流式细胞仪在临床检测和临床科研中的应用91页PPT
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流式细胞仪在临床检验中的应用 PPT
健康人（左）和强直性脊柱炎患者（右）的HLA-B27的检测结果 （上：同型对照，下：测试样本）
1
流式细胞术的基本原理
2 流式的临床应用
目 录
3 迈瑞流式介绍
4
专家对迈瑞流式的评价
迈瑞流式细胞仪及配套试剂
BriCyte E6流式细胞仪及配套试剂
人性化设计—降低临床操作难度
临床常规项目全自动软件 双向LIS连接 全中文操作界面
诊断与鉴别诊断 疾病临床分期 治疗效果评估 指导临床用药 。。。
TBNK淋巴细胞检测在临床科室中的应用
流式在肿瘤的应用 流式在感染科的应用 流式在风湿免疫科的应用 流式在健康体检的应用 流式在血液科的应用 流式在移植中心的应用 流式在心血管内科的应用 流式在其他科室的应用
胃癌及其不同临床分期淋巴细胞亚群的变化
四川省人民医院 中心实验室主任
张剑波
THANKS！
谢谢
HLA-B27检测与AS辅助诊断
1984年修订的纽约标准 ；
1991年欧洲脊柱关节病 研究组（ESSG）标准；
2009年国际脊柱关节病 评估工作组（ASAS） SpA诊断标准标准—增 加HLA-B27作为重要的 诊断指标
Rudwaleit M. Curr Opin Rheumatol. 2010,22:375-380）
食品工业
临床诊断、 研究
血液，肿瘤， 药理，免 疫…
农业畜牧业
选种，育种…
环境研究
湖泊、海洋生态 研究…
制药工业
药物筛选，疫苗 研究…
总结
flow cytometry flow cytometry + Autoimmune diseases
flow cytometry+leukemia
1
流式细胞术的基本原理
2 流式的临床应用
目 录
3 迈瑞流式介绍
4
专家对迈瑞流式的评价
迈瑞流式细胞仪及配套试剂
BriCyte E6流式细胞仪及配套试剂
人性化设计—降低临床操作难度
临床常规项目全自动软件 双向LIS连接 全中文操作界面
诊断与鉴别诊断 疾病临床分期 治疗效果评估 指导临床用药 。。。
TBNK淋巴细胞检测在临床科室中的应用
流式在肿瘤的应用 流式在感染科的应用 流式在风湿免疫科的应用 流式在健康体检的应用 流式在血液科的应用 流式在移植中心的应用 流式在心血管内科的应用 流式在其他科室的应用
胃癌及其不同临床分期淋巴细胞亚群的变化
四川省人民医院 中心实验室主任
张剑波
THANKS！
谢谢
HLA-B27检测与AS辅助诊断
1984年修订的纽约标准 ；
1991年欧洲脊柱关节病 研究组（ESSG）标准；
2009年国际脊柱关节病 评估工作组（ASAS） SpA诊断标准标准—增 加HLA-B27作为重要的 诊断指标
Rudwaleit M. Curr Opin Rheumatol. 2010,22:375-380）
食品工业
临床诊断、 研究
血液，肿瘤， 药理，免 疫…
农业畜牧业
选种，育种…
环境研究
湖泊、海洋生态 研究…
制药工业
药物筛选，疫苗 研究…
总结
flow cytometry flow cytometry + Autoimmune diseases
flow cytometry+leukemia
流式细胞仪的应用ppt
6 在器官移植中的作用
FCM通过检测受者血清中抗供者的抗HLA的抗体，根据 抗体的种型、效价、靶抗原和器官移植的类型不同， 抗体介导的排斥反应也有所不同，FCM比传统方法更 灵敏、操作时间更短并可同时检测细胞亚型、分辨出 IgG和IgM抗体。巨细胞病毒（CMV）能在白细胞内繁 殖并合成CMV特异性蛋白，通过FCM检测CMV特异性抗 原及其抗原分泌量，这种技术用于CMV感染检测时感 染后4h便可检出T淋巴母细胞中CMV-DNA，从而可快速、 准确地反映CMV在移植受者中的早期感染状况，对预 防和减少感染具有重要意义 ［8］ 。以FCM监测肾移 植受体CD8 + 、CD38 + 、T细胞亚群的变化也可监测 CMV感染 ［9］ 。
T淋巴细胞检测
CD8+Ts淋巴细胞检测
B淋巴细胞检测
NK细胞检测
3 白细胞分类分析
利用FCM的体积测定和细胞结构测定来检测 每个白细胞的光散色强度，它与细胞体积、 细胞膜结构、细胞核形状、细胞质性状等 多种因素有关，经过分析可得到中性粒细 胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞 的检测结果。这种方法应用于血细胞计数 速度快、结果准确，大大提高了临床实验 室的工作效率 ［5］ 。
9 在肿瘤诊断中的作用
通过DNA含量分析的细胞周期分布，可反映 肿瘤细胞的增殖状态，对治疗及预后有十 分重要的意义。近年来，流式细胞测量法 DNA分析越来越多地应用于实体瘤患者。 DNA非整倍体的出现率和癌变与不典型增生 程度密切相关。DNA非整倍体可能是癌前病 变发生早期癌变的一个早期指标 ［12］ 。
8 在白血病诊断中的作用
白血病是白细胞在分化到某个阶段受阻后 异常增殖的结果，利用白细胞分化不同阶 段出现的细胞表面标志可以对白血病进行 免疫分型。过去对造血细胞和免疫细胞分 类主要是依据细胞形态学和细胞免疫化学 染色来进行的，现在将多种检测手段相结 合，可为临床诊断、治疗监测和预后提供 更多、更有力的依据。通过FCM检测各种急 性白血病细胞表面抗原的表达，对临床诊 断尤为重要 ［11］ 。
最新流式细胞仪在临床检测和临床科研中的应用
光学检测信号
All rights reserved by Dr Baiqing LI
-16-
Bengbu Medical College Department of Immunology
流式细胞仪的光学系统 FACSCalibur
All rights reserved by Dr Baiqing LI
-13-
Bengbu Medical College Department of Immunology
Injector Tip
Sheath fluid
Fluorescence signals
Focused laser beam
All rights reserved by Dr Baiqing LI
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Bengbu Medical College Department of Immunology
All rights reserved by Dr Baiqing LI
Bengbu Medical College Department of Immunology
（一） 流式细胞仪的结构
光路系统：
激光光源，光路系统（透镜、滤光片）
电子系统：光电倍增管（PMT），补偿电路 液流系统： 鞘液系统，样品流动系统
数据系统：计算机，数据测量和分析软件。
细胞分选系统
All rights reserved by Dr Baiqing LI
-10-
Bengbu Medical College Department of Immunology
-17-
Bengbu Medical College Department of Immunology
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Bengbu Medical College Department of Immunology
流式细胞仪的光学系统 FACSCalibur
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Injector Tip
Sheath fluid
Fluorescence signals
Focused laser beam
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Bengbu Medical College Department of Immunology
（一） 流式细胞仪的结构
光路系统：
激光光源，光路系统（透镜、滤光片）
电子系统：光电倍增管（PMT），补偿电路 液流系统： 鞘液系统，样品流动系统
数据系统：计算机，数据测量和分析软件。
细胞分选系统
All rights reserved by Dr Baiqing LI
-10-
Bengbu Medical College Department of Immunology
-17-
Bengbu Medical College Department of Immunology
流式细胞术的临床应用ppt课件
实验诊断科 分子诊断组
数据分析
设门（gating）：
根据某些特性将分析细胞群
圈起来。
淋巴细胞：FSC/SSC CD45++/SSCdim T淋巴细胞：CD3+/SSCdim
实验诊断科 分子诊断组
数据分析
直方图
单参数分析
横坐标：信号强度
纵坐标：细胞数量
实验诊断科 分子诊断组
数据分析
散点图
双参数分析 横、纵坐标代表的均是信号强度 UL: cd3-cd4+ LL: cd3-cd4UR: cd3+cd4+ LR: cd3+cd4-
实验诊断科 分子诊断组
标本染色的一般方法
FCM的临床应用
已开展的临床项目 其他临床应用
实验诊断科 分子诊断组
标本染色的一般方法
标本来源：
外周血、骨髓、组织块、培养细胞、脑脊 液、胸腹水、肺泡灌洗液(BALF)及其脱落细 胞。 血清和各类体液样本（可溶性蛋白）
实验诊断科 分子诊断组
前期处理
CSF、BALF、胸腹 水等：
结合淋巴细胞绝对数来看待百分比的改变
AIDS
实验诊断科 分子诊断组
已开展的项目
HLA-B27
试剂：BD HLA-B27 Kit 标本：外周血 检测指标： T (CD3+)淋巴细胞上HLA-B27 定性检测
实验诊断科 分子诊断组
实验诊断科 分子诊断组
HLA-B27
临床意义：强直性脊柱炎（高度相关） 遗传性关节炎
数量的检测 采集时机的确定
某些肿瘤
实验诊断科 分子诊断组
已开展的项目
白血病和淋巴瘤（L&L）免疫分型
流式细胞仪在临床检验中的应用
流式细胞仪在临床检验中的应用流式细胞仪在临床检验中的应用1.引言1.1 背景流式细胞仪是一种用于分析细胞的仪器，通过激光照射细胞样本，并测量样本中细胞的荧光或散射等特性来定量分析细胞的类型和数量。
它在临床检验中具有广泛的应用，能够对各种细胞进行精确的分析和鉴定。
1.2 目的本文旨在介绍流式细胞仪在临床检验中的应用，包括其原理、操作步骤、常见应用以及相关注意事项。
2.流式细胞仪的原理2.1 光学原理流式细胞仪利用激光器产生的高能光束对细胞样本进行照射，并通过多个光学元件将光信号转换为电信号，最终通过计算机进行数据采集和分析。
2.2 流体力学原理流式细胞仪通过控制样本在微细管道中的流速和流动方式，使细胞依次通过激光束，实现对单个细胞的分析。
3.流式细胞仪的操作步骤3.1 样本准备样本准备包括细胞的收集、细胞的处理和细胞的染色等步骤，确保样本的质量和准确性。
3.2 仪器设置仪器设置包括激光器的选择和调节、光学元件的调整、流速的设置等，确保仪器的正常运行和数据的准确性。
3.3 数据采集在操作过程中，根据实验需要选择合适的参数进行数据采集，并通过计算机软件进行数据保存和分析。
3.4 数据分析根据数据分析的需要，通过计算机软件对采集的数据进行分析和解读，得出相应的结果和结论。
4.流式细胞仪的应用4.1 细胞表型分析流式细胞仪可用于对细胞的表型进行分析，识别不同类型的细胞，并分析其表面标记物的表达情况。
4.2 细胞功能分析流式细胞仪可用于评估细胞的功能，如分析细胞的增殖能力、细胞凋亡情况等。
4.3 细胞排序流式细胞仪可根据设定的标准将细胞进行排序，以获取特定类型的纯细胞。
4.4 微量分析流式细胞仪具有高敏感度和高分辨率的特点，可进行微量样本的分析，如检测稀有细胞、测定细胞内分子的含量等。
5.注意事项5.1 样本处理注意事项样本的处理过程中需要注意避免细胞的损伤和样本的污染，以保证实验结果的准确性。
5.2 仪器操作注意事项在使用流式细胞仪时，需要仔细阅读和遵守仪器使用说明书，正确操作仪器，防止损坏和误操作。
流式细胞仪分析技术及应用PPT课件
14
光学系统：主要由多组透镜、滤光片和分 光镜等光学元件组成，将不同波长的光信 号送入不同的探测器
滤片
1）长通滤片（long pass filter，LP ) 2）短通滤片（short pass filter，SP ) 3）带通滤片（band pass filter，BP）
15
只允许特定波长以上的光通过 ，如LP500
带电细胞液滴通过静电场而 发生偏转，落入收集器中， 其他液体则被当作废液抽吸 掉，完成细胞分选的目的。
23
（二）FCM分选技术要求
细胞分选对仪器的性能要求较高 分选是流式细胞仪的重要功能之一 分选功能的装置较为复杂
► 分选指标
分选速度
分选纯度 分选收获率
24
分选速度
1
每秒可分离所要细胞的个数，一般要求分 选速度至少达5000个/秒左右。
研究对象为生物颗粒，如各种细胞、微生 物及人工合成微球等
3
第一节 流式细胞术的分析及分选原理
液流 系统
光学 系统
流式 细胞仪
光学 原理
光电转 换原理
电子 系统
测试 原理
4
激光
光电 倍增管
放大电路
流式细胞仪是集
多种技术为一体的 新型高科技仪器
激光技术 单克隆抗体技术 细胞荧光化学技术 光电测量技术 电子物理技术 电子计算机技术
1、散射光信号：分为前向散射光（forward scatter，FSC）和侧向散射光（side scatter， SSC）。
散射光不依赖于任何细胞样品的制备技术， 被称为细胞的物理参数，反映的是细胞的大小 的内部结构。
2、荧光信号
27
前向散射光检测器
流式细胞仪在临床检验中的应用
流式细胞仪在临床检验中的应用流式细胞仪在临床检验中的应用介绍：流式细胞仪是一种现代化的生命科学仪器，能够对细胞进行快速、准确的分析和排序。
它通过利用激光器产生的光与细胞相互作用，获取细胞的多种信息，可以广泛应用于临床检验中。
章节一、流式细胞仪的原理1.1 激光器光源1.2 光学系统1.3 流式细胞仪的探测系统1.4 数据采集与分析系统章节二、流式细胞仪的标记和染色技术2.1 细胞表面标记物的检测2.2 细胞内标记物的检测2.3 细胞染色技术的选择与优化章节三、流式细胞仪在血液学检验中的应用3.1 血常规检验3.2 免疫表型分析3.3 流式细胞术在白血病诊断中的应用章节四、流式细胞仪在免疫学检验中的应用4.1 免疫细胞亚群分析4.2 免疫功能检测4.3 炎症指标检测章节五、流式细胞仪在肿瘤学检验中的应用5.1 肿瘤细胞检测5.2 肿瘤干细胞检测5.3 肿瘤微环境分析章节六、流式细胞仪在其他临床检验中的应用6.1 全血凝块分析6.2 骨髓移植前检验6.3 器官移植免疫监测附件：本文档的附件包括：附件1：流式细胞仪操作手册附件2：流式细胞仪数据分析软件说明书附件3：流式细胞仪标记和染色试剂使用手册法律名词及注释：1、《医疗器械管理条例》：指中华人民共和国国务院于2000年通过的关于医疗器械管理的法规。
2、《临床实验室管理条例》：指中华人民共和国国家卫生计生委于2000年颁布的关于临床实验室管理的法规。
3、《医学伦理学指导原则》：指国际上广泛采纳的医学伦理学准则，包括尊重人的尊严、权益和自主决策能力等原则。
流式细胞术原理及临床应用-PPT文档
FCM检测白血病微小残留病变(MRD):
MRD 是 白 血 病 复 发 的 主 要 根 源 ， FCM 的 高 特 异性和敏感性可以在患者缓解期检测是否有残 留病变细胞，早期探测MRD，以免复发
FCM在临床肿瘤学中的应用
1.血液标本的检查 ● 肿瘤患者的免疫功能检查 ● 肿瘤患者的粘附分子检查：在肿瘤的浸润与转
细胞凋亡的生物学意义
胚胎形成、肌体正常发 育、衰老和损伤细胞的清 除以及肿瘤的发生、发展 和转归等都与细胞凋亡有 关。
生物医学的研究热点
FCM在血栓性疾与止血中应用
由于活化血小板是血栓的主要
成分之一，血小板活化程度的增 高与疾病的发生发展有关。 利用 流式细胞仪可检测血小板活化指 标，了解血小板状态和活化进程 。 巨血小板 血小板无力症 网织血 小板
肿瘤细胞耐药性
MDR是由多药耐药基因编码的P糖蛋白（P-gp） 亲脂化合物，包括多种抗癌药物和荧光染料的跨膜性 排出泵。当淋巴细胞出现MDR阳性细胞时，患者对 化疗药物开始出现耐
细胞凋亡是由基因控制的细胞自主的有序 的死亡。它涉及一系列基因的激活、表达以及调 控等的作用；是为更好地适应生存环境而主动争 取的一种死亡过程。 坏死（necrosis）：坏死是细胞受到强烈理化或 生物因素作用引起细胞无序变化的死亡过程。表 现为细胞胀大，胞膜破裂，细胞内容物外溢，核 变化较慢，DNA 降解不充分，引起局部严重的 炎症反应
可用流式细胞仪分析的标本
外周血、骨髓、癌组织、癌旁组织、各种体液 （尿、脑脊液、胸腹水、肺泡灌洗液等）
单细胞生物、特殊处理的植物细胞、某些非细胞 粒子、可溶性分子
流式细胞仪的基本功能
•细胞表型分析：包括细胞膜、胞浆内蛋白表达及核膜成份分析 •DNA含量及细胞周期分析、细胞凋亡检测 •目标细胞分选 •自身免疫性疾病相关HLA抗原分析、自身抗体的检测 •流式蛋白定量技术：血浆中各种细胞因子的含量
《流式细胞仪》幻灯片PPT
这些荧光信号的强度代表了所测细胞膜外表抗原的强度或其核内物质的 浓度，经光电倍增管接收后可转换为电信号，再通过模/数转换器，将连续 的电信号转换为可被计算机识别的数字信号。计算机把所测量到的各种信 号进展计算机处理，将分析结果显示在计算机屏幕上，液可以打印出来， 还可以数据文件的形式存储在硬盘上以备日后的查询或进一步分析。
电子系统负责光电转换和数据处理
1 散射光信号
侧向角散射光 〔SSC〕 Side Scatter：细胞粒度及细胞内相对复杂性
激
前向角散射光〔FSC〕
发 光
Forward Scatter：细胞相对大小及其外表积
光散射分析：从非均一的细胞群体中鉴别出某些亚群
流式细胞仪的信号分析
外周全血细胞散射光双参数点图 〔红细胞溶解后〕
新型流式细胞仪，特点：随着激光技术的
二、流式细胞仪的构造组成
Principles of Flow Cytometric analysis
➢ 液流系统 ➢ 光学系统 ➢ 电子系统 ➢ 分选系统
三、流式细胞仪的根本构造
液 流 系 统
液流系统的作用是依次传送待测样本中的细胞到激光照射区，其理想状态是 把细胞传送到激光束的中心。而且在特定时间内，应该只有一个细胞或粒子 通过激光束。
根据散射光信号 从人白细胞中鉴别出不同亚群：
白细胞
淋巴细胞 单核细胞 粒细胞
流式细胞仪的信号分析
2荧光信号
利用荧光标记的特异性单克隆抗体，做单/多色分析： 检测多种细胞外表标志，定量细胞抗原表达、细胞因子水平 为PCR、FISH 等分子技术分选出纯度高的特异细胞群
流式细胞仪的信号分析
荧光信号的分析
流式仪器一览
流式细胞仪一览
流式细胞术在临床科研中的应用PPT共49页
流式细胞术在临床科研中的应用
11、获得的成功越大，就越令人高兴 。野心 是使人 勤奋的 原因， 节制使 人枯萎 。 12、不问收获，只问耕耘。如同种树 ，先有 根茎， 再有枝 叶，尔 后花实 ，好好 劳动， 不要想 太多， 那样只 会使人 胆孝懒 惰，因 为不实 践，甚 至不接 触社会 ，难道 你是野 人。(名 言网) 13、不怕，不悔(虽然只有四个字，但 常看常 新。 14、我在心里默默地为每一个人祝福 。我爱 自己， 我用清 洁与节 制来珍 惜我的 身体， 我用智 慧和知 识充实 我的头 脑。 15、这世上的一切都借希望而完成。 农夫不 会播下 一粒玉 米，如 果他不 曾希望 它长成 种籽； 单身汉 不会娶 妻，如 果他不 曾希望 有小孩 ；商人 或手艺 人不会 工作， 如果他 不曾希 望因此 而有收 益。-- 马钉路 德。
1、最灵繁的人也看不见自己的背脊。——气承担命运这才是英雄好汉。——黑塞 4、与肝胆人共事，无字句处读书。——周恩来 5、阅读使人充实，会谈使人敏捷，写作使人精确。——培根
11、获得的成功越大，就越令人高兴 。野心 是使人 勤奋的 原因， 节制使 人枯萎 。 12、不问收获，只问耕耘。如同种树 ，先有 根茎， 再有枝 叶，尔 后花实 ，好好 劳动， 不要想 太多， 那样只 会使人 胆孝懒 惰，因 为不实 践，甚 至不接 触社会 ，难道 你是野 人。(名 言网) 13、不怕，不悔(虽然只有四个字，但 常看常 新。 14、我在心里默默地为每一个人祝福 。我爱 自己， 我用清 洁与节 制来珍 惜我的 身体， 我用智 慧和知 识充实 我的头 脑。 15、这世上的一切都借希望而完成。 农夫不 会播下 一粒玉 米，如 果他不 曾希望 它长成 种籽； 单身汉 不会娶 妻，如 果他不 曾希望 有小孩 ；商人 或手艺 人不会 工作， 如果他 不曾希 望因此 而有收 益。-- 马钉路 德。
1、最灵繁的人也看不见自己的背脊。——气承担命运这才是英雄好汉。——黑塞 4、与肝胆人共事，无字句处读书。——周恩来 5、阅读使人充实，会谈使人敏捷，写作使人精确。——培根
流式细胞仪在临床检测和临床研中的应用共92页
41、学问是异常珍贵的东西，从任何源泉吸 收都不可耻。——阿卜·日·法拉兹
42、只有在人群中间，才能认识自 己。——德国
43、重复别人所说的话，只需要教育； 而要挑战别人所说的话，则需要头脑。— 玛丽·佩蒂博恩·普尔
44、卓越的人一大优点是：在不利与艰 难的遭遇里百折不饶。——贝多芬
45、自己的饭量自己知道。——苏联
流式细胞仪在临床检测和临床研中的 应用
16、人民应该为法律而战斗，就像为 了城墙 而战斗 一样。 ——赫 拉克利 特 17、人类对于不公正的行为加以指责 ，并非 因为他 们愿意 做出这 种行为 ，而是 惟恐自 己会成 为这种 行为的 牺牲者 。—— 柏拉图 18、制定法律法令，就是为了不让强 者做什 么事都 横行霸 道。— —奥维 德 19、法律是社会的习惯和思想的结晶 。—— 托·伍·威尔逊 20、人们嘴上挂着的法律，其真实含 义是财 富。— —爱献 生
相关主题
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-27-
外周全血细胞（红细胞溶解后） Bengbu Medical College Department of Immunology 以散射光表示的 双参数 点图
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免疫学教研室
流式细胞仪在临床检测和 临床科研中的应用
李柏青 蚌埠医学院免疫学教研室
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Bengbu Medical College Department of Immunology
流式细胞仪的基本工作原理以及在基础 和临床科研中的应用
流式细胞仪和流式细胞术－概述
流式细胞仪的工作原理和测量参数
一、流式细胞仪和流式细胞术－特点
多参数测量和分析（散射光和荧光） ； 快速测量和分析
每秒可达1000-10000个细胞 分选纯度可达99%以上。
获取的数据分析结果更具有统计学意义；
通常测量的对象如各种细胞细胞必须处在单 个细胞悬液中。此外，也可测量微生物等生 物颗粒，或者工合成微球非生物颗粒，
FALS Sensor
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-24-
散射光信号
Bengbu Medical College Department of Immunology
侧向角散射光－SSC
Laser
FALS Sensor
90LS Sensor
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（二） 流式细胞仪可检测的细胞参数
细胞结构 细胞大小
细胞功能 细胞表面蛋白抗原
细胞颗粒性程度 细胞表面面积 核浆比例 DNA含量与细胞周期 RNA含量
细胞胞浆内蛋白性 抗原
细胞内细胞因子 细胞增殖 细胞内钙离子浓度
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-6-
7
Bengbu Medical College Department of Immunology
大型机——FACSVantage SE
科研型 八荧光参数 高速分选 多路分选
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-8-
Bengbu Medical College Department of Immunology
流式细胞仪(Flow Cytometer， FCM): 是集合光电子物理，光电测量技术， 液流技术，计算机技术等现代高科技 技术为一体的细胞测量和分析仪器。
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-3-
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液流系统：鞘液系统＋样品流动系统
ห้องสมุดไป่ตู้
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-19-
Bengbu Medical College Department of Immunology
流式细胞仪的电子系统
信号检测和分析 当细胞携带荧光素, 通过激光照射区, 受到激发产 生不同波长的、代表细胞内不同物质的荧光信号 荧光信号由光电接收器接收，转变为电脉冲信号， 电脉冲信号经A/D转换成数字信号 数字信号传送到计算机，进行储存、作图和统计分 析
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数据系统
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-21-
二、流式细胞仪的工作原理和测量参数 Bengbu Medical College Department of Immunology
流式细胞仪在临床检测和科研中的应用
免疫学检测和科研应用
血液病检测和科研应用
肿瘤学检测和科研应用
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-2-
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一、流式细胞仪和流式细胞术的基本概念
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-31-
荧光信号
Bengbu Medical College Department of Immunology
FALS Sensor
Freq
Fluorescence
Fluorescence detector
(PMT3, PMT4 etc.)
双色直接染色
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-34-
Bengbu Medical College Department of Immunology
（三） 流式细胞仪分析数据常见图形：
（二维）点陈图 (Dot Plot)
适用于：双参数分析
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光学检测信号
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-16-
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流式细胞仪的光学系统 FACSCalibur
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（一） 流式细胞仪的结构
光路系统：
激光光源，光路系统（透镜、滤光片）
电子系统：光电倍增管（PMT），补偿电路 液流系统： 鞘液系统，样品流动系统
数据系统：计算机，数据测量和分析软件。
细胞分选系统
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-10-
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-5-
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台式机——FACSCalibur
双激光 488nm 635nm
四荧光参数
分选、浓缩系统
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入射光90角的散射光信号，
可反映：细胞颗粒性程度
（胞内成分和构造和表面结构的复杂性）
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-23-
散射光信号
Bengbu Medical College Department of Immunology
前向角散射光－FSC
Laser
流式细胞仪－光路系统
激光 (Laser)是一种相干光源，它能提供 单一波长、单一方向、同步的稳定光照
激光波长: 488nm, 635nm
光收集系统是由若干组透镜, 滤波片, 小孔组成，将产生的光信号引导至检测器
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-11-
光路系统
-13-
Bengbu Medical College Department of Immunology
Injector Tip
Sheath fluid
Fluorescence signals
Focused laser beam
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（二） 流式细胞检测细胞参数:
特征信息－荧光（Fluorescence）信号
荧光素吸收激光（激发光波长）能量 荧光素将吸收能量释放，转换为
释放较入射光波长更长的光量子（发射光波长） 荧光素与特异抗体结合（荧光抗体） 荧光抗体与细胞抗原结合越多，产生荧光信号越强 荧光素与细胞核酸结合，荧光强度反映核酸含量
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-32-
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-33-
荧光信号
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Injector Tip
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流式细胞仪与荧光显微镜比较
流式细胞仪 流动的细胞
数量大 高速分选 细胞群体特征量分布
荧光显微镜 静止的细胞样本
数量少 样本难以再利用 可揭示细胞内部结构信息
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二、流式细胞仪的工作原理和测量参数 Bengbu Medical College Department of Immunology
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外周全血细胞（红细胞溶解后） Bengbu Medical College Department of Immunology 以散射光表示的 双参数 点图