实验一 植物制片技术
植物制片技术教学大纲
3.染色的方法
第三节封片（掌握）
1.封片法
本章重点、难点：
染色
本章教学要求：
掌握染色与封片
第六章显微摄影与图像分析
第一节切片材料的显微观察和注意事项（掌握）
第二节切片材料的测量方法（掌握）
第三节显微摄影时的注意事项（了解）
第一节图象的输出（掌握）
本章重点、难点：
材料的显微观察、测量
第三节透明（掌握）
1.透明的目的
2.透明剂及其透明法
第四节药品的回收与再用（了解）
1.包埋剂与包埋用具（了解）
2.石蜡渗透
第六节石蜡包埋（掌握）
1.包埋的操作过程
2.包埋中出现的问题及其解决办法
本章重点、难点：
石蜡包埋
本章教学要求：
掌握冲洗、脱水、透明与浸蜡、石蜡包埋方法
第四章切片、贴片与烘片
第一节切片（掌握）
三、学时分配
教学课时分配
章节
绪论
第一章
第二章
第三章
第四章
第五章
第六章章节内容
植物制片的基本原理与过程
手工制片、整体封片
材料的采集与分割取材、固定及试剂的配制
冲洗、脱水、透明与浸蜡
切片、贴片与烘片
染色与封片
显微摄影与图像分析
合计讲课111111
6实验0实践合计
四、教学内容及教学要求
绪论植物制片的基本原理植物制片的基本过程
第一章手工制片、整体封片
第一节手工制片的基本原理和过程（掌握）
第二节整体封片的基本原理和过程（掌握）
本章重点、难点：
手工制片、整体封片过程
本章教学要求：
掌握手工制片、整体封片方法
实验一有丝分裂制片技术和显微观察
实验一有丝分裂制片技术和显微观察一、实验目的通过对植物组织的取材、预处理、解离、染色、压片等制片步骤的学习，掌握植物制片技术，奠定细胞遗传学的研究技术；通过对植物根尖细胞的观察，掌握有丝分裂过程中染色体的形态特征和动态变化。
二、实验原理有丝分裂是植物细胞分裂的主要方式，细胞分裂过程中，核内染色体准确地复制，并有规律地、均匀地分配到两个子细胞中去，使子细胞和母细胞的遗传组成一样，保证了植物细胞的遗传性状的一致。
各种生长旺盛的植物组织中，如根尖组织、茎尖组织、居间分生组织、愈伤组织等，常进行着剧烈的细胞有丝分裂。
在细胞分裂的适当（分裂旺盛期）时候取材，进行预处理，固定、解离、染色和涂抹压片等方法，使细胞、染色体分散，便于在显微镜下观察染色体的形态特征和变化特点及进行染色体计数。
三、实验材料蚕豆（Vicia faba, 2n=12）干种子洋葱（Allium cepa, 2n=16）鳞茎四、实验仪器及用具多媒体显微演示系统、显微镜、培养箱、分析天平、水浴锅、酒精灯、剪刀（或刀片）、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、滤纸、铅笔、标签纸、胶水、棕色瓶等。
五、药品和试剂秋水仙碱、8－羟基喹啉、苏木精、水合三氯乙醛、铁矾［铁钾矾KFe(SO4)2•12H2O或铁铵矾NH4Fe(SO4)2·12H2O］、无水酒精、冰醋酸、1N盐酸、50％丙酸六、实验步骤（一）材料准备：1.蚕豆根尖：选取新鲜无病斑的蚕豆干种子，经日晒后，放在烧杯内，室温下清水浸泡一昼夜。
种子吸水膨胀后，放在搪瓷盘上20℃左右保湿培养（双层纱布覆盖），待根长1~2cm 时，于上午9:00~10:30或下午14:00~16:00进剪下根尖备用。
2.洋葱根尖：通过休眠的洋葱鳞茎，经日晒后，置于盛有清水的小烧杯上，根部与水接触，20~25℃光照条件下培养2~3天，待根长1~2cm时，于上午9:00~11:00剪下根尖备用。
（二）预处理为了获得较多中期分裂相的细胞，同时使染色体缩短和分散，可对根尖进行预处理，处理方法如下：1.0.05％~0.2％的秋水仙碱水溶液处理2~4小时。
实验一植物切片制作
3．选片
挑选出薄而完整的切片（薄的切片一般沉在水底）， 制作临时水装片，置于显微镜下观察。
4．切片的方向
2）径向切面：是通过中心 而切的纵切面
1）横切面：是垂直于茎或 根的长轴而切的切面
3）切向切面：是垂直于半径而 切的纵切面
香樟幼茎横切面
（二）生物绘图法
1．仔细观察； 2．正确构图； 3．用HB铅笔正确勾画轮廓图，然后用2H铅笔正确描
画；
4．线条要均匀平滑；用圆点衬阴表示明暗和颜色的 深浅；点要圆而整齐，大小均匀，根据需要灵活掌 握疏密变化；
5．细胞图和轮廓图； 6．最后将画好的图与实物对照，检查确认无遗漏或
错误后，注明各部分的名称和图题。（用平行线引 出，最好在图右侧排列整齐）
细胞壁
细胞核 液泡
洋葱鳞叶表皮内细胞示意图（10×40）
四、实验内容与方法
（一）徒手切片法
徒手切片是植物形态解剖学实验中最简便的 一种切片方法。其优点是工具简单，方法简单易 学，即切即可观察；可看到自然状态下的形态与 颜色。
徒手切片姿势
徒手切片的过程
切片时，如切草本植物的幼茎，先将材料切成长约3cm 小段。用左手三个指头夹住材料，并使其高于其手指之上， 拿正。右手持刀片，平放在左手的食指之上，刀口向内，且 与材料断面平行，然后右手用臂力(不要用腕力)，自左前方 向右后方拉刀滑行切片，即切又拉，充分利用刀锋，把材料 切成正而平的薄片。
维
髓射线
管 柱
髓
表皮
皮层 维管 束
髓
髓射线
表皮
厚角组织 初生韧皮部 初生木质部 髓
髓射线
束中形成层
维管束：初生木质部和初生韧皮部共同组成的束 状结构。
维管束类型：
实验一 植物学实验的基本研究方法
实验一植物学实验的基本研究方法一、目的要求通过本实验教学，要求学生掌握植物学研究的基本方法、养成良好的实验习惯、打下良好的实验基础；了解光学显微镜的基本结构和工作原理，并掌握其使用方法；了解常用的植物制片技术；掌握生物绘图的基本方法。
二、材料用品洋葱表皮细胞装片、洋葱鳞叶。
生物显微镜。
培养皿、载玻片、盖玻片、滴瓶、滴管、搪瓷方盘、吸水纸、擦镜纸、镊子、解剖针、刀片、蒸馏水等。
三、实验内容和方法（一）显微镜的基本结构显微镜的类型很多，有的较简单，但其基本部分大至相同。
一般光学显微镜可分为光学系统部分和机械装置部分。
光学部分的使用在于保证成像，而机械部分则是用于装置光学部分的。
1、显微镜的机械装置镜座：这是显微镜的基础部分，呈马蹄形、方形、圆形等，本实验室所用的显微镜的镜座为方形，它是用来支持整个镜体的。
镜柄（镜臂、执手）：镜柄靠倾斜关节（或螺丝，本室所用显微镜无倾斜关节）与镜座上的一短柱（镜柱）相连，弯曲呈弓臂形，但也有靠镜筒变换位置（即无倾斜关节时）的。
取用显微镜时，手就执着这部分。
镜筒：有的将它归入光学部分，镜筒为镜臂上方的圆筒部分，在它顶端的孔中放入接目镜，下端装有转换器与接物镜。
国产显微镜的镜筒通常是160毫米。
调节器（配焦器、调节螺旋）：在镜臂上端，镜筒的两侧，盘状而可以旋转的部分，叫做调节器或调节螺旋，将调节器前后旋转，可使镜筒升降，用以调焦距，使物像清晰。
调节器分大、小两种，大的叫粗调节螺旋，每旋转一周可使镜筒上升或下降10毫米，由于它的移动范围大，所以，可将物像迅速观察到，但调节焦距粗放，物像欠清晰；小的叫细调节螺旋，每旋转一周，可使镜筒上升或下降0.1毫米，用细调节器可看到完全清晰的物像。
载物台（镜台）：载物台位于镜座的上方，为方形或圆形的平台，为安置镜检的玻片标本之用，台中央有一圆孔，以通光线，故称为通光孔。
在通光孔的后方，有一以对压片夹，用来固定玻片标本，好的显微镜，载物台上配有载片移动架，可使玻片标本前后左右移动。
实验一 组织制片技术(一)
实验一组织制片技术（一）【实验原理】显微鉴定法就是利用显微镜、显微技术及显微化学方法等对中药进行分析鉴定的方法。
可以确定中药的真伪、纯度、品质以及建立鉴别标准。
目前多数用于品种鉴定，部分用于定量分析。
在鉴定过程中，以采用显微镜观察动、植物的组织构造、细胞形状、内含物的特征以及矿物的光学特性等为主要内容。
按照鉴定的方法可分为组织鉴定、粉末鉴定、显微常数测定和显微定量等。
组织鉴定是粉末鉴定的基础，以粉末鉴定应用最为广泛。
显微鉴定是一项专门技术，需要有植物(动物)解剖学、矿物学的晶体光学、植物显微化学等基本知识，并掌握显微制片、显微观察和描述、显微摄影和绘图、显微测量等基本技术。
显微鉴定的主要仪器有各类光学显微镜和电子显微镜等，通常使用光学显微镜。
【目的要求】1.掌握显微制片方法2.掌握显微测量的方法和放大倍数的使用3.掌握显微特征的观察与描述方法和显微绘图技术4.熟悉掌握显微测定尺的使用方法5.了解显微摄影技术与方法【仪器、试剂、材料】1.仪器生物显微镜，目镜测微尺，镜台测微尺，显微描绘器，镊子，解剖针，载玻片，盖玻片，酒精灯，单面刀片，粉碎机，绘图板，铅笔等。
2.试剂水合氯醛试剂，苏丹Ⅲ试液，稀甘油试剂，盐酸，硝酸，碘化铋钾试剂，氯化锌碘试液，硫酸，α-萘酚浓硫酸试液，碘试液，间苯三酚试液，钌红试液，硝酸汞试液，乙醚，石油醚，90%乙醇，70%乙醇，α-萘酚乙醇溶液，稀盐酸，稀醋酸等。
3.药材样品：牛膝、薄荷4.药材粉末：大黄、肉桂、山药【实验内容】一、显微鉴定1.组织鉴定组织鉴定是通过观察中药的组织构造特征来达到鉴定目的，主要用于个体较小的完整药材鉴别。
通常用以鉴别药材性状特征不明显或外形相似而组织构造不同的类似品、混淆品、代用品、伪品，或用于多来源药材的对比鉴别，也可用于确定某种化学成分的存在部位，以考查质量。
一般地说，组织鉴定对不同科属来源的药材鉴别比较容易，对于相同科属来源的药材鉴别比较困难。
植物制片的染色及显微化学鉴定方法
植物制片的染色及显微化学鉴定方法一、目的与要求1、学习植物制片的一般染色方法。
2、学会并掌握常用显微化学鉴定法，即细胞壁化学组成及细胞内主要后含物性质的鉴定方法。
二、材料和用品1、自备材料：植物叶片、芹菜叶柄、土豆块茎、花生种子等等，解剖器、剃刀或双面刀片。
2、其它材料和用品：显微镜、载玻片、盖玻片、纱布、吸水纸、蒸馏水、染色缸；0.1%番红、0.1% 固绿或1%苯胺蓝等染液、中性树胶、二甲苯、酒精、碘—氯化锌、盐酸—间苯三酚、苏丹Ⅲ、碘—碘化钾、10%氯化铁、盐酸等。
三、实验内容1、植物制片的染色方法2、常用显微化学鉴定法四、实验方法1、植物制片的染色方法用徒手切片法切得的薄片，如果仅仅是为了临时观察，制成临时装片即可，这种临时制片不能长久保存，只能作临时观察之用，又由于没经过染色，结构显示的也不够清晰。
为了求得更清晰地显示其细微结构及化学成分，并能够较长时间的保存，可以进一步染色及其它处理以至封片，从而可制成半永久或永久制片。
常用的染色方法是番红—苯胺蓝（或固绿）二重染色法，具体操作方法有二：方法一：（1）将植物切片材料放入30%酒精中，5分钟后移入水中。
（2）用0.1%番红水溶液染色12—24小时。
（3）倒去番红液，用清水冲洗数次后，再放回50%酒精中浸泡5分钟。
（4）将材料从50%酒精中转入70%酒精中脱色，直至硬木质化的细胞壁呈现红色，其它部分呈粉红色或近于无色时为止。
（5） 1%苯胺蓝（用70%酒精配制）对染2—5分钟。
若用0.1%固绿对染，则仅需半分钟左右即可。
注意：此步染色，要不时地在显微镜下检视，切忌染色过深，当木质化细胞壁呈红色，其它部分为淡蓝或淡绿色时，即可停止。
（6）用95%酒精冲去多余染液，再经无水酒精脱水5分钟。
（7）放入等量无水酒精与二甲苯溶液中及纯二甲苯中透明各3分钟。
（8）将切片材料移入载玻片上，在二甲苯未干时立即加一滴中性树胶封片，尔后将玻片平放，自然凉干或置于摄氏35度温箱中烘干。
植物制片技术
五、浸透和包埋
包埋：以特定的器皿将材料及石蜡 制成适宜切片的形态。 石蜡性质与切片的成败密切相关。
五、浸透和包埋
包埋剂特点： 石蜡有熔点为52、54、56、58度四种 不同的石蜡。 石蜡熔点不同，性质不同。低熔点的 石蜡质地均一，而56-58度的石蜡质地 较为疏松，有小的空隙，易使蜡带不 成带。
第二章 植物制片技术原理步骤
第一节 选材
第二节 杀死、固定与保存
第三节 清洗与脱水 第四节 透明与过渡
第五节 渗蜡与包埋
第六节 切片
第七节 粘片与展片
第八节 染色
第九节 封片
五、浸透和包埋
渗透：经过脱水、透明之后，将 包埋介质逐步浸入材料，使之渗入细 胞各部，并与细胞壁紧密结合，这个 过程为渗透。
2、甲醛：分子式为HCOH，是气体。作 为固定剂时，为溶于水的溶液（38%） 来使用。有良好的硬化作用，也有收缩 固定过度，渗透慢的缺点。
二、杀死、固定、保存
• 常用固定剂
3具、有冰强醋烈酸刺：激分性子气式味为的C无H3色C液OO体H。，是 特点是渗透力强，可防腐，保存蛋白 质和染色体，但溶解脂肪，有膨胀作 用。
三、清洗与脱水
常用的脱水剂 4）丙酮：分子式CO(CH3)2，为无
色透明液体。 脱水快于酒精，仍须经过透明。
三、清洗与脱水
常用的脱水剂 5）甘油：分子式C3H5(OH)3，无色
透明粘稠液体。 避免原生质的收缩，适用于细小 柔软材料。
第二章 植物制片技术原理步骤
第一节 选材
第二节 杀死、固定与保存
二、杀死、固定、保存
✤固定象 碱性固定象：碱性固定剂可保存 核质和线粒体，细胞质呈透明质 状态，液泡也可保存下来。细胞 分裂间期的染色质、核仁、纺缍 丝被溶解。
植物常规染色体制片-取材
实验一植物常规染色体制片Ｉ
-取材和预处理
（综合性实验）
遵义师范学院生命科学学院韦若勋
一、实验目的
1、掌握植物根尖染色体制片过程中预处理的方法；
2、掌握植物根尖染色体制片过程中取材的方法；
3、熟悉预处理药剂的配制。
二、实验原理
②促1、预处理原理植物根茎尖分生组织进染色中分裂细胞能达到3个效果。
体缩①③短妨降
三实验器具及试剂
三实验器具及试剂
2、实验试剂及配制
2实验试剂及配制
（1）0.002mol/L 8-羟基喹啉（分子量0002l/L8
145.17）
8-羟基喹啉0.29g，少许乙醇溶解，鲜蒸馏水定溶1000ml。
四、实验材料
1、蚕豆、绿豆、洋葱和大蒜的根尖
蚕豆：2n = 12
绿豆：2n = 22
洋葱、大蒜：2n = 16
洋葱大蒜216
25℃，浸种4-5h；发芽16-24h；
25℃浸种45h；发芽1624h；
五、实验方法与步骤
2
8mm
3
2mm
1
色较深
六、实验作业
实验报告。
药用植物学实验一
实验一植物细胞、组织的观察及植物装片的制作方法一、实验目的1．学习植物细胞观察方法，掌握植物细胞根本构造，了解质体类型及特点。
2．掌握细胞后含物、细胞壁特化的主要类型及鉴别。
3．掌握各种成熟组织的形态特征及其在植物体的分布部位。
4．熟练植物制片技术操作与生物绘图方法。
二、实验器具与试剂光学显微镜、载玻片、盖玻片、尖头镊子、解剖针、刀片、剪刀、吸水纸、擦镜纸、纱布块、吸水纸、蒸馏水、稀碘液、苏丹Ⅲ试液、水合氯醛、稀甘油、20%蔗糖液、间苯三酚试液、浓盐酸、黑墨水。
三、实验材料洋葱鳞叶表皮细胞制片、新鲜洋葱、新鲜女贞叶、新鲜绿辣椒、新鲜红辣椒、番茄、萝卜、马铃薯块茎、姜块茎、无花果或秋海棠叶柄、夹桃叶、花生或蓖麻种子、半夏粉末、大黄粉末、黄柏粉末。
柿子胚乳细胞切片；南瓜茎横切永久制片、南瓜茎纵切永久制片、松茎横切永久制片；洋葱根尖纵切制片、玉米根尖纵切制片、玉米或洋葱根尖横切永久制片、黑藻顶芽纵切永久制片。
菠菜叶、油菜叶、油麦菜叶、小白菜叶或板蓝根叶、冬青叶、决明叶、薄荷叶、桑叶、桑枝、姜、橘子、半夏粉末。
芹菜、梨、豆芽、肉桂粉末、人参粉末、甘草粉末。
四、实验内容＜植物的细胞＞：〔一〕植物细胞的根本构造1．植物细胞根本构造①取洋葱鳞叶表皮细胞永久制片或用新鲜洋葱材料撕取表皮制临时装片观察，可见表皮为一层细胞，其细胞多为近长方形，选择形状较规那么、构造清晰的细胞移至高倍镜下观察，可分辨细胞壁、细胞质、细胞核构造。
由于大液泡的形成，细胞核位于一侧，高倍镜下还可看见核仁。
通过调节细调焦轮可使细胞的不同层次依次成像，加深对细胞立体构造的理解。
②加水合氯醛，加热透化，再加稀甘油。
镜下观察细胞变化。
细胞壁较透明，细胞质无色均匀，细胞核扁球形，仔细观察可见其内1—3个发亮的核仁。
③从一侧滴加稀碘液，细胞质被染成浅黄色，细胞核被染成深黄色。
④取20%蔗糖液，制作表皮细胞装片，放置20分钟后观察质壁别离现象。
2．质体观察〔1〕叶绿体：取新鲜女贞叶，拨取叶肉组织制成临时装片观察，其细胞为狭长形，内含多数椭圆形绿色颗粒，即为叶绿体。
植物病理学实验实验一植物病害症状的观察和真菌显微玻片制作
植物病理学实验实验一植物病害症状的观察和真菌显微玻片制作一、实验目的1.了解植物病害的基本症状和诊断方法。
2.掌握制作真菌显微玻片的基本操作。
二、实验原理植物病害的症状是植物在遭受病原体侵害后产生的外部表现，包括叶子脱水、变色、轻度褐斑，严重腐烂、变形等。
通过观察病害症状可以初步判断病害的类型，并寻找病原菌种进行后续的研究。
真菌显微玻片制作是将病原菌种通过特定的方法制作成透明玻片，方便研究人员观察真菌内部结构的工具。
三、实验步骤1.组织采集：选择患有病害的植物叶片、茎、根等组织，用刀子或剪刀切取一小块样品。
2.病症观察：在实验室条件下，用裸眼观察样品表面的病症症状，记录下来。
如有可能，可以使用显微镜观察细节。
3.细菌分离：将样品表面的病菌用无菌的刮匙、刮片取下，涂抹在无菌培养基上，进行菌落的分离。
4.培养：将划取的菌落转接到含有适宜营养成分的培养基上，放入培养箱中，在适宜温度下培养一段时间，培养出单一的菌落。
5.培养制片：从培养基上取得单一的菌落，用无菌的铲子将菌落刮下，放在无菌载玻片上。
加入一滴甘油或蒙脱石悬浮液，加盖玻片备用。
6.烘干：将制作好的载玻片放置在通风干燥的环境中，待载玻片上的液体完全蒸发后，取出备用。
7.真菌显微观察：将制作好的载玻片放置在显微镜盖玻片上，用显微镜观察菌落形态、菌丝、孢子等结构特征。
四、实验注意事项1.实验室操作时要注意无菌技术，避免外界微生物的污染。
2.选择病害植物和病菌样品时要小心操作，避免对自己和他人造成伤害。
3.培养和显微观察时要使用无菌工具，避免细菌的二次污染。
4.在制作玻片过程中，要避免菌落太密集，影响观察；也要避免菌落过于稀疏，难以观察到结构特征。
5.显微镜使用时要注意对焦，根据需要调整放大倍数。
五、实验结果及讨论经过观察，可以发现不同病害引起的植物症状也不同。
例如黑斑病引起的植物叶片会出现黑色斑点，而根腐病引起的植物根部会发生腐烂。
这些特征可以初步判断病害的类型，并为后续的分析提供依据。
实验一.植物根尖有丝分裂制片和观察
核膜破裂，核仁消失，染色体排列在赤道板 上，此时最有利于对染色体进行观察和计数。
实验图例
4 后期图例
纺锤丝变短，每两个并列的染色单体分开， 分别移向两极
实验图例
5 末期图例
两个染色单体在两极重新组成核，此时核膜核 仁重新组成，染色体解旋，两个子核形成后细胞 质开始分裂，两个子核间残留的纺锤丝形成细胞 板，细胞膜，最后形成将母细胞分成两个子细胞， 此时细胞分裂结束。
4 倍体的准备（2n=4X） 水浸发根(根长0.2—0. 5 cm)
0.1-- 0.2 %秋水仙素溶液浸根2—4d, 且根长为1.0—1.5cm
பைடு நூலகம்
秋水仙素加倍处理
预处理
固定(卡诺氏液2—24h）
实验方法
2 制片
（1）解离：取根尖置于青霉素小瓶水洗后， 加入 1mol/l的盐酸，于65ºC恒温箱中10min； （2）制片：在载玻片上切取根尖生长点，加一滴改 良苯酚品红染液，用镊子敲碎，染色10 min； （3）压片：吸水纸包住盖玻片和载玻片，用镊柄敲片； （4）镜检：先在低倍镜下找到各时期的细胞，再转换到 高倍镜下仔细观察。
实验图例
1 间期图例
两次细胞分裂之间的时期,DNA复制分为三个时期： 复制前期（G1期）、复制期（S期）、复制后期 （G2期），该时期一般看不到细胞核中的染色体。
实验图例
2 前期图例
染色体开始螺旋化，每个染色体由两个相 同的染色单体组成，两者紧密相连（光镜下 很难区别），细胞核呈线团状。
实验图例
实验图例
6 多倍体图例
细胞内有三套或三套以上染色体
实验作业
1、制片并观察洋葱根尖细胞有丝分裂前、中、 后与末期的图象； 2、画出洋葱根尖细胞有丝分裂前、中、后与末 期的染色体的形态图象； 3、简要描述有丝分裂前、中、后与末期的染色 体的变化特征。
科学实验报告植物标本制作(含标本画)
铺吸水纸数张在标本夹上，将夹着植物标本的对折吸水纸放在上面，压制前，把对折吸水纸打开，检查与矫正花、叶的位置，把少数叶片和花翻过来，以便对他们作全面观察。摆正后，将吸水纸对折折合起来，上面再铺几层吸水纸，就可再放另一份植物了。这样一层层加上去，放齐。最后，将标本夹用粗绳捆紧，压上几十公斤重的大石块，置通风处。次日换干纸时，须再仔细加工整理标本。压制的第一天，每隔五小时换干纸，次日可每天换干纸两次，再过二天，24 小时换一次，一般植物标本需要 3-7 天。也可在第三天换纸后，增加压力。置直射日光下，使水分迅速蒸发，可防止过度变色或发霉。多雨地区，每日换干纸两次，可置于微火上烘烤，大约 3-4 日可制干。标本的干燥程度怎样才是适度呢？可用手把标本拿起来，没有干透的标本，个别部分柔软易弯曲；过于干燥的标本，很脆硬易折断。干燥得适度的标本是有弹性的。
3固定标本：根据植物的特点，选择合适的背景，包括背景使植物标本处于最佳位置处固定。
4装裱标本：将植物标本装框或直接速封。
五、实验现象、结果、作品图
六、拓展与反思
考核内容
评分
准备情况
实验状况
实验报告/成果
总 分
教师（签名）
实验序号：实验一实验名称：植物标本制作（含标本画）
一、实验内容和要求
制作植物标本
二、主要仪器工具、材料
采集箱(或塑料袋)，标本夹，枝剪，掘根铲，绳子，号牌，标签，容易吸水的纸(草纸或旧报纸)，台纸，盖纸，镊子，铅笔等
四、实验过程与步骤
1.采集植株，进行修整
选择各器官最完整的植株，去残叶，适当疏掉一些过密的枝条和过繁的花、叶、果，防止压制成平面是有重叠堆积。 修剪好植株，在吸水纸上进行整形，即将标本的枝、叶、果、 花展开平放，避免重叠。尽量使标本既保持自然状态，看上 去又很美观。对一些不便压制的浆果、块茎、块根，则应进 行浸制保存。
普通植物病理学实验指导(下册)
普通植物病理学实验指导（下册）实验一植物病理徒手制片技术一、实验目的观察植物病害病原物的形态，进行病原物的分类鉴定，研究受病组织的组织结构病变，受病植物组织与病原物的解剖学关系以及对于难得一见病原物的保存备用等，都需将材料制成适当的显微玻片标本。
因此，徒手制片技术也是植物病理学研究的重要手段之一。
通过本次实验系统学习实践常用的徒手制片技术，为普通植物病理学和农业植物病理学的深入学习以及以后开展病理学的有关研究工作奠定坚实的制片技术基础。
二、内容、材料和方法徒手制片的方法有整体封藏法、徒手切片法、组织透明制片法和涂抹制片法等多种。
限于时间本实验实践最为常用的整体封藏法和徒手切片法两种。
(一)整体封藏法对于生长在植物病部表面或培基上的菌丝体、分生孢子、分生孢子梗和其他孢子器官以及线虫等，可直接择取少许封藏在适当的浮载剂中，在显微镜下观察，根据材料的特点和观察的目的可采用不同的方法封藏制片。
常用的方法的概括为挑、刮、拨、撕四种。
1挑：对于在植物受病部位或基质表面生长繁茂的霉状病原体(如霜霉菌)粉状病原体(如锈菌、白粉菌)以及培养基上的许多培养菌，可用尖细的解剖针等直接挑取封埋制片，挑取病原体的量，在保证选材典型的前提下，越少越好，以免互相重叠，分辩不清。
取黄瓜霜霉病叶，小麦白粉病叶分别挑取霉状物和粉状物镜检病原菌的形态特点。
2刮：对病部病原体稀少，或用放大镜也难辩认霉层的病害标本，可采用两侧具刀的三角刮针(或可用刀片代替)刮取病原物制片。
刮的方法是，用刮针的一刃，蘸浮载剂少许，在病部顺同一个方向刮取2—3次，将刮得的病原蘸在载玻片的浮载剂中封片镜检。
浮载剂在保证浮载质量的前提下要尽量少，否则少量的病原体在大滴的浮载剂中极易分散漂流，在显微镜下难以寻找。
取玉米小斑病叶，在病斑背面刮制片，镜检分生孢子梗和分生孢子的形态。
3拨：对于产生在植物表皮下或半埋生于基物内的病原体孢子器官。
如子囊壳、分生孢子器、闭囊壳等，可将病原体连同寄主组织一同拨下，放入浮载剂中，用两支解剖针，一支稳定材料，另一支拨出植物组织，使病原体外露制片。
高中生物 实验一植物细胞有丝分裂染色体制片及观察
四、实验用具及药品
1．用具：显微镜、水浴锅、剪刀、镊子、 刀片、载玻片、盖玻片、酒精灯等。
2．药品：无水乙醇、70%乙醇、冰乙酸、 饱 和 对 二 氯 苯 水 溶 液 、 0.1% 秋 水 仙 素 、 0.1N盐酸。
五、实验步骤
Hale Waihona Puke 材 固定解离染色压片 镜检
酸解: 酶解
六、制作永久玻片
冷冻脱片封片法 酒精一叔丁醇脱水封片法 酒精—二甲苯脱片封片法
七、作业及思考题
1.根据你的实验情况总结出制备好一张优 良的细胞分裂标本应注意哪些问题？
2.常用染料的特点如何？ 3.绘制2～3个有丝分裂典型时期简图。
有丝分裂是一个连续的过程，可分为前期、中期、 后期和末期。高等植物的有丝分裂主要发生在根 尖、茎尖及幼叶等部位的分生组织。经过适当的 取材处理、固定、离析、染色、压片等步骤，可 获得清晰的植物细胞有丝分裂染色体动态变化的 装片。以进行有丝分裂和染色体动态的观察。
三、实验材料
洋葱（Allium cepa）及蚕豆（Vicia faba） 等
实验一 植物细胞有丝分裂染色 体制片及观察
一、实验目的
学习和掌握植物根尖细胞有丝分裂染色体 压片技术；观察有丝分裂过程中染色体的 形态特征和动态变化。
二、实验原理
有丝分裂是植物体细胞增殖的主要方式。在有丝 分裂过程中，细胞核内染色体能准确地复制，并 能有规律地均匀分配到两个子细胞中去，使子细 胞遗传组成与母细胞完全一样，从而保证了性状 的发育和遗传的稳定性。
01实验1 中药组织临时制片技术
• (2)粉末制片： • 即以水或稀甘油作为润湿剂，与粉末混合后制片。 • 方法：于载玻片上滴加润湿剂1-2滴，再用小药勺
取粉末少许与润湿剂混合均匀。然后将盖玻片一侧 的边沿轻轻压在粉末旁载玻片上，慢慢放下(切勿丢 下，否则易,产生气泡)。盖下后若润湿剂未充满盖 玻片，则可从一侧滴加少量润湿剂，使之充满盖片 • 若润湿剂过多而溢出盖片外，则用滤纸屑从侧面将 过多的润湿剂吸去，保持制片清洁。
• 质地软硬适中的材料可以直接进行切片，质地较坚 硬的材料则须先使其软化才能切片。过于柔软的材 料不便夹持切片，可将其浸入70-75％乙醇中，约 20分钟后即可较硬。
2021/8/2
• (2)切片方法：用左拇指和食指夹持材料，并用中 指托着，使材料略高出食、拇指，左肘关节靠在 桌沿，以避免手臂及手腕的摇动。并使材料的切 面保持水平。右手执切片刀(或刀片)，刀口向内并 使刀刃与材料的切面平行，移动右臂使刀锋自左 前方向右后方切削，切出的薄片用毛笔轻轻从刀 上扫下，放在盛有蒸馏水或50％乙醇的培养皿中 ，即得。
• (3)装片：徒手切片一般多不染色，而直接封藏在 适宜的试剂中，如水合氯醛液、稀甘油或显微化 学试剂等。取材方法是用毛笔选取上述的已切好 的完整、清晰的薄片，放于清洁的载玻片上，滴 加所需试剂，盖上清洁的盖玻片即可观察。如要 制成半永久性标本片。可用稀甘油洗去水合氯醛 液，然后封藏在熔化了的甘油明胶中。
实验一 中药组织临时制片技术
• [目的耍求] • 掌握中药组织临时制片技术：徒手切片法 、粉
末装片法 、表面装片法 、整体封藏制片法 、 组织解离制片法
2021/8/2
• [实验材料] • 麦冬、黄柏粉末、鲜薄荷叶、红花、黄芪粗粉 • [仪器与试剂] • 生物显微镜、刀片、镊子、试管、烧杯、培养
植物制片的染色及显微化学鉴定方法
植物制片的染色及显微化学鉴定方法植物制片是植物解剖学研究的基础，主要包括了样品的采集、处理、包埋和切片等步骤。
制片的质量直接影响着后续染色和显微化学鉴定结果的准确性和可靠性。
以下是植物制片的一般步骤：1.采集样品：根据研究需要，采集符合实验要求的植物部件，如叶片、茎、花粉等。
2.处理样品：对采集到的植物样品进行初步处理，如去除杂质、保持新鲜等。
3.包埋样品：将处理后的样品进行包埋，使用适宜的包埋剂，如石腊、低熔点石蜡等。
4. 切片样品：将包埋好的样品进行切片，使用微tome等工具进行切割，制备出适当厚度的切片。
一旦制片完成后，接下来需要进行染色和显微化学鉴定。
染色方法可以增强显微镜下的观察效果，常见的染色方法包括常规染色和特殊染色。
1.常规染色方法：最常用的染色方法是使用苏丹精、碘红等生物染料，用于染色细胞壁、细胞核等常见组织结构。
常规染色方法可以提供植物组织的基本信息。
2.特殊染色方法：特殊染色方法主要用于特定的组织结构或化学物质的染色。
如使用苏木精-伊红染色对木质部和木质纤维进行染色，使用布氏染色对淀粉进行染色等。
显微化学鉴定方法是通过对制片样品进行特定试剂处理，以便于观察和检测特定化学物质的存在与否。
常用的显微化学鉴定方法包括：1.反应性染色：使用生化试剂或化学试剂与组织中的化学物质进行反应，产生特定的颜色或沉淀。
如使用碘酸钾溶液对淀粉进行碘反应形成蓝色物质。
2.酶反应：通过加入适当的酶试剂，使显色底物发生氧化还原反应，形成显色产物。
如使用过氧化氢试剂对过氧化物酶进行酶反应产生氧气和水。
3.化学反应：使用特定化学试剂，对特定化学物质进行识别。
如使用铁氰化钾试剂对根际紧矿质进行化学反应，生成蓝色的沉淀。
植物制片的染色及显微化学鉴定方法，通过染色和试剂处理等手段，可以使植物组织结构变得更加清晰和可见，从而更好地研究和识别植物的组织结构、化学成分和功能。
这些方法对于植物科学研究和植物学教学有着重要价值。
实验指导一简易植物制片、细胞的结构观察和生物绘图
实验指导一 简易植物制片、细胞的结构观察和生物绘图一、目的学会徒手切片法，简易装片法和生物绘图法。
二、用品显微镜、植物学盒（内装刀片、小剪、镊子、解剖针各l把；载玻片、盖玻片各6片）、培养皿、滴管、纱布、毛笔、吸水纸、蒸馏水、75%乙醇、染色液（1％番红、碘液、龙胆紫）。
三、材料玉米幼茎或蚕豆幼茎、洋葱鳞叶、胡萝卜（或萝卜、马铃薯块茎）、小麦叶片或其它叶片。
四、方法步骤（一）简易装片法1. 擦拭玻片 载玻片和盖玻片用前均要擦拭干净。
正确方法是用左手拇指和食指夹住玻片的两边，右手拇指和食指衬两层纱布夹住玻片的一半，进行擦拭，然后再擦拭另一半，使整个玻片干净为止，如玻片太脏，可用纱布蘸些水或酒精擦拭，再用干纱布擦干。
2. 取材 用镊子撕下洋葱鳞叶的内表皮．剪成长约5mm宽约3mm的小片。
3. 装片 在载玻片上滴一滴清水，将剪好的表皮浸入水滴内，并用解剖针挑平，再加盖玻片。
加盖玻片时先使一边接触水滴；另一边用针托住慢慢放下，以免产生气泡。
如盖玻片内的水未充满，可用滴管吸水从盖玻片的一侧滴入，如果水太多溢出盖玻片外，可用吸水纸将多余的水吸去。
这样装好的的片子就可以进行镜检。
（二）徒手切片法徒手切片是制作切片中的一种简单的方祛。
制作时只需要一把刀片和一个培养皿即可开展工作。
对草本植物器官的观察一般都可以用徒手切片法进行，甚至于木本植物较细的嫩枝也可用此法。
1. 用植物茎（或其它器官）做徒手切片取一小段（长约2cm）的玉米或蚕豆幼茎，用左手的拇指、食指和中指夹住材料，材料要稍高于拇指0.5-1mm左右，右手执刀、刀要锋利，刀口向内，自左前向右后水平拉切。
刀片与材料垂直切时最好用臂力而不用腕力，用力要均匀，材料与刀成垂直，切片时只动右手，左手不动，更不要来回拉切。
不论切什么材料，在切前，刀片及材料要蘸水。
每切几片后，用毛笔蘸水将材料蘸到有水的培养皿中，然后选择最薄的进行染色装片。
将薄片放在载玻片上，滴上一滴1%番红液或碘液、龙胆紫，约1分钟，用吸水纸将番红液吸去，再滴二滴蒸馏水，稍微摇动，再用吸水纸吸去多余的水分，盖上盖玻片后，便可镜检。
实验1 中药制片技术
操作：取新鲜或已软化的中药材，用拇指及 食指和中指夹住材料，下端用无名指托住，另 外一只手持刀片，自左向右移动手腕，牵曳切 片。 操作时材料的断面与刀口须经常用水湿润。 以毛笔将切好的薄片移入在盛水培养皿 中浸泡。
装片 将切片以镊子夹出，置于滴加了甘油的载
使用完毕后，移去玻片，按上述方法擦 拭，将最低倍物镜转入光路，载物台复位。 关闭电源，拔下插座，盖上防尘罩。 在相应使用登记本上签名。
二、粉末临时制片
粉末临时制片操作要领 粉末用量：米粒大小。 每次滴加装置液2~3滴。 每次滴加装置液后需要搅拌均匀。 控制搅拌范围约为盖玻片大小。 如加热透化，则重复进行3~4次， 沸即离火，勿烧干、焦。
实验一 显微镜的使用保养 与中药临时制片技术
一、显微镜的使用和保养
显微镜的结构 镜座 镜臂 镜筒 载物台 光路系统：目镜、物镜、集光器、光源
物镜 低倍镜：4×、10 × ——用于观察整体结构、寻找特定特征。 高倍镜：40 ×、100 ×（油镜） ——用于观察特定细微结构与组织特征， 油镜较为少用。
金银花两种非腺毛
金银花腺毛
金 银 花 花 粉 粒
四、叶表皮撕片
叶表皮撕片适用对象及操作 适用对象：观察表皮细胞、气孔、毛茸。 材料：通常为叶下表皮。
操作：以镊子自下表面夹住少许叶片，往 一侧撕取表皮。将撕下的表皮外表面朝上 置于滴有1~2滴水的载玻片上，使其自然展 开，盖片观察。
玻片上，加上盖玻片；或滴加水合氯醛加热透 化，滴加稀甘油后加上盖玻片。
徒手切片——桑枝横切面
作业与思考 1、实验完成后应做哪些善后工作？ 2、由低倍镜转换成高倍镜后，调焦时应注意
什么？ 3.寻找被观察物时应如何操作？
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实验一植物制片技术
临时水封玻片
一、实验材料
生物材料。
洋葱鳞茎、番茄。
实验用具。
显微镜、镊子、解剖针、小块软布、刀片、载玻片、盖玻片、吸水纸。
实验药品。
蒸馏水、稀释碘酒。
二、制作临时装片的程序和步骤
（1）擦载玻片。
用左手的拇指和食指捏信载玻片的边缘，右手用软布将载玻片上下两面包住，然后反复擦拭，擦好后放在干净处备用。
（2）擦盖玻片。
先用左手拇指和食指轻轻捏住盖玻片的一角，再将右手拇指和食指用软布把盖玻片包住，然后从上下两面隔着软布慢慢地进行擦试。
（3）用吸管在载玻片中央滴一滴清水（或直接滴加稀释碘液用以染色）。
（4）a. 洋葱表皮细胞观察
取一块洋葱磷叶，在其内面（凹面，无色）用刀片浅划出长2mm的正方形，用镊子从正方形的一角撕下一小块洋葱内表皮，把洋葱内表皮放在载玻片的水滴中展平。
b. 果肉离散细胞观察
用解剖针挑取少许已红熟的番茄果肉（以临近果皮的为好），把它们放在载玻片上的水滴中，用解剖针将果肉细胞拨匀，分散得越开越好。
（5）右手持镊子，轻轻夹住盖玻片一角，使盖玻片的边缘与液滴的边缘接触，然后慢慢倾斜下落，最后平放于载玻片上，避免气泡的产生。
（6）盖玻片下水太多，可用吸水纸从一侧吸去，水少也可从一侧加入。
2、染色
（1）把一滴染液滴在盖玻片的一侧；
（2）用吸水纸从盖玻片的另一侧吸引使染液浸润整个标本；
（3）使盖玻片下的标本均匀着色。
徒手切片
一、实验材料
生物材料。
芹菜幼茎；水花生幼茎和叶片；2cm×1cm×0.5cm的土豆（或胡萝卜块）。
实验用具。
显微镜；双面刀片；载、盖玻片；镊子；培养皿。
实验药品。
蒸馏水；0.1%番红水溶液；1%甘油水溶液。
二、实验步骤
1. 取材。
选择发育正常，有代表性的幼茎或叶片，用刀片从植株上割下，立即进行切片或保存在水中以防萎蔫。
2. 切片。
取茎长约1-2cm（如果是叶片等较为柔软的材料用胡萝卜或土豆等作为支持物，叶片大小为1×1cm），以左手的拇指、食指和中指夹住材料（要求材料突出在指尖上面约
2-3mm），用右手握住刀片，刀口向内，以均匀的动作做横切面切片（切片时刀口和材料表面都要经常湿水，使之滑润），多切，掌握技巧，切片放入培养皿清水中充分展开。
3. 用镊子从培养皿中挑选薄而透明、平整的切片1-2片放在载玻片中，制成临时装片观察；
4. 临时观察和短期保存。
为了使材料更清晰进行染色。
挑选好的切片放在载玻片中，滴一滴0.1%的番红水溶液，加盖玻片进行观察；如需短期保存，可在染色后在切片上滴一滴30%的甘油，再盖上盖玻片（加甘油的目的是增强切片的透明度和避免切片失水变黑）。