如何制作药敏试纸和药敏实验
药敏试验的步骤
药敏试验的步骤药敏试验药敏纸片法药敏纸片法是最常用的一种试验方法,能直接体现出抗菌药物的抗菌效用,其优点是:直观明显,对比鲜明,有一定的实验依据。
缺点是:仅表现体外抗菌效果,由于抗菌药物在体内受体液环境,代谢分布,组织扩散浓度,半衰期等因素的影响,个别药物并不能真实反应出实际的抗菌疗效。
下面介绍抗菌药物的药敏纸片法。
试验材料经分离和鉴定后的纯培养菌株(例如大肠杆菌、链球菌等),营养肉汤,琼脂平皿,棉拭子,镊子,酒精灯, 药敏纸片若干。
1.1药敏纸片的制作方法将要试验的抗菌药物按其有效浓度稀释成1mL备用,脂溶性的抗菌药物使用乙醇或丙酮溶解。
用打孔器将滤纸打成6mm直径的圆片100张高压灭菌,加入到抗菌药物有效浓度1mL稀释液中充分混合,阴凉处干燥备用。
多种联合的抗菌药物制剂以其成分中某种含量最高的抗菌药物为标准稀释成有效浓度。
抗菌中草药药敏纸片的制作:取中草药粉剂1g加适量的水充分浸泡煮沸,滤液浓缩成1mL,也加入100张纸片干燥备用。
1.2药敏试验的操作步骤1.2.1 取自然发病动物的病料心血、脾、肝脏、淋巴结或病变明显的组织无菌操作接种鉴别培养基37℃分离培养24h,选典型菌落备用。
1.2.2 将病料中分离出的病原菌用密集划线法或涂布法接种至专用琼脂平板培养基上,均匀的粘贴各药敏纸片,并记录每种抗菌药物药敏纸片的位置。
1.2.3 37℃培养12~18h,取出观察结果。
1.3判定结果1.3.1 量取各药敏纸片抑菌直径大小,并仔细观察抑菌圈的清晰度,通常直径小于10mm的判为该抗菌药物为低度敏感,10~15mm之间为中度敏感,15~25mm为高度敏感,25mm以上为极度敏感。
1.3.2 抑菌圈边缘分界清晰,内部洁净透明,说明该抗菌药物作用迅速,多半为杀菌剂;边缘十分清晰,内部朦胧说明该抗菌药物可能是慢效抑菌剂或有耐药的产生,或分解较快维持抗菌时间短。
1.3.3 抑菌圈中分层次形成同心年轮样,说明可能是联合使用抗菌药物或该抗菌药物失效过快或细菌产生了耐药性。
药敏纸片的制备
药敏纸片的制备及药敏试验方法抗菌药物对预防或治疗动物疾病发挥了巨大的作用,但随着抗菌药物在兽医临床的广泛使用,尤其为了防治疾病,常常以亚剂量水平的药物添加于饲料中,以致长期使用后病原微生物产生了耐药性,使本来对治疗病原微生物感染有效的抗菌药物失去作用,给兽医临床上有效地预防和治疗疾病的发生带来一定的困难。
通过制作自家药敏纸片进行试验,可快速进行药物的筛选,获得对病原微生物敏感的药物, 对指导临床合理用药,提高治疗效果,节约养殖过程的用药费用,有着重要的意义。
一. 药敏纸片的制备1.材料抗菌药物、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、冰醋酸、新华1号定性滤纸、50mL容量瓶、无菌过滤器或一次性过滤器等2.方法2.1 PBS的配制A.制备0.2mol/L储备液0.2mol/LNa2HPO4 :35.61g Na2HPO4.2H2O+1000 mL蒸馏水或71.62g Na2HPO4.12H2O+1000 mL蒸馏水0.2mol/L NaH2PO4 :31.2g NaH2PO4.2H2O+1000 mL蒸馏水或27.6g NaH2PO4.H2O+1000 mL蒸馏水B.将两种储备液按下表比例,配制成不同pH值的PBS,室温保存备用0.2mol/L磷酸缓冲液的配制2.2 抗菌药物原液的配制和保存期限抗菌药物溶剂浓度(?g/mL)-20℃4℃青霉素pH6.0 PBS 1280 3个月1周半合成青霉素类pH6.0 PBS 1280 3个月1周头孢菌素类pH7.8 PBS 1280 3个月1周氨基糖苷类pH7.8 PBS 1280 3个月4周四环素类pH4.5 PBS 12803个月1周多粘菌素B硫酸盐pH6.0 PBS 12803个月2周林可或氯林可霉素pH7.8 PBS 12803个月2周12803个月2周红霉素先用少量乙醇溶解,再用pH7.8 PBS1280长期长期氯霉素先用少量乙醇溶解,再用pH6.0 PBS12803个月1周利福平先用甲醇溶解,再用pH6.0PBS万古霉素蒸馏水12803个月2周两性霉素B 蒸馏水12803个月1周12803个月2周5-氟胞嘧啶先用少量二甲基甲酰胺溶解,再用蒸馏水1280长期长期甲氧苄氨嘧啶先用0.1mol/L乳酸溶解再用蒸馏水稀释2560长期长期各种磺胺药先用NaoH溶解再用蒸馏水稀释2.2.2 配制方法A.按抗菌药物原液中药物百分含量的要求,计算出纯抗菌药物的重量,方法是:抗菌药物终浓度×终体积。
药敏实验流程
药敏实验流程(一)普通肉汤培养基的制作:1.NaCL5g, 牛肉膏3g,蛋白胨10g,蒸馏水1000ml,PH7.2~7.6, 2%琼脂粉20 g。
2.先称取NaCL,牛肉膏,蛋白胨易于潮解最后称取,放于烧杯中溶解,玻璃棒搅拌。
3.用PH试纸或PH校正仪调PH值,偏酸加1mol/L的NaOH,偏碱加1mol/L的HCL。
4.用量筒再量一次加入2%的琼脂粉玻璃棒搅拌溶解。
5.盖上硅胶塞,用8层纱布橡皮筋扎好,再用4层报纸包好,令用两层报纸包扎相应数量的平板,121°灭菌20分钟。
6.把已灭菌了的平板放于烘箱内使其干燥或拆开报纸倒放于无菌工作台内使上面的水珠蒸发。
7.做好无菌室的准备工作,待培养基的温度合适时开始倒平板,每个倒25~30ml,一般下午用时上午倒平板,第二天上午用时前一天下午倒平板,若用不完的培养基倒置于4°冰箱保存一周内用完。
(二)接种培养:1..用酒精棉球檫试要解剖的鱼的体表部位,解剖后用酒精棉球檫试要取的发病组织(肝脾肠)。
2.点燃酒精灯,用灭菌了的镊子取发病组织剖面涂抹于培养基一角,用着烧过的接种环在培养基内做三四划线或“之”子划线,做上标记,倒置于37°恒温培养箱内培养18~24h。
(三)贴药敏纸片:在无菌工作台内用接种环挑取优势菌落在培养基内做“米”字划线,用已灭菌了的有齿镊子贴药敏纸片于已经做“米”字划线的培养基,做上标记,10min后放于37°培养箱内培养18~24h. (四)观察结果:记录抑菌圈的大小并排序,填实验结果报告单。
药敏纸片制备流程一、实验所需仪器及试剂打孔器、小瓶、容量瓶、培养皿、10ml移液管、眼科镊、小烧杯等。
0.1M NaOH、0.85%生理盐水、200ml无菌水、恩诺沙星、盐酸土霉素、氟苯尼考。
二、制备流程1、取新华1号定性滤纸,用普通的打孔器打成直径为6mm的圆形小纸片,取出8只小瓶装入50片圆纸片(小瓶干燥洁净)用单层牛皮纸包扎好。
药敏实验的操作规程
药敏实验的操作规程药敏实验是一种常用的实验方法,用于测试不同药物对细菌的敏感性。
其操作规程如下:1. 准备工作a. 选择适当的培养基:根据实验目的和细菌的需求,选择适合的培养基。
常用的培养基有Muller-Hinton (MH) 培养基和血琼脂基质(Blood Agar)。
b. 准备药物:根据研究的需求,选择要测试的药物,先进行浓度调节并制备药物试液。
c. 选择试验细菌:选择需要测试的细菌菌株,可选择多种细菌进行测试。
2. 制备药物试液a. 根据药物的浓度和用途,按照配制方法将药物试液制备好。
b. 对于不同药物,可根据需要设定不同的浓度梯度。
通常使用两倍稀释法制备浓度梯度。
3. 制备细菌悬浮液a. 从培养基中取出所需菌株,并用无菌生理盐水进行洗涤,以去除残余培养基或其他杂质。
b. 将菌株悬浮于无菌生理盐水中,通过眼镜划线计数法或光密度测定法调整细菌悬浮液的浓度至合适的范围。
4. 进行测定a. 在MH培养基或血琼脂基质上均匀涂布细菌悬浮液,使其形成薄膜。
b. 将培养基上涂有菌株的培养皿分成数个区域,每个区域均加入一种药物试液。
c. 用无菌的扩菌针分别在每个区域上刺入药物试液,使药物试液与菌株接触。
d. 将培养皿孵育于适当的环境条件下,一般为37℃,孵育时间根据实验目的而定,通常为24小时。
5. 结果判读a. 在观察期间,观察每个区域的菌落生长情况。
b. 比较不同药物试液对细菌生长的影响,评定其敏感性。
c. 根据实验目的和相应参考标准,判断细菌对药物的敏感性、中等敏感性或耐药性。
6. 数据处理和分析a. 统计每个药物试液对细菌的抑菌效果,记录菌落生长情况。
b. 根据实验结果,绘制抑菌效果图或者计算药物的最小抑菌浓度(MIC)。
7. 实验注意事项a. 所有操作必须在无菌条件下进行,避免细菌的污染。
b. 实验人员必须戴上手套,避免药物对皮肤造成刺激。
c. 严格按照药物的安全操作规程进行操作,避免药物泄漏和误服。
药敏纸片的制备完整版
药敏纸片的制备HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】药敏纸片的制备及药敏试验方法抗菌药物对预防或治疗动物疾病发挥了巨大的作用,但随着抗菌药物在兽医临床的广泛使用,尤其为了防治疾病,常常以亚剂量水平的药物添加于饲料中,以致长期使用后病原微生物产生了耐药性,使本来对治疗病原微生物感染有效的抗菌药物失去作用,给兽医临床上有效地预防和治疗疾病的发生带来一定的困难。
通过制作自家药敏纸片进行试验,可快速进行药物的筛选,获得对病原微生物敏感的药物, 对指导临床合理用药,提高治疗效果,节约养殖过程的用药费用,有着重要的意义。
一. 药敏纸片的制备1.材料抗菌药物、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、冰醋酸、新华1号定性滤纸、50mL容量瓶、无菌过滤器或一次性过滤器等2.方法PBS的配制A.制备L储备液LNa2HPO4: +1000 mL蒸馏水或 +1000 mL蒸馏水L NaH2PO4: +1000 mL蒸馏水或 +1000 mL蒸馏水B.将两种储备液按下表比例,配制成不同pH值的PBS,室温保存备用L磷酸缓冲液的配制抗菌药物原液的配制和保存期限-20℃4℃抗菌药物溶剂浓度(?g/mL)青霉素 PBS 1280 3个月1周半合成青霉素类 PBS 1280 3个月1周头孢菌素类 PBS 1280 3个月1周氨基糖苷类 PBS 1280 3个月4周四环素类 PBS 12803个月1周PBS 12803个月2周多粘菌素B硫酸盐PBS 12803个月2周林可或氯林可霉素12803个月2周红霉素先用少量乙醇溶解,再用 PBS1280长期长期氯霉素先用少量乙醇溶解,再用 PBS12803个月1周利福平先用甲醇溶解,再用PBS万古霉素蒸馏水12803个月2周两性霉素B 蒸馏水12803个月1周12803个月2周5-氟胞嘧啶先用少量二甲基甲酰胺溶解,再用蒸馏水1280长期长期甲氧苄氨嘧啶先用L乳酸溶解再用蒸馏水稀释各种磺胺药先用NaoH溶解再用蒸2560长期长期配制方法A.按抗菌药物原液中药物百分含量的要求,计算出纯抗菌药物的重量,方法是:抗菌药物终浓度×终体积。
药敏实验的原理实验报告
药敏实验的原理实验报告药敏实验的原理实验报告引言药物敏感性测试是一种常见的实验方法,用于确定细菌或真菌对不同药物的敏感性和抗性。
该实验报告旨在介绍药敏实验的原理、实验步骤和结果解读。
实验原理药敏实验的原理基于细菌或真菌对不同抗生素、抗真菌药物的敏感性差异。
在实验中,我们通常使用纸片扩散法或微量稀释法来评估药物的抗菌或抗真菌活性。
实验步骤1. 样品准备:收集需要测试的细菌或真菌样品,并进行纯化和培养。
2. 制备培养基:根据实验要求,制备适当的培养基,确保其含有必要的营养物质。
3. 纸片扩散法:将含有不同抗生素或抗真菌药物的纸片放置在含有细菌或真菌的培养基上,培养一段时间后观察生长情况。
4. 微量稀释法:将不同浓度的药物溶液加入含有细菌或真菌的培养基中,培养一段时间后观察生长情况。
5. 结果记录:记录不同药物对细菌或真菌的抑制效果,通常使用抑菌圈直径或最小抑菌浓度来评估药物的活性。
实验结果与讨论药敏实验的结果通常以抑菌圈直径或最小抑菌浓度来表示。
抑菌圈直径越大,说明药物对细菌或真菌的抑制作用越强。
最小抑菌浓度越低,说明药物对细菌或真菌的抑制作用越强。
根据实验结果,我们可以判断细菌或真菌对不同药物的敏感性和抗性。
如果细菌或真菌对某种药物表现出高度敏感性,那么该药物可能是治疗感染的有效选择。
相反,如果细菌或真菌对某种药物表现出抗性,那么该药物可能无法有效治疗感染。
实验注意事项1. 实验过程中要注意无菌操作,以避免外源性污染对结果产生干扰。
2. 实验中使用的药物应符合相关法规和规定,确保其安全性和有效性。
3. 实验室人员应遵守相关实验室安全规范,保护自身和他人的安全。
结论药敏实验是一种常见且重要的实验方法,用于评估细菌或真菌对不同药物的敏感性和抗性。
通过实验结果,我们可以选择合适的药物来治疗感染,并避免使用对细菌或真菌无效的药物。
药敏实验在临床医学和药物研发中具有重要的应用价值,可以指导临床用药和药物研发的方向。
药敏试验
药敏实验:
1、直接选用各药厂的成品药来做(瓶装、袋装、桶装等)
其他设备需要:恒温箱、培养皿、烧杯、蒸馏水、滤纸、打孔器、具体步骤如下:
2、称取1g成品药,溶于50ml蒸馏水中,一般5ml就能
做30-40个。
3、将滤纸用打孔器达成6mm的小圆纸片。
4、将小圆纸片放入配好的药液中浸泡1-2h。
5、将浸泡好的小圆纸片用镊子夹出,放到一干净、干燥
的培养皿中,不要重叠,重叠会使药量不均匀。
6、将放有湿药敏片培养皿放到恒温箱中烘干、可定时翻
动一下。
7、恒温箱温度不要太高,不超过60度。
8、短期使用可冷藏,长期使用冷冻,用多少,拿多少。
用时可在药敏片上编号。
9、固体培养基的配制:
5g营养琼脂加到100ml生理盐水中溶解。
高压灭菌,待其降到50度左右时,将其倒在培养皿中,待其冷却后可涂板,也可放于40度冷藏保存,用时取出涂板。
涂板时注意不要讲琼脂培养鸡表面弄得太湿,不利于细菌生长。
药敏试验的实验步骤及结果判定方法
药敏试验的实验步骤及结果判定方法一、实验准备在进行药敏试验之前,需要准备以下物品:1. 抗菌药物纸片。
2. 药敏试验培养基(如MH琼脂)。
3. 待测菌株。
4. 无菌棉签。
5. 吸管或微量加样器。
6. 手套、口罩和实验服。
7. 药敏试验记录表。
二、菌株接种1. 使用无菌棉签蘸取待测菌株,轻轻涂布在MH琼脂表面,确保菌株分布均匀。
2. 将涂布好的培养基放在37℃恒温箱中培养18-24小时。
三、药物稀释1. 根据抗菌药物的说明书,配置好所需浓度的药物溶液。
2. 使用吸管或微量加样器,将药物溶液按比例稀释。
四、药敏片制备1. 准备抗菌药物纸片,根据说明书要求进行剪裁。
2. 将抗菌药物纸片放在无菌平皿中,每片纸片标记对应的药物名称。
五、药敏试验1. 在培养基上标记好菌株的名称和实验日期。
2. 使用无菌棉签或吸管,将菌株涂布在药敏试验培养基上,确保菌株分布均匀。
3. 用无菌镊子取抗菌药物纸片,轻轻贴在培养基表面,每个药物纸片间隔15-20mm。
4. 将培养基放在37℃恒温箱中培养18-24小时。
六、结果判定1. 在规定时间内观察并记录每个抗菌药物纸片周围的抑菌圈大小。
2. 根据抑菌圈大小,参照抗菌药物的敏感度判定标准,判断菌株对药物的敏感度(如敏感、中介或耐药)。
3. 综合不同抗菌药物的敏感度结果,给出最终的药敏试验报告。
七、结果记录将实验步骤和结果详细记录在药敏试验记录表中,以便后续分析和报告编写。
记录内容包括:菌株名称、实验日期、药物名称、药物浓度、抑菌圈大小、敏感度判断和实验员等信息。
八、结果解读根据药敏试验结果,临床医生可以了解菌株对不同抗菌药物的敏感性和耐药性,从而选择合适的药物进行治疗。
药敏试验结果也是抗菌药物合理使用的重要依据,有助于减少耐药性的产生和抗生素的滥用。
同时,实验室可以通过药敏试验结果的统计分析,了解地区或医院内常见病原菌的耐药情况,为抗菌药物的研发和使用提供科学依据。
如何制作药敏试纸和药敏实验
近年来,随着抗菌药物的广泛应用,尤其是光谱及超光谱的抗菌药物的滥用,导致耐药性菌株逐年增多;环境的污染,以及养殖户的饲养管理意识跟不上,促使细菌性疾病的流行及发病率逐年上升;且使用抗菌素药物预防和治疗的效果越来越不理想,为了减少药物的滥用和耐药性的产生,在临床治疗前进行药敏试验筛选出有效的抗菌药物是十分必要的,正确选用药物是治疗和预防禽病的重要措施之一。
笔者根据近几年来的经验选用本公司的现有抗生素药物自制药敏片,通过药敏试验在临床上取得十分好的效果。
一、药敏片的制备1、纸片的选用在医疗器械公司购买定性滤纸,用0.6cm的打孔器把滤纸打成圆形纸片,分别装入洁净的青霉素小瓶内,50片/瓶,放入高压蒸汽锅内进行121℃灭菌20min,再放入60-100℃干燥箱烘干,冷却后放入洁净箱备用。
2、抗菌药液的配制选用本公司的抗菌药物,按我们习惯常用的药物浓度进行配比,如冀农杆特,规格为100g/瓶,习惯常用兑水量为400斤水,即用分析天枰称取0.2g的杆特5ml灭菌生理盐水置于灭菌的青霉素小瓶内,充分溶解后再吸取0.1ml于另一灭菌青霉素瓶内,加入3.9ml的灭菌生理盐水即可。
3、纸片的处理将以配制好的药物溶解加入装有纸片的青霉素小瓶内,每小瓶加0.5ml,应使纸片均匀的吸取药液,置4-8℃冰箱浸泡1小时左右,再将小瓶置37-50℃的温箱内2-3小时烘干。
制备好的干燥药敏片要密封好,置冰箱内8℃以下冷藏或零下14℃以下冷冻保存备用。
二、培养基制作1、选用市面上提供的营养琼脂,SS琼脂和麦康凯琼脂按说明配制(1)SS琼脂培养基的制作:称取SS琼脂粉5.8克,加入蒸馏水100毫升,加热煮沸溶解即可,冷至55℃倾注无菌平皿中备用。
(2)营养琼脂培养基的制作:称取营养琼脂3.8克,加至100ml蒸馏水中摇均匀,溶解煮沸121℃,高压灭菌15分钟,冷却至38℃,倾注无菌平皿中备用。
(3)麦康凯琼脂培养基的制作:称取5克麦康凯琼脂,加入蒸馏水100ml溶解摇均匀,煮沸,高压灭菌10磅15分钟,即可冷却至55℃,倾注无菌平皿中备用。
药敏试验的操作方法
药敏试验的操作方法
药物敏感性试验是一种常用的药物敏感性检测方法,它可以评估不同药物对细菌的杀菌效果。
操作步骤如下:
1. 准备培养基:根据实验需要选择适宜的培养基,如Mueller-Hinton琼脂培养基等,并按照说明书的要求制备好培养基。
2. 细菌的孵育:将需要测试的细菌株均匀涂布在琼脂培养基的表面上,然后在37C下孵育24小时,使得菌落生长。
3. 制备药物试验片:将需要测试的药物稀释成不同浓度的溶液,通常是2倍稀释系列。
将药物溶液滴在试验片上。
4. 放置试验片:将制备好的试验片放置在含有菌落的琼脂培养板上,并轻轻压平,使得药物溶液能够与细菌接触。
5. 孵育试验片:将装有试验片的琼脂培养板置于37C下孵育24小时,使得细菌在药物的作用下生长或者抑制生长。
6. 结果的观察和解读:观察试验片上细菌的生长情况,根据细菌对药物的敏感性判断药物的杀菌效果。
常用的评估标准是观察试验片上出现最低抑菌浓度(MIC)。
7. 数据记录和分析:将观察到的结果记录下来,并根据试验片上出现的细菌生长情况分析药物的抗菌活性。
值得注意的是,药物敏感性试验只是一种体外实验,并不能完全代表细菌在体内的敏感性。
因此,对于真实应用中的治疗选择,还需要综合考虑其他因素,并结合临床实践进行判断。
药敏试验操作
药敏试验操作实验步骤一、实验材料普通营养琼脂培养基:可去生化试剂店购买,做不同细菌的药敏试验可选择不同的培养基,如做大肠杆菌的药敏试验可选择普通营养琼脂或麦康凯培养基。
做沙门氏菌可选择血清培养基。
药敏试纸:购买或自制(详见实验准备)细菌:待做药敏试验的细菌仪器:接种环、酒精灯、打孔器、牛津杯、移液器、滴头二、实验准备2.1药敏片的准备:购买或自制2.1.1制备方法:取新华1号定性滤纸,用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。
取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中,瓶口以单层牛皮纸包扎。
经15磅15-20分钟高压消毒后,放在37℃温箱或烘箱中数天,使完全干燥。
2.1.2抗菌药纸片制作:在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升,并翻动纸片,使各纸片充分浸透药液,翻动纸片时不能将纸片捣烂。
同时在瓶口上记录药物名称,放37℃温箱内过夜,干燥后即密盖,如有条件可真空干燥。
切勿受潮,置阴暗干燥处存放,有效期3-6个月。
2.2药液的制备(用于商品药的试验):按商品药的使用治疗量的比例配制药液;如商品药百病消按其说明量治疗量0.01%饮水,可按这个比例配制药液,可取10毫克加入10毫升的水中混匀。
此稀释液即为用于做药敏试验的药液。
三、实验操作方法3.1药敏片法3.1.1在“超净台”中,用经(酒精灯)火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物,以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。
具体方式;用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌,以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。
然后,找到第二点划线至平皿的1/2,依次划线,直至细菌均匀密布于平皿。
(另:可挑取待试细菌于少量生理盐水中制成细菌混悬液,用灭菌棉拭子将待检细菌混悬液涂布于平皿培养基表面。
要求涂布均匀致密)3.1.2将镊子于酒精灯火焰灭菌后略停,取药敏片贴到平皿培养基表面。
为了使药敏片与培养基紧密相贴,可用镊子轻按几下药敏片。
为了使能准确的观察结果,要求药敏片能有规律的分布于平皿培养基上;一般可在平皿中央贴一片,外周可等距离贴若干片(外周一般可贴七片),每种药敏片的名称要记住。
药敏试验的操作方法及注意事项
药敏试验的操作方法及注意事项
(1)M-H平板的制备:将在约56℃恒温的无菌M-H琼脂倾注直径为90mm的平板,其厚度4mm。
(2)比浊管的配置:0.5麦氏比浊管的配置:取0.048mol/L的氯化钡溶液(1.175%w/v,BaCl2•2H2O)0.5ml,加至99.5ml0.18mol/L的硫酸溶液(1%v/v)中,不断搅拌使成混悬液。
取4~6ml硫酸钡混悬液,置与稀释菌悬液相同规格的具塞试管中,密封,室温避光保存。
(3)菌液的制备:A 肉汤法:无菌挑取菌落于MH肉汤中,摇菌2-6h;B 直接法:无菌挑取4-5个菌落于PBS中,混匀。
(4)比浊:将制备好的菌液与比浊液管置比色卡上对着光源比较,适当情况下可用无菌生理盐水或肉汤稀释菌悬液,使两者浊度一致,即菌悬液的浓度为0.5标准麦氏单位。
(5)涂菌:用无菌棉签浸入细菌悬液中,将拭子在试管上壁轻轻挤压以挤去过多的菌液。
棉签在三个方向均匀抹琼脂表面(每次转60℃)最后沿平板内缘涂抹一周,使菌液均匀分布。
(6)贴药敏片:用无菌镊子或纸片分配器将抗菌纸片粘贴于M-H琼脂的表面,一旦纸片贴上,不能移动;一般一个平皿贴5-6个药敏片。
(7)培养:一般细菌:37℃培养16~18h;流感和副流感嗜血杆菌:5%CO2 37℃16-18h。
(8)用游标卡尺取抑菌环直径,根据CLSI标准。
判断待测菌对抗生素是敏感,中介还是耐药,选择敏感药物进行疾病治疗。
中介是一个缓冲区,若无敏感药物可提高中介药物的浓度来使用。
药敏纸片的制备
药敏纸片的制备及药敏试验方法抗菌药物对预防或治疗动物疾病发挥了巨大的作用,但随着抗菌药物在兽医临床的广泛使用,尤其为了防治疾病,常常以亚剂量水平的药物添加于饲料中,以致长期使用后病原微生物产生了耐药性,使本来对治疗病原微生物感染有效的抗菌药物失去作用,给兽医临床上有效地预防和治疗疾病的发生带来一定的困难。
通过制作自家药敏纸片进行试验,可快速进行药物的筛选,获得对病原微生物敏感的药物, 对指导临床合理用药,提高治疗效果,节约养殖过程的用药费用,有着重要的意义。
一. 药敏纸片的制备1.材料抗菌药物、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、冰醋酸、新华1号定性滤纸、50mL容量瓶、无菌过滤器或一次性过滤器等2.方法2.1 PBS的配制A.制备0.2mol/L储备液0.2mol/LNa2HPO4 :35.61g Na2HPO4.2H2O+1000 mL蒸馏水或71.62g Na2HPO4.12H2O+1000 mL蒸馏水0.2mol/L NaH2PO4 :31.2g NaH2PO4.2H2O+1000 mL蒸馏水或27.6g NaH2PO4.H2O+1000 mL蒸馏水B.将两种储备液按下表比例,配制成不同pH值的PBS,室温保存备用0.2mol/L磷酸缓冲液的配制2.2 抗菌药物原液的配制和保存期限2.2.1抗菌药物配制溶剂和保存期限抗菌药物溶剂浓度( g/mL)-20℃4℃青霉素pH6.0 PBS 1280 3个月1周半合成青霉素类pH6.0 PBS 1280 3个月1周头孢菌素类pH7.8 PBS 1280 3个月1周氨基糖苷类pH7.8 PBS 1280 3个月4周四环素类pH4.5 PBS 12803个月1周多粘菌素B硫酸盐pH6.0 PBS 12803个月2周林可或氯林可霉素pH7.8 PBS 12803个月2周12803个月2周红霉素先用少量乙醇溶解,再用pH7.8 PBS1280长期长期氯霉素先用少量乙醇溶解,再用pH6.0 PBS12803个月1周利福平先用甲醇溶解,再用pH6.0PBS万古霉素蒸馏水12803个月2周两性霉素B 蒸馏水12803个月1周12803个月2周5-氟胞嘧啶先用少量二甲基甲酰胺溶解,再用蒸馏水1280长期长期甲氧苄氨嘧啶先用0.1mol/L乳酸溶解再用蒸馏水稀释2560长期长期各种磺胺药先用NaoH溶解再用蒸馏水稀释2.2.2 配制方法A.按抗菌药物原液中药物百分含量的要求,计算出纯抗菌药物的重量,方法是:抗菌药物终浓度×终体积。
药敏实验报告实验内容
药敏实验报告实验内容药敏实验报告实验内容引言:药敏实验是一种常见的实验方法,用于评估不同药物对细菌的抗菌活性。
通过该实验,可以确定不同药物对细菌的敏感性,从而为临床治疗提供指导。
本文将介绍药敏实验的实验内容,包括实验材料、实验步骤和实验结果的分析。
一、实验材料:1. 细菌培养物:选择需要测试的细菌菌株,如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等,并在适宜的培养基上进行预培养。
2. 药物:选择需要测试的药物,如抗生素、抗菌药物等,并按照规定的浓度进行配制。
3. 培养基:选择适宜的培养基,如琼脂、肉汤等,用于培养和生长细菌。
4. 培养皿:用于装载培养基和药物的培养皿,可以选择普通培养皿或96孔微孔板。
二、实验步骤:1. 制备细菌悬液:从预培养的细菌培养物中取出适量的细菌,转移到无菌培养基中,摇匀后得到细菌悬液。
2. 稀释细菌悬液:将细菌悬液进行适当稀释,以获得合适的菌液浓度,一般为0.5 McFarland浓度。
3. 涂布培养基:将稀释后的细菌悬液均匀涂布在培养基上,可以使用无菌的玻璃棒或无菌的吸管进行涂布。
4. 药物斑点法:在涂布的培养基上滴加一定浓度的药物溶液,形成不同浓度的药物斑点。
5. 培养:将涂布好药物的培养基放入恒温培养箱中,在适宜的温度下培养一定时间,一般为18-24小时。
6. 结果观察:观察培养基上细菌生长的情况,记录不同药物斑点周围的细菌生长情况。
三、实验结果分析:通过观察实验结果,可以得出以下结论:1. 抗菌活性:根据不同药物斑点周围的细菌生长情况,可以判断该药物对该细菌菌株的抗菌活性。
若细菌周围无生长,则说明该药物对该细菌菌株具有较好的抗菌活性;若细菌周围有生长,则说明该药物对该细菌菌株的抗菌活性较差。
2. 最小抑菌浓度(MIC):通过观察不同药物斑点的浓度,可以确定该药物对该细菌菌株的最小抑菌浓度。
最小抑菌浓度是指能完全抑制细菌生长的最低药物浓度,一般以药物斑点周围无细菌生长为标准。
3. 药物敏感性:根据最小抑菌浓度,可以将细菌对药物的敏感性分为敏感、中度敏感和耐药等级。
药敏试验操作方法
药敏试验操作方法药物敏感性试验是一种常见的实验方法,用于评估药物对细菌或其他微生物的敏感性。
下面我将详细介绍药敏试验的操作方法。
一、实验仪器和试剂准备1. 培养基:根据要测试的细菌种类选择相应的培养基,并按照说明书配制。
2. 抗生素:根据实验需求选择合适的抗生素。
可以是已知的抗生素,也可以是待测的新药物。
3. 细菌悬浮液:从培养物中挑取单一菌落,转接到培养基中培养一夜,然后取一定量的细菌悬浮液用生理盐水调制。
二、药敏试验步骤1. 稀释菌悬液:将细菌悬液稀释至适宜浓度,通常为0.5 McFarland 标准浓度,以确保实验准确性。
2. 制备琼脂平板:将培养基煎化至液态,待温度降至45-50时加入相应抗生素浓度,快速混合后倒入培养皿中。
3. 扩展细菌:将含有药物的琼脂平板倒扣在灭菌台上,用细菌悬液均匀涂抹在琼脂平板表面上。
4. 培养和观察:将培养皿放入恒温培养箱中,在适宜的温度下培养一段时间,通常为18-24小时。
培养结束后,观察菌落生长情况,并记录结果。
5. 结果解读:根据菌落的生长情况和直径大小,判断细菌对药物的敏感性。
通常,抗生素有效抑制菌落生长的区域称为抑制圈,其直径大小与药物对细菌的抑菌效果相关。
- 抗生素敏感(S):抑制圈直径大于抗生素的最低抑菌浓度(MIC);- 中度敏感(I):抑制圈直径仅略大于MIC;- 抗生素耐药(R):抑制圈直径小于MIC。
6. 结果记录和分析:将对应的药敏结果记录下来,并进行案例分析和数据统计。
7. 实验验证:如果需要,可以对少数样本进行二次验证以确保结果的准确性。
三、注意事项和常见问题1. 实验操作要严格遵守无菌技术,以防止外界细菌的污染。
2. 实验室工作人员应佩戴适当的个人防护装备,如实验手套、口罩等。
3. 实验仪器和试剂要经过严格的消毒和无菌处理。
4. 抗生素的选择要与实验目的和细菌种类相匹配,避免选择不当的抗生素。
5. 实验结束后,应正确处置培养皿和含有抗生素的废弃物,以避免对环境造成污染。
药敏实验器材及操作步骤
药敏实验器材及操作步骤
操作步骤:
一、药敏试纸片的制备:
1. 取定性滤纸,用打孔机打成直径6毫米的圆形小纸片.
2. 取圆纸片50片防入清洁干燥的青霉素空瓶中,瓶口以单层牛皮纸包扎.经15-20分钟121℃高压消毒后,
3. 放在37度恒温箱中数天,使其完全干燥.
二、药敏片的制备(商品药):
1. 按商品药的使用治疗量的比例配制药液.
2. 在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升,并翻动纸片,使各纸片充分浸透药液,翻动纸片时不能将纸片捣烂.同时在瓶口或瓶身记录药物名称,放37度温箱内过夜,干燥后即密盖。
3. 如有条件可真空干燥.切勿受潮,置阴暗干燥处存放,有效期3-6个月.
三、培养基的制备:
1. 取16.5g营养琼脂至500ML三角烧瓶中,加蒸馏水至485ML于三角烧瓶。
放置电子万用火炉上,不断搅拌至营养琼脂完全融化。
2. 瓶口以单层牛皮纸包扎.经15-20分钟121℃高压消毒,同时把清洗洁净的培养皿一起高压消毒。
3. 然后,每个培养皿中灌入18-20ML,室温凝固保鲜备用。
四、药敏操作:
1. 在净化工作台上,用动物肝脏或心脏的横断面置于培养基上均匀涂布。
2. 然后把七个不同的药敏片均匀分布在培养基上。
3. 置于恒温培养箱中37℃培养24H,然后观察结果。
药物敏感判定标准:
20以上极敏,15-20高敏,10-14中敏,10以下低敏,0不敏.
培养基:应根据实验菌的营养需要进行配制,倾注平板时,厚度合适,约5-6毫米,不可太薄,一般90毫米直径的培养皿,倾注培养基18-20毫升.。
药敏试剂配制
药敏试剂配制的注意事项
安全注意事项
避免直接接触试剂,避免吸 入试剂蒸汽
操作过程中必须佩戴防护眼 镜和手套
试剂配制过程中应避免产生 火花或静电
试剂配制完成后应立即密封 保存,避免与空气接触
操作注意事项
确保试剂的纯度和浓度 避免试剂与空气接触,防止氧化 操作过程中避免污染,保持无菌环境 严格按照说明书进行操作,避免操作失误
青霉素等
称量:准确 称量所需药 敏试剂的量
溶解:将药 敏试剂溶解 于适当的溶 剂中,如生 理盐水、蒸
馏水等
稀释:将溶 解后的药敏 试剂进行适 当稀释,以 获得合适的
浓度
混匀:将稀 释后的药敏 试剂充分混 匀,确保浓
度均匀
保存:将配 制好的药敏 试剂保存在 适当的环境 中,如冷藏 或冷冻,以 保持其活性
在药物研发中的应用
筛选药物:通过 药敏试验筛选出 有效的药物
优化药物:通过 药敏试验优化药 物的剂量和给药 方式
评估药物:通过 药敏试验评估药 物的安全性和有 效性
预测药物反应: 通过药敏试验预 测药物在人体内 的反应和效果
在生物科学研究中的应用
细菌培养:用于培养细菌,观察其生长情况 药物筛选:用于筛选有效药物,提高药物研发效率 基因表达:用于检测基因表达情况,了解基因功能 生物标志物检测:用于检测生物标志物,了解疾病发生和发展情况
试剂保存注意事项
试剂应保存在阴凉、干燥、通风良好的环境中 试剂应避免阳光直射和温度过高 试剂应避免与强酸、强碱等物质接触 试剂应定期检查有效期,过期试剂应及时处理
药敏试剂配制的实际应用
在临床诊断中的应用素
提高治疗效果, 降低抗生素滥用
监测细菌耐药性, 预防和控制感染
药物敏感实验方法及步骤
药物敏感实验方法及步骤一、实验背景药物敏感实验是一种常见的药物筛选方法,通过测试不同剂量的药物对细胞或动物的生长和发育的影响,从而评估药物的疗效和毒性。
该实验可以为新药开发提供重要参考依据,也可以用于评估已上市药物的疗效和安全性。
二、实验材料1. 细胞培养基:如DMEM、RPMI-1640等;2. 药物:待测药物和对照药物;3. 细胞:如人类肺癌细胞A549等;4. 96孔板:用于培养细胞;5. 静脉注射器:用于给小鼠注射药物。
三、实验步骤1. 细胞培养将细胞按照常规方法培养至对数生长期,然后将细胞用PBS洗涤2次并离心收集,最后加入适量的培养基中制备单细胞悬液。
2. 药物处理将待测药物按照预定浓度稀释至不同浓度,并加入到96孔板中。
同时,在另一个96孔板中加入对照药物,如阿霉素、氟尿嘧啶等。
3. 细胞处理将细胞悬液加入到96孔板中,每孔约1万个细胞。
然后将板放入培养箱中,恒温恒湿培养24小时。
4. 细胞增殖检测使用MTT法或CCK-8法等方法检测细胞的增殖情况。
具体步骤如下:(1)MTT法:将MTT溶液加入到96孔板中,培养4小时后加入DMSO,并在洗板器上震荡混匀。
最后使用酶标仪检测吸光度值。
(2)CCK-8法:将CCK-8溶液加入到96孔板中,培养2小时后使用酶标仪检测吸光度值。
5. 数据处理根据实验结果,计算药物的IC50值和治疗指数(TI)。
其中,IC50值表示药物抑制细胞增殖50%所需的最小浓度;TI表示药物的治疗效果与毒性之比。
6. 动物实验如果需要评估药物在体内的疗效和毒性,可以进行小鼠模型实验。
具体步骤如下:(1)小鼠注射:将小鼠按照体重分组,然后使用静脉注射器将药物溶液注射到小鼠体内。
(2)观察动态:观察小鼠的生长发育情况、行为活动和食欲等指标,并记录相关数据。
(3)取样检测:在实验结束后,取样检测小鼠的血液、肝脏、肾脏等组织,评估药物的毒性和疗效。
四、实验注意事项1. 实验过程中要注意无菌操作,避免细胞污染或交叉感染。
药敏试验及抗体检测试验方法
药敏试验及抗体检测试验方法药物敏感性试验一试验前的准备工作1高压灭菌平皿、棉签,灭菌后放入培养箱中烘干。
2按照营养琼脂上的说明来配制固体培养基,115℃高压灭菌15分钟。
3 将试验台进行紫外灯消毒15~30分钟。
二试验方法1 先用酒精棉球擦拭试验台面然后再点燃酒精灯。
2 用酒精棉球消毒双手,将高压灭菌后的营养琼脂倒入玻璃平皿的三分之一高度。
3 将倒好琼脂的平皿水平放置在试验台上,让琼脂冷却凝固同时打开紫外灯消毒15分钟。
4 将采集好的病料如带菌棉签、肝脏、肠道、脾脏等直接涂于培养基上,涂抹均匀后直接贴药敏片。
5 将贴好药敏片的平皿放入恒温培养箱中37℃培养16~18小时。
6 观察试验结果测量抑菌直径。
三结果判定血凝试验与血凝抑制试验一试验材料离心机及离心管、冰箱、微量振荡器、96孔v型板、微量移液器、一次性吸头、注射器、天平二试验用试剂1 抗凝剂用天平称量3.8g柠檬酸钠,溶入100ml生理盐水中,待溶解完全后即可使用。
2 生理盐水3 标准抗原4 1%红细胞悬液由鸡心脏采血或翅静脉采血,放入加有抗凝剂的离心管中(抗凝剂:全血=1:2的比例)。
2500转离心8分钟。
用吸管吸去上清液和红细胞沉淀上层白色沉淀层,将沉淀的红细胞用生理盐水混匀后离心,如此反复离心4~5次。
若要配制10ml的1%红细胞悬液需取0.1ml红细胞沉淀,加入9.9ml的生理盐水中混匀即可。
5 被检血清由鸡心脏或翅静脉采血0.5ml静置或离心,待血清析出后备用。
6 被检卵黄收集鸡蛋,用清水洗净蛋壳外表,取卵黄液1ml ,加生理盐水1ml,充分混匀后备用。
三实验方法(一)血凝试验1 向反应板的各孔加生理盐水25μl。
2 吸取待检测的抗原25μl于第一孔中并充分吹打混匀,吸出25μl 至第2孔,依次倍比稀释到第11孔,弃去25μl。
3 吸取1%红细胞悬液依次加入各孔,每孔25μl。
4 置于微量振荡器上震荡1分钟左右。
5 室温静置20~30分钟,观察结果。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
近年来,随着抗菌药物的广泛应用,尤其是光谱及超光谱的抗菌药物的滥用,导致耐药性菌株逐年增多;环境的污染,以及养殖户的饲养管理意识跟不上,促使细菌性疾病的流行及发病率逐年上升;且使用抗菌素药物预防和治疗的效果越来越不理想,为了减少药物的滥用和耐药性的产生,在临床治疗前进行药敏试验筛选出有效的抗菌药物是十分必要的,正确选用药物是治疗和预防禽病的重要措施之一。
笔者根据近几年来的经验选用本公司的现有抗生素药物自制药敏片,通过药敏试验在临床上取得十分好的效果。
一、药敏片的制备
1、纸片的选用在医疗器械公司购买定性滤纸,用0.6cm的打孔器把滤纸打成圆形纸片,分别装入洁净的青霉素小瓶内,50片/瓶,放入高压蒸汽锅内进行121℃灭菌20min,再放入60-100℃干燥箱烘干,冷却后放入洁净箱备用。
2、抗菌药液的配制选用本公司的抗菌药物,按我们习惯常用的药物浓度进行配比,如冀农杆特,规格为100g/瓶,习惯常用兑水量为400斤水,即用分析天枰称取0.2g的杆特5ml灭菌生理盐水置于灭菌的青霉素小瓶内,充分溶解后再吸取0.1ml于另一灭菌青霉素瓶内,加入3.9ml的灭菌生理盐水即可。
3、纸片的处理将以配制好的药物溶解加入装有纸片的青霉素小瓶内,每小瓶加0.5ml,应使纸片均匀的吸取药液,置4-8℃冰箱浸泡1小时左右,再将小瓶置37-50℃的温箱内2-3小时烘干。
制备好的干燥药敏片要密封好,置冰箱内8℃以下冷藏或零下14℃以下冷冻保存备用。
二、培养基制作
1、选用市面上提供的营养琼脂,SS琼脂和麦康凯琼脂按说明配制
(1)SS琼脂培养基的制作:称取SS琼脂粉5.8克,加入蒸馏水100毫升,加热煮沸溶解即可,冷至55℃倾注无菌平皿中备用。
(2)营养琼脂培养基的制作:称取营养琼脂3.8克,加至100ml蒸馏水中摇均匀,溶解煮沸121℃,高压灭菌15分钟,冷却至38℃,倾注无菌平皿中备用。
(3)麦康凯琼脂培养基的制作:称取5克麦康凯琼脂,加入蒸馏水100ml溶解摇均匀,煮沸,高压灭菌10磅15分钟,即可冷却至55℃,倾注无菌平皿中备用。
三、试验方法
1、剖检已死亡或即将死亡的家禽。
2、以无菌手术镊子陆续取出病料(心,肝,肺,脾均可)。
3、在酒精灯上把手术刀,镊子,接种环灭菌,再用接种环采取病料划在备好的培养基上,划线
要均匀。
4、将备好的药敏片均匀贴在培养基上(各纸片中心距离不小于2.5cm)。
5、取出培养基观察有无抑菌圈,根据抑菌圈的有无或大小,并测量各种药敏纸片的抑菌圈的直径,单位为毫米,可筛选出敏感的药物。
四、体会
1、为了使试验安全可靠,所有试验操作过程均在超净工作台中进行。
2、制备纸片的滤纸的质量直接影响试验结果,所以要求所用滤纸吸水性要好,均匀,不能含无关的化学物及色素。
3、药物溶解性的高低可以影响药物敏感性试验结果,选用抗菌素配制药液时我们应该注意要反复摇晃使药物充分溶解。
4、制备好的药敏片要避免受潮,因此,要放在干燥器内贴好标签记录好。