚至于木本植物较细的嫩枝也可用此法。
1. 用植物茎（或其它器官）做徒手切片取一小段（长约2cm）的玉米或蚕豆幼茎，用左手的拇指、食指和中指夹住材料，材料要稍高于拇指0.5-1mm左右，右手执刀、刀要锋利，刀口向内，自左前向右后水平拉切。
刀片与材料垂直切时最好用臂力而不用腕力，用力要均匀，材料与刀成垂直，切片时只动右手，左手不动，更不要来回拉切。
不论切什么材料，在切前，刀片及材料要蘸水。
每切几片后，用毛笔蘸水将材料蘸到有水的培养皿中，然后选择最薄的进行染色装片。
将薄片放在载玻片上，滴上一滴1%番红液或碘液、龙胆紫，约1分钟，用吸水纸将番红液吸去，再滴二滴蒸馏水，稍微摇动，再用吸水纸吸去多余的水分，盖上盖玻片后，便可镜检。
植物根尖有丝分裂制片观察
植物根尖有丝分裂制片观察引言：细胞是生物体的基本结构和功能单位，植物细胞的有丝分裂是细胞生长和繁殖的重要过程之一、根尖是植物中细胞分裂活跃的部位之一，通过对植物根尖有丝分裂的制片观察，可以更好地理解细胞的分裂过程和细胞学结构。
材料与方法：1.采集植物根尖样品：选择一棵健康的植物，如小麦、大豆等，用剪刀或手轻轻剪下根部10-15毫米长的根尖。
2.处理样品：将采集的根尖样品放入含有0.01%的酶解液中，室温下酶解2-3小时。
然后用10%醋酸溶液进行固定，固定时间为12-24小时。
3.制片：将固定好的样品用刀片轻轻切片，厚度约为0.2-0.5毫米。
然后将切片放入盛有日本蘸水珍珠等染色剂的玻片盒中，封好，在60摄氏度下加热2-3分钟。
4.观察和记录：将制好的幻灯片放到显微镜下，使用40倍或更高倍镜头进行观察，观察到的细胞学结构和有丝分裂过程进行记录。
结果：在制好的幻灯片上观察，可以看到植物根尖细胞的有丝分裂过程。
根尖细胞在有丝分裂过程中呈现出不同的细胞学结构和特征。
有丝分裂的过程可以分为以下几个阶段：前期、纺锤体形成期、纺锤体分裂期、有丝分裂器官分离期和细胞融合期。
在前期阶段，可以看到细胞核变大，染色质逐渐变得更加明显，核仁逐渐消失，核膜开始消失。
在纺锤体形成期，可以观察到纺锤体的形成，纺锤体由纺锤丝、中心体和半球体组成。
纺锤丝从中心体延伸出来，并与染色体连接。
在纺锤体分裂期，染色体朝着纺锤丝的方向移动，形成两个大约相等的染色体组。
在有丝分裂器官分离期，可以观察到纺锤丝缩短，染色体在两边分离，并开始朝向细胞两个极向迁移。
在细胞融合期，可以观察到细胞分裂完成，形成两个新的细胞。
讨论：通过对植物根尖有丝分裂的制片观察，我们可以更好地了解细胞的分裂过程和细胞学结构。
有丝分裂是细胞繁殖的重要过程，对植物的生长和发育起着至关重要的作用。
在观察过程中，我们可以通过不同倍镜头的使用，更清晰地观察到细胞核和染色体的变化。
实验植物细胞切片的制作
3）下降至70%酒精（水）：分别经400 ml纯酒精、95%、85%、70%酒精割 400 ml（50%及30%酒精下降至蒸馏 水），并回收各液。 4）番红复染色：400 ml 1%番红酒精（水 液）再染色2h。回收染液， 并用自来水 洗去多余的染液。 5）继续脱水：用30%、50%和70%酒精 400 ml各处理30s～1 min，并回收各液。 6）固绿复染：用0.1%固绿的95%酒精 400 ml复染10～30s，回收染液。
二、实验用品和材料
1、显微镜、尖嘴镊子、刀片、载玻片、 盖玻片、吸水纸、解剖针、纱布、碘 液。 2、蚕豆（芹菜）茎和叶 3、洋葱或玉米根尖纵切永久制片 4、南瓜或向日葵茎横、纵切永久制片 .
三、内容与方法
（一）临时切片制作
１、徒手切片法（重点）
２、整体装片 适合于植物体形小而扁
平的材料。如菌丝、孢子束、藓类。
2、蜡块制取
1）逐级脱水
将上述经软化的材料转入 250ml已洗净的输液瓶中加入40ml，70%酒 精脱水24h。分别加入各级酒精40ml，70% 酒精脱水24h，85%酒精脱水12h，95%酒 精脱水2h，无水酒精脱水1h。同时回收各 级酒精。 番红酒精染液染色（1g番红溶于 100ml 50%酒精中，纱布过滤）染色24h。
;
2）放在载玻片上作临时水装片，然 后置于显微镜下观察；
3）如果结构能被清晰地显示出来，
石 蜡 切 片 机
（二）永久装片的制作
1、材料预处理
将材料装在25ml规格的小指管， 加入甘油—酒精软化剂（甘油1份， 70%酒精1份）8ml封盖后在电热恒 温水浴锅50℃18h，第二天升成的光滑的硬纸（10.0×1.0×1.0㎝）制成 的纸盒中制取蜡块，在恒温箱门的低坎处 摆好纸盒，并写上名称，使其一面紧贴恒 温箱的受热金属板，纸盒底面紧贴恒温箱 底面金属板，倒入溶化石蜡0.2～0.3㎝厚的 薄层，2min后待薄层稍有凝固时将材料依 次排列于其上，再倒入溶化石蜡，并用烧 热的解剖针刺破其中的气泡，提着纸盒两 端预留的盒耳将纸盒浸入盛有冷水的盆中 冷却制成石蜡块。
如何制作永久植物玻片标本
如何制作永久植物玻片标本石蜡切片（paraffin section）组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法。
石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。
教学中，光镜下观察切片标本多数是石蜡切片法制备的。
活的细胞或组织多为无色透明，各种组织间和细胞内各种结构之间均缺乏反差，在一般光镜下不易清楚区别出；组织离开机体后很快就会死亡和产生组织腐败，失去原有正常结构，因此，组织要经固定、石蜡包埋、切片及染色等步骤以免细胞组织死亡，而能清晰辨认其形态结构。
石蜡切片制作基本技术石蜡切片法包括取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与粘片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等步骤。
一般的组织从取材固定到封片制成玻片标本需要数日，但标本可以长期保存使用，为永久性显微玻片标本。
1.取材应根据要求选取材料来源及部位。
例如植物细胞有丝分裂多选取洋葱根尖，细胞分裂快又便于切取；猪的肝小叶边界清晰明确；耳蜗以豚鼠的内耳易于定位和剥离。
材料必须新鲜，搁置时间过久则产生蛋白质分解变性，导致细胞自溶及细菌的滋生，而不能反映组织活体时的形态结构。
2.固定用适当的化学药液——固定液浸渍切成小块的新鲜材料，迅速凝固或沉淀细胞和组织中的物质成分、终止细胞的一切代谢过程、防止细胞自溶或组织变化，尽可能保持其活体时的结构。
固定能使组织硬化，有利于切片的进行，而且也有媒浸作用，有利于组织着色。
固定液的种类很多，其对组织的硬化收缩程度以及组织内蛋白质、脂肪、糖类等物质的作用各不相同。
例如纯酒精可固定肝糖而能溶解脂肪，甲醛能固定一般组织，但溶解肝糖和色素。
固定液可分为单一固定液及混合固定液。
前者有甲醛（蚁醛、福尔马林）、酒精、醋酸或冰醋酸、升汞、锇酸（四氧化锇）、重铬酸钾及苦味酸等，单一固定液不能固定细胞中的所有成分；混合固定液可以互补不足，常用的混合固定液有Bouin氏液、Zenker氏液、FAA液、Carnoy氏液、SuSa液（配方见有关技术书籍）。
两种野生杜鹃属植物染色体制片方法比较及其核型分析的开题报告
两种野生杜鹃属植物染色体制片方法比较及其核型
分析的开题报告
本研究旨在比较两种野生杜鹃属植物染色体制片方法的优缺点，并
通过核型分析研究其染色体特征。
方法一为经典醋酸-乙醇法，方法二为改良琼脂糖法。
两种方法均采用杜鹃属植物中的野生种——丛枝杜鹃和薄叶杜鹃为研究对象。
对于醋
酸-乙醇法，首先进行开花期的花蕾采集，用0.05M KCl溶液浸泡固定，
然后经过醋酸-乙醇法进行制片。
对于改良琼脂糖法，同样采用开花期的
花蕾进行制片，但是先将花蕾在70%乙醇中固定，然后用甘露醇-琼脂糖固定，并在50℃温度下脱水制片。
通过显微镜观察两种制片方法制得的染色体，比较发现，醋酸-乙醇法制片的细胞核膜和染色体更为清晰，但容易出现染色体缩短和染色体
断裂现象，导致统计结果的误差增加。
而改良琼脂糖法采用的温度脱水
制片法能有效避免染色体缩短现象，并且制得的染色体结构清晰、完整。
接着对两种野生杜鹃属植物染色体核型进行了分析。
结果表明，丛
枝杜鹃为2n=26，薄叶杜鹃为2n=24。
丛枝杜鹃的染色体组成以中小型
染色体为主，呈筒状，且呈现多种染色体形态，而薄叶杜鹃的染色体组
成则以大型染色体为主，呈长纺锤状。
综上所述，改良琼脂糖法制片优于醋酸-乙醇法，能有效避免染色体缩短现象，制片效果更佳。
同时，两种野生杜鹃属植物在染色体核型分
析中表现出不同的染色体数目和形态，为进一步开展杜鹃属植物的遗传
与育种研究提供了基础数据。
五年级科学下册用显微镜观察的记录方法
五年级科学下册用显微镜观察的记录方法显微镜观察记录背景在五年级科学下册中，我们学习了关于显微镜的知识，学生们通过实验和观察，了解了显微镜的使用方法和原理，并通过观察不同的物品，对其微小结构有了更深刻的认识。
观察方法以下是我们用显微镜观察物品时所采用的不同方法：1.制片法观察叶片层析结构将叶片打碎成碎片后，取其中的薄片，放入显微镜下，用转盘将表面清晰的部分选中，再将图形转到目镜下，进行观察。
观察时要将目镜升高，使目镜焦距逐渐减小，当图像清晰时，读出放物镜的倍数和目镜升高的高度差值，即可计算出该薄片的厚度。
2.用载玻片观察细胞用无菌针从叶片中刮取细胞，挤压出液体后取出一滴，滴在载玻片上。
然后将另一张载玻片紧贴在上面，轻轻移动载玻片，将细胞液涂开成薄膜，并使其平均分布，待其干燥后，用显微镜观察。
观察时，将载玻片放在载玻片夹片下，用转盘将表面清晰的部分选中，再将图形转到目镜下，进行观察。
观察时要将目镜升高，使目镜焦距逐渐减小，当图像清晰时，读出放物镜的倍数和目镜升高的高度差值，即可计算出该薄片的厚度。
3.直接观察草叶切片细胞取少数草叶，用刀片切下一片薄厚均匀的切片，在微波加热处理后再进行显微镜观察。
观察时，将载玻片放在载玻片夹片下，用转盘将表面清晰的部分选中，再将图形转到目镜下，进行观察。
观察时要将目镜升高，使目镜焦距逐渐减小，当图像清晰时，读出放物镜的倍数和目镜升高的高度差值，即可计算出该薄片的厚度。
观察结果通过以上不同方法观察，我们可以看到不同的物品微小结构，具体结果如下：1.制片法观察叶片层析结构我们观察了银杏、槭树、菠萝蜜等植物的叶片层析结构，发现不同植物的叶片组织结构有所不同。
2.用载玻片观察细胞我们观察了叶绿体、细胞膜、细胞核等细胞组成部分，对其形态学结构有了更深入的了解。
3.直接观察草叶切片细胞我们观察了草叶细胞中的细胞壁、叶绿体、细胞核等组成部分，对草叶的结构特点有了更加深入的了解。
结论通过用显微镜观察不同物品，我们对其微小结构有了更深入的了解，对科学知识的掌握也更加牢固。
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植物制片法
一、徒手切片法及临时装片的制作
徒手切片法不需要任何机械设备，只需要一把锋利的刀片，不但方法简单，而且也容易保持植物细胞的生活状态，所以有很大的实用价值。
1. 一般材料的切片方法和步骤
进行切片前，准备一个盛有清水的培养皿，准备好毛笔、刀片等用具。
将要切的材料切成2-—3cm长的小段。
截取材料，削平切面，均应用解剖刀或用过的刀片。
而在作徒手切片时，再用锋利的新刀片，以保证切出合乎要求的切片。
作徒手切片时，最重要的是要切下一小片薄的组织。
例如切某植物茎的横切片时，不要求切下完整的一片，而只需切一小部分能够观察它的组织就行了，有时切的一边厚一边薄，取薄的一侧制成临时装片也有利于观察。
用左手大拇指、食指和中指捏住材料，拇指略低于中指，使材料突出于手指之上，这样以免损伤手指。
右手平稳地拿住刀片，将刀片平放在左手的食指之上，刀刃向内，且与材料断面平行，然后以均匀的力量，从左前方向右后方拉，材料要一次切下，切忌切片中途停顿或前后作“拉锯”式切割。
切片时要用臂力而不要用腕力，而且不要用力过大，也不能用刀片直接挤压材料，或从左右两方向来回切割材料，这样都不能切出合格切片。
切片时为了避免材料枯干，应使材料的切面及刀刃上保持有水，呈湿
润状态。
薄的切片应该是透明的，切片可留在刀刃上继续切，一连切几个切片，然后用蘸水的毛笔把切片取下，放入盛有水的培养皿中，或直接选薄的放在滴有水滴的载玻片上，制成临时装片进行观察。
2. 柔软和坚硬材料的切片法
过于柔软的器官，例如幼嫩的叶子，难于直接拿在手中进行切片。
切时需放在夹持物中，以便于把握操作。
夹持物一般用胡萝卜根、土豆块茎等，将要切的材料夹于其中，然后进行切片。
对于较坚硬的材料，需要经过软化处理才能进行切片。
其软化方法通常是将要切的材料先切成小块，然后在开水中煮沸3—4小时，再浸入软化剂（50％酒精：甘油=1﹕1）中，一昼夜后或更长些时间后再切。
对于已经干燥或富含矿物质而更硬的材料，可先于15％氢氟酸的水溶液中浸渍数周后，使之充分浸透，再置入甘油中软化后方可进行切片。
3. 临时装片的制作
（1）擦净载玻片和盖玻片
擦载玻片：用左手的拇指和食指捏住载玻片的边缘，右手用纱布将载玻片上下两面包住，然后反复擦拭，擦好放在干净处备用。
擦盖玻片：先用左手拇指和食指轻轻捏住盖玻片的一角，再用右手拇指和食指用纱布把盖玻片包住，然后从上下两面隔着纱布慢慢地进行擦拭。
注意用力一定要小而均匀，以免擦碎盖玻片。
（2）用滴头滴一滴蒸馏水于载玻片的中央，再用镊子或毛笔取一薄而透明的材料切片，置于载玻片的水滴中。
（3）盖盖玻片：右手持镊子，轻轻夹住盖玻片的一角，使盖玻片的边缘与材料在左边水滴的边缘接触，然后慢慢倾斜下落，最后平放于载玻片上。
这样可使盖玻片下的空气逐渐被水挤掉，以免产生气泡。
如盖玻片下水过多，可用吸水纸将多余的水吸掉，这样制好的临时装片就可在显微镜下进行观察了。
二、行（走）切片法或滑行切片法
这种方法是用滑行切片机进行切片,切片性质和徒手切片法相同，只不过是用机械操作而已。
由于机械的帮助，它能按需要调节切片的厚度，切出的切片厚薄均匀，比较完整。
适用于切制较坚硬的材料。
三、石蜡切片法
创建于18世纪，是显微技术上最重要最常用的一种方法，优点是应用范围广，几乎适用于所有的植物材料；能切成极薄而连续的切片，较清楚地显现细胞、组织的细微结构；制片可长期保存，便于以后观察比较。
过程可概括为：取材→固定→洗涤→脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→粘片→染色→封藏。
四、整体封固法
适用于微小的或扁平的材料，例如丝状或叶状的藻类、菌类、蕨类的原叶体、孢子囊、纤小的苔藓植物，被子植物的表皮、花粉粒、幼胚等幼小的器官。
这种方法不需经过切片，就可以显示植物或植物器官的整体。
五、组织离析法
它的原理是用一些化学药品配成离析液，使组织细胞的胞间层溶解，
细胞彼此分离，获得分散的、单个的完整细胞，以便观察不同组织的细胞形态和特征。
六、压片法
是将植物的幼嫩器官如根尖、茎尖和幼叶等经过处理后，被涂抹或压在载玻片上，使组织成一薄层然后进行观察的制片方法。
染色后可作临时的观察标本，也可以经过脱水、透明等手续制成永久的玻片标本。
近年来在植物细胞遗传学等方面的研究中应用极为普遍，特别在染色体数目的检查方面，此法尤为重要。