耐高温酵母菌的筛选及特性 - 《生物加工过程》
【doc】论耐热性毛霉菌株的筛选及酶学性质
论耐热性毛霉菌株的筛选及酶学性质qI{,z—l.第1期1998年1月,印穹,,79j吖1仃一\吣7中国调味品2一弓f№tJm1998论耐热性毛霉菌株的筛选及酶学性质垫堂蛰-'7-527L7L?(华中农业大学食品科技系武汉42~q0)l摘要】从湖北,河南手地收集,分离的6l抹霉菌中,筛选母到一抹靛良好发酵生产腐乳的耐热性毛霉I-I,菌棘.谴菌棘的生生长青适矗为30～40℃;在35℃条件"F~l-养2d,其中性蛋白酶活力腐乳是我国特有的发酵食品,在许多地方都有生产.它具有风味独特,营养丰富,价格便宜等特点.它既可调味,也能佐餐,深受国内外消费者的喜爱,因而存在着较大的销售市场和消费潜力.腐乳生产的历史悠久【.五十年代中期以来,由于搞清了发酵菌种问题而开始应用人工接种的革新法(新法)生产腐乳.毛霉是新法生产腐乳的主要菌种【2J.它具有菌丛细长柔软,酶系丰富,无毒无害,不产生怪昧异色等优点,但其生长温度一般都在15～25℃,不能在炎热季节用于腐乳生产.为了解决在炎热季节生产腐乳所需的菌种问题,我国从八十年代初期开始开展了大量的耐热菌种选育工作.但所选菌种的耐热程度一般都在35℃以下,不能满足腐乳生产的需要.本文就耐热菌种的筛选及酶学性质进行了研究.l材料与方法1.1菌种来源1.1.1发霉豆制品收集湖北,河南等地的霉豆腐,霉干张,豆渣等,从中分离得到毛霉24株,1.12稻草收集武汉市郊的新鲜稻草,将豆腐块置于其上,富集得到毛霉11株,根霉15株. 1.1.3酒曲从湖北所产一酒曲中分离得到毛霉2株,根霉3株.1.1.4本研究室华中农业大学食品微生物研究室现有的腐乳发酵用根霉1株.1.2培养基1.2.1酪蛋白(干酷索)琼脂培养基干酪索4.0先用20ml0.1mol/LNaOH溶液溶解后,加20g琼脂,再加蒸馏水煮沸溶解并定容至1000ml,分装后灭菌备用.1.2.2麸皮豆粉培养基麸皮9.O黄豆粉(过加目筛)1.0g,水10ml,装入250ml三角瓶中,拌匀,灭菌后及时振散备用.1.23马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基见参考文献l.1.2.4豆浆培养基取黄豆100.0g,用水泡胀后,放入多功胡巅,理学硕士,讲师,现在河南省卫生防疫站工作.拯藩骶玑渤弩言蝴速关前第1期专论与综述论耐热性毛霉菌株的筛选及酶学性质3 能果汁机的料杯中.并加少量水,然后捣碎制浆.用双层纱布过滤.反复加水,捣碎,过滤.共得豆浆1000rd,然后分装,灭菌,备用.1.2.5豆腐块培养基将市售豆腐(石膏点制)切成2×3xlena小块,装入250ml三角瓶中.每瓶2块.灭菌后备用.以上培养基有条件均为121℃半小时灭菌.1.3主要仪器电子天平:1702型.德国Sartarius;分光光度计:721型.上海第三分析仪器厂;控温摇床:e一26型,美国New BrunswickScientificCo.;生化培养箱:IR}卜150B型,广东省医疗器械厂;相差显微镜附配套照像系统:BH一2 型.日本OlympusoptCo.,Ltd..1.4主要药品L一酪氨酸:生化试剂.上海长江生化制药厂;葡萄糖:化学纯,北京化学试剂二厂;3,5一二硝基水杨酸(DNS):化学纯,北京西中化工厂;橄榄油:化学纯,上海化学试剂站分装厂;福林一酚(Follnpheno1)试剂lJ用于蛋白酶活力的测定;聚乙烯醇(P,v.P)橄榄油乳化液[l:用于脂肪酶活力的测定.DNS试剂【】:用于还原糖含量及糖化酶及活力的测定.1.5菌种筛选1.5.1初筛用接种环蘸取少许孢子.分别将各菌株点种在酪蛋白琼脂乎板培养基上,并置于35℃条件下培养2出然后观测各菌株的菌落直径,菌丛高度和透明圈大小等.1.5.2复筛将初筛所得菌株的孢子悬液,分别接种到麸皮豆粉培养基中,在35℃条件下培养2d.接着取一定量的鲜曲.制备其中性蛋白酶的粗酶液后.测定各菌株的酶活高低. 1.5.3发酵试验将复筛所得菌株的孢子悬液.涂布接种到豆腐块培养基上,在35℃条件下培养2d. 观测其发酵情况.1.6粗酶液制备1.6.1固体曲的蛋白酶粗酶液取2.0g固体曲(麸曲,菌膜).研磨后分别用20rd0.1md/LpH2.6的乳酸一乳酸钠缓冲液,0.1mol/LpH7.2的磷酸氢二钠一磷酸二氢钠缓冲液和0.05mol/L硼酸根pill0.0的硼砂一氯氧化钠缓冲液,在加℃水浴中浸提1h,并间断搅拌.经滤纸过滤后即得相应的酸性,中性和碱性蛋白酶的粗酶液.16.2液体曲的蛋白酶粗酶液直接将液体曲用滤纸过滤即得其粗酶液.1.6.3脂肪酶粗酶液同液体曲蛋白酶粗酸液的制备方法.1.6.4糖化酶粗酶液基本同固体曲蛋白酶粗酶液的制备方法,但用0.1mol/LpH4.6的醋酸一醋酸钠缓冲液作浸提液.1.7酯活的测定1.7.1蛋白酶活力的测定采用Folinphenol法_4J.分别用相应pH值(pH2.6,pH7.2和pill0.0)的缓冲液配制酪蛋白溶液作底物,测定酸性,中性和碱性蛋白酶活力高低.定义在加℃条件下,每lmin 水解酪蛋白产生lpg酪氨酸所需的酶量为1 个酶活单位.1.7.2脂肪酶活力的测定采用乳化撇榄油法].定义在加℃,pH7.2条件下,每lmin水解脂肪产生lpmol4中国调味品总第227期脂肪酸所需酶量为1个酶活单位.1.7.3糖化酶活力的测定采用DNS法【t.定义在加℃,pH4.6条件下,每1h水解淀粉产生lrag葡萄糖所需的酶量为1个酶活单位.2结果与分析2.1选定的菌株经初筛,复筛和发酵试验,HI菌株在35℃条件下生长,发酵良好.且其菌丛细长柔软,色白无怪味,具有较高的蛋白酶活力.因而被选为进一步研究,利用的腐乳菌种.其有关陛状见表1.表1菌株的性状【在35E条件下墙彝*:在酪蛋白琼脂平扳上培养;*-:在麸皮豆粉培养基上培养i-*-:在豆腐块培养基上培养.经鉴定【,HI菌株为毛霉(Mucor印.),暂命名为毛霉HI菌株.2.2H|菌株的温度适应性将毛霉H菌株的孢子悬液涂布于三角瓶中的PDA培养基上.分别置于不同温度下培养,每隔12h观测一次.其生长情况见表2.表2H菌株在不同温度下的生长情况显然,H|菌株在45℃以下都能生长,且随着温度的升高,它的生长速度加快,老化的速度也随之加快.其中在30～40℃,HI菌株的生长速度较快.老化较慢.所以HI菌株是一生长温度范围较大的耐热菌株.2.3H|菌株的蛋白酶组城将毛霉HI菌株的孢子悬液接种于麸皮豆粉培养基中,在35℃条件下培养2d.然后分别制备其酸性,中性和碱性蛋白酶的粗酶液,并测定其相应的酶活.其结果见表3.表3菌株蛋白酶的组成酶类煞燕碱性蛋白酶0酶活(g干曲)129.0185.9表3显示.HI菌株具有酶活力相近的酸性和中性蛋白酶.这有利于HI菌株在偏酸性的较大的DH值范围内分解蛋白质.2.4H|菌株的脂肪酶和糖化酶活力分别用豆浆培养基和麸皮豆粉培养基,在接种毛霉菌株的孢子悬液后,分别在第1期专论与综述论耐热性毛霉菌株的筛选及酶学性质5 35"C条件下振荡(200r/rnln)和静止培养2d.然后分别制备脂肪酶和糖化酶的粗酶液测定其相应的酶活.其结果见表4.表4I-L,由表3和表4可知,HI菌株具有较丰富的酶系组成.这有利于豆腐坯主要成分的降解,以保证腐乳的品质.2.5HI菌株的产酶(中性蛋白酶)进程在豆腐块培养基上,涂布接种毛霉H菌株的孢子悬液,在35℃条件下培养,每隔12h剥取毛坯上的菌膜(带少量坯基).制备中性蛋白酶的粗酶液,测定其酶活力.其产酶进程如图1.3蠡菪驽圉1H'菌株产酶(中性蛋白酶)进程从图1可看出,HI菌株在豆腐坯上生长到第48h达到产酶高峰,至第60h便迅速下降.所以在腐乳生产过程中,可在48～60h期间中止HI菌株的发酵而进行后续工艺.2.6cMg2对}I4菌株产酶【中性蛋白酶】的影响以豆浆培养基为对照.并以它为基础,分别添加CaSO4?2H20和MgSOg7H20,配成不同cd和Mg2浓度的豆浆培养基,灭菌后接种毛霉}I4菌株的孢子悬液,在35℃,200r/rain条件下培养2do每处理三次重复, 每重复50ml培养基.培养结束后分别制备其中性蛋白酶的粗酶液,测定其酶力.其结果见图2.3蠡菪舅子.'l00'30予(%)圈2c',M对H'菌株产酶{中性蛋白醵】的影响由图2可看出,在试验范围内,0.1O%～0.50%cd能促进}I4菌株的中性蛋白酶活力,其中0.40%Ca2使其中性蛋白酶活力达最大值(210.050ml液体曲);0.10%～0.44%t~也能提高HI菌株的中性蛋白酶活力.其中0.20%Mg2使其中性蛋酶活力达最大值(2O5.ov/5ona液体曲).2.7(起始)pH值对}I4菌株产酶(中性蛋白酶)的影响同样以豆浆培养基为基础,分别调成不同的oH值.接种后在35℃,200r/win条件下培养2d.然后分别制备其粗酶液,测定其中性蛋白酶活力.其结果见图3.200嚣0嚣loo掣5o3456789pH值圉3m-I值对H'菌株产酶伸性蛋白酶】的影响显然,pI-I5～7是H菌株产酶(中性蛋白酶)的适宜的pH值.3讨论3.1腐乳发酵菌种的耐热性据现有的报道[8.9.1o】,所谓的耐热菌种,6中国调味品总第227期其耐热程度大多在35℃以下.本研究筛选的毛霉H菌株.其生长适温在30--40℃,故为目前最耐热的腐乳发酵菌种之一.实际上,我国腐乳产地的夏季室内温度各不相同, 因此,耐热菌种的选育和应用应结合腐乳产地的具体情况.江南地区是腐乳的主产地. 毛霉菌株符合该地对耐热菌种的需要.3.2腐乳发酵菌种的酶系组成豆腐(以大豆为原料)中含有16.0%蛋白质,7.2%脂肪和0.1%碳水化物.三者是豆腐的主要有机质成分¨.腐乳发酵菌种应具有相应的酶系.以分解豆腐相应的成分. 形成腐乳的鲜味和其它风味,提高腐乳的营养价值.毛霉菌株具有相应的酶系,符合腐乳发酵对菌种酶系的要求.由于多种原因,使得确定发酵菌种的几种主要酶的酶活指标颇为困难.但为了提高菌种选育水平,应根据腐乳不同品种的工艺特点,确定发酵菌种的酶活指标,特别是蛋白酶的酶活指标.这方面的工作尚待开展.3.3凝固剂对菌种的影响腐乳发酵所用的豆腐坯一般是由盐卤或石膏凝固.它们作凝固剂各有所长.其中用盐卤凝固的豆腐坯中Mg2较多,含量一般为0.1%～0.2%;用石膏凝固的豆腐坯中Ca2+较多.含量一般为0.3%～0.4%t".所以.不论以盐卤还是以石膏作凝固剂点制的豆腐,均利于H}菌株中性蛋白酶的作用. 参考文献l陈陶声.中国酿造技术的过去,现在与将来(下),中国调味品,1988(4):62扬淑嫒等.新编大豆食品.北京.中国商业出版社,1989180～2063祖若夫等.微生物实验教程.上海.复旦大学出版社.1993.2814堵葛健,壬正祥.工业微生物实验技术手册. 北京.中国轻工业出版社,1994.206-2095中山大学生化微生物学研究室.生化技术导论.北京.人民教育出版社,197857～596北京大学生物化学教研室.生物化学实验指导.北京:人民教育出版社.1979.22-247胡巅,赵学慧.耐热性毛霉的选育及鉴定.信阳农专.1997(3):6～88常余林.新春3号腐乳菌种的选育.调味副食品科技.1981(9):209陈娇娣,陈绪嫦.腐乳生产的高温菌种的筛选结果.食品科学,1993(3):50-5210邓席芳等.耐高温腐乳毛霉菌种选育及产酶条件研究.中国酿造,1996(1):27-30n扈文盛食品常用数据手册.北京.中国食品出版社,1987.446-456收稿日期:19978上接第31页)表l样品分析结果参考文献1日本药学会编着.张洪样主编.卫生试验法. 注解.北京.华文出版社,1995:2292GB5009.39—85.食品卫生检验方法(理化部分),北京中国标准出版社,1986:1533志Itl~--化学辞典东京,森北出版株式会社,1981:9844D咖iMB.~2shooCJ.ShahSAeta1.JA OACInt,1989,72(6):953收稿日期:1997.9。
酵母菌分离筛选方法要点
酵母菌的分离筛选方法酵母菌多数为腐生，一般生长在含糖较高，偏酸的环境中，在通气条件下，液体培养比霉菌快。
菌落与细菌相似，较大而厚，多数不透明，菌落光滑湿润粘稠，乳白色，少数干皱，边缘整齐，呈红色或粉红色，圆形椭圆卵形，液体培养基生长会生成沉淀或菌膜。
含高糖浓度（45%），分离蜂蜜酵母，球拟酵母属等嗜高渗透压的酵母。
1.培养基：1.1葡萄糖50g/L 尿素1g/L （NH4）2SO41g/L KH2PO42.5g/LNa2HPO40.5g/L MgSO41g/L FeSO4 0.1g/L 酵母膏 0.5g/L 孟加拉红 0.03g/L PH4.5-5.0 （富集用）★1.2乳酸-马铃薯-葡萄糖培养基：马铃薯200g/L 葡萄糖（霉菌用蔗糖）20g/L 乳酸5ml马铃薯去皮切片200g，加水煮沸30min，纱布过滤，补足蒸馏水1L，PH自然。
（去掉乳酸可用于酵母菌和霉菌培养用）（富集用）★1.3麦芽汁培养基：1：4水60-65℃水浴3-4小时，4-6层纱布过滤，可加一个蛋清加水20mL调均生泡沫，倒入糖化液中，煮沸过滤，10-15波林，氯霉素0.1g/L PH6.0-6.4 121℃ 20min（分离保存用）灭菌后加入300u/ml硫酸链霉素（集菌用）★1.4虎红（孟加拉红）培养基：蛋白胨5.0g/L 葡萄糖10g/LKH2PO41.0g/L MgSO40.5g/L 孟加拉红0.033g/L 氯霉素0.1g/L 琼脂15g/L PH自然（分离纯化用）★1.5 豆芽汁培养基：黄豆芽100g/L 葡萄糖50g/L PH自然。
100g 黄豆芽，加水煮沸30min，纱布过滤，补足蒸馏水1L1.6察氏培养基：主要培养霉菌观察形态用蔗糖30g/L 硝酸钠3g/L 磷酸氢二钾1g/L 氯化钾0.5g/L 硫酸镁0.5g/L 硫酸亚铁0.01g/L 琼脂15-20g/L 121℃ 20min PH自然一般分离黄酒酵母酒精酵母使用曲汁培养基，啤酒酵母用酒花麦汁培养基，葡萄酒酵母用葡萄汁培养基。
耐高温耐高糖酵母的筛选与驯化
ＷＡＮＧ ｈ ｎ Ｃ ａ ｇ—ｋ ｉ ＨＡＮＧ Ｌ —ｌ，ＨＥ ｉｎ ｕ ，Ｚ ｉ ｉ Ｊａ ｇ—ｚ ｏ ，Ｌ ｉｇ ｈ ｕ ＩＪｎ
（ ｅ ａｏａ ｒ ｒｔ ｔｎ＆ Ｕｉｚｔｎｏ ｉｏｉ ｌ ｅｏｒｅ ｉ ａｌ ａｉ ｏ ｉ ａｇＰｏ ｕｔｎａｄＣ ｎｔ ｃ ｏ ｒ ｐ ， Ｋ ｙＬｂｒｔ ｙｏ Ｐｏ ｃ ｏ ｏ ｆ ｅｉ ｔｉ ｉ ｆ ｏ ｇ ａ Ｒ ｓｕｃｓ ｎＴ ｒ Ｂｓ Ｘ￣ｉ ｒｄ ｃｏ ｎ ｏｓ ｕｔ ｎＧ ｏ ｓ ｌａｏ Ｂ ｌ ｃ ｍ ｎｆ ｎ ｉ ｒｉ ｕ Ｔ ｒ ｎ ｅｓｙ Ｍａ ８ ３０ ，ｈｎ ） ａｉ Ｕ ｉ ｒ ｔ， ｒ ４ ３０ Ｃ ｉａ ｍ ｖ ｉ
Ａｂ ｔａ ： ｆ —ｆｕ ｅｍｏｏｅａ ｔｙ ａｔ ｗ ｒ ｓｌｔｄｆ ｍ ｈ ｅｉａｐｏ ｉｋａ ｇｆ ｉ ，ｎｗ ｃ ｒｅｓ ａｎ ｅｅｏ ｔ ｎ ｄ ｓｒ ｄ Ｆ ｔ ｙ ｏ ｒｔ ｒ ｔｌｒ ｅ ｓ ｅｅｉｏａｅ ｏ ｔｅｐ ｒ ｒ Ｓｎ ｉ ｒ ｔ ｉ ｈ ｈｔ ｅ ｔ ｉｓｗ ｒ ｂａ ｅ ｈ ｎ ｓ ｒ ｃ ｆ ｎ ｕ ｓ ｉ ｈ ｒ ｉ
耐温酵母的筛选及其发酵特性研究
耐温酵母的筛选及其发酵特性研究肖辰;邓静;吴华昌;张良;李萍萍;沈芳【摘要】A high temperature resistant yeast strain A10（grow well at 46 ℃）was screened out from high temperature stacking fermented Maotai-flavor grains through enrichment culture.Its best growth temperature and growth pH value were at 36 ℃ and 4.0 respectively.Through the study of the effects of temperature on strain A10 fermentation,the optimum fermenting temperature was at 38 ℃,after 72 h fermentation,alcohol content in the fermenting liquid could reach up to 5.1 %vol.%通过富集培养,从酱香型白酒高温堆积发酵酒糟中筛选出1株能在46℃下发酵的耐温酵母菌株A10,其最适生长温度36℃、pH值为4.0。
通过考察温度对A10发酵的影响,确定A10的最适发酵温度为38℃,发酵72 h后,发酵液中酒精浓度达到5.1%vol。
【期刊名称】《酿酒科技》【年(卷),期】2012(000)003【总页数】4页(P26-29)【关键词】酒精酵母;高温;筛选;发酵特性【作者】肖辰;邓静;吴华昌;张良;李萍萍;沈芳【作者单位】四川理工学院生物工程学院,四川自贡643000;四川理工学院生物工程学院,四川自贡643000;四川理工学院生物工程学院,四川自贡643000;四川理工学院生物工程学院,四川自贡643000;四川理工学院生物工程学院,四川自贡643000;四川理工学院生物工程学院,四川自贡643000【正文语种】中文【中图分类】TS261.1;TS262.33乙醇广泛应用于食品、化工、医药、能源等领域。
两株耐高温酵母菌的鉴定及其特性研究
两株耐高温酵母菌的鉴定及其特性研究耐高温酵母菌是一类在高温环境下能够生存和繁殖的微生物。
这些酵母菌通常能够生长在温度超过50摄氏度的环境中，且具有一系列特殊的适应性和生理特性。
由于其在高温下的活性和稳定性，耐高温酵母菌在食品工业、发酵工业和生物燃料产业等领域具有巨大的应用潜力。
为了鉴定和研究耐高温酵母菌的特性，一般可以采用以下步骤：1.从耐高温环境中采集样品：耐高温酵母菌通常存在于高温的自然环境中，如温泉、地热能源、火山喷发附近等。
为了寻找耐高温酵母菌，可以从这些环境中采集土壤、水样、空气等样品。
2.分离耐高温酵母菌：将采集到的样品在适当的培养基上进行分离培养。
选择培养基中含有高温下菌落能够生长的组分，如葡萄糖、酵母提取物等。
通过培养基上出现的菌落形态、颜色和生长速度等特征，分离出耐高温酵母菌。
3.重复分离纯化菌株：将分离得到的耐高温酵母菌进行重复分离，以得到纯化的菌株。
4.鉴定菌株：通过形态学、生理特性和分子生物学方法，对纯化的菌株进行鉴定。
形态学鉴定包括观察菌落形状、孢子形态等；生理特性鉴定包括菌株生长温度范围、对极端环境的适应性等；分子生物学鉴定包括通过PCR扩增和测序分析菌株的基因序列。
在鉴定和研究耐高温酵母菌的特性时，还可以进行以下方面的研究：1.生理特性和生长环境的影响：通过调整培养基的成分和温度，研究耐高温酵母菌的生长特性和生理反应。
比如可以研究耐高温酵母菌对不同碳源的利用、对酸碱度和盐度的耐受性等。
2.发酵特性和产酶能力：通过测定耐高温酵母菌在不同温度和培养条件下的生长速率和产酶能力，研究其在发酵工业中的应用潜力。
可尝试研究发酵过程中产生的酶种类和活性，以及产酶的适宜温度和pH值等特性。
3.基因组和基因表达分析：通过对耐高温酵母菌的基因组进行测序和分析，研究其在适应高温环境中的基因表达调控机制。
可以筛选并分析与高温适应性相关的基因，探究耐高温酵母菌的抗热适应机制。
总之，耐高温酵母菌的鉴定和特性研究可以为其在食品工业、发酵工业和生物燃料产业等领域的应用提供重要的科学依据，同时也有助于我们对这类酵母菌的生物学特性和适应机制有更深入的了解。
耐高温酵母的诱变筛选及生理生化特性研究
４ ℃、５Ｃ、０Ｃ、５ ６ ｃ恒温培 养 箱 中培养 ４ｈ后 ， 存 活 的耐 高温 菌 株 分别 挑 选保 存 于斜 面试 ０ ４ ５ ５ ℃、０ ８ 将
管中。 １ ２４ 产酸试 验 ． ． １ ２ ５ 产醋试 验 ．．
将 供 试 菌株 （ 括 出发 菌 株和 耐 高 温菌 株 ） 包 转接 于产 酸 平 板 培 养 基 上 ， 分别 置 于
产那些质 量 指标要 求较 高 的发 酵产物和 Ｓ Ｐ生产 ， 高温 酵母具 有重 要 的地 位 和广 泛 的应 用 。 Ｃ 耐
１ 材 料 与 方 法
１１ 材料 ．
１ １ １ 茵种 ． ．
产朊假 丝 酵母 （ 源 于武汉 大学生 科 院 ） 来 ① 斜 面 培 养 基“ ： 萄 糖 ２ ｇ 蛋 白胨 ２ ｇ， 母 膏 １ｇ 琼 脂 ２ ｇ 水 １ ０ ｍ［， 葡 ０． ０ 酵 ０． ０． Ｏ０
醢 代谢 造 往 相 关 的 酶 活 性 较 高 ， ４ ℃ 高 温下 产 醢 、 琦覆 分 解庳 素 的 能 力 最强 ． 在 ５ 产 美
中 田分 娄 号 ＴＱ９ ２
酵母 菌 是单 细胞真核 微 生物 ． 生长温 度 ４ ０ｃ， —３ 最适 ２ — ３ ℃ ， 自然界 分布很 广 ． ５ ０ 在 主要 生 长在
过 ３ Ｃ时 ， 产 和 发 酵 能 力 大 大 减 弱 ， 为 了 控 制 由 于发 酵热 所 引 起 的 温 度 上 升 ， 要 大 量 冷 却 ５ 生 且 需
水 。而对 于 耐高温 酵母菌株 来说 ， 它们具 有生长 速度 快 ， 产效 率高 的优点 ， 生 而且 不 易 污染 杂菌 ， 节 省能 源 。 它们所 合成 的酶与适 温 同类 酵母 菌株 产生 的酶 相 比 ， 高温 时具 有更 高 的 酶活性 。因此对 于生
酒糟中耐高温酵母菌的筛选及分类鉴定
酒糟中耐高温酵母菌的筛选及分类鉴定陈敏会;康冀川;雷帮星;郭坤亮【期刊名称】《酿酒科技》【年(卷),期】2015(000)003【摘要】In this study, 12 yeast strains were isolated from Maotai distiller’s grains, then they were cultivated at 37 to 47℃, and they were identified through colony morphology analysis and physiological and biochemical analysis. The results suggested that, 2 yeast strains grew wellat 47℃and named No.1 and No.2 strain, and they were identified as Torulopsis and Brettanomyces according to their morphological features (colony, cells, ascospores, pseudohyphae and ballistospore) and their biological and biochemical characteristics. Those 2 strains were of certain research values.%从茅台酒酒糟中分离得到12株酵母菌，在37～47℃条件下进行培养观察。
用菌落形态、生理生化实验分析鉴定菌株。
结果表明，2株酵母菌能在47℃的高温下生长，分别为1号和2号。
根据形态特征(菌落、细胞、子囊孢子、假菌丝、掷孢子)和生理生化特征等，初步将1号和2号酵母菌鉴定为球拟酵母属和酒香酵母属。
1号和2号菌株在47℃时生长良好，具有一定的研究价值。
耐高温酵母的选育及其生长特性的研究
耐高温酵母的选育及其生长特性的研究
邹建忠
【期刊名称】《酿酒科技》
【年(卷),期】2009(000)006
【摘要】通过对一株酒精酵母E12做紫外线诱变和高温培养筛选,获得一株耐高温型酒精酵母UT1,并比较E12和UT1两者的主要生长特性以及对胁迫环境的耐受能力,为以后酒精发酵的条件选择、优化提供参考.结果表明,在40℃下,变异菌UT1的产酒率达到6.0%vol,比出发菌E12提高了11.1%.比较两者分别在不同温度和不同pH,以及在高酒精度、高糖分和高盐分的环境下的生长状况,发现UT1对温度、酸度和盐度变化的耐受力更好,说明生长耐受能力强有助于酵母在高温下提高产酒率.
【总页数】5页(P52-56)
【作者】邹建忠
【作者单位】华南理工大学生物化工系,广东,广州,510006
【正文语种】中文
【中图分类】Q93-1;TS261.1
【相关文献】
1.1株耐高温高盐生香酵母的选育及特性分析 [J], 谭才邓;王文文;朱美娟;廖延智;姚勇芳
2.选育耐高温酒精酵母的研究 [J], 华子安;田亚平;金其荣
3.耐高温酿酒酵母的选育及其在乙醇发酵生产中的应用 [J], 齐显尼;甘雨满;王钦宏
4.基因组改组技术选育耐高温、耐高乙醇酿酒酵母菌株的研究 [J], 王灏;王航;孟春;郭养浩
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两株耐高温酵母菌的鉴定及其特性研究
两株耐高温酵母菌的鉴定及其特性研究
1 引言
近年来，随着环境的温度变化，高温带来的不可避免的影响，很多实验研究表明，许多酵母菌非常耐受高温，可以良好地适应高温环境。
用于发酵工艺及其他生物技术生产和处理过程中对酵母菌的高温耐受性非常重要。
因此，鉴定和筛选具有良好耐高温性能的酵母菌菌株具有重要的科学意义和应用价值。
2 酵母菌菌株的鉴定
耐高温酵母菌菌株的鉴定首先要采集样本，根据气候条件和生态参数，到该生境中的抽样点，收集和采集酵母菌，回收到实验室进行分离培养，以满足发酵生物技术应用。
其次，实验人员需要严格管理采集样本和培养条件，根据一定的分类标准，筛选菌株，从而确认耐高温酵母菌菌株的存在，并研究其特性。
3 耐高温酵母菌的特性
优质的耐高温酵母菌菌株，具有其他菌株所不具备的特性，具有健康的芽孢活动，能够快速地形成芽孢，在具体的范围内能够有效地生长，从而实现自然界的繁殖。
此外，优质耐高温酵母菌拥有良好的抗病毒性，可以在高温环境中有效地抵御外界病毒的入侵，保护自身不受病毒的侵害，拥有更高的发酵机械效率，最大限度地利用好发酵有机质资源。
4 总结
通过对发现的耐高温酵母菌菌株的详细鉴定和特性研究，可以更深入地了解酵母菌的生理和抗性特性，为食品及其他高温发酵工艺的实际应用提供参考，为延伸酵母菌的应用前景发展提供依据，从而有助于更好地促进高温下的发酵工艺优化和酵母菌应用的发展。
两株耐高温酵母菌的鉴定及其特性研究
两株耐高温酵母菌的鉴定及其特性研究近年来，随着全球气温的升高，耐高温酵母菌的研究受到了越来越多的关注。
耐高温酵母菌可以用来制作高糖度的食物和酒，因此，研究它们既有科研潜力，也有实际应用价值。
本文介绍了从西北地区发现的两株耐高温酵母菌的分类鉴定及其特性研究。
两株耐高温酵母菌属于真菌泛分支，分别命名为S1和S2。
S1菌株在西安市雁塔区某些物种的植物表面发现，颜色呈橙色，菌落的大小为2~3毫米，是圆形的，由于具有色素，因此可视而知。
扫描电镜下可见双分枝孢子，大小为4~9微米，孢子分二枝，枝条两端平直，表面有微小的纤毛，球形孢粉多数与枝条同轴；S2菌株在陕西省某些物种的植物表面发现，颜色蓝紫色，菌落的大小为3~4毫米，形状表达圆形，由于具有色素，所以可视而知。
扫描电镜下可见双分枝孢子，大小为4~9微米，孢子分二枝，枝条两端平直，有微小的纤毛，球形孢粉多数与枝条同轴。
两株耐高温酵母菌的分子特性研究表明，S1和S2的18S rRNA序列99%的相似度，可以很好地将它们归类为一个物种。
通过ITS与ITS2区域的比较，S1和S2的ITS序列相似度达到99.8%，说明其集团间的遗传关联性很强，且该物种种类极为稳定。
进一步研究两株菌株的生理特性，用耐热实验来研究其耐高温能力。
S1菌株最适宜发酵温度为30~45℃，耐热温度为50℃；S2菌株的最适宜发酵温度为30~50℃，耐热温度为60℃，可见两菌株均具有较高的耐热性能。
此外，两株菌株的PH值也有所不同，S1菌株最适宜发酵pH在4.5~7范围内，而S2菌株最适宜发酵pH在5.5~8.5之间。
在抗药性检测中，S1和S2对广谱抗生素中大部分抗生素的耐药性较低，只有少部分抗生素的耐药性较强。
结果表明，S1和S2具有良好的特异性，不仅可以抵御外源侵害，而且具有较高的高温耐受性。
综上，本文介绍了西北地区发现的两株耐高温酵母菌的分类鉴定及其特性研究。
研究结果表明，S1和S2是属于真菌泛分支的两株酵母菌。
两株耐高温酵母菌的鉴定及其特性研究
两株耐高温酵母菌的鉴定及其特性研究近年来，随着石油化工工业的发展，许多耐高温酵母菌的研究正在受到越来越多的关注。
耐高温酵母菌具有较高的耐温性，可以在温度较高的环境中维持正常的生物活性，因此具有十分重要的应用价值。
本研究以两株耐高温酵母菌(Pichia thermohyalospora Y-1/2)为研究对象，通过对Pichia thermohyalospora Y-1/2的鉴定及其相关特性的研究，探究其在石油化工及其他领域中的应用潜力。
1、两株酵母菌的鉴定首先，我们从环境中分离出了两株高温耐受菌，采用多孔物质培养基进行培养，搭配28℃以上的高温条件，以确保酵母菌的正常生长。
经过活动性检测，这两株菌株显示出较强的生物活性，可在较高温度下维持正常的生长，因此被称为耐高温酵母菌。
通过16S rDNA测序和形态特征鉴定，将这两株高温耐受菌分类为Pichia thermohyalospora Y-1/2。
2、Pichia thermohyalospora Y-1/2的生物学特性经实验表明，Pichia thermohyalospora Y-1/2在室温（28℃）时可以正常生长，而在37℃时更加旺盛，活力也更强。
此外，它们还表现出对抗素的抗性，可以抵御来自环境的抗生素污染，有效抵御外源性抗生素的毒性，具有较强的抗病毒性，能够迅速抵御病原体侵染。
由于具有良好的抗药性和环境适应性，Pichia thermohyalospora Y-1/2在微生物技术领域有着广阔的应用前景。
3、Pichia thermohyalospora Y-1/2的细胞生物学特性通过细胞膜特性分析，Pichia thermohyalospora Y-1/2的细胞膜主要由诸如脂肪酸、烷醇和多糖组成，具有良好的抗药性和结构稳定性，能够有效抵御外界的抗生素和其他有害物质的侵害，具有较强的环境耐受性和抗病毒性。
此外，Pichia thermohyalospora Y-1/2也具有优良的抗氧化性能，能够有效地抵御氧化剂的侵袭并阻止自由基的形成，同时还可以在高温环境中维持正常的生化活性。
两株耐高温酵母菌的鉴定及其特性研究
两株耐高温酵母菌的鉴定及其特性研究近年来，随着环境温度的不断升高，全球变暖正在加剧。
这对生物的种类和分布造成了巨大的影响，因此，高温耐受性的真菌受到了广泛的关注。
酵母菌特别是大菌属（Saccharomyces）的研究成为发展高温耐受性的真菌的新兴研究方向，高温耐受酵母菌通常表现出各种特性，如耐高温性、耐酸性、耐药性和耐抗生素性。
本研究以系统发酵实验为基础，研究了两株高温耐受酵母菌的特性，其中一株（细胞来源：工业酿造的微生物鉴定公司）在45℃时具有活性，而另一株（细胞来源：科研林场）可在60℃时维持活性。
首先，我们进行了基质复杂度和抗性水平的分析，评估了两株高温耐受酵母菌系统中的遗传多样性。
其次，我们检测了耐抗生素性，研究了在可变温度下细胞存活率和生长率，最后，我们研究了细胞增殖和繁殖能力，以及细胞体积变化的模式。
结果表明，这两株高温耐受酵母菌的基因多样性显著高于传统菌株，两株菌株的耐抗生素性也显著高于传统菌株，表现出抗性水平的显著差异。
此外，这两株菌株在35-75℃的温度范围内均有活性，在低温下细胞存活率较高，而在高温下，其细胞存活率和生长率仍然很高。
最后，在不同温度下这两株菌株的细胞体积和繁殖能力也表现出显著的差异，其中较低温度下的细胞体积较小，而较高温度下其细胞体积较大，繁殖能力也更强。
因此，本研究表明，这两株高温耐受酵母菌是一种特殊的菌种，可以深入研究它们的耐受性、耐抗生素性及其他特性。
本研究增加了对此类特殊类型酵母菌的认识，为发展更多高温耐受真菌提供了启发。
总之，本研究鉴定了两株高温耐受酵母菌，检测了它们在不同温度条件下的耐受性、耐抗生素性及其他特性，表明这两株高温耐受酵母菌具有显著的耐抗生素性、繁殖性及其他特性。
因此，本研究为高温耐受真菌的开发及应用提供了参考。
耐高温高产酒精酵母的筛选及生理特性的初步研究
耐高温高产酒精酵母的筛选及生理特性的初步研究
李艾;郝玉翠;郝斌
【期刊名称】《唐山学院学报》
【年(卷),期】2009(22)3
【摘要】从自然界不同来源的基质样品中,经富集、选择性培养和四级筛选,最终获得了一株耐高温高产酒精酵母,记为A27,可满足在高温条件下进行浓醪酒精发酵.A27菌株的生理特性:适宜生长温度36℃,适宜生长pH值4.5,最适接种量
2×107个/mL.
【总页数】3页(P74-76)
【作者】李艾;郝玉翠;郝斌
【作者单位】唐山学院,环境与化学工程系,河北唐山,063000;唐山学院,环境与化学工程系,河北唐山,063000;唐山学院,环境与化学工程系,河北唐山,063000
【正文语种】中文
【中图分类】TS262.2
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4.双灭活原生质体融合法选育耐高温高产酒精酵母的研究 [J], 杨汝德;朱文生
5.耐高温高产酒精酵母的筛选及其大曲生产应用研究 [J], 王珍; 张永利; 孟勤燕; 陈雪; 齐欢; 李浩浩; 闫宗科
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耐高温酵母菌的筛选及特性 - 《生物加工过程》
１ 材料与方法
１ １ 菌种和培养基 本实验所用酵母菌为北京市生物加工过程重 点实验室保藏的 １ ８株菌。 初筛培养基由下层培养基和上层培养基构成。 下层培养基（ ｇ ／ Ｌ ） ： 葡萄糖 １ ０ １ 、 Ｋ Ｈ Ｐ Ｏ ０ 、 牛肉 ２ ４１ 膏蛋白胨 ２ ０ 、 酵母粉 １ ５ 、 无水 Ｍ ｇ Ｓ Ｏ ４ 、 柠檬酸 ４０ ０ ２ ７ 、 琼脂 ２ ０ ０ ； 上层培养基（ ｇ ／ Ｌ ） ： ２ ， ３ ， ５ 氯化三 苯基四氮唑（ Ｔ Ｔ Ｃ ） ０ ３ 、 葡萄糖 ３ ０ ０ 、 琼脂 ２ ０ ０ 。 复筛培养基（ ｇ ／ Ｌ ） ： 葡萄糖 ２ ６ ０ ０ 、 Ｋ Ｈ Ｐ Ｏ ０ 、 ２ ４１ ０ ０ 、 Ｍ ｇ Ｓ Ｏ · ７ Ｈ Ｏ４ １ 。 牛肉膏蛋白胨 １ ４ ２ 种子培养基（ ｇ ／ Ｌ ） ： 葡萄糖 ２ ０ ０ 、 酵母粉 １ ０ ０ 、 牛肉膏蛋白胨 ２ ０ ０ 。 ｇ ／ Ｌ ） ： 葡萄糖 １ ０ ０ ０ 、 Ｋ Ｈ Ｐ Ｏ ０ 、 发酵培养基（ ２ ４１ 牛肉膏蛋白胨 １ ０ ０ 、 Ｍ ｇ Ｓ Ｏ · ７ Ｈ Ｏ４ １ 。 ４ ２ １ ２ 筛选方法 １ ２ １ 酵母菌初筛 将在一定的培养基上培养的酵母菌落上覆盖 一层 Ｔ Ｔ Ｃ显色剂， Ｔ Ｔ Ｃ显现不同的颜色， 产乙醇能 力强的酵母会显现深红色， 次之显粉红色， 微红色
（ Ｂ ｅ ｉ ｊ ｉ ｎ ｇＫ ｅ ｙＬ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙｏ ｆ Ｂ ｉ ｏ ｐ ｒ ｏ ｃ ｅ ｓ ｓ ，Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅｏ ｆ Ｌ ｉ ｆ ｅＳ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅａ ｎ ｄＴ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ， Ｂ ｅ ｉ ｊ ｉ ｎ ｇＵ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙｏ ｆ Ｃ ｈ ｅ ｍ ｉ ｃ ａ ｌ Ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ，Ｂ ｅ ｉ ｊ ｉ ｎ ｇ １ ０ ０ ０ ２ ９ ，Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
耐高温酒精酵母的筛选
文章编号 1004 6410(2009)03 0026 04耐高温酒精酵母的筛选易 弋1a ,黎 娅1b ,容元平1a ,李 凯2(1.广西工学院a.生物与化学工程系b.科技处,广西柳州 545006;2.四川省中医药高等专科学校,四川绵阳 621000)摘 要:从酒精厂废液、糖厂废糖蜜、土壤及淤泥等七种不同样品中,经富集、分离、纯化,筛选得到3株耐高温酵母菌T M 6、T M 10和T M 20.实验结果表明,3株菌都能在50 的高温下生长,但高温会明显影响酵母菌的发酵能力.30 下,T M 10的发酵酒精终浓度最高,达到了7.82%(v/v).而在40 下T M 20的发酵能力要高于T M 6和T M 10,且发酵酒精终浓度仅比30 时降低了约6%.关 键 词:耐高温;酒精发酵;酵母;筛选中图分类号:T S262.2 文献标识码:A收稿日期:2009-06-05基金项目:广西工学院博士基金项目(0818001),广西工学院科学基金项目(0840202)资助.作者简介:易弋(1979-),男,四川都江堰人,广西工学院生物与化学工程系副教授,博士.0 引言自20世纪70年代发生石油危机以来,能源短缺已成为我国乃至世界各国经济发展的主要障碍.发展可再生资源以解决我国经济持续发展中的能源问题,已成为全社会的共识.燃料乙醇由于其可再生性,被认为是最有可能代替石油的液体燃料,市场潜力十分巨大.目前工业化生产酒精的发酵温度一般在30~33 左右,在这种温度下发酵需要大量的冷却水.若能使发酵在高温下进行,不但可以减少冷却水的用量,节约生产成本,而且可以从根本上解决糖化与发酵不同步的问题,缩短发酵周期,提高发酵效率[1].同时高温发酵能有效的抑制杂菌生长,减少醪液受污染的机会.但过高的温度会引起酵母细胞内脂肪酸、磷脂等成分的变化,甚至会导致蛋白质变性,这样一来就会影响细胞正常的生理活动,表现出高温对酵母细胞的毒性[2].因此,对于耐高温酒精酵母菌的选育问题一直是酒精酵母研究者的重要研究方向之一.针对这一问题,本文拟从自然界中分离出有较强温度耐受性的酵母菌,并初步研究其发酵及相关性能,为下一步的选育工作打下基础.1 材料与方法1.1 培养基酵母培养基:葡萄糖50g,酵母膏8.5g,NH 4Cl 1.0g,MgSO 4 7H 2O 0.6g ,CaCl 20.6g ,加水溶解至1000mL,调pH =4.5,115 灭菌20m in.固体培养基在液体培养基的基础上添加1.5%的琼脂.发酵培养基:葡萄糖150g ,酵母膏5g,蛋白胨5g,NH 4Cl 1.0g,M gSO 4 7H 2O 0.6g,CaCl 20.6g ,加水溶解至1000mL,调节pH= 4.5,115 灭菌20min.T TC 上层培养基[3]:葡萄糖0.5g,琼脂1.5g,加水至100mL,115 灭菌20min,待冷却至55 左右时,加入TTC(2,3,5!氯化三苯基四氮唑)0.05g.第20卷 第3期 广西工学院学报 Vol 20 No 32009年9月 JO U RNAL OF G UA NG XI U N IV ERSIT Y OF T ECHN OL OGY Sep 20091.2 酵母菌分离和纯化在以前的研究中,从柳州市7个不同地点(酒精厂废液,糖厂废糖蜜,果园土壤,农田土壤,湖水淤泥,2个白酒厂的发酵醪液)采集样品,经分离纯化得到了23株具有典型酵母菌特征的菌株,编号为TM1~23[4].1.3 耐高温酒精酵母菌的筛选将分离得到的23株酵母菌涂布于固体培养基上,于42 下培养.待长出菌落后,倒入一层TTC上层培养基,继续培养2~3h.结束后挑选7株长势好、红色较深的菌落备用.TTC可以和细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶反应,生成红色的甲月赞,由此可判断酵母细胞中呼吸酶活力的大小,即酵母产酒精能力的高低[5]. 将挑选出的酵母菌接种至液体培养基,分别于42 、44 、46 、48 、50 、52 下培养,根据其生长情况选出3株耐高温特性较强的菌株进行下一步实验.1.4 部分发酵特性的测定初始糖浓度对各菌株的影响:制备葡萄糖含量分别为20%、30%、40%、50%、55%、60%的液体培养基,接入筛选的酵母菌,28 摇床培养,通过测定OD560比较其生长情况,从而判断菌株对渗透压的耐受性.pH值对各菌株的影响:制备pH2 0,pH2 5,pH3 0,pH3 5,pH4 0和pH4 5的液体培养基,接入筛选的酵母菌,培养及检测方法同上.酒精对各菌株的影响:制备含不同酒精浓度分别为3%、5%、7%、9%、11%、13%(v/v)的液体培养基,接入筛选出的酵母菌,培养及检测方法同上.1 5 酒精发酵能力的测定于500mL的三角瓶中加入200mL发酵培养基,按10%的比例接入活化后的酵母菌种,分别于30 和40 下静置发酵,每4h测定一次CO2失重,CO2失重小于0 1g时认为发酵结束.发酵结束后测定发酵醪液酒精浓度、残糖和总酸,测定方法见参考文献[6].2 实验结果2 1 耐高温酵母菌的筛选通过在42 下培养及T TC筛选,从23株酵母菌中选出了7株有一定高温耐受性,且酒精发酵能力较强的酵母菌,其编号及形态特征见表1.表中所列7株菌均具有典型的酵母菌形态,而且经TT C筛选,7株菌都具有较好的酒精发酵性能.为了进一步比较这几株菌的耐高温特性,我们将7株菌分别置于不同高温下培养,实验结果见表2.表1 耐高温酵母菌的初筛菌株编号 菌落形态 菌体形态T M1菌落大,圆形,边缘锯齿形,高凸起,不透明,表面粗糙,不闪光,乳白色圆形/椭圆,出芽生殖T M6菌落大,圆形,边缘整齐,高凸起,不透明,表面光滑,闪光,灰白色圆形,出芽生殖T M10菌落中等,圆形,边缘有齿,高凸起,较透明,表面光滑,闪光,灰白色圆形/椭圆,出芽生殖,芽成串T M15菌落大,圆形,边缘整齐,低凸起,不透明,表面光滑,闪光,乳白色圆形/椭圆,出芽生殖T M16菌落大,圆形,边缘不齐,低凸起,较透明,表面光滑,闪光,乳白色椭圆,略长,出芽生殖T M20菌落中等,圆形,边缘整齐,高凸起,不透明,表面光滑,闪光,乳白色椭圆,出芽生殖T M22菌落大,圆形,边缘整齐,低凸起,不透明,表面光滑,闪光,灰白色椭圆,出芽生殖表2 耐高温酵母菌的复筛菌株温度/42444648 50 5254T M1++++++++---T M6++++++++++++++++-T M10+++++++++++++++-T M15++++++++---T M16++++++++++---T M20+++++++++++++--T M22++++++++---- 注:∀+#表示酵母菌生长情况,∀+#越多,表示生长越好,下同.27第3期 易 弋等:耐高温酒精酵母的筛选酵母菌的正常生长温度在30 左右,当温度超过35 时,其生长和发酵能力大大减弱[7].目前所筛选的耐高温酒精酵母一般在38~40 还有较高的酒精产率,如沈睿等人[8]筛选的耐高温酵母菌YH4.该菌的最适生长温度为35~38 ,最高生长温度为47 .从图中可以看出7株菌都能在46 下生长,说明它们均有一定的高温耐受性.TM6、TM10和T M20的耐高温能力要明显强于其他4株,其中TM6、TM10的耐高温能力最强,能在52 下生长;T M20次之,能在50 下生长.因此,选择这3株菌进行了后续的实验.2 2 部分发酵特性的测定通过筛选,得到了3株具有较强耐高温特性酵母菌.鉴于酵母菌的渗透压耐受性能、耐酸能力以及酒精耐受性在实际生产中是至关重要的,我们测定了3株菌在这几方面的能力,结果见表3、表4和表5.表3 初始糖浓度对各菌株生长的影响菌株葡萄糖含量/%203040505560TM6++++++++++++-TM10+++++++++++--TM20+++++++++++--表4 pH对各菌株生长的影响菌株培养基初始pH值4 54 03 53 02 52 0 TM6+++++++++++--TM10+++++++++++++++-TM20++++++++++++++-2 2 1 初始糖浓度对各菌株影响培养基中的糖浓度对酵母菌生长的影响非常大,糖浓度较低会使酵母菌因营养不足而生长缓慢,糖浓度过高又会因渗透压的增大而抑制酵母菌的增殖.提高初始糖浓度可以提高发酵醪的酒精含量,因此生产用的酵母菌都需要有一定的渗透压的耐受能力.从表3中可以看出当初糖浓度达到40%时,3株菌的生长均受到了明显的抑制.糖浓度达到50%时,生长变得缓慢.相对而言T M6对糖渗透压的耐受性要略高于TM10和T M20,它能在55%的初始糖浓度下缓慢生长.2 2 2 培养基pH值对各菌株生长的影响在酵母菌酒精发酵的实际生产当中,发酵醪液的pH值非常重要,因为较低的pH值可以抑制杂菌的生长,从而提高发酵的效率.酵母菌正常的生长pH在4 5~5 5之间,而如今某些糖蜜酒精厂为了防止发酵过程中杂菌的污染,已将发酵醪液的pH调低至3 2~3 4,这就要求生产菌有非常好的耐酸特性.从表4中可以看出pH4 0以上,3株菌的生长情况都非常良好.当pH降至3 5时,TM6受到了较严重的抑制,它最低生长的pH为3 0.而TM10和TM20的耐酸能力略强于TM6,能在pH2 5的培养基上生长.2 23 酒精对各菌株生长的影响在发酵过程中,酵母自身产生的酒精达到一定浓度时,会对酵母本身产生毒性,影响其生长、细胞发育,以及酒精发酵的能力[9],进一步提高酒精浓度,酵母的发酵便会停止.因此,酵母菌的酒精耐受能力对于能否大幅度的提高酒精发酵终浓度至关重要,是评价酒精酵母菌种好坏的重要指标.从表5可以看出,酒精对酵母菌生长的影响是非常明显的.当酒精浓度提高到5%时,3株菌的生长都受到了明显的抑制.TM10和TM20的酒精耐受性略强于TM6,在含酒精9%的培养基中表现出了微弱的生长.2 3 酒精发酵能力的测定测定了三株菌的部分发酵特性后,按1 5所述的方法比较了各株菌的酒精发酵能力,实验结果如表6所示.表5 酒精对各菌株生长的影响菌株培养基酒精浓度/%,v/v 35791113TM6+++++++---TM10+++++++++--TM20++++++++++--表6 发酵结果菌株酒精浓度/%,v/v残糖/g L-1总酸发酵时间/h30 40 30 40 30 40 30 40 TM66 825 870 380 265 234 854856 TM107 836 340 250 204 515 034452 TM207 226 810 300 345 024 774852从表6中可以看出不管在30 还是在40 下,3株菌对糖的利用率都较高,残糖的含量均低于0 4g/ L.从发酵时间来看,高温下的发酵时间比常温下略长,TM10的发酵速度最快,常温下在44h内就完成了发28广西工学院学报 第20卷酵.常温下TM 10的发酵酒精终浓度最高,达到了7 82%,发酵效率约为84 1%,是一株极具潜力的酒精酵母菌.虽然3株菌在40 下的发酵能力均明显逊于30 ,但值得注意的是TM 20在40 下的发酵酒精终浓度只比30 降低了约6%,是3株菌中降低幅度最小的.这说明TM 20体内与酒精合成相关的酶受高温的影响不大,是一株值得进一步研究的耐高温酒精酵母菌.3 结论经菌种富集、分离、纯化,从自然界中筛选到了3株具有较强高温耐受性的酵母菌TM 6、T M10和T M20.3株菌均能在50 的高温下生长,在耐渗透压、耐酸、耐酒精以及发酵能力方面各有优缺点.同前期的实验结果相比较,发现本次实验筛选出的酵母菌发酵能力均优于之前筛选出的菌株[4].经分析认为本次实验由于在筛选过程中加入了TT C 筛选,因此在初筛的时候就将发酵能力弱的菌株淘汰掉了,这说明TTC 的确是一种筛选酒精高产酵母菌的有效方法,值得推广和研究.虽然TM 20在高温下的生长情况不如TM 6和TM 10,而且常温下TM10的发酵能力也远高于TM 20,但TM20在高温下的发酵能力要明显优于T M6和T M10.此外TM 20在30 和40 下的发酵能力仅相差6%,这说明TM20的发酵能力受温度的影响不大,是一株有潜力的耐高温酒精酵母菌.在后续实验中,希望通过诱变、驯化等方法进一步提高其酒精发酵的能力.参 考 文 献:[1]王瑞明,关凤梅,马霞,等.固态发酵高产酒精酵母菌株的选育[J].酿酒科技,2002(1):20 21.[2]王灏,王航,孟春,等.基因组改组技术选育耐高温、耐高乙醇酿酒酵母菌株的研究[J].微生物学通报,2007,34(4):705 708.[3]毛志群,张伟,檀建新,等.高产酒精酵母的筛选及鉴定[J].食品与发酵工业,2003,29(3):50 53.[4]易弋,伍时华.酒精耐受性酵母菌的筛选[J].广西工学院学报,2008,19(3):42 46.[5]王梅,张彭湃,帅桂兰,等.T T C 在黄酒酵母选育中的应用[J].酿酒,2001,28(5):62 64.[6]王福荣.酿酒分析与检测[M ].北京:化学工业出版社,2005.[7]蒋亚平,蔡金芝,杨宝玉,等.耐高温酵母W VHY8的生物学特性及应用[J].微生物学通报,1992,19(6):328 331.[8]沈睿,诸葛健.固态发酵用耐高温酿酒酵母YH4的筛选及其特性研究[J].食品与发酵工业,1991,4(4):8 15.[9]Pina C,Couto J A ,Hogg T.Inferring ethanol tolerance of Saccharomyces and non Saccharomyces yeasts by progressive inactivation[J].Biotechnol Lett.,2004,26(19):1521 1527.Study on screening of thermotolerant yeast strainsYI Yi 1a ,LI Ya 1b ,RONG Yuan ping 1a ,LI Kai 2(1a.Biological &Chemical Engineering Department,1b.Science and Technology Department,Guangx i University of Technology,Liuzhou 545006,China;2.Sichuan College of Traditional Chinese Medicine,M ianyang 621000,China)Abstract:T hree thermotolerant yeast strains,T M6,TM 10and TM 20,w ere isolated from nature.T he results showed that the three strains can survive at 50 and fermentation would be restrained obviously at high tem perature.T he alcohol ferment strength of T M6w as better than the others at 30 and the alcohol concentration reached 7 82%(v/v).But the ferment strength of T M20was higher than TM 6and T M10at 40 .The alco hol concentration w as just reduced about 6%compared with the concentration at 30 .Key words:thermotolerant;alcohol fermentation;yeast;screening29第3期 易 弋等:耐高温酒精酵母的筛选。
耐高温酵母菌的筛选及特性研究
７ ， 其 温 度适应性 实 验 结 果 见 表 １ 。 由 表 １ 可 知 ： 低 于 ４５ ℃ 时 两 株 菌 的生长状况良好； 在 ５０℃ 时， Ｂ－ ２ 生长状况良好， Ｊ－ ７ 生长缓 Ｂ－ ２ Ｊ－ ７ 表２ 注： ＋＋ 生长良好 ＋ 生长 － 不生长 耐高温酵母菌的基本形态特征 基本特 征 基本特征 Ｂ－ ２ 圆形或椭圆形， 芽殖， 在产孢子培 养基上形成子囊， 每个子囊中有 １ Ｊ－ ７ 圆形， 芽殖， 在产孢子培养基上形成子 囊， 每个子囊中有 １～４ 个圆形或 卵圆 形子囊孢子。 表面不产膜， 底部有沉淀。 乳白色， 中心无凸起， 表面光滑 ， 无褶 皱； 边缘不规则， 呈波形， 直径为 ０．８ｃｍ， 生长速度慢。 细胞形态 ～４ 个圆形或卵圆形子囊孢子。 液体生长 巨大菌落 （ 培养 １５ｄ 后） 表面产膜， 底部有絮状沉淀。 乳白 色， 圆形， 中心凸起， 表面光 滑， 不透明， 无褶皱， 边缘整齐， 直径为 １． ８ｃｍ； 生长速度快。 慢； ５１℃ 时， Ｂ－ ２ 生长缓慢， Ｊ－ ７ 没有生长迹象。 对营养物质的吸收和利用。由图 ２ 可知： 当 培 养 液 的 ｐＨ 为 ２．２ 耐高温酵母菌的形态特征 对两株酵母的细胞形态、液体生长及巨大菌落形态进行 了研究， 结果见表 ２ 。 ３￣６ 时， 两株菌的数量随 ｐＨ 的增大而逐渐增加， 当 ｐＨ＝５．５ 时
ｐａｇｅ １
６．０ ６．５ １ 材料与方法 １．１ 材料 １．１．１ 原料： 轻微腐烂的水果。 １．１． ２ 菌种： 安琪活性高温干酵母， 市售。 １．１．３ 培养基 ： 富 集 培 养 基 ： 麦 芽 汁 液 体 培 养 基 ： １１￣１２° 麦 ＢＸ 芽汁。 分离培养基： 麦芽汁固体培养 基 ： 麦 芽 汁 ， ２％ 琼 脂 。 Ｙ ＰＤ 培 养 基 ： 葡 萄 糖 ２０ｇ、 蛋 白 胨 ２０ｇ、 酵 母 浸 膏 １０ｇ、 定 容 至 ７．０） 的麦芽汁， 测定方法同 １．２．３．１ 。 １．２．３．３ 耐盐性 ： 制备含有氯化钠浓度分别为 ０ 、 、 、 、 ０．５ １．０ １．５ ２．０ 、 、 ２．５ ３．０ｍｏｌ／Ｌ 的麦芽汁， 测定方法同 １．２．３．１ 。 １．２． ３．４ 耐 酒 精 性 ： 制 备 含 不 同 酒 精 量 ６％ 、 、 、 、 １０％ １２ ％ １４％ １６％ 、 １８％Ｖｏｌ 的 麦 芽 汁 试 管 ， 附 杜 氏 小 管 ， 接 种 待 测 酵 母 菌 ， ３０℃ 培养 ２４ｈ ， 观察发酵现象并镜检计数。 １．２ ．３．５ 生 长 曲 线 的 测 定 ： 将 酵 母 菌 接 种 于 麦 芽 汁 中 ， 在 一 定 温度下， ２００ｒ／ｍｉｎ 的摇床培养， 每隔 ２ｈ 取样一次， 用未接种的 麦芽汁作空白对照， 于 ６６０ｎｍ 测其 ＯＤ 值， 以培养时间为横坐 标， ＯＤ 值为纵坐标， 绘制生长曲线。 １０００ｍＬ。 产 孢 子 培 养 基 ： 葡 萄 糖 １ｇ， ＫＣＬ１．８ｇ， 酵 母 浸 膏 ２． ５ｇ， 醋 酸 钠 ８．２ｇ， 水 １０００ｍＬ。 酒 精 发 酵 培 养 基 ： 适 当 浓 度 的 葡 萄 糖 ， 玉 米 浆 ２０ｇ， 尿 素 ２ｇ， 水 １０００ｍＬ。 １．２ 方法 １．２．１ 酵母菌的分离纯化 １． ２．１．１ 富集培养酵母： 分别称取 ５ｇ 轻微腐烂的水果， 切块投 入麦芽汁液体培养基中， ３０℃ 培养 ３６ｈ 。 １．２．４ 酵母菌的发酵实验 １．２．４．１ 最适发酵温度的确定： 将酵母 种子液接入发酵培养基 中 ， 在 不 同 温 度 下 恒 温 培 养 ７２ｈ ， 称 量 ＣＯ２ 失 重 ， 根 据 失 重 大 小确定最适发酵温度。 １．２．１．２ 分 离 纯 化 酵 母 ： 将 富 集 培 养 液 系 列 稀 释 ， 分 别 取 １ｍＬ 收稿日期 ：２００６－ １０－ ２２ 作者简介： 刘 畅 １９７９－ ） ， 女 ， 硕士， 讲师， 研究方向： 食品微生物。 （ １．２．４．２ 三角瓶发酵实验： 将酵母种子液接入三角瓶发酵培养 基中， 每瓶 ２００ｍＬ， ３７℃ 摇床培养 ７２ｈ ， 每 １２ｈ 称 重 一 次 ， 计 算 ＣＯ２ 失重， 发酵结束后蒸馏酒精， 用比重计测酒精含量。 ２ 结果与分析
耐高温酵母菌的筛选及特性
耐高温酵母菌的筛选及特性徐大鹏;李云杰;张栩;谭天伟【期刊名称】《生物加工过程》【年(卷),期】2011(9)3【摘要】筛选得到1株在41 ℃可以良好生长的耐高温酵母菌,并对其特性及发酵性能进行研究.结果表明:该菌的最适生长pH为5.0,转速180 r/min,最高生长温度45 ℃.在41 ℃和初糖质量浓度为93.0 g/L的条件下发酵24 h后,乙醇质量浓度达到44.0 g/L,乙醇得率为93.0%.%One thermotolerant yeast strain endured at 41 ℃ was isolated and characterized on fermentation properties.The results demonstrated that the optimum growth pH was 5.0,rotating speed was 180 r/min and maximum growth temperature was 45 ℃.The ethanol fermentation at 41 ℃ and 93.0 g/L of glucose was comple ted after 24 h to achieve the production of 44.0 g/L of ethanol, corresponding to an overall conversion yield of 93.0％.【总页数】5页(P17-21)【作者】徐大鹏;李云杰;张栩;谭天伟【作者单位】北京化工大学,生命科学与技术学院,北京市生物加工过程重点实验室,北京,100029;北京化工大学,生命科学与技术学院,北京市生物加工过程重点实验室,北京,100029;北京化工大学,生命科学与技术学院,北京市生物加工过程重点实验室,北京,100029;北京化工大学,生命科学与技术学院,北京市生物加工过程重点实验室,北京,100029【正文语种】中文【中图分类】Q93.331【相关文献】1.耐高温酵母菌的筛选及其乙醇发酵特性 [J], 刘超帝;缪礼鸿;陈瑾;刘蒲临2.中高温大曲中耐高温酵母菌的筛选及其发酵特性的研究 [J], 赖颖;赵锦慧;胡炳义;栾春雪3.耐高温酵母菌的筛选及特性研究 [J], 刘畅;王涛;石翠芳4.发酵肉用耐高温酵母菌的筛选与鉴定 [J], 许艳丰;陈瑶;刘艳;杨万根5.耐高温酿酒酵母菌的筛选及发酵性能研究 [J], 刘辉;何太波;赵国淼;张永昌;王小艳;李凡;佟毅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
耐热微生物的筛选及其应用研究
耐热微生物的筛选及其应用研究【前言】随着生物技术的发展，微生物的应用越来越广泛。
其中，耐热微生物的筛选及其应用研究日益受到关注。
本文将阐述耐热微生物的筛选方法、鉴定手段以及在食品加工、医药工业等领域的应用。
【一、耐热微生物的筛选方法】1.1 利用温度作为筛选条件温度是微生物生长的重要条件之一，也是筛选耐热菌的一种常规方法。
以极端嗜热微生物为例，其生长温度一般在60℃以上，可利用不同温度条件筛选出嗜热菌并进行进一步鉴定。
1.2 利用抗热剂的筛选方法利用抗热剂可以筛选出对热稳定剂具有耐受性的微生物。
例如，在大豆固体培养基中添加抗氧化剂可选出一系列具有抗氧化剂耐受性的腐败细菌。
1.3 利用胁迫筛选法通过在混合菌中引入特定条件胁迫（如缺失特定营养物质或添加毒素等）可以筛选出能够适应并生长的耐热微生物。
【二、耐热微生物的鉴定手段】2.1 形态学鉴定利用显微镜观察耐热微生物的形态特性，如细胞形态、染色情况、孢子形态等。
2.2 生理生化鉴定利用耐热微生物在不同条件下的生理生化反应特性，如对不同营养源的利用情况、酶活性等。
2.3 分子鉴定通过分子生物学技术，如PCR和测序技术，鉴定目标微生物的DNA序列，从而确定微生物在分类学上的位置。
【三、耐热微生物在食品加工中的应用】3.1 酸奶发酵耐热乳酸菌是酸奶制作中的重要菌种，它们能够在较高温度下生存、生长和发酵。
可通过筛选耐热菌种并培养、利用其酸奶发酵能力满足市场需求。
3.2 肉制品加工在肉制品加工中，耐热乳酸菌和耐热芽孢杆菌常被应用于腌制和发酵过程中，以提高产品品质，并延长产品保质期。
【四、耐热微生物在医疗领域的应用】4.1 发酵制备药物利用耐热微生物进行发酵可制备多种生物大分子药物。
如耐热菌E. Coli BL21(DE3)可用于表达和生产复杂蛋白质。
4.2 消毒剂耐热芽孢菌在制造消毒产品中应用广泛。
它们能够在高温条件下生存，灭活时也不容易被破坏或失活，是制造高效消毒剂的理想菌株。
实验五 耐高温酵母菌株的诱变选育
实验一耐高温酵母菌株的诱变选育一、目的要求通过实验，观察紫外线对酵母菌的诱变效应，学习物理因素诱变育种的方法。
二、基本原理紫外线对微生物有诱变作用，主要引起是DNA的分子结构发生改变（同链DNA的相邻嘧啶间形成共价结合的胸腺嘧啶二聚体），从而引起菌体遗传性变异。
测定紫外光的剂量有直接法（以尔格/平方毫米表示绝对剂量）和间接法（以辐照时间或致死率作为相对剂量）两种。
微生物所受射线的剂量决定于灯的功率、照射距离和时间。
如果功率和距离是固定的话，则剂量就和照射的时间成正比，故照射时间的长短可作为相对剂量。
一般用15W的紫外灯，距离固定在<30厘米>左右，选用致死率达90~99.9%所需的辐射时间进行诱变处理。
但各类微生物所需的最适时间不同，一般营养体需辐照3~5分钟，芽孢要10分钟，芽孢杆菌的营养体要1~3分钟，革兰氏阳性菌和无芽孢菌较易杀死，用30秒，放线菌的分生孢子用30秒~2分钟。
辅射不宜在肉汤等成分复杂的液体中进行，以免化学反应的干扰；同时要有电磁搅拌设备，以求照射均匀，尤其在菌液浓度较大或菌体、孢子等较大而重时很容易在处理期间发生沉降，此时电磁搅拌更显重要。
照射前紫外灯宜先开灯预热20~30分钟，使光波稳定。
三．菌种与仪器菌种：酵母菌仪器：血球计数板，显微镜，紫外线灯（15W），电磁搅拌器，离心机四．实验设计（1）菌悬液的制备（a）取培养24小时的酵母菌的斜面1支，用无菌生理盐水将菌苔洗下，并倒入盛有玻璃珠的大试管中，振荡30分钟，以打碎菌块。
（b）将上述菌液离心（1500r/min，离心5分钟），弃去上清液，将菌体用无菌生理盐水洗涤2—3次，最后制成菌悬液。
（c）用显微镜直接计数法计数，调整细胞浓度为每毫升108个。
（2）马铃薯琼脂培养基溶化后，冷至55℃左右时倒平板，凝固后待用。
（3）紫外线处理（a）将紫外线灯开关打开预热约20分钟。
（b）取直径9cm无菌平皿1套，分别加入上述菌悬液6－7ml，并放入无菌大头针于平皿中。
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１ 材料与方法
１ １ 菌种和培养基 本实验所用酵母菌为北京市生物加工过程重 点实验室保藏的 １ ８株菌。 初筛培养基由下层培养基和上层培养基构成。 下层培养基（ ｇ ／ Ｌ ） ： 葡萄糖 １ ０ １ 、 Ｋ Ｈ Ｐ Ｏ ０ 、 牛肉 ２ ４１ 膏蛋白胨 ２ ０ 、 酵母粉 １ ５ 、 无水 Ｍ ｇ Ｓ Ｏ ４ 、 柠檬酸 ４０ ０ ２ ７ 、 琼脂 ２ ０ ０ ； 上层培养基（ ｇ ／ Ｌ ） ： ２ ， ３ ， ５ 氯化三 苯基四氮唑（ Ｔ Ｔ Ｃ ） ０ ３ 、 葡萄糖 ３ ０ ０ 、 琼脂 ２ ０ ０ 。 复筛培养基（ ｇ ／ Ｌ ） ： 葡萄糖 ２ ６ ０ ０ 、 Ｋ Ｈ Ｐ Ｏ ０ 、 ２ ４１ ０ ０ 、 Ｍ ｇ Ｓ Ｏ · ７ Ｈ Ｏ４ １ 。 牛肉膏蛋白胨 １ ４ ２ 种子培养基（ ｇ ／ Ｌ ） ： 葡萄糖 ２ ０ ０ 、 酵母粉 １ ０ ０ 、 牛肉膏蛋白胨 ２ ０ ０ 。 ｇ ／ Ｌ ） ： 葡萄糖 １ ０ ０ ０ 、 Ｋ Ｈ Ｐ Ｏ ０ 、 发酵培养基（ ２ ４１ 牛肉膏蛋白胨 １ ０ ０ 、 Ｍ ｇ Ｓ Ｏ · ７ Ｈ Ｏ４ １ 。 ４ ２ １ ２ 筛选方法 １ ２ １ 酵母菌初筛 将在一定的培养基上培养的酵母菌落上覆盖 一层 Ｔ Ｔ Ｃ显色剂， Ｔ Ｔ Ｃ显现不同的颜色， 产乙醇能 力强的酵母会显现深红色， 次之显粉红色， 微红色
１ ８
生 物 加 工 过 程
第 ９卷
耐受性（ 耐高糖、 耐乙醇、 耐高温等特性） 好的 菌株是生产乙醇的关键。笔者通过初筛、 复筛实验 得到 １株耐高温的酵母和 １株高产乙醇酵母， 并对 耐高温酵母的生理特性及发酵性能进行研究。
６ ０的种子培养基， ４ １℃培养 ２ ４ｈ ， 测其生物量。 １ ３ ５ 转速 按接种量为 １ ０ ％接入到种子培养基， 在转速分 别为 ０ 、 ６ ０ 、 １ ０ ０ 、 １ ４ ０ 、 １ ８ ０和 ２ ２ ０ｒ ／ ｍ ｉ ｎ条件下， ４ １℃ 培养 ２ ４ｈ ， 测其生物量。 １ ４ 分析方法 生物量的测定： 采用比浊法， 将发酵液混匀后 稀释一定倍数， 测定其在 ６ ６ ０ｎ ｍ的吸光度（ Ｏ Ｄ ） 。 ６ ６ ０ 残糖和乙醇的测定： 利用 Ｓ Ｂ Ａ ４ ０ Ｃ生物传感
２ 结果与讨论
２ １ 耐高温菌的初筛 １ ８株酵母用灭菌的牙签分别接种于初筛培养 基中， 分别于 ３ ７ 、 ３ ９ 、 ４ １ 、 ４ ３和 ４ ５℃ 下培养 ２ ４ｈ ， 长 出菌落后， 倒入配好的 Ｔ Ｔ Ｃ溶液， 覆盖菌落， ３ ７℃再 继续培养 ２ｈ ， 结果如图 １所示。 从图 １可以看出： 第１ ８株菌（ 从右至左、 从上至 下数起） 的菌落最大， 乳白色， 圆形， 中心凸起， 表面 光滑， 不透明， 在高温条件下生长稳定。 ２ ２ 耐高温菌的复筛 摇瓶复筛的实验， 将１ ８株酵母按 １ ０ ％ 的接种 量接种于复筛培养基中， 在３ ７℃ 条件下培养， 结果 如图 ２所示。 可以看出： 发酵 ３ ６ｈ 后， 在３ ７℃培养条件 从图 ２ 下， 第１ ５ 株菌乙醇质量浓度最高， 达到１ ０ ２ ０ｇ ／ Ｌ ， 残糖 质量浓度为 ３ ８ ０ｇ ／ Ｌ ， Ｏ Ｄ 为１ １ ８ ４ ； 第１ ８ 株菌乙醇质 ６ ６ ０ 量浓度较低， 为９ ４ ０ｇ ／ Ｌ ， 残糖质量浓度为 ５ ４ ０ｇ ／ Ｌ ， Ｏ Ｄ 最高， 为１ １ ９ ８ ， 乙醇得率为 ８ ９ ３ ％。 ６ ６ ０ ２ ３ 耐高温菌的生理特性 ２ ３ １ 温度对酵母菌的影响 在低温范围内， 温度越高， 酶反应越快， 酵母生 长代谢加快， 乙醇提前生成。当温度升高到一定程 度后， 继续升温则酶失活的也越快， 表现出酵母易
９ ］ 衰老、 发 酵 周 期 短， 从 而 影 响 发 酵 乙 醇 的 产 量［ 。
１ ２ ２ 酵母菌复筛 摇瓶复筛， 测定各个生化参数。 １ ３ 酵母菌的生理特性 １ ３ １ 温度 将菌株按体积分数 １ ０ ％ 接种量接入到种子培 养基， 在３ ７ 、 ３ ９ 、 ４ １ 、 ４ ３和 ４ ５℃ 培 养 ２ ４ｈ ， 测其生 物量。 １ ３ ２ 耐糖性 制备 初 始 葡 萄 糖 质 量 分 数 分 别 为 ５ ％、 １ ０ ％、 １ ５ ％、 ２ ０ ％、 ２２ ４ｈ ， 测其生物量。 １ ３ ３ 耐乙醇性 制备初 始 乙 醇 体 积 分 数 分 别 为 ０ 、 ２ ％、 ４ ％、 ６ ％、 ８ ％、 １ ０ ％、 １ ２ ％、 １ ４ ％和 １ ６ ％ 的 种 子 培 养 基， ４ １℃培养 ２ ４ｈ ， 测其生物量。 １ ３ ４ 耐酸性 制备 初 始 ｐ Ｈ分别为 ３ ５ 、 ４ ０ 、 ４ ５ 、 ５ ０ 、 ５ ５ 、
６ ］ 的或者不显色的为野生酵母 ［ 。
１ ５ 乙醇得率的计算 乙醇得率 ＝ （ 理论乙醇） ＝ ρ （ 实际乙醇） ρ ×１ ０ ０ ％ （ 理论乙醇） ρ （ １ ）
（ 初始糖）－ρ （ 残糖） ρ ×９ ２ １ ８ ０ （ ２ ）
式中： ９ ２和 １ ８ ０分别代表 ２ｍ ｏ ｌ 乙醇和 １ｍ ｏ ｌ 葡萄糖 的相对分子质量， 乙醇和糖质量浓度单位都是 ｇ ／ Ｌ 。
耐高温酵母菌的筛选及特性
徐大鹏， 李云杰， 张 栩， 谭天伟
（ 北京化工大学 生命科学与技术学院 北京市生物加工过程重点实验室， 北京 １ ０ ０ ０ ２ ９ ）
摘 要 ： 筛选得到 １株在 ４ １℃可以良好生长的耐高温酵母菌， 并对其特性及发酵性能进行研究。 结果表明： 该菌 的最适生长 ｐ Ｈ为 ５ ０ ， 转速 １ ８ ０ｒ ／ ｍ ｉ ｎ ， 最高生长温度 ４ ５℃。在 ４ １℃和初糖质量浓度为 ９ ３ ０ｇ ／ Ｌ的条件下发酵 ２ ４ ｈ 后， 乙醇质量浓度达到 ４ ４ ０ｇ ／ Ｌ ， 乙醇得率为 ９ ３ ０ ％。 关键词： 耐高温酵母； 筛选； 生理特性； 乙醇； 发酵 中图分类号： Ｑ ９ ３ ３ ３ １ 文献标志码： Ａ 文章编号： １ ６ ７ ２－ ３ ６ ７ ８ （ ２ ０ １ １ ） ０ ３－ ０ ０ １ ７－ ０ ５
６ ］ 。 视， 成为当前国内外乙醇行业研究的热点 ［
。
同步糖化发酵纤维素生产乙醇的主要问题之 一是糖化（ ４ ５～ ５ ０℃） 和发酵（ ２ ５～ ３ ５℃） 的最适温 度不同
［ ３ ］
， 并且浓醪乙醇发酵有利于降低水耗和能
收稿日期： ２ ０ １ ０－ １ １－ １ ９ 基金项目： 国家自然科学基金资助项目（ ２ ０ ８ ７ ６ ０ １ １ ， ２ ０ ８ ７ ６ ０ １ ２ ） ； 国家转基因重大专项资助项目（ ２ ０ ０ ８ Ｚ Ｘ ０ ８ ０ １ ２－ ０ ０ １ ） ； 国家重点基础研究发展计 划（ ９ ７ ３计划） 资助项目（ ２ ０ ０ ７ Ｃ Ｂ ７ １ ４ ３ ０ ４ ，２ ０ ０ ７ Ｃ Ｂ ７ ０ ７ ８ ０ ４ ） ； 国家高技术研究发展计划（ ８ ６ ３计 划 ） 资助项目（ ２ ０ ０ ９ Ａ Ａ ０ ５ Ｚ ４ ３ ６ ， ２ ０ ０ ９ Ａ Ａ １ ０ Ｚ ４ ０ ４ ） ； 北京市自然科学基金资助项目（ ２ ０ ７ １ ０ ０ ２ ） 作者简介： 徐大鹏（ １ ９ ８ ３ —） ， 男， 山东临沂人， 硕士研究生， 研究方向： 生物能源； 谭天伟（ 联系人） ， 教授， Ｅ ｍ ａ ｉ ｌ ： ｔ ｗ ｔ ａ ｎ ＠ｍ ａ ｉ ｌ ． ｂ ｕ ｃ ｔ ． ｅ ｄ ｕ ． ｃ ｎ
第 ９卷第 ３期 ２ ０ １ １年 ５月
生 物 加 工 过 程 Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅＪ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｂ ｉ ｏ ｐ ｒ ｏ ｃ ｅ ｓ ｓ Ｅ ｎ ｇ ｉ ｎ ｅ ｅ ｒ ｉ ｎ ｇ
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