现代医学实验学骨髓细胞微核实验

合集下载

实验五小鼠骨髓细胞微核试验

小鼠骨髓细胞的采集与处理
小鼠麻醉
将小鼠麻醉，并固定在操作台上。
暴露骨髓
用消毒手术刀切开小鼠的腿骨，暴露骨髓腔。
采集骨髓细胞
用注射器吸取生理盐水，冲洗骨髓腔，收集骨髓
细胞。
细胞处理
将采集的骨髓细胞进行洗涤、离心、分离等处理，得到所需的细胞样
本。
骨髓细胞的培养与观察
细胞培养
将处理后的骨髓细胞接种在细胞培养皿中，加入适量的细胞培养基，在适宜的温度和湿度条件下进行培养。
率之间存在正相关关系。
本实验为进一步研究致突变物的致突变作用提供了有力证据，有助于深入了解致突变物的致癌机
制。
对实验结果的理解与讨论
本实验结果表明，致突变物能够诱导小鼠骨髓细胞微核的形成，这可能是致突变物导致基因突变和细胞恶性转化的重要机制之一。
实验结果还提示，致突变物的致突变作用可能与其在体内的代谢活化有关，因此需要进一步研究致突变物的代谢活化过程及其与微核形成之间的关系。
实验五小鼠骨髓细胞微核试验
目录
CONTENTS
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 实验结果分析 • 结论与讨论
01 实验目的
了解微核试验的原理
微核试验是一种用于检测染色体畸变和DNA损伤的细胞遗传学方法。它通过观察细胞中微核（微小的细胞核）的数量，来评估细胞受到的遗传损伤程度。
染色体结构畸变
分析实验组和对照组的染色体结构畸变类型，如断裂、倒位、重复等。
染色体数目畸变
观察染色体数目畸变情况，包括非整倍体、多倍体等。
畸变类型与实验条件关系
探讨不同实验条件下染色体畸变类型的差异及其与实验条件的关系。
实验结果与预期结果的比较

骨髓细胞微核试验

骨髓细胞微核试验(保健食品)1.实验动物小鼠是微核试验的常规动物，也可选用大鼠。

通常用7周~12周龄，体重25g~30g的小鼠或体重150 g~200 g的大鼠。

每组用两种性别的动物至少各5只。

动物购买后适应环境至少3天。

2．剂量及分组受试物应设三个剂量组，最高剂量组原则上为动物出现严重中毒表现和/或个别动物出现死亡的剂量，一般可取1/2LD50，低剂量组应不表现出毒性，分别取1/4LD50和1/8LD50作为中、低剂量。

急性毒性试验给予受试物最大剂量（最大使用浓度和最大灌胃容量）动物无死亡而求不出LD50时，高剂量组则按以下顺序：a) 10g/kg体重; b)人的可能摄入量的100倍;或c) 一次最大灌胃剂量进行设计，再下设中、低剂量组。

另设溶剂对照组和阳性对照组。

阳性对照物可用环磷酰胺40mg/kg体重经口或腹腔注射(首选经口)给予。

3．操作步骤3.1 受试物配制一般用蒸馏水作溶剂，如受试物不溶于水，可用食用油、医用淀粉、羧甲基纤维素等配成乳化液或悬浊液。

受试物应于灌胃前新鲜配制，除非有资料表明以溶液(或悬浊液、乳浊液等)保存具有稳定性。

3.2 实验动物的处理经口灌胃。

根据细胞周期和不同物质的作用特点，可先做预试，确定取材时间。

常用30h给受试物法。

即两次给受试物间隔24h，第二次给受试物后6h，颈椎脱臼处死动物。

3.3 标本制备取胸骨或股骨,用止血钳挤出骨髓液与玻片一端的小牛血清混匀,常规涂片,或用小牛血清冲洗股骨骨髓腔制成细胞悬液涂片,涂片自然干燥后甲醇固定5~10min。

当日固定后保存。

将固定好的涂片放入Gleams应用液中，染色10~15 min，立即用pH6.8的磷酸盐缓冲液或蒸馏水冲洗、晾干。

写好标签，阴凉干燥处保存。

3.4 阅片选择细胞完整、分散均匀、着色适当的区域,在油镜下观察。

以有核细胞形态完好作为判断制片优劣的标准。

本法系观察嗜多染红细胞的微核。

用Giemsa染色法，嗜多染红细胞呈灰蓝色，成熟红细胞呈粉红色。

骨髓细胞微核实验报告

骨髓细胞微核实验报告1. 背景骨髓细胞微核实验是一种常用的细胞遗传毒性检测方法，用于评估物质对人体细胞的影响。

该实验可以通过观察细胞核中的微核数量来判断物质是否具有诱发染色体损伤的能力。

在临床研究和毒理学评价中，骨髓细胞微核实验被广泛应用于药物筛选、环境污染物评估和职业危害监测等领域。

2. 实验目的本次实验旨在通过骨髓细胞微核实验，对不同浓度的化学物质进行评估，分析其对人体细胞的遗传毒性作用，并提出相应的建议。

3. 实验方法3.1 实验材料和设备•骨髓细胞培养基•不同浓度的化学物质溶液•细胞培养器•显微镜•细胞计数板•玻璃干片3.2 实验步骤1.采集实验对象的骨髓细胞，并将其接种在含有培养基的细胞培养器中，保持适宜的温度和湿度。

2.将不同浓度的化学物质溶液分别加入不同培养器中，同时设置对照组。

3.在一定时间后，将细胞样本离心并进行固定处理。

4.制备玻璃干片，并使用吉姆萨染色法染色。

5.在显微镜下观察细胞核中的微核数量，并记录下来。

4. 数据分析根据实验结果，我们可以得出以下结论：1.不同浓度的化学物质对骨髓细胞核中微核数量产生了影响。

随着化学物质浓度的增加，微核数量呈现出明显的上升趋势。

2.与对照组相比较，实验组细胞核中微核数量明显增加，表明该化学物质具有一定的遗传毒性作用。

5. 结果讨论本次实验结果表明该化学物质具有一定的遗传毒性作用。

微核是染色体损伤的指示器之一，其数量的增加可能意味着染色体断裂、染色体片段丢失或整个染色体的缺失。

这些染色体损伤与遗传突变和癌症等疾病的发生相关。

基于实验结果，我们建议：1.避免长时间接触该化学物质，特别是高浓度的暴露。

2.在工作场所进行必要的防护措施，如佩戴防护口罩、手套和工作服等。

3.进一步深入研究该化学物质的毒性机制和致突变潜能，以便更好地评估其对人体健康的风险。

6. 结论通过骨髓细胞微核实验，我们评估了一种化学物质对人体细胞的遗传毒性作用，并得出结论该化学物质具有一定的遗传毒性。

实验三小鼠骨髓细胞微核试验

实验三小鼠骨髓细胞微核试验实验三：小鼠骨髓细胞微核试验一、实验目的本实验旨在通过观察小鼠骨髓细胞微核率的变化，了解并评估骨髓细胞受到的损伤程度，为进一步研究生物样品中的毒性物质及其潜在危害提供依据。

二、实验原理微核试验是一种检测染色体畸变的快速、敏感的方法，常用于评价各种因素对机体的遗传毒性。

微核是由染色体的片段或整个染色体在细胞分裂后期或末期未能进入子代细胞核而形成的，因此微核率的高低可反映细胞染色体受损的程度。

骨髓细胞微核试验常用于检测体内外接触毒物的程度及检测药物的遗传毒性。

三、实验步骤1.选取健康的成年小鼠，进行试验前处理，包括脱毛、称重等。

2.对小鼠进行腹腔注射或口服给予不同剂量的待测毒物。

3.分别于24小时、48小时和72小时三个时间段采集小鼠骨髓细胞，制备骨髓细胞涂片。

4.对涂片进行染色处理，以便观察和计数。

5.在显微镜下观察每个涂片，记录微核数并计算微核率。

6.统计分析数据，对比不同剂量组与对照组的微核率差异。

7.根据实验结果，评估待测毒物的遗传毒性及对骨髓细胞的损伤程度。

四、实验结果与数据分析经过对小鼠骨髓细胞微核率的观察和计数，我们得到了不同剂量组与对照组的微核率数据。

通过对比分析，我们发现随着待测毒物剂量的增加，小鼠骨髓细胞的微核率也逐渐升高。

这表明待测毒物具有明显的遗传毒性，能够导致骨髓细胞的损伤。

为了更直观地展示实验结果，我们可以使用柱状图或折线图来表示不同剂量组与对照组之间的微核率差异。

通过观察图表，可以清楚地看到随着毒物剂量的增加，微核率也逐渐升高。

这进一步证实了待测毒物的遗传毒性和对骨髓细胞的损伤作用。

五、实验结论通过本实验，我们得出以下结论：1.待测毒物具有明显的遗传毒性，能够导致小鼠骨髓细胞的损伤。

2.随着待测毒物剂量的增加，小鼠骨髓细胞的微核率也逐渐升高。

3.实验结果提示，待测毒物可能对机体产生一定的危害作用，需要进一步研究其对人体健康的潜在影响。

4.微核试验作为一种快速、敏感的检测方法，可用于评估生物样品中的毒性物质及其潜在危害。

3.小鼠骨髓细胞微核试验

Giemsa染色时网织红细胞呈蓝灰色，称为多染红细胞；而成熟红细胞染色呈橘红色，称为正染红细胞。
三.实验步骤 1.染毒：昆明种小鼠，环磷酰胺100mg/kg腹腔注射。 2.骨髓液制备和涂片：颈椎脱臼处死动物。解剖后取胸骨或股骨，去除肌肉，剪去骨骺，将骨髓挤出或冲洗出，滴于载玻片推片。 3.固定：晾干后甲醇固定15秒，取出晾干。 4.染色：晾干后以新鲜配制的Giemsa染液染色5-10分钟，自来水冲洗，晾干。 5.观察计数：低倍镜选择分布均匀、染色较好的区域，油镜下观察计数。含有微核的PCE/1000个PCE；PCE/NCE。
实验三小鼠骨髓多染红细胞微核试验
重庆医科大学实验教学管理中心公共卫生实验原理 3.掌握镜下辨认微核的技术
二.实验原理：细胞分裂过程中在染色体断裂剂或纺锤体毒物作用下，细胞染色体断裂产生不含着丝粒的断片，或者整条染色体遗失在细胞质中，形成微核。染色与主核一致，大小相当于细胞直径的1/20-1/5，圆形或椭圆形，一个或多个。在多种细胞中出现。在红细胞成熟前组后一次分裂后数小时主核排除而微核保留。
红细胞发育过程：骨髓多能干细胞→定向干细胞→原红细胞→早幼红细胞→中幼红细胞→晚幼红细胞→网织红细胞→成熟红细胞从原红细胞到晚幼红细胞需分裂3-4次。形成晚幼红细胞后即不再分裂，在发育过程中主核排出形成网织红细胞。网织红细胞含有少量RNA，甲酚蓝染色成蓝色丝网状。网织红细胞进一步发育，RNA消失成为成熟红细胞。
四.结果分析与评价 1.PCE/NCE比值约为1（0.6-1.2）。比值小于0.1表明PCE生成严重受抑制，染毒剂量过大。 2.用统计方法分析结果。五.实验成功的关键 1.制作良好的骨髓涂片 2.优质的染色

小鼠骨髓细胞微核试验

小鼠骨髓细胞微核试验
小鼠骨髓细胞微核试验是一种用于检测物质对小鼠骨髓细胞基因毒性的方法。

骨髓细
胞微核是正常细胞中小核细胞数量的标志。

在受到某些化学物质的影响后，骨髓细胞可以
形成异常小鼠骨髓微核和形态不规则的细胞，这是指指出该物质可能是致癌物或基因毒物，因此，这种试验可以用于评估某种物质对人类健康的风险。

在小鼠骨髓微核试验中，通常将小鼠的骨髓细胞放置在培养基中进行培养，然后将待
检物质加入培养中。

待检物质可能是化学物质、辐射或生物质等。

随后，经过一定时间后，分离的细胞会被染色并进行显微镜检查，以确定细胞数量和微核的数量。

通过小鼠骨髓细胞微核试验得出的结果可以帮助研究人员判断待检物质是否是基因毒
物和可能是致癌物，是否影响细胞的正常生长和健康。

因此，小鼠骨髓细胞微核试验已成
为一种广泛使用的实验室技术，以评估物质的潜在致癌性和毒性。

总之，小鼠骨髓细胞微核试验是一种快速且有效的实验室技术，用于评估化学物质、
辐射等物质对人类健康的影响和风险。

虽然该方法需要一定的经验和技能，但它已被广泛
使用于实验室中，并成为确定制定公众卫生政策的重要工具之一。

骨髓细胞微核试验

骨髓细胞微核试验(保健食品)1.实验动物小鼠是微核试验的常规动物，也可选用大鼠。

通常用7周~12周龄，体重25g~30g的小鼠或体重150 g~200 g的大鼠。

每组用两种性别的动物至少各5只。

动物购买后适应环境至少3天。

另设溶剂对照组和阳性对照组。

阳性对照物可用环磷酰胺40mg/kg体重经口或腹腔注射(首选经口)给予。

3．操作步骤3.1 受试物配制一般用蒸馏水作溶剂，如受试物不溶于水，可用食用油、医用淀粉、羧甲基纤维素等配成乳化液或悬浊液。

受试物应于灌胃前新鲜配制，除非有资料表明以溶液(或悬浊液、乳浊液等)保存具有稳定性。

3.2 实验动物的处理经口灌胃。

根据细胞周期和不同物质的作用特点，可先做预试，确定取材时间。

常用30h给受试物法。

即两次给受试物间隔24h，第二次给受试物后6h，颈椎脱臼处死动物。

当日固定后保存。

将固定好的涂片放入Gleams应用液中，染色10~15 min，立即用pH6.8的磷酸盐缓冲液或蒸馏水冲洗、晾干。

写好标签，阴凉干燥处保存。

3.4 阅片选择细胞完整、分散均匀、着色适当的区域,在油镜下观察。

以有核细胞形态完好作为判断制片优劣的标准。

本法系观察嗜多染红细胞的微核。

用Giemsa染色法，嗜多染红细胞呈灰蓝色，成熟红细胞呈粉红色。

实验四.小鼠骨髓细胞微核试验

院系：理学院专业：农药学学号：0931******* 姓名：王熠实验四：小鼠骨髓细胞微核试验1、实验目的通过检测哺乳动物骨髓细胞中嗜多染红细胞（PCE）的微核出现率，间接反映骨髓细胞染色体畸变发生率的高低，从而判断受试动物是否具有致突变作用。

主要用于测试干扰细胞有丝分裂的物质。

2、实验原理微核可以出现在多种细胞中，但在有核细胞中较难与正常核的分叶及核突出物相区别。

红细胞在成熟之前最后一次分离后数小时可将主核排出，但微核仍保留于PCE细胞中，因此可通过计数PCE细胞中的微核来判断受试物的致突变作用。

3、实验材料3.1实验动物7～12周龄健康小鼠，体重20~30g，10只，雌雄各半。

3.2试剂小牛血清（灭活）；甲醇；姬姆萨染色液：磷酸盐缓冲液（pH6.8）：丝裂霉素C。

3.3器材生物显微镜、恒温水浴箱、解剖剪、镊子、止血钳、注射器、灌胃针头、载玻片、玻璃染色缸、塑料吸瓶、吸管、乳钵、干净纱布、滤纸等。

4、操作步骤4.1试剂的配制4.1.1小牛血清（灭活）小牛血清滤菌后置于56℃恒温水浴保温30 min进行灭活。

4.1.2磷酸盐缓冲液（pH 6.8）1/15mol/L磷酸氢二钠溶液：磷酸氢二钠(Na2HPO4) 9.47 g溶于1000ml蒸馏水中;1/15mol/L磷酸二氢钾溶液：磷酸二氢钾(KH2PO4) 9.07g溶于1000ml蒸馏水中;1/15mol/L磷酸氢二钠溶液50ml与1/15mol/L磷酸二氢钾溶液50ml混合即可。

4.1.3姬姆萨染色液将Giemsa染料和少量甲醇于乳钵里仔细研磨，再加入甲醇至375 ml，待完全溶解后，再加入125ml甘油，混合均匀。

置37℃恒温箱中保温48h。

保温期间振摇数次，促使染料的充分溶解。

取出过滤，即为姬姆萨储备液，两周后可使用。

实验前取姬姆萨储备液与磷酸盐缓冲液（pH 6.8）1 : 9混匀，即可。

4.2实验动物的处理步骤如下:（1）给药根据急性LD50，选用使动物出现中毒，但不引起动物死亡的剂量，受试小鼠腹腔注射丝裂霉素C1.5～2mg/kg（2）骨髓细胞液的制备在给与受试物6h后，小鼠脱颈椎处死，打开胸腔，沿着胸骨柄与肋骨交界处剪断，剥掉附着其上的肌肉，用滤纸擦干血污（3）PCE及微核的观察涂片在洁净的玻片一端滴小牛血清1滴，横向剪开胸骨，暴露骨髓腔，然后用止血钳挤出骨髓液至血清中，混匀，推片（长度约2～3cm），在空气中晾干（一般以两节胸骨髓液涂一张片子为宜）固定将干燥的涂片置甲醇液中固定5～10min，取出晾干染色固定好的涂片放入姬姆萨应用液中染色15～30min，蒸馏水冲洗，干燥镜检先在低倍镜下观察，选择分布均匀，染色较好的视野，然后换到油镜下观察计数。

小鼠骨髓细胞微核及精子畸形实验5

（三）PCE及其微核形态
MN
NCE
MN
MN
MN
当前9页，共22页，星期二。
当前10页，共22页，星期二。
当前11页，共22页，星期二。
二、正常精子及畸形形态
精子畸形
• 精子畸形如圆锥形头､双头､双尾､尾卷曲等
• 精子畸形率的增高,往往间接反映了睾丸生精功能的障碍,也必然影响到精子的活力和受精能力｡
当前15页，共22页，星期二。
无
香
钩
蕉
头
当前16页，共22页，星期二。
胖头
当前17页，共22页，星期二。
双头
双尾
当前18页，共22页，星期二。
尾折叠
无定型
当前19页，共22页，星期二。
双头双尾
当前20页，共22页，星期二。
无定型
当前21页，共22页，星期二。
无钩
当前22页，共22页，星期二。
一、小鼠骨髓细胞形态及微核形态
（一）基本概念
• 微核（Micronucleus，MN）：是在细胞的有丝分裂
后期染色体有规律地进入子细胞形成细胞核时，仍然滞留在细胞质中的染色单体或染色体的无着丝点断片，或因纺锤体受损而丢失的整条染色体。它在末期以后，单独形成一个或几个规则的次核，被包含在子细胞的胞质内而形成，因比主核小，故称为微核。
成熟红细胞，因其核糖体已消失，可通过选择性的染色而与未成熟红细胞区别开来。
当前2页，共22页，星期二。
PCE与NCE在光镜下的区别
胞
名称
胞体
核
PCE 椭圆或圆盘状无
NCE 圆盘状
无
胞着色灰蓝色桔黄色
质分布不均匀均匀来自当前3页，共22页，星期二。

微核试验实验报告

一、实验背景微核试验是一种常用的遗传毒理学检测方法，用于评估化学物质、药物或其他环境因素对生物体的遗传毒性。

本实验采用小鼠骨髓细胞微核试验，旨在检测某化学物质对小鼠骨髓细胞的遗传毒性。

二、实验目的1. 观察某化学物质对小鼠骨髓细胞微核形成的影响。

2. 评估该化学物质的遗传毒性。

3. 探讨该化学物质对小鼠骨髓细胞DNA损伤的机制。

三、实验材料与仪器1. 实验动物：清洁级雄性昆明小鼠，体重18-22g。

2. 实验试剂：某化学物质、生理盐水、小牛血清、RPMI-1640培养基、吖啶橙染液等。

3. 实验仪器：显微镜、细胞培养箱、细胞培养板、电子天平等。

四、实验方法1. 实验分组：将小鼠随机分为对照组和实验组，每组10只。

2. 给药：实验组小鼠按0.5ml/只的剂量给予某化学物质，对照组小鼠给予等体积的生理盐水。

3. 采样：给药后24小时，处死小鼠，取骨髓细胞。

4. 细胞培养：将骨髓细胞接种于细胞培养板，置于细胞培养箱中培养。

5. 染色：细胞培养至适宜时期，用吖啶橙染液染色。

6. 观察与计数：显微镜下观察骨髓细胞，记录微核细胞数。

7. 数据处理：采用SPSS软件进行统计学分析，比较各组间微核率差异。

五、实验结果1. 对照组小鼠骨髓细胞微核率为（5.6±1.2）%，实验组小鼠骨髓细胞微核率为（10.8±2.5）%。

2. 实验组小鼠骨髓细胞微核率显著高于对照组（P<0.05）。

六、实验结论1. 某化学物质对小鼠骨髓细胞具有遗传毒性。

2. 该化学物质可能导致小鼠骨髓细胞DNA损伤，进而引发微核形成。

七、实验讨论1. 微核试验是一种简单、快速、灵敏的遗传毒理学检测方法，可用于评估化学物质、药物等对生物体的遗传毒性。

2. 本实验结果表明，某化学物质对小鼠骨髓细胞具有遗传毒性，可能与DNA损伤有关。

3. 进一步研究应探讨该化学物质对小鼠骨髓细胞DNA损伤的机制，为该化学物质的安全性评价提供依据。

小鼠骨髓微核实验骨髓细胞悬液制备的基本实验流程

小鼠骨髓微核实验骨髓细胞悬液制备的基本实验流程1.测试动物和治疗（1）动物的选择：常用的实验动物是大型和小鼠。

小鼠是使用最广泛的，需要18至20克体重和7至12周龄的体重。

每组中的小鼠数量为10只，雌雄各占一半。

（2）中毒途径：根据研究目的或所测试化学毒物的性质，可选择口服，经皮，呼吸和注射途径。

但原则上，应采用与人接触化学毒物相同的方式。

（3）中毒频率和采样时间：研究已经证实，化学毒物需要在目标器官中积累到一定浓度才能产生诱变作用。

不同化学毒物诱导的微核的峰值时间也不同。

波动范围可达24?72h。

这就要求在接触化学毒物后建立不同的采样时间点。

考虑到上述两个原因，建议使用多种曝光方法。

其中，四次曝光更方便合理。

也就是说，每天一次，连续4天，第5天采样。

这样，样品可以覆盖24?72h 的峰，并且如果峰延迟至96h，则不会错过。

（4）剂量选择：被测化学毒物的最大剂量应为最大耐受量，但溶解度极限除外。

如果是叶子，应设定3至5个或更多剂量组。

剂量范围应正确且连续。

腹腔注射环磷酰胺（50?100mg / kg）或丝裂霉素C（10mg / kg）一次即可。

或2次。

静脉注射使用等体积的溶剂。

2.骨髓液的制备和涂片在最后一次暴露测试动物后，在确定的时间通过颈脱位或麻醉处死它们。

将四肢固定在解剖板上，用头发浸透腹部的中线，切开胸腹部，除去胸骨，并清洗血液。

，去除肌肉，切断骨the，使用小的弯曲止血钳在干净的玻璃载玻片上挤入骨髓，并滴加小牛血清，混合均匀，然后推动载玻片。

或者，在处死动物后，用手术剪刀除去股骨，除去肌肉，用生理盐水洗净血液和碎肉，切掉分离的骨physi，并使用带针的2ml注射器吸小牛血清。

插入骨髓腔，将颗粒冲洗到离心管中，然后使用移液管吹动微观肿块以校正均匀性。

以1000r / min的速度离心10分钟，弃去多余的上清液，并与沉淀物混合约0.5ml。

用滴管吸出并将一滴滴在干净的玻璃载玻片上，然后推动载玻片。

微核和骨髓细胞2

诱变物质的微核试验和小鼠骨髓细胞染色体标本制备与观察
实验时间
2012年11月2日至9日
实验室
生科院224试验室
1．实验目的
（1）诱变物质的微核试验的实验目的
a了解微核发生的机制；
b掌握微核实验的一般程序和实践意义；
c掌握对实验动物进行药物处理的一般程序；
d掌握进行实验设计的一般程序和规则，并锻炼实践能力。
[3]耿德贵，王秀琴，刘士旺等.除草剂使它隆对黄鳝细胞的致突变作用研究.环境与健康杂志，2000，17（2）103-105.
[4]周晓蓉，李百祥，邱向红等.小鼠骨髓及肝血中嗜多染红细胞微核率的比较.卫生毒理学杂志，1999，13（1）66-67.
[5]曹佳.微核实验在中国的应用、发展与展望.遗传，2003，25（1）73-76.
13
阴性对照蒸馏水
3
2
1
4
3
5
3
9
阳性对照环磷酰胺
40mg/kg体重
38
44
45
40
36
41
43
39
表2对苯二酚对动物骨髓嗜多染红细胞微核发生率
组别剂量动物数受检细胞数含微核细胞数微核率P值
(g/kg体重) (只) (个) (个) (‰)
受试物
120
8
8000
对苯二酚
80
8
8000
40
8
8000
溶剂对照（蒸馏水）
(2)实验流程
3．实验设备及材料
（1）诱变物质的微核试验
仪器和器械：
生物显微镜、解剖剪、镊子、注射器、载玻片、盖玻片、塑料吸瓶、吸水纸等。
试剂及配制：（a）小牛血清（灭活）
将滤菌的小牛血清置于56℃恒温水浴保温30min灭活。灭活的小牛血清通常保存于冰箱冷冻室里。

骨髓细胞微核实验报告

骨髓细胞微核实验报告骨髓细胞微核实验是一项常用的毒理学检测方法，可以有效地评价某种物质对DNA损伤的影响，具有重要的毒性评价价值。

本文将对骨髓细胞微核实验进行详细的介绍和解读，为相关研究人员提供指导。

一、骨髓细胞微核实验原理骨髓细胞微核实验是通过体外培养动物骨髓细胞，观察其亚微米级大小的微核（Micronucleus，MN）形成情况来评价物质对DNA损伤的影响。

在骨髓细胞分裂时，如果染色体发生异常分离或断裂，就会产生一个或多个亚微米级的小核结构，称为微核。

微核中包含未被分离的染色体片段或全染色体，它们将被保留在新细胞核内，从而形成有两个或多个核的细胞。

形成微核的细胞与正常细胞相比，DNA的稳定性已经受到了不同程度的损伤。

因此，骨髓细胞微核实验通过检测细胞中微核的数量和形态，可以初步判断某种物质对DNA的损伤程度，进而评价其毒性。

二、骨髓细胞微核实验步骤1. 骨髓细胞培养：将动物骨髓细胞取出，利用适当的培养基进行体外培养。

通常可以采用罗氏61#或麦戈文液等培养基，具体选择应根据实验需要确定。

2. 处理检测物质：将待检测物质加入到骨髓细胞培养基中，通常需要设立不同的浓度梯度，以便观察物质对骨髓细胞DNA损伤的剂量效应。

3. 细胞收集：培养一定时间后，用适当的方法收集细胞，可选择离心法或离心浓缩法等，通常可在离心时加入适当的溶解剂溶解红细胞。

4. 细胞扩增：将收集到的细胞加入到分装好的培养皿中，加入细胞生长因子，推动细胞继续增殖。

5. 制片染色：取适当量的细胞悬液，制作染色片并染色。

一般情况下，常用的染色方法包括单盐酸染色、儿茶酚蓝染色和吉姆萨染色等。

6. 观察分析：观察所制的染色片，采用恒定镜观察和计数，并对微核数量和形态进行统计分析。

为了获得稳定可靠的数据，一个实验通常需要做多组重复测定。

三、常见问题解答1. 什么因素会影响骨髓细胞微核实验的结果？骨髓细胞微核实验受多种因素影响，如细胞染色质特征、培养时间和环境温度等，需要掌握合适的技术方法和实验环境。