植物组织硝酸盐含量测定与分析

植物组织硝酸盐含量的测定与分析

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一实验目的：

1、学会植物组织硝酸盐含量的测定方法。

2、复习分光光度法，掌握分光光度计的使用。

3、了解硝酸盐含量在植物营养生理中的作用。

4、通过对实验原理的掌握，用分光光度法测定油菜柄的硝酸盐含量。

二、实验原理：

（1）用蒸馏水将植物组织中的硝酸盐和亚硝酸盐提取出来。

（2）加锌粉将提取液中的硝酸根还原成亚硝酸根：

（3）与对氨基苯磺酸生成重氮盐，同α－萘胺结合生成玫瑰红色的偶氮染料：

（4）在520nm有吸收峰，其颜色的深浅在一定浓度范围内与溶液中硝态氮含量成正比，可以用分光光度法进行测定。，

三、实验材料：

油菜Brassica napus L．

四、实验试剂：

（1）硝酸盐标准溶液：取恒重硝酸纳0.6071g溶于1升水中，配成100µg/ml硝态氮溶液储存于冰箱中（0—5℃）备用。

（2）20%醋酸溶液(V/V)：取2Oml分析纯冰醋酸加80ml水。

（3）混合粉剂：

含硫酸钡：100

α-萘胺：2

锌粉：2

对氨基苯磺酸：4

硫酸锰：10

柠檬酸75

将上述各种试剂分别研细，硫酸钡烘干，再分别用等分的硫酸钡与其混合，然后再

把所有各剂混合在一起,使混合粉剂成为无颗粒状灰白色的均匀体，配制粉剂应在干燥洁净环境中进行，若空气湿度偏高，则混合粉剂成淡攻瑰红色。若药品不纯也会造成此现象，降低测定灵敏度，配好的粉剂应保存在黑暗干燥条件下，七天以后即能使用，存放条件良好，可存放数年，其测定稳定性比新配的更佳。

五、实验步骤：

1、标准曲线的绘制：

（1）配标准系列：配制浓度为0、4、8、12、16、20µg/ml的硝态氮溶液各10ml。

（2）显色：分别吸取2ml上述溶液转入到50ml比色管中，加20%醋酸溶液18ml,0.4g 混合粉剂，剧烈摇动1分钟，静置10分钟，用双层滤纸过滤。

（3）比色测定：取上清液以蒸馏水作对照，测定其520nm的吸光度值，以浓度为横

坐标，标准样品的吸光度为纵坐标绘制标准曲线或作出回归曲线。

2、植物组织中硝态氮的提取：

称取待测的植物功能叶柄0.5g，剪成l－2mm的碎片，置于干燥的三角瓶中，加入蒸馏水20ml，加塞进行激烈振荡1-3分钟，放置10分钟。

上清液为硝酸盐提取液。

3、植物硝态氮提取液的测定：

（1）取上部清液2ml，显色转入到50ml比色管中，加20%醋酸溶液18ml,0.4g混合粉剂，剧烈摇动1分钟，静置10分钟，用双层滤纸过滤。

（2）比色测定：蒸馏水作对照，测定显色后溶液520nm的吸光度值，查标准曲线求出提取液中硝态氮的浓度(μg/ml)。

六、计算：

植物组织中硝态氮含量(μg/g)=C ·V

其中：C 为标准曲线上查得的组织提取液含硝态氮浓度(μg/ml),

V 为lg 植物组织所制备的提取液总体积(ml)。如本方法为40ml 。实验数据：蒸馏水0ug/mL

4ug/mL 8ug/mL 12ug/mL 16ug/mL 20ug/mL 待测100.0700.2150.2980.3100.6090.7360.6742

00.0710.215

0.297

0.313

0.609

0.737

0.673

用Excel

作图得：

12ug/mL 对应的吸光度偏离其他的数据，极有可能为错误数值，应予删

去，得下图：

y=0.0334x+0.0648可得：当吸光度a=0.6735时，浓度所以，测得油菜叶柄中硝态氮含量为：18.22七、分析与讨论：

1、在刷洗干净试管以及比色管以后要及时贴好标签，以防比色管混淆。

2、加入混合粉后要剧烈震荡试管，以使溶液中的硝酸盐充分被还原为亚硝酸盐。

3、过滤时要用前滤液润洗试管，充分利用了要弃去的滤液。

4、在使用分光光度计时要将比色皿刷洗干净，尤其是作为调零的比色皿。

八、实验建议：

1、比色皿应该定期彻底清洗，因为外部与内部都有杂质残余。

2、建议增加胶头滴管或塑料滴管的数量，用来准确滴加，量取溶液。

3、建议更新移液管，因为很多移液管的下端都已破碎，会对移液的精度造成影响。

九、小结：

通过本次实验我学会了植物组织硝酸盐含量的测定方法，复习了分光光度法，掌握了分光光度计的使用。并且新了解了硝酸盐含量在植物营养生理中的作用。在实验中，我们小组通过对实验原理的掌握，用分光光度法测定了油菜柄的硝酸盐含量。基本上达到了本次实验的目的与要求。