常用作物遗传转化的组织培养基的配置

MS 大量元素×20

MS 微量元素×200

MS 有机×200

MS 铁盐×200

氢氧化钠的配置：称4g NaOH粉末放到蒸馏水中，溶解后再定容到100ml即可。

改良MS （MS＇）×20

MS＇有机（与MS相同）×200

N6 大量×20

N6 微量×200

N6 有机与MS有机相同

N6铁盐与MS铁盐相同

W14 大量×20

W14 微量×200

W14铁盐与MS铁盐相同W14有机与MS有机相同

接种小麦花药的程序

1.准备工作；培养基﹑用灭过菌的一水配75﹪酒精，棉花，95﹪，火柴，酒精灯，直镊，

托盘，烧杯或塑料盒，放烧过镊子的皿底，装75﹪酒精的瓶子，将超净工作台打开吹15分钟，然后擦干净即可使用。

2.把样品拿到准备间内去叶，注意尖上留一点小叶，避免酒精渗进去。把一天的量弄够，

上午做不完的用保鲜膜包好放入4℃冰箱，下午再用。

3.消毒：将去叶的样品拿到超净工作台上，先用75﹪的酒精棉擦2次放入托盘中，再用

酒精棉擦第3次后放入盒中或烧杯中准备接种。

4.点着酒精灯：把皿底及镊子烧好备用，再把三角瓶皮筋拆下，拿到灯前用火烧一下封

口纸，再斜着拿瓶把纸打开，用火烧一下瓶口，然后把烧好的三角瓶尽量往超净工作台里面放，避免污染。

5.用75﹪酒精壶喷一下双手消毒，把样品外衣剥掉露出长穗，面对有棱的一面，先用直

镊剥去外壳露出花药，每一个花苞有3个花药，将其用弯镊轻轻地夹起磕到三角瓶中，每瓶3个穗子大概100个花药。

6.接好后，将镊子及三角瓶瓶口和封口纸烧一下，把三角瓶斜着拿用封口纸盖好，系上

皮筋写上名称及日期，放在培养箱中暗培养。

观察：15—20天开始观察，只要出了愈伤就赶快把它转到分化培养基上。愈伤越小越好。

小麦花药诱导培养基（PH 5.8）

小麦花药分化培养基（PH 5.8）

小麦花药壮苗培养基（PH 5.8）

小麦幼穗消毒步骤：

1、.用75﹪酒精快速冲洗几秒钟，主要清洗根部。

2、再用75﹪酒精快速冲洗一下，然后捞出放到烧杯里。

小麦幼穗诱导培养基（PH 5.8）

小麦幼胚消毒步骤：

1.用75％的酒精冲洗一下。

2.再用次氯酸钠（1︰1）浸泡10分钟。

3.最后用无菌水冲洗5～6遍。

小麦幼胚诱导培养基（PH 5.8）

小麦幼胚、幼穗分化培养基（PH 5.8）

小麦幼胚、幼穗壮苗培养基（PH 5.8）

玉米幼胚诱导培养基（PH 5.8）

玉米幼胚分化培养基（PH 5.8）

玉米幼胚壮苗培养基（PH 5.8）

小结

一、配置玉米诱导、分化培养基时，注意AgNO3(硝酸银)有毒，添加时要小心。

二、如果小麦和玉米要打基因枪，在配置其诱导培养基时，一定要用植物凝胶（加4g/L）。

三、在配大量元素时注意有CaCl2·2H2O(氯化钙)，切记把它用一个容器单溶，等前几样

完全溶解后，再将溶好的氯化钙倒入其中混匀。

四、在配置培养基时：

1.一般情况下，大量、微量、铁盐、有机的实加量×瓶子上的倍数=1000ml，即实

加量=1000ml÷瓶子上的倍数。

2.激素的实加量=所给数÷瓶子上的数。

3.在配好培养基，将它加热前用NaOH(氢氧化钠)调PH值=6.0，一般情况下1L加8

滴即可，如不行再每升加1～2滴慢慢调，直到PH=6.0，实际加热后PH值=5.8

了。

4.当培养基加热至冒热气时，再把称好的琼脂倒入其中混匀至开，然后分装，灭菌。

5.加琼脂时要根据其质量和天气冷热程度添加，一般情况下花药加 4.5g/L,其它加

5g/L即可。到了冬天每升加4.5g。

1、穗子拿来后，暂时不接的放入4℃冰箱（最多放6天）。

2、要接的穗子用百分之百次氯酸钠浸泡10—15分钟，然后用无菌水冲洗5～6遍。

3、接好的花药放在30℃培养箱中暗培养，培养30天，随时观察，发现愈伤赶快转出来，愈伤越小越好。

水稻花药诱导培养基（PH 5.8）

水稻花药分化培养基（PH 5.8）

水稻花药壮苗培养基（PH 5.8）

接种黑麦草的程序

准备工作：先把工作台打开吹10—15分钟，，同时把培养基、75﹪的酒精、95﹪酒精、酒精灯、火柴、长直镊、培养皿、装75﹪的酒精瓶子（放镊子）、剥好的草籽、灭过菌的三角瓶、封口膜全部准备好，然后用75﹪酒精擦2—3遍超净工作台，即可操作。

操作步骤；

1、把草籽外皮剥掉（不用泡水）。

2、把剥好的草籽放在50ml的三角瓶里在超净工作台上用75﹪的酒精浸泡2—3分钟。

3、再用次氯酸钠浓度为（1︰1）浸泡45分钟，浸泡过程中再倒入另外一个灭过菌的小三角瓶里，把瓶口烧一下，再经常摇一摇。

4、最后用无菌水冲洗5—6遍，即可。

黑麦草诱导培养基（PH 5.8）

黑麦草分化培养基（PH 5.8）

黑麦草壮苗培养基（PH 5.8）

黑麦草幼穗诱导和小麦幼穗诱导培养基（PH 5.8）

W14大量+W14微量+铁盐+有机+肌醇+糖100g/L+4mg/L2，4-D+0.5mg/LKT+琼脂（黑麦草）

W14大量+W14微量+铁盐+有机+肌醇+糖100g/L+2mg/L2，4-D+0.5mg/LKT+琼脂（小麦）烟草转化：

共培养：MS+6-BA1mg/L+NAA0.1mg/L

分化培养：MS+6-BA1mg/L+NAA0.1mg/L+Kan200mg/L+cef500mg/L

生根：MS+NAA0.1mg/L+Kan100mg/L+cef200mg/L

注意：Kan和cef不能高压灭菌，灭完菌以后用手摸一摸装有培养基的三角瓶不烫手了，然后再加。