植物制片法

植物制片法

一、徒手切片法及临时装片的制作

徒手切片法不需要任何机械设备，只需要一把锋利的刀片，不但方法简单，而且也容易保持植物细胞的生活状态，所以有很大的实用价值。

1. 一般材料的切片方法和步骤

进行切片前，准备一个盛有清水的培养皿，准备好毛笔、刀片等用具。将要切的材料切成2-—3cm长的小段。截取材料，削平切面，均应用解剖刀或用过的刀片。而在作徒手切片时，再用锋利的新刀片，以保证切出合乎要求的切片。作徒手切片时，最重要的是要切下一小片薄的组织。例如切某植物茎的横切片时，不要求切下完整的一片，而只需切一小部分能够观察它的组织就行了，有时切的一边厚一边薄，取薄的一侧制成临时装片也有利于观察。

用左手大拇指、食指和中指捏住材料，拇指略低于中指，使材料突出于手指之上，这样以免损伤手指。右手平稳地拿住刀片，将刀片平放在左手的食指之上，刀刃向内，且与材料断面平行，然后以均匀的力量，从左前方向右后方拉，材料要一次切下，切忌切片中途停顿或前后作“拉锯”式切割。切片时要用臂力而不要用腕力，而且不要用力过大，也不能用刀片直接挤压材料，或从左右两方向来回切割材料，这样都不能切出合格切片。

切片时为了避免材料枯干，应使材料的切面及刀刃上保持有水，呈湿

润状态。薄的切片应该是透明的，切片可留在刀刃上继续切，一连切几个切片，然后用蘸水的毛笔把切片取下，放入盛有水的培养皿中，或直接选薄的放在滴有水滴的载玻片上，制成临时装片进行观察。

2. 柔软和坚硬材料的切片法

过于柔软的器官，例如幼嫩的叶子，难于直接拿在手中进行切片。切时需放在夹持物中，以便于把握操作。夹持物一般用胡萝卜根、土豆块茎等，将要切的材料夹于其中，然后进行切片。

对于较坚硬的材料，需要经过软化处理才能进行切片。其软化方法通常是将要切的材料先切成小块，然后在开水中煮沸3—4小时，再浸入软化剂（50％酒精：甘油=1﹕1）中，一昼夜后或更长些时间后再切。

对于已经干燥或富含矿物质而更硬的材料，可先于15％氢氟酸的水溶液中浸渍数周后，使之充分浸透，再置入甘油中软化后方可进行切片。

3. 临时装片的制作

（1）擦净载玻片和盖玻片

擦载玻片：用左手的拇指和食指捏住载玻片的边缘，右手用纱布将载玻片上下两面包住，然后反复擦拭，擦好放在干净处备用。

擦盖玻片：先用左手拇指和食指轻轻捏住盖玻片的一角，再用右手拇指和食指用纱布把盖玻片包住，然后从上下两面隔着纱布慢慢地进行擦拭。注意用力一定要小而均匀，以免擦碎盖玻片。

（2）用滴头滴一滴蒸馏水于载玻片的中央，再用镊子或毛笔取一薄而透明的材料切片，置于载玻片的水滴中。

（3）盖盖玻片：右手持镊子，轻轻夹住盖玻片的一角，使盖玻片的边缘与材料在左边水滴的边缘接触，然后慢慢倾斜下落，最后平放于载玻片上。

这样可使盖玻片下的空气逐渐被水挤掉，以免产生气泡。如盖玻片下水过多，可用吸水纸将多余的水吸掉，这样制好的临时装片就可在显微镜下进行观察了。

二、行（走）切片法或滑行切片法

这种方法是用滑行切片机进行切片,切片性质和徒手切片法相同，只不过是用机械操作而已。由于机械的帮助，它能按需要调节切片的厚度，切出的切片厚薄均匀，比较完整。适用于切制较坚硬的材料。

三、石蜡切片法

创建于18世纪，是显微技术上最重要最常用的一种方法，优点是应用范围广，几乎适用于所有的植物材料；能切成极薄而连续的切片，较清楚地显现细胞、组织的细微结构；制片可长期保存，便于以后观察比较。过程可概括为：取材→固定→洗涤→脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→粘片→染色→封藏。

四、整体封固法

适用于微小的或扁平的材料，例如丝状或叶状的藻类、菌类、蕨类的原叶体、孢子囊、纤小的苔藓植物，被子植物的表皮、花粉粒、幼胚等幼小的器官。这种方法不需经过切片，就可以显示植物或植物器官的整体。

五、组织离析法

它的原理是用一些化学药品配成离析液，使组织细胞的胞间层溶解，

细胞彼此分离，获得分散的、单个的完整细胞，以便观察不同组织的细胞形态和特征。

六、压片法

是将植物的幼嫩器官如根尖、茎尖和幼叶等经过处理后，被涂抹或压在载玻片上，使组织成一薄层然后进行观察的制片方法。染色后可作临时的观察标本，也可以经过脱水、透明等手续制成永久的玻片标本。近年来在植物细胞遗传学等方面的研究中应用极为普遍，特别在染色体数目的检查方面，此法尤为重要。