实验七 动物组织DNA的提取
组织DNA的提取及凝胶回收
回收的DNA片段
DNA分子的体外连接
pUC18 和 pUC19质粒图谱
• pUC18 和 pUC19 大小只有 2686bp ，是最常用的质粒 载体，其结构组成紧凑，几乎不含多余的 DNA 片段， GenBank注册号为 L08752(pUC18)和 X02514(pUC19)。 由 pBR322 改造而来，其中 lacZ (MSC)来自 M13 。
• 这两个质粒的结构几乎是完全一样的，只是多克隆位点的 排列方向相反。这些质粒缺乏控制拷贝数的 rop 基因，因 此其拷贝数达 500-700 。 pUC 系列载体含有一段 lacZ 蛋白氨基末端的部分编码序列，在特定的受体细胞中可表 现 alpha-互补作用。因此在多克隆位点中插入了外源片 段后，可通过alpha -互补作用形成的蓝色和白色菌落筛 选重组 质粒。
• pMD19- T Vector与pMD18- T Vector相比，pMD19- T Vector的β半乳糖 苷酶的表达活性更高，菌落显示蓝色的时间缩短，菌落显示的蓝色更深。因 此，克隆后更容易进行克隆体的蓝白斑筛选。
质粒DNA限制性酶切 图谱分析
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• 由于这两种载体是分别以pUC18、pUC19载体为基础构建而成，所以它具有 同pUC18、pUc19载体相同的功能。此外，这两种制品中的高效连接液 Ligation Mix可以在极短时间内（-5min）完成连接反应，且此连接液可以直 接用于细菌转化，大大方便了实验操作。制品中的 Control Insert 500bp） 还可以用于 Control示发布的 良好效果，请言简意赅的阐述您的观点。点击此处添 加正文，请言简意赅的阐述您的观点。
dna的提取方法与步骤
dna的提取方法与步骤DNA的提取方法与步骤DNA提取是分子生物学中的重要实验步骤，它可以从细胞中分离出DNA，为后续的实验研究提供基础。
本文将介绍DNA的提取方法与步骤。
一、材料准备1. 细胞样本：可以是动物组织、植物组织或微生物培养物等。
2. 细胞裂解缓冲液：常用的裂解缓冲液包括Tris-HCl缓冲液和EDTA缓冲液。
3. 蛋白酶K：用于降解蛋白质。
4. 盐溶液：如NaCl溶液，用于沉淀DNA。
5. 异丙醇：用于沉淀DNA。
6. 酚-氯仿混合液：用于分离DNA。
二、DNA提取步骤1. 细胞裂解：将细胞样本加入细胞裂解缓冲液中，使用均质器或超声波仪器对细胞进行裂解，使细胞壁破裂释放出细胞内的DNA。
2. 蛋白酶处理：加入适量的蛋白酶K，将蛋白质降解，使DNA从蛋白质中解离出来。
3. 盐沉淀：加入盐溶液，通过离心将DNA沉淀下来。
盐溶液中的离子会中和DNA分子上的电荷，使其变得不溶于水，从而沉淀下来。
4. DNA纯化：将DNA沉淀物用异丙醇洗涤，去除杂质。
然后使用乙酸溶解DNA沉淀物，使其变为可溶于水的形式。
5. DNA分离：将DNA溶液与酚-氯仿混合液混合，酚层中的蛋白质和DNA杂质会与酚结合，而DNA会在水相中。
通过离心分离酚相和水相，得到纯净的DNA溶液。
6. DNA沉淀：将DNA溶液加入异丙醇中，通过离心使DNA沉淀下来。
7. DNA溶解：将DNA沉淀物用适量的缓冲液溶解，获得最终的DNA溶液。
三、实验注意事项1. 实验操作要严格遵守无菌技术，避免DNA的污染。
2. 实验过程中要注意温度的控制，避免DNA的降解。
3. 实验器材要干净，以免杂质对DNA提取的影响。
4. 实验过程中要轻柔操作，避免DNA的断裂。
四、常见问题及解决方案1. DNA溶解不完全：可以加热溶解，或者使用酶切酶处理。
2. DNA沉淀量低：可以增加盐溶液的浓度，或者加入载体DNA增加DNA的沉淀量。
3. DNA质量差：可以使用纯化试剂盒进行纯化处理，或者使用Phenol-Chloroform-Isoamyl Alcohol（PCI）进行提取。
动物组织DNA提取
动物组织细胞基因组DNA提取一、实验原理真核生物的一切有核细胞（包括培养细胞）都能用来制备基因组 DNA。
真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内，因此，制备DNA的原则是既要将DNA 与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。
提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。
蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA（乙二胺四乙酸二钠）存在下保持很高的活性。
在匀浆后提取DNA的反应体系中，SDS可破坏细胞膜、核膜，并使组织蛋白与DNA分离，EDTA则抑制细胞中Dnase的活性；而蛋白酶K可将蛋白质降解成小肽或氨基酸，使DNA分子完整地分离出来。
二、仪器及试剂1. 仪器：恒温水浴锅、台式离心机、紫外分光光度计（GeneQuant）、移液器、玻璃匀浆器、离心管（灭菌）、吸头（灭菌）2. 试剂：（1）细胞裂解缓冲液：Tris (pH8.0) 100 mmol/LEDTA (pH 8.0) 500 mmol/LNaCL 20 mmol/LSDS 10%胰RNA酶 20ug/ml（2）蛋白酶K：称取20mg蛋白酶k溶于1ml灭菌的双蒸水中，?C20℃备用。
（3）TE缓冲液（pH 8.0）：高压灭菌，室温贮存。
（4）酚：氯仿：异戊醇（25:24:1）（5）异丙醇、冷无水乙醇、70%乙醇、灭菌水。
三、操作步骤1. 取新鲜或冰冻动物组织块0.1g（0.5cm3），尽量剪碎。
置于玻璃匀浆器中，加入1ml的细胞裂解缓冲液匀浆至不见组织块，转入1.5ml 离心管中，加入蛋白酶K （500ug/ml）20μl，混匀。
在65℃恒温水浴锅中水浴30min，也可转入37℃水浴12～24h，间歇振荡离心管数次。
于台式离心机以12000 rpm离心5min，取上清液入另一离心管中。
动物组织中总DNA的提取
试剂
提取缓冲液：200 mmol/L Tris·Cl (pH8.0), 25mmol/L EDTA, 500 mmol/L NaCl, 0.5% SDS
24：1的氯仿：异戊醇 预冷无水乙醇
SDS抽提液配方(1000ml):
操作步骤
1. 肝脏1g左右, (剪碎) 置研钵中，加入2-3mL提取缓
目前从样品中分离DNA的方法主要有两种，分为 CTAB法和使DNA得以 游离出来）。
SDS法提取动物组织DNA
SDS（十二烷基硫酸钠 ）是阴离子表面活性 剂，溶解膜蛋白而破坏细胞膜，使蛋白质变性而沉 淀下来。EDTA 抑制DNA酶的活性。再加入氯仿等 有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因 核酸(DNA、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提 液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。上清液中加入 乙醇使DNA沉淀，沉淀DNA溶于双蒸水或TE溶液中， 即DNA溶液。
絮状DNA沉淀。
结果分析与讨论
DNA提取原则
保证DNA结构的完整性
纯化后不应存在对酶有抑制作用的物质
排除有机溶剂和金属离子的污染 蛋白质、多糖、酚类等降低到最低程度 排除其他核酸分子的污染
实验原理
细胞内各种DNA（包括基因组DNA和核外DNA） 称为总DNA。DNA与蛋白质结合成脱氧核糖蛋 白（DNP），能溶解在纯水或1mol/L的NaCl溶液 中，而不溶于有机溶剂。
冲液， 研磨成浆；吸入10mL EP管中，摇动混匀；
2. 60℃水浴保温20min，不时颠倒混匀； 3. 室温下3000rpm离心10min； 4. 小心吸上清于另一只离心管中，加入等体积的24:1
的氯仿：异戊醇，上下颠倒混匀；
5. 室温下3000rpm离心10min； 6. 小心将上层水相吸入另一只离心管中； 7. 重复4-5步2-3次; (此步不做） 8. 加入等体积预冷无水乙醇，室温下放置片刻即出现
动物组织基因组DNA提取
动物组织DNA提取1样品预处理取新鲜组织25-50mg（组织不宜过多，否则裂解不完全堵塞离心柱），组织剪碎或者切成小块，放入预冷研钵，快速加入液氮用力研磨，或直接放入匀浆器中匀浆。
冻存组织同样使用研钵研磨或匀浆器快速用力研磨或匀浆（冻存组织避免反复冻融，使细胞破碎，内源酶外泄影响基因组DNA提取）2.加入100ulPBS到研磨好的样品中，样品均匀悬浮于PBS3.加600ul的Lysis Buffer，颠倒混匀，如需消化RNA，可加入20ulRNase A，颠倒混匀，室温放置5min4.加入10ul ProteinaseK，混匀，56度水浴45-60min，（颠倒混匀数次，裂解完全液体则清亮粘稠，此步骤可过夜）5 .12000rpm 离心10min，上清转入新的离心管，加800ul无水乙醇，混匀6.液体分次转入离心柱（一次加不完可分次加入），12000rpm 离心1min，弃废液。
7.加入700ulWash bufferA（用前检查是否已加入无水乙醇），12000rpm 离心30s-1min，弃废液。
8. 加入700ulWash bufferB（用前检查是否已加入无水乙醇），12000rpm 离心30s-1min，弃废液。
9.加入500ulWash bufferB，12000rpm 离心30s-1min，弃废液。
10.再次12000rpm 离心2min，将离心柱置于心得离心管中，打开离心柱盖，于室温或37度恒温箱放置5-10min，直至无明显乙醇味。
11.在硅基质膜中央加入50-200ulTEbuffer（事先预热55-65度）置于室温2-5min，12000rpm 离心30s。
12. 离心得到的溶液再次加入离心柱中，室温放置2min，12000rpm 离心2min，所得溶液为纯化后的基因组DNA.纯化效果检测：取2-5ulDNA产物，0.7%agarose电泳检测DNA分子的完整性和紫外分光光度计检测浓度和纯度。
动物组织基因组DNA的提取
二、实验原理
7、核酸样品的保存
核酸保存的主要条件是温度和介质 温度： ① 4℃ ——最佳最简单； ② -70℃——长期保存的良好温度； ③ -20℃ ； 保存介质： TE缓冲液（最常用） 10mmol/L Tris-HCl pH 8.0 1mmol/L EDTA pH 8.0
三、实验试剂、仪器和耗材
6、核酸制备的步骤 破碎细胞
提取
纯化
二、实验原理
6、核酸制备的步骤 破碎细胞
① 微生物：溶酶菌、SDS裂解； ② 高等植物：捣碎器破碎、液氮研磨。 酶法——蛋白酶、胰蛋白酶； 冰冻法 —— 反复冻融或液氮冻后 组织捣碎； ③ 动物：液氮处理后用匀浆器破碎； 以上原理
2、核酸制备的一般原则
核酸制备时应注意的事项： ① 尽量简化操作步骤，缩短提取过程； ② 减少化学因素对核酸的讲解； ③ 减少物理因素的核酸的讲解：机械剪切力和 高温； ④ 防止核酸的生物讲解；
二、实验原理
3、核酸酶的抑制和抑制剂
降低温度，改变pH值，及盐的浓度，都利于对 核酸酶活性的抑制，但均不如用核酸酶抑制剂更 有利，几个条件并用更好。 DNA ，抑制 Dnase 活力很容易，但防止机械拉 力张力更重要； RNA，因分子较小，不易被机械张力拉断，但 抑制 Rnase 活力较难，故在 RNA 提取中设法抑制 Rnase更重要。
二、实验原理
4、核酸制备中常用的去垢剂
核酸本身带负电荷，结合带正电荷的蛋白质， 用于核酸提取的去垢剂一般都是阴离子去垢剂， 去垢剂的作用： ① 溶解膜蛋白及脂肪，使细胞膜破裂； ② 溶解核糖体上面的蛋白，使其解聚，将核酸 释放出来； ③ 对Rnase和Dnase有一定的抑制作用； 如: SDS，脱氧胆酸钠，4-氨基水杨酸钠，萘-1， 5-二磺酸钠等
哺乳动物组织基因组DNA提取实验报告
哺乳动物组织基因组DNA提取实验报告实验目的：
实验原理：
本实验采用了离心提取法，将细胞破裂并使DNA高度纯化。
实验步骤：
1.将肝脏样本放在冰上并迅速离心5分钟，将上清液移至50ml离心管中。
2.加入10ml EDTA-Triton X-100 Buffer，彻底混合。
3.离心15分钟，室温25°C，10000转/分钟。
4.用管钳将上清液倒入新的50ml离心管中。
6.将上清液倒出，加入70%的乙醇混悬液中。
8.将上清液倒出，将离心管底部置于吸水纸上20秒钟。
9.加入DEPC水，在室温25°C下彻底溶解DNA。
实验结果：
实验分析：
1. 相比较其他方法，离心提取法是一种较高质量的DNA提取方法。
2. 在实验中，我们需要密切注意样本放在冰上的时间，以确保样本不被污染。
3. 在实验中，我们需要适当地离心时间，以保证DNA的纯化程度。
4. 在提取后，我们需要用DEPC水进行溶解DNA，以确保DNA完全溶解。
实验报告DNA提取实验步骤及结果分析
实验报告DNA提取实验步骤及结果分析实验报告：DNA提取实验步骤及结果分析一、引言DNA提取是分子生物学研究中的关键步骤之一，能够从样本中纯化出DNA，用于后续的分析和实验。
本实验旨在探究DNA提取的步骤和方法，并对提取结果进行分析和评估。
二、实验步骤1. 样本准备：选择合适的样本进行DNA提取，如植物组织、动物组织或微生物培养物。
样本应储存于-80℃的冰箱中，以防止DNA降解。
2. 细胞破碎：将样本取出，加入细胞破碎缓冲液，使用均质机或研钵等方法将细胞破碎，使细胞膜被破坏，释放DNA。
3. 蛋白酶处理：加入蛋白酶，将样本中的蛋白质降解，以去除蛋白质的干扰。
4. 酚/氯仿提取：加入等体积的酚/氯仿混合液，混匀后离心，使混合液分为上下两层，上层为DNA上清液。
5. DNA沉淀：将DNA上清液转移至新离心管中，加入等体积的冷异丙醇，轻轻颠倒混匀，待DNA逐渐沉淀出来。
6. 洗涤：使用70%的乙醇洗涤DNA沉淀物，以去除异丙醇和其他杂质。
7. 重溶：将洗涤后的DNA沉淀物用适量的TE缓冲液重溶，使其溶解。
8. 定量和纯化：使用紫外可见分光光度计测定DNA的浓度，并使用凝胶电泳验证DNA的纯度和完整性。
三、结果分析通过以上步骤，我们成功提取了DNA，并进行了初步的纯化。
下面是对实验结果进行分析和评估：1. DNA提取效果评估：- 可见分光光度计测定DNA浓度：根据光度计读数，我们可以计算出DNA的浓度。
通常，越高的读数代表着更高的DNA浓度。
- 凝胶电泳：通过凝胶电泳，我们可以观察到DNA在琼脂糖凝胶上的迁移情况。
理想情况下，DNA应该呈现出清晰的条带，并且没有明显的降解现象。
2. 实验结果评价：- DNA浓度：根据光度计读数，我们可以评估DNA提取的效果。
如果浓度较高，说明提取效果较好；如果浓度较低，说明可能存在提取效果不佳或DNA被降解的情况。
- DNA完整性：通过观察凝胶电泳结果，我们可以评估提取的DNA是否完整。
动物组织提取实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握从动物组织中提取DNA的基本原理和方法。
2. 熟悉实验操作流程，包括组织处理、裂解、纯化、沉淀和溶解等步骤。
3. 学习使用酚-氯仿法提取DNA，并掌握相关试剂和仪器的使用。
二、实验原理动物组织中的DNA主要以染色体的形式存在于细胞核内。
提取DNA的目的是将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，同时保持DNA分子的完整性。
本实验采用酚-氯仿法提取DNA，其原理如下：1. 使用SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K处理组织，破坏细胞膜，使蛋白质变性并溶解。
2. 加入酚和氯仿/异戊醇，通过酚的变性作用和氯仿/异戊醇的相容性，使蛋白质和DNA分离。
3. 通过离心，将蛋白质和杂质与DNA分离。
4. 用乙醇沉淀DNA，得到纯净的DNA。
三、实验材料1. 实验动物：小鼠或鸡2. 试剂：SDS、蛋白酶K、酚、氯仿/异戊醇、乙醇、TE缓冲液、NaCl、EDTA、液氮、离心机、移液器、玻璃匀浆器、离心管、吸头等四、实验步骤1. 组织处理- 称取适量动物组织（如肝脏、肌肉等），用液氮迅速冷冻。
- 将冷冻的组织移入研钵中，加入适量的裂解缓冲液（含SDS、蛋白酶K、NaCl、EDTA等），用研钵研磨至匀浆状。
- 将匀浆移入离心管中，加入等体积的酚和氯仿/异戊醇，充分混匀。
- 4℃下静置30分钟，待蛋白质变性沉淀。
2. 离心分离- 将离心管以12,000 rpm离心10分钟，弃去上清液。
- 将沉淀中加入适量的TE缓冲液，充分混匀。
- 再次以12,000 rpm离心10分钟，弃去上清液。
3. DNA沉淀- 向沉淀中加入适量的乙醇，混匀后静置2-3分钟。
- 将沉淀移入新的离心管中，以12,000 rpm离心5分钟。
- 弃去上清液，用75%乙醇洗涤沉淀1次。
- 将沉淀干燥，加入适量的TE缓冲液溶解。
4. DNA纯化- 将溶解的DNA溶液通过0.22 μm滤膜过滤，去除杂质。
- 使用紫外分光光度计测定DNA浓度。
实验7基因组DNA的提取(综合性设计实验)
展望
未来，基因组DNA提取技术将更加广泛应 用于生命科学、医学、农业等领域的研究和 实践中，为人类认识生命本质、解决重大疾 病和促进农业发展等方面发挥重要作用。同 时，随着技术的进步和应用领域的拓展，基
因组DNA提取技术也将面临更多的挑战和 机遇。THANK YOU提取效率低详细描述
在某些情况下，由于实验条件 或操作不当，可能导致DNA的 提取效率较低。这可能表现为 提取时间较长，获得的DNA量 较少，甚至出现DNA降解的情 况。这可能是因为某些试剂使 用不当或实验操作失误所导致 。
DNA纯度与质量的评估
总结词：纯度高 总结词：纯度低
详细描述：通过电泳和紫外光谱分析等方法，可以 评估所提取DNA的纯度和质量。纯度高的DNA表现 为电泳时条带单一、无杂质，紫外光谱分析中 A260/A280比值接近1.8，说明DNA无蛋白质和 RNA污染。
酚-氯仿法
利用酚和氯仿的混合液反复抽提细胞破 碎后的上清液，使蛋白质变性并去除， 留下基因组DNA。
VS
试剂盒法
利用特定的试剂盒，通过细胞裂解、洗涤 、纯化等步骤，高效地提取基因组DNA 。
实验中使用的试剂与设备
试剂
细胞培养基、蛋白酶K、酚-氯仿混合液、乙醇、洗涤缓冲液等。
设备
离心机、PCR仪、电泳仪、移液器等。
03
实验步骤
样品准备与处理
01
样品来源
选择合适的生物样品，如人类、 动物或植物组织，确保样品新鲜 且无污染。
样品处理
02
03
清洗与去杂质
将样品进行匀浆或研磨，以充分 破碎细胞结构，释放出基因组 DNA。
去除样品中的蛋白质、脂肪和糖 类等杂质，以避免干扰后续的 DNA提取。
动物组织DNA提取
动物组织DNA提取方案1：1.液氮研磨组织2.加入10ml分离缓冲液3.加1ml10%SDS混匀4.加50ul 或1mg蛋白酶K，37℃保温1-2h.5.加1ml 的5mol/l NaCl ,混匀5000r/min ×10s6.取上清液于新离心管中，加等体积苯酚/氯仿/异戊醇抽提，待分层，12000r/min ×5min7.去上层水相于干净离心管，加2体积乙醚抽提8.移去上层乙醚，保留下层水相9.（加5ul 10mg/ml Rnasea ,37℃保温30min,用苯酚抽提）10.加1/10体积3mol/lNaAc(pH 5.2)，及2倍体积无水乙醇颠倒混合沉淀DNA。
室温静止10-20min,DNA沉淀形成白色絮状物11.用玻璃棒勾出DNA，70%乙醇中漂洗，吸干。
12.溶解于1ml TE中，储存于4℃冰箱。
方案2：1．液氮研磨组织2．加入10ml分离缓冲液3．加1ml10%SDS混匀4．加50ul 或1mg蛋白酶K，55℃保温2h.5．加等体积苯酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）抽提，混匀5min,待分层，12000r/min ×5min 6．取上层水相于干净离心管，加2体积无水乙醇—20℃放置2h或液氮放置5min 7．12000rmp ×5min 沉淀DNA，倾去上清液8．沉淀中加入75%乙醇500ul 轻轻混匀，12000r/min ×5min，倾去上清液，晾干。
9．在沉淀中加入200ulTE缓冲液，—20℃保存。
储液：1ml/L NaCl For 100ml 5.844g10×TE Buffer(for 100ml)1M Tris-HCl pH8.0 Tris-HCl 12.114g1M EDTA pH=8.0 EDTA 29.214g分离缓冲液：for100ml10mml/LTris-HCl(pH7.4) 1M Tris-HCl pH7.4 1ml10mml/L NaCl 1ml/L NaCl 1ml25mml/L EDTA 1M EDTA pH=8.0 2.5ml2×抽提缓冲液for100ml6mol/L NaCl 1ml/L NaCl 0.6ml100mmol/Tris-HCl(pH7.4) 1M Tris-HCl pH7.4 10ml40 mml/L EDTA(pH8.0) 1M Tris-HCl pH7.4 4ml1%SDS SDS 1g1×抽提缓冲液for100ml0.5%的2×抽提缓冲液2×抽提缓冲液0.5ml5mol/L尿素尿素30.025g10mml/L巯基乙醇巯基乙醇70ul5%苯酚苯酚5ml1×TE Buffer for 5ml组成浓度：10mM Tris-HCl pH8.0 1M Tris-HCl 50ul 1mM EDTA pH=8.0 1M EDTA PH=8.0 5ul至5ml。
实验七 肝脏dna的粗提取
4、每管加入5 mol/l NaCl溶液1mL， 蝴蝶形振荡3min。加入约1倍体积的 氯仿—异戊醇混合液，蝴蝶形振荡3 min，离心3 min（4000rpm）。 此步骤后溶液分三个相：上层水相 （DNA）；中层变性蛋白质相；下层 有机相和残余的RNA。
5、吸出上清液，弃去沉淀，每组的 两管EP管的上清液收集到一起。向 上清液中缓慢加入2倍体积的95%乙 醇，DNA沉淀析出，［离心 （10000rpm）2min］ 看到的漂浮丝状物则为粗DNA
实 验 四
肝悉DNA提取的操作步骤
实验原理
要获得DNA样品，必须考虑以下 几点： ⑴如何选材，如何破碎组织细胞？ ⑵如何除去蛋白质？在真核细胞内 ，DNA与蛋白质结合成核蛋白形 式。因此，分离DNA时必须使其 与蛋白质解离，并除去蛋白质。 ⑶设法除去RNA的污染； ⑷防止DNA酶的降解作用。
6、向上述离心产物中加入 0.01mol/L 1ml的NaOH溶液，溶解 后放入冰箱，待下次做DNA含量测 定。
重点掌握
1、肝脏DNA提取时用到的各种试 剂的作用？ 2、在提取DNA过程中DNP中的P是 怎样被去除的？原理是什么？ 3、在提取DNA过程中，加入有机 溶剂，离心后溶液应该分几层？ 分别是什么？
思考题
1、在提取人外周血染色体 DNA时，提取的DNA主要来至 于哪儿？ 2、设想DNA提取与蛋白质提 取，哪一个更容易？为什么 ？
(一)选材
要提取动物组织DNA，一般选择 细胞膜较脆弱，容易破碎的动物 脏器，如胸腺、肝脏、脾脏、胰 脏、精子等。
(二)细胞破碎方法：
机械物理法：研磨、组织捣碎、 反复冻融法、超声波处理法等。 化学方法：有机溶剂，SDS。
动物基因组dna分离的原理
动物基因组dna分离的原理动物基因组DNA分离的原理主要涉及到DNA的提取、纯化以及分析等过程。
以下是该过程的详细解释：第一步：DNA的提取动物基因组DNA的提取是DNA分离的第一步。
一般来说，有两种常用的提取方法：有机溶剂法和无机盐法。
有机溶剂法是指使用有机溶剂（如苯酚和氯仿）将DNA从细胞中提取出来。
首先，细胞样品被加入一个细胞裂解缓冲液中，以破坏细胞膜，并释放出DNA 和其他细胞组分。
然后，加入有机溶剂混合液对溶解后的溶液进行提取，使DNA溶解在有机相中。
最后，通过离心加速分离有机相和水相，并将DNA从有机相中重新提取出来。
无机盐法是指使用一系列含有盐的溶液将DNA从细胞中提取出来。
这种方法基于DNA在高盐浓度下与溶液中的阳离子形成离子相关物质可能性较低的原理。
首先，细胞样品被加入盐裂解缓冲液中，经裂解后，DNA与其他细胞组分分离。
然后，高盐缓冲液加入溶液中，通过离心将DNA从其他细胞组分中分离出来。
最后，通过洗涤等步骤去除残余的细胞组分和盐，并得到纯化的DNA 样品。
第二步：DNA纯化DNA纯化是为了去除提取过程中的杂质和其他细胞组分，从而得到高质量的DNA。
DNA纯化可以通过蛋白酶和蛋白质沉淀剂等酶消化、有机物沉淀和电泳等方法进行。
在酶消化方法中，蛋白酶被加入到DNA溶液中，以将DNA附着在蛋白酶或相关酶的组分上。
然后，使用有机物或其他方法除去蛋白酶和相关组分，使DNA 得到纯化。
有机物沉淀方法是通过将DNA与有机溶剂混合并离心沉淀去除其他细胞组分。
加入有机物（如异丙醇、以及其它盐类）的目的是改变DNA与溶液中的盐类和水分子的相互作用，从而促使DNA形成团状并沉淀。
离心作用向下压缩DNA并与有机溶剂一起沉淀，而其他细胞组分不受影响地保留在上层溶液中。
电泳是一种以电场为驱动力的方法，利用DNA的电荷特性将DNA分离出来。
DNA溶液被加载在含有琼脂糖的水平琼脂糖凝胶上。
然后，通过施加电场，DNA的负电荷会使其向正电极迁移。
动物dna提取过程中的关键步骤及注意事项
动物DNA提取是分子生物学研究中的重要步骤，它涉及到从动物样本中分离出纯净的DNA，为后续的实验和研究奠定了基础。
正确的DNA提取步骤和注意事项对于实验结果的准确性和可重复性至关重要。
本文将重点介绍动物DNA提取过程中的关键步骤及注意事项。
1. 样本获取需要准备动物样本，可以是组织样本、血液样本或者细胞样本。
样本的获取需要遵循相关的伦理规定，确保动物的权益不受损害。
另外，样本的质量对DNA提取的影响非常大，因此在样本获取过程中需要尽量避免污染和损伤。
2. 细胞破碎对于组织样本和血液样本，需要先将细胞破碎，释放DNA。
通常采用细胞裂解液进行细胞破碎，可以直接购物商用的细胞裂解液，也可以根据实验需要自行配制。
细胞破碎的时间和温度需要根据样本的性质进行调整，一般来说，较坚硬的样本需要更长的破碎时间。
3. DNA沉淀经过细胞破碎后，需要加入沉淀剂（如乙醇或异丙醇）使DNA沉淀下来。
在加入沉淀剂的过程中，需要缓慢混合并避免产生气泡。
沉淀后，可以用离心机将DNA沉淀下来，然后将上清液倒掉，留下DNA沉淀。
4. DNA洗涤为了去除沉淀剂和杂质，需要对DNA进行洗涤。
这个步骤通常需要用到乙醇或异丙醇进行洗涤，之后需要用去离子水或TE溶液进行最后的洗涤。
洗涤的过程中需要小心操作，避免DNA的流失或污染。
5. 溶解DNA最后一步是将提取出的DNA溶解到特定的缓冲液中，以便于后续的存储和实验使用。
在动物DNA提取过程中，有一些注意事项需要特别关注：1. 样本的标识和存储十分重要。
正确的标识可以避免混样，影响实验结果的准确性。
2. 在细胞破碎过程中需要保持样本的温度稳定，避免因温度不恰当造成DNA的降解。
3. 使用高质量的试剂和设备是保证DNA提取质量的关键。
试剂和设备的选择应当根据实验要求进行。
4. 每一步骤都需要小心操作，避免样本的污染和DNA的流失。
动物DNA提取是一项复杂的工作，但通过仔细的操作和严格的控制，可以获得高质量的DNA。
动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告
动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告动物肝脏中DNA的提取及检测一、前言脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸（DNA，为英文Deoxyribonucleic acid的缩写），又称去氧核糖核酸，是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分，同时也是组成基因的材料。
有时也被称为“遗传微粒”，原因是在繁殖过程中，父代会把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中，从而完成性状的传播。
DNA是高分子聚合物，DNA溶液为高分子溶液，具有很高的粘度，可被甲基绿染成绿色。
DNA对紫外线（260nm）有吸收作用，利用这一特性，可以对DNA进行含量测定。
当核酸变性时，吸光度升高，称为增色效应；当变性核酸重新复性时，吸光度又会恢复到原来的水平。
较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性，即DNA双链碱基间的氢键断裂，双螺旋结构解开―也称为DNA的解螺旋。
在细胞内，DNA能与蛋白质结合形成染色体，整组染色体则统称为染色体组。
对于人类而言，正常的体细中含有46条染色体。
染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制，细胞分裂间期又可划分为：G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。
对于真核生物，如动物、植物及真菌而言，染色体主要存在于细胞核内；而对于原核生物，如细菌而言，则主要存在于细胞质中的拟核内。
染色体上的染色质蛋白，如组织蛋白，能够将DNA进行组织并压缩，以帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用，进而调节基因的转录。
脱氧核糖核酸的结构DNA的结构： DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构四个水平。
DNA是一种长链聚合物，组成单位为四种脱氧核苷酸，即腺嘌呤脱氧核苷酸（dAMP 脱氧腺苷）、胸腺嘧啶脱氧核苷酸（dTMP 脱氧胸苷）、胞嘧啶脱氧核苷酸（dCMP 脱氧胞苷）、鸟嘌呤脱氧核苷酸（dGMP 脱氧鸟苷）。
而脱氧核糖（五碳糖）与磷酸分子借由酯键相连，组成其长链骨架，排列在外侧，四种碱基排列在内侧。
动物dna的提取实验报告
动物dna的提取实验报告动物DNA的提取实验报告一、引言DNA（脱氧核糖核酸）是生物体内负责遗传信息传递的重要分子。
通过提取动物体内的DNA，我们可以更深入地了解动物的遗传特征和进化历程。
本实验旨在探究动物DNA的提取方法，并观察提取到的DNA的形态和纯度。
二、实验材料与方法1. 实验材料：- 实验动物：我们选择了小鼠（Mus musculus）作为实验对象。
- 实验器材：离心管、显微镜、酒精灯、显微镜玻片等。
- 实验试剂：细胞裂解缓冲液、蛋白酶K、乙酸酒精、异丙醇、盐酸、乙醇等。
2. 实验步骤：a) 准备工作：将实验器材消毒并摆放整齐，准备所需试剂。
b) 细胞裂解：将小鼠组织样本切碎并转移到离心管中，加入适量的细胞裂解缓冲液，并加入蛋白酶K，进行细胞裂解。
c) 蛋白质去除：加入盐酸和异丙醇，使蛋白质凝固并沉淀，离心后将上清液倒掉。
d) DNA沉淀：加入乙酸酒精，使DNA沉淀出来，用离心机离心后将上清液倒掉。
e) 洗涤与纯化：加入乙醇洗涤沉淀的DNA，用离心机离心后将上清液倒掉，重复此步骤两次。
f) DNA溶解：加入适量的去离子水，使DNA溶解。
三、实验结果与讨论通过以上步骤，我们成功地提取到小鼠的DNA，并进行了初步观察和分析。
1. DNA形态观察：在显微镜下观察提取到的DNA样本，我们可以看到DNA呈现出长丝状的形态，这是由于DNA分子的高度聚合性所致。
此外，我们还观察到DNA的颜色呈现出乳白色，与DNA的理化性质相符。
2. DNA纯度分析：为了进一步评估提取到的DNA的纯度，我们使用了比色法和吸光度测定法进行分析。
结果显示，提取到的DNA的吸光度比值（A260/A280）为1.8，接近1.8-2.0的理想范围，表明提取到的DNA相对纯净。
3. 实验优化与改进：在实验过程中，我们发现了一些问题和改进的空间。
首先，细胞裂解的时间和温度对DNA的提取效果有一定影响，可以进一步优化条件以提高DNA的提取率。
动物基因提取实验报告
一、实验目的1. 掌握动物组织基因组DNA提取的操作方法。
2. 理解并应用琼脂糖凝胶电泳技术检测DNA的方法。
3. 学习DNA纯度与含量的测定方法。
二、实验原理动物组织基因组DNA提取的原理主要是通过破碎细胞膜和核膜，释放出DNA分子，然后通过特定的方法去除杂质，最终获得高纯度的DNA。
实验中，常用的破碎细胞膜和核膜的方法有：- 使用十二烷基磺酸钠（SDS）和蛋白酶K等试剂，使蛋白质变性并溶解细胞膜中的脂质，导致细胞裂解。
- 利用溶菌酶、蜗牛酶等酶类，水解细胞壁和细胞膜，释放DNA。
获得细胞裂解物后，通过加入苯酚和氯仿等有机溶剂，使蛋白质变性并形成有机相和水相，从而分离核酸和蛋白质。
由于DNA不溶于有机溶剂，因此可以通过离心分离获得含有DNA的上清液。
上清液中加入无水乙醇，DNA会从溶液中沉淀出来。
将沉淀的DNA溶解于TE缓冲液中，即可获得高纯度的DNA。
琼脂糖凝胶电泳是检测DNA纯度和大小的重要手段。
DNA分子在琼脂糖凝胶中，在电场的作用下，根据分子大小和所带电荷的不同，在凝胶中移动的速度不同，从而实现分离。
DNA纯度可以通过紫外吸收法测定，根据DNA在260nm处的吸光度值计算DNA的纯度。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：动物肝脏组织样本2. 试剂：- DNA提取试剂盒- 十二烷基磺酸钠（SDS）- 蛋白酶K- 溶菌酶、蜗牛酶- 苯酚、氯仿、异丙醇- 无水乙醇- TE缓冲液- 琼脂糖- 电泳缓冲液- 标准DNA分子量标记物四、实验器材与仪器1. 器材：离心管、移液器、电泳槽、凝胶成像系统、PCR仪等2. 仪器：超净工作台、恒温培养箱、高速离心机、微波炉等五、实验步骤1. 取动物肝脏组织样本，称重后加入适量提取试剂，进行细胞破裂和蛋白质水解。
2. 加入苯酚和氯仿，混合均匀，离心分离，取上清液。
3. 上清液中加入无水乙醇，混合均匀，离心分离，收集沉淀。
4. 将沉淀溶解于TE缓冲液中，即为提取的DNA。
动物组织中DNA的提取与鉴定
实验目的
1. 掌握动物组织中DNA提取的原理和操作过程 2. 了解DNA的组分，掌握DNA的定性检测的具 体方法 3. 掌握DNA纯度检测和浓度测定方法
实验原理—DNA提取
动物组织细胞中的核糖核酸(RNA)与脱氧核糖 核酸(DNA)大部分与蛋白质结合形成核蛋白。 RNA核蛋白和DNA核蛋白在不同浓度氯化钠溶液 中的溶解度有显著区别。DNA核蛋白在0.14 mol/L 氯化钠中溶解度低，但在1 – 2 mol/L氯化钠中溶 解度高；RNA核蛋白在0.14 mol/L氯化钠中溶解度 仍有相当大的溶解度。调节氯化钠浓度，可使 RNA核蛋白和DNA核蛋白分步提取开来。
实验原理—DNA提取
氯仿-异戊醇溶液可以使核蛋白变性沉淀，将核酸 物质萃取出来；再向萃取液中加入适量乙醇，可 使DNA析出。氯仿异戊醇抽提和乙醇沉淀方法在 DNA纯化研究中非常常用，氯仿-异戊醇抽提的原 理是，氯仿可使蛋白质变性并加速有机相与液相 分层；异戊醇有助于消除抽提过程中产生的气泡。 而DNA不溶于乙醇等有机溶剂，因此可以通过乙 醇沉淀来纯化和浓缩DNA。
实验原理—DNA鉴定
DNA是由脱氧核糖核苷酸单体构成，其组成部分包括磷酸、 有机碱（嘌呤与嘧啶）、戊糖（脱氧核糖）。
1）磷酸
钼酸铵
磷钼酸
Vc 或 氨基萘酚磺酸 钼蓝
（显蓝色） 2）嘌呤碱
硝酸银
嘌呤银化合物（灰褐色、絮状）
3）脱氧核糖 蓝色化合物
硫酸
ω-羟基-γ-酮基戊醛
二苯胺
实验试剂 1. 含有0.14 mol/L NaCl的0.015 mol/L柠檬酸 钠溶液 2. 1mol/L NaCl溶液 3. 氯仿-异戊醇（24 : 1, V/V） 4. 95%乙醇 5. 氨水溶液 6. 5% AgNO3溶液
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DNA提取原则 DNA提取纯化后不应存在对酶有抑制作用的物质
排除有机溶剂和金属离子的污染 蛋白质、多糖、酚类等降低到最低程度 排除其他核酸分子的污染
实验原理
DNA与蛋白质结合成脱氧核糖蛋白（DNP），能 DNA与蛋白质结合成脱氧核糖蛋白（DNP），能 溶解在纯水或1mol/L的NaCl溶液中，而不溶于有 溶解在纯水或1mol/L的NaCl溶液中，而不溶于有 机溶剂。
试剂
提取缓冲液： 提取缓冲液：200 mmol/L Tris·Cl (pH8.0), 25mmol/L EDTA, 500 mmol/L NaCl, 0.5% SDS 24：1的氯仿：异戊醇 的氯仿： ： 的氯仿 预冷无水乙醇
SDS抽提液配方 SDS抽提液配方(1000ml): 抽提液配方(1000ml):
高等动物、植物的基因组相当宠大， 高等动物、植物的基因组相当宠大， 如人类细胞基 因组由30亿个碱基对组成， 包含了该物种生长， 因组由30亿个碱基对组成， 包含了该物种生长 ，发 育，繁殖等各项生理活动的几乎全部信息量，获得 繁殖等各项生理活动的几乎全部信息量， 纯度高、 基因组相对完整的基因组是以后 PCR分析 ， 纯度高 、 基因组相库的构建，基因探测等的研究的基础。 动物细胞基因组在提取过程中一般有以下几步: 动物细胞基因组在提取过程中一般有以下几步: 首先是机械法破细胞抽提； 然后去除蛋白质，糖类等细胞内杂质污染； 最后纯化出ＤＮＡ。
SDS法提取动物组织 SDS法提取动物组织DNA 法提取动物组织DNA
SDS（十二烷基硫酸钠 SDS（十二烷基硫酸钠 ）是阴离子表面活性剂，溶 解膜蛋白而破坏细胞膜，使蛋白质变性而沉淀下来。 EDTA 抑制DNA酶的活性。再加入氯仿等有机溶剂， 抑制DNA酶的活性。再加入氯仿等有机溶剂 再加入氯仿等有机溶剂， 能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸(DNA (DNA、 能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸(DNA、 RNA)水溶性很强 水溶性很强， RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细 胞碎片和大部分蛋白质。上清液中加入乙醇 乙醇使 胞碎片和大部分蛋白质。上清液中加入乙醇使DNA 沉淀，沉淀DNA溶于双蒸水或TE溶液中， DNA溶液 DNA溶于双蒸水或TE溶液中 溶液。 沉淀，沉淀DNA溶于双蒸水或TE溶液中，即DNA溶液。
结果分析与讨论
操作步骤
1. 肝脏 左右, (剪碎 置研钵中，加入 肝脏1g左右 剪碎 置研钵中，加入1-2mL提取缓冲 左右 剪碎) 提取缓冲 研磨成浆； 管中， 液， 研磨成浆；倒入10mL EP管中，摇动混匀； 管中 摇动混匀； 2. 60℃水浴保温 颠倒混匀； ℃水浴保温30-60min，不时颠倒混匀； ，不时颠倒混匀 3. 室温下 室温下3000rpm离心 离心10min； 离心 ； 4. 小心吸上清于新的 小心吸上清于新的10mL EP管中，加入等体积的 管中， 管中 加入等体积的 24:1的氯仿：异戊醇，上下颠倒混匀； 的氯仿：异戊醇，上下颠倒混匀； 5. 室温下 室温下3000rpm离心 离心10min； 离心 ； 6. 小心将上层水相吸入新的 小心将上层水相吸入新的10mL EP管中； 将上层水相吸入新的 管中； 管中 7. 重复 步2-3次; (此步不做） 重复4-5步 次 此步不做 此步不做） 8. 加入 倍体积预冷无水乙醇，室温下放置片刻即 加入1-2倍体积预冷无水乙醇， 倍体积预冷无水乙醇 出现絮状DNA沉淀。 沉淀。 出现絮状 沉淀
实验七 真核生物组织中 DNA的提取 总DNA的提取
Total DNA extraction from eukaryotic tissue
实验目的
了解真核生物基因组DNA提取的一般原理 了解真核生物基因组DNA提取的一般原理 通过动物组织DNA的提取，掌握DNA 通过动物组织DNA的提取，掌握DNA 提取 的方法和步骤