常用作物遗传转化的组织培养基的配置

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植物组培培养基及其配制

植物组培培养基及其配制培养基好比土壤，是组织培养中离体材料赖以生存和发展的基地。

因此，在组织培养基的各个环节中，应着重掌握培养基，了解它的组成和配制方法。

一、组成培养基的五类成分目前，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。

1.无机营养物无机营养物主要由大量元素和微量元素两部分组成，大量元素中，氮源通常有硝态氮或铵态氮，但在培养基中用硝态氮的较多，也有将硝态氮和铵态氮混合使用的。

磷和硫则常用磷酸盐和硫酸盐来提供。

钾是培养基中主要的阳离子，在近代的培养基中，其数量有逐渐提高的趋势。

而钙、钠、镁的需要则较少。

培养基所需的钠和氯化物，由钙盐、磷酸盐或微量营养物提供。

微量元素包括碘、锰、锌、钼、铜、钴和铁。

培养基中的铁离子，大多以螯合铁的形式存在，即FeSO4与Na2—EDTA(螯合剂)的混合。

2.碳源培养的植物组织或细胞，它们的光合作用较弱。

因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物以供需要。

培养基中的碳水化合物通常是蔗糖。

蔗糖除作为培养基内的碳源和能源外，对维持培养基的渗透压也起重要作用。

3.维生素在培养基中加入维生素，常有利于外植体的发育。

培养基中的维生素属于B族维生素，其中效果最佳的有维生素B1、维生素B6、生物素、泛酸钙和肌醇等。

4.有机附加物包括人工合成或天然的有机附加物。

最常用的有酪朊水解物、酵母提取物、椰子汁及各种氨基酸等。

另外，琼脂也是最常用的有机附加物，它主要是作为培养基的支持物，使培养基呈固体状态，以利于各种外植体的培养。

5.生长调节物质常用的生长调节物质大致包括以下三类：(1)植物生长素类。

如吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)。

(2)细胞分裂素。

如玉米素(Zt)、6-苄基嘌呤(6-BA或BAP)和激动素(Kt)。

(3)赤霉素。

组织培养中使用的赤霉素只有一种，即赤霉酸(GA3)。

二、常用培养基配方及其特点1.常用培养基配方组织培养是否成功，在很大程度上取决于对培养基的选择。

植物组织培养MS培养基配方

植物组织培养MS培养基配方（一）母液配制与保存配制培养基时，如果每次配制都要按着杨成分表依次称量，既费时，又增加了多次称量误差。

为了提高配制培养基的工作效率，一般将常用的基本培养基配制成10～200倍，甚至1000倍的浓缩贮备液，即母液。

母液贮存于冰箱中，使用时，将它们按一定的比例进行稀释混合，可多次使用，并在配制较多数量的培养基时，降低工作强度，也提高试验的精度。

基本培养基的母液有四种：大量元素（浓缩20倍），微量元素（浓缩100倍），铁盐（浓缩200倍），除蔗糖之外的有机物质（浓缩100倍）1大量元素配制大量元素母液时要分别称量，分别溶解，在定容时按表1中的序号依次加入容量瓶中，以防出现沉淀。

倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保存。

2微量元素母液在配制微量元素母液时，也应分别称量和分别溶解，定溶时不分先后次序，可随意加入溶量瓶中定容（表2），一般不会出现沉淀现象。

倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保有存。

3铁盐母液由于铁盐无机化合物不易被植物吸收利用，只有基螯合物才能被植物吸收利用，因此需要单独配成螯合物母液表3）。

配制方法：称取5.56g硫酸亚铁和7.46g乙二胺乙酸二钠，分别用450ml的去离子水溶解，分别适当加热不停搅拌，分别溶解后将硫酸亚铁溶液缓缓加入到乙二胺四乙酸二钠溶液中，将两种溶液混合在一起，最后用去离子水定溶于1000mL，倒入棕色贮液瓶中，贴好标签和做好记录后放入冰箱内保存。

先取一种置容量瓶（烧杯）中，然后将另一种成分逐加逐剧烈震荡，至产生深黄色溶液，最后定容，保存在棕色试剂瓶中。

4有机物母液按表4中的量分别称取各种有机物，分别溶解后，用蒸馏水或去离子水定容于1000mL，放入细口瓶配成1 mg/ml 。

各100 ml。

6-苄基腺嘌呤（6-BA）用0.5 N的HCl加热溶解。

萘乙酸（NAA）用少量无水乙醇溶解，再加蒸馏水。

各种培养基配方范文

各种培养基配方范文培养基是用于细菌、真菌、植物细胞等生物的培养和繁殖的一种营养物质。

不同生物种类和培养目的需求不同，所以有许多种不同的培养基配方。

以下是几种常见的培养基配方：1. LB培养基（Luria-Bertani培养基）LB培养基是一种常用于培养细菌的全面培养基，其配方包括：5g酵母膏、10g蛋白胨、10g氯化钠，可以用1升蒸馏水溶解，调节pH至7.0。

LB培养基可用于大多数菌种的培养，是最常用的细菌培养基之一2. TSB培养基（Tryptic Soy Broth培养基）TSB培养基是一种适用于多种细菌的全面营养培养基，其配方包括：15g胰胨蛋白胨、5g酵母膏、5g氯化钠，可以用1升蒸馏水溶解，调节pH至7.3、TSB培养基可用于培养细菌、真菌等微生物。

3. MS培养基（Murashige and Skoog培养基）MS培养基是一种用于植物组织培养的配方，适用于各种植物种类的生长和繁殖。

其配方包括：4.4gMS盐基础培养基粉、30g蔗糖，可以用1升蒸馏水溶解，调节pH至5.8、MS培养基还可以根据不同植物种类的需求调整添加适当的植物激素。

4. YPD培养基（Yeast Peptone Dextrose培养基）YPD培养基是用于酵母菌培养的常用培养基，其配方包括：10g蛋白胨、20g葡萄糖、20g酵母浸出物，可以用1升蒸馏水溶解，调节pH至6.0。

YPD培养基可满足酵母菌对碳源、氮源等营养物质的需求。

5. SDA培养基（Sabouraud Dextrose Agar培养基）SDA培养基是一种常用的真菌培养基，其配方包括：20g葡萄糖、15g 琼脂、10g酵母提取物，可以用1升蒸馏水溶解，调节pH至5.6、SDA培养基可用于分离和培养真菌。

以上是几种常见的培养基配方，不同生物种类和培养目的需要选择适合的培养基。

培养基的配方还可以根据需要进行调整和优化，以满足特定菌种或细胞的生长需求。

最适合的培养基应根据具体实验需求进行选择。

水稻的遗传转化

水稻的遗传转化1）种子消毒：用75%乙醇浸泡去皮的水稻种子1min（剧烈摇动），再用2.5%的次氯酸钠分别处理两次，每次15min，然后用无菌水冲洗3-5次后均匀铺于诱导培养基上，不宜过多，一个培养皿大概14-20粒。

2）水稻愈伤组织的诱导和继代培养：消毒好的成熟种子在诱导培养基上28℃暗培养25-28天。

待愈伤组织长至合适大小，在培养基中来回剧烈摇动几次，使一些小块愈伤从大的组织块上脱离，从中挑选光滑、淡黄色、较硬、大小在2-3mm的胚性愈伤，均匀铺放在继代愈伤培养基上，28℃避光培养7-8天，即可用于农杆菌转化。

3）农杆菌介导的水稻愈伤组织转化及共培养：刮取已活化3天的农杆菌，放入液体共培养培养基中，用力打散，置摇床摇培0.5-2h，使得菌液的OD600在0.1-0.15（0.125最宜）之间。

将挑选的愈伤组织小粒放入已加农杆菌的液体培养基中，轻轻摇动几次，放置15-20min。

倒去菌液，用无菌滤纸吸干均匀的铺在已加滤纸的共培养基中。

愈伤在共培养培养基中22℃条件下暗培养3天。

4）转化愈伤组织的选择培养：共培养后的愈伤先用灭菌水洗涤三次，后用含头孢500mg/L的灭菌水浸泡30min，期间轻轻摇动，之后用滤纸吸干，均匀铺放在选择培养基上，28℃暗培养10天，之后进行第二次筛选，挑选淡黄色、生长状态良好的愈伤，均匀铺放在含潮霉素和头孢的选择培养基中，28℃暗培养15天。

5）愈伤组织的分化培养：挑选黄色、圆形的愈伤组织，均匀铺放在预分化培养基上，28℃暗培养7天。

之后挑选生长状态良好、淡黄色的胚性愈伤，放入分化培养基上，28℃光照培养30-60天左右，直至转基因小苗长出。

中间每隔25天左右将愈伤转移到新鲜的分化培养基上。

6）水稻的壮苗培养与移栽：将长出的小苗去掉周围的愈伤，在无菌条件下转移到1/2MS的壮苗培养基中，使根部浅插入培养基中，28℃光照培养（14h光/10h暗）。

当苗长至瓶口、约10cm以上时，打开瓶口所覆塑料膜，瓶内加入约1/3 的水，使苗暴露于空中炼化培养。

培养基的配制方法

培养基的配制方法培养基是微生物学、生物学等实验中将微生物培养的一种物质基质，它提供了微生物生长所必需的营养和环境条件。

培养基的配制方法主要包括选择基质、添加营养成分、调节pH值、灭菌和包装等步骤。

以下是一般的培养基配制方法及注意事项。

1.选择基质培养基的基质可以选择为水或含有必要营养成分的溶液。

一般情况下，使用蒸馏水或双蒸馏水作为基质是比较常见的选择。

2.添加营养成分培养基中必须添加适当的营养成分，以满足微生物的生长需求。

常用的营养成分有碳源、氮源、无机盐、维生素和生长因子等。

常用的碳源有葡萄糖、蔗糖、麦芽糖等，常用的氮源有氨基酸、酵母浸出物、肉浸出物等。

此外，还可以根据微生物的特殊要求增加一些其他的营养成分。

3.调节pH值pH值对于微生物的生长十分重要，大多数微生物的最适生长pH在6.5-7.5之间。

因此，培养基在配制过程中需要进行pH值的调节。

可以使用酸碱溶液（如HCl和NaOH）进行pH调节，并通过使用pH试纸或pH计监测pH值。

4.灭菌培养基的灭菌工作非常重要，它可以防止杂菌的污染。

常用的灭菌方法有高压灭菌、干热灭菌和滤过灭菌等。

高压灭菌是指将配制好的培养基放置在高压锅中，经过高温高压的处理。

干热灭菌是将配制好的培养基放置在烘箱中进行加热处理。

滤过灭菌是将培养基通过0.22um的无菌滤膜过滤，以去除微生物。

灭菌后，需要用无菌操作将培养基倒装入无菌培养器皿中。

5.包装灭菌后的培养基需要进行包装保存，以防止污染。

常用的包装方式有试管包装、琼脂平板包装和瓶装包装等。

试管包装是将培养基倒入试管中，用苏打棒打破试管口，并通过注封的方法密封试管。

琼脂平板包装是将培养基倒入无菌琼脂平板中，并使用无菌的平板封口膜密封。

瓶装包装是将培养基倒入无菌玻璃瓶中，用无菌胶塞封闭瓶口。

在配制培养基的过程中，还需要注意以下几点：1.保持操作环境无菌，使用无菌操作台、无菌器具和无菌操作方法。

2.注意各种添加物的浓度，不可过量或过少。

植物组织培养基的配制

植物组织培养基的配制母液的配制和保存基本培养基母液在植物组织培养过程中，配制培养基是日常必备的工作。

为减少工作量，经常使用的培养基，可先将各种药品配成浓缩一定倍数的母液，放入冰箱内保存，用时再按比例稀释，这样比较方便，且准确度高。

母液要根据药剂的化学性质分别配制，一般配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物质等母液。

在配制大量元素母液时，要防止在混合各种盐类时产生沉淀，为此各种药品必须在充分溶解后才能混合。

在混合时要注意参加的先后次序，把Ca2+、Mn2+、Ba2+、S042-、P043-错开，以免KH2P04和MgS04与CaC12等发生化学反应，相互结合生成CaSO4、BaSO4、Ca3(P04)2沉淀。

另外在混合各种无机盐时，其稀释度要大，慢慢混合，同时边混合边搅拌。

在配制微量元素母液时也要注意药品的添加顺序，以免产生沉淀。

铁盐容易发生沉淀，需要单独配制。

一般用FeS04∙7H20和Na2-EDTA配成铁盐螯合剂比较稳定，不易沉淀，铁盐放在棕色瓶中保存比较稳定。

母液要用蒸僧水配制，药品应选用纯度较高的化学纯CP或分析纯AR,以免有杂质对培养物造成不利影响。

药品的称量及定容都要准确，在称量时不同的化学药品需使用不同的药勺，防止药品的交叉污染和混杂，每称好一种药剂应立即作一记号，以免重复或遗漏。

各种药品先以少量水让其充分溶解，然后依次混合。

配制好的母液应分别贴上标签，注明母液种类、倍数、配制时间，并在记录本上详细记载配制及称取量，以便工作的准确及日后检查。

母液最好在2-4。

C 的冰箱中保存，特别是有机物质要求更严，储存时间不宜过长，如发现母液有霉菌污染或沉淀变质时，应重新配制。

多数植物生长调节剂不溶于水或难溶于水，IAA、NAA、IBA、2,4-D等生长素类和GA3,可先用少量O.ImolNaOH或95%酒精溶解，然后再用蒸储水定容到所需要的体积。

KT、6-BA等细胞分裂素类则可用少量lmol∕LHCl加热溶解，然后加水定容。

植物组织培养基的配制—培养基种类及成分

培养基中最常用的氨基酸是甘氨酸，其他的如精氨酸、谷氨酸、谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等也常用。
有时应用水解乳蛋白或水解酪蛋白，它们是含有约20种氨基酸的混合物，用量在10～1000mg／L之间。由于它们营养丰富，极易引起污染。
• 天然有机添加物
其成分比较复杂，大多含氨基酸、激素、酶等一些复杂化合物。它对细胞和组织的增殖与分化有明显的促进作用，但对器官的分化作用不明显。
（四）、生长调节物质
• 是植物新陈代谢中产生的天然化合物，它能以极微小的量影响到植物的细胞分化、分裂、发育，影响到植物的形态建成、开花、结实、成熟、脱落、衰老和休眠以及萌发等许许多多的生理生化活动。
• 在培养基的各成分中，植物激素是培养基的关键物质，对植物组织培养起着决定性作用
• 常用的有生长素类和细胞分裂素类。
锰：参与植物的光合、呼吸代谢过程，影响根系生长。锌：是各种酶的构成要素，能增强光合作用效率，参与生长
素的代谢，促进生殖器官发育和提高抗逆性。铜：有促进离体根生长的作用。硼：能促进生长器官的正常发育，参与蛋白质合成或糖类运输。钼：参与氮素代谢
（三）、有机营养成分
• 主要包括：各种维生素、肌醇、氨基酸和天然有机添加物。
维生素具有热易变性，易在高温下降解，可进行过滤灭菌
• 肌醇
使用浓度一般为l00mg／L，适当使用肌醇，能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽的形成。对组织和细胞的繁殖、分化有促进作用，对细胞壁的形成也有作用。
• 氨基酸
是很好的有机氮源，是蛋白质的组成成分，可直接被细胞吸收利用，对外植体的芽、根、胚状体的生长、分化均有良好的促进作用。
• 维生素
主要有盐酸硫胺素（VB1）、盐酸吡哆醇(VB6)、烟酸（VB3）、抗坏血酸（VC）、泛酸钙、生物素（VB7）、叶酸（VB11）、钴胺素、VB2等。一般用量为0.1～1.0mg／L。

常见植物培养基的配制配方

2015-4-16常见培养基的制备LB；G AUSE I;P AD培养基[]LB培养基LB（lysogeny broth）培养基是微生物学实验中最常用的培养基，用于培养大肠杆菌等细菌，其分为液态或是加入琼脂制成的固态培养基。

加入抗生素的 LB 培养基可用于筛选以大肠杆菌为宿主的克隆。

LB培养基的配制：成分：胰蛋白胨(tryptone) 10g酵母提取物(yeast extract) 5g氯化钠(NaCl) 10g固体培养基另加琼脂粉(15-20)g加双蒸水至1000mL, 用5mol/L NaOH（约0.2ml）调pH至7.2，121℃灭菌30min。

配制方法：✓称量分别称取所需量的胰化蛋白胨、酵母提取物和NaCl，置于烧杯中。

✓溶化加入所需水量2/3的蒸馏水于烧杯中，用玻棒搅拌，使药品全部溶化。

✓调pH 用1mol/L NaOH溶液调pH至7.2。

✓定容将溶液倒入量筒中，加水至所需体积.✓加琼脂加入所需量琼脂，加热融化，补足失水。

✓分装、加塞、包扎。

✓高压蒸汽灭菌100Pa灭菌20min。

培养细菌：大肠埃希氏菌(Escherichia coli)天然培养基；Gause′s Synthetic Agar （高氏合成一号琼脂）成分：✓KNO3 1g✓Soluble starch（可溶性淀粉）20g✓K2HPO40.5g✓MgSO4 .7H2O 0.5g✓NaCl 0.5g✓FeSO40.01g✓Agar （琼脂）20g✓water （水） 1000ml✓pH 7.2-7.4方法：加入蒸馏水或去离子水，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装试管或三角瓶，121℃高压灭菌20分钟备用.。

性状：干燥粉末，易吸潮。

PDA培养基制作PDA培养基是马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称，即Potato Dextrose Agar (Medium)，分别对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。

它属于固体培养基、半合成培养基。

PDA 培养基宜于微生物生长发育、节省原料等优势，一般在培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌方面应用广泛。

培养基的配制方法

培养基的配制方法培养基的配制方法是在实验室中作为微生物培养的基础，可以提供适当的营养物质和环境条件来促进微生物的生长和繁殖。

正确的配制培养基是进行微生物实验和研究的关键步骤之一。

下面将详细介绍培养基的配制方法。

1. 准备配制培养基所需的原料和仪器：- 食品级蛋白胨粉或胨蛋白水解物：提供微生物所需的氨基酸和营养物质。

- 食品级琼脂：用于凝固培养基。

- 蔗糖或葡萄糖：提供微生物的碳源。

- 盐：提供微生物生长所需的必需离子，如钠、钾、镁等。

- pH试纸或pH计：用于调节培养基的酸碱度。

- 常温和高温灭菌器：用于灭菌培养基。

- 烧杯、容器、磁力搅拌器和称量仪器：用于容器和搅拌培养基。

2. 测量和称量：- 根据所需的培养基成分和浓度，测量所需的蛋白胨量、琼脂量、蔗糖或葡萄糖量以及盐的量。

- 将测量好的原料放入烧杯中。

3. 加入适量的水：- 加入适量的去离子水或纯净水，将配方溶解。

4. 调节酸碱度：- 使用pH试纸或pH计来检测培养基的酸碱度。

- 如果需要调节酸碱度，则可以使用盐酸或氢氧化钠等脆性酸碱溶液加入培养基中以达到目标pH值。

5. 搅拌混合：- 将培养基溶液放入磁力搅拌器中。

- 开启搅拌器并搅拌溶液直到完全混合。

6. 灭菌：- 将配制好的培养基倒入适当容器中，如烧杯或琼脂培养皿。

- 对于常见的液体培养基，使用常温灭菌器在121摄氏度下高压灭菌20-30分钟。

- 对于琼脂培养基，使用高温灭菌器在121摄氏度下高压灭菌15-20分钟。

7. 倒盖和保存：- 等待培养基凝固后，盖上并标记培养基的名称、配方和配制日期。

- 将培养基保存在冰箱中或冷藏库中，在4摄氏度下保存。

总结一下，培养基的配制方法包括准备原料和仪器，测量和称量原料，加入适量的水，调节酸碱度，搅拌混合，灭菌和保存。

注意对于不同的微生物，培养基的配方可能会有所不同，需要根据具体的实验目的和需求进行调整。

正确配制培养基对于获得准确的微生物培养结果至关重要。

培养基的成分、配制和筛选

培养基的成分、配制和筛选
例2：N6＋GA3 0.1＋ Suc5.0％＋Agar0.8％过滤灭菌
转灭菌入
培养基的成分、配制和筛选
事实上，培养基的研制始终伴随着组培技术的发展，
整个组培的发展史就是一部培养基的研制史：
1902 Haberlandt knop培养液＋Suc
失败
1934 White 等人无机＋有机（ VB）＋ IAA 脱分化
1957 Skoog & Miller CYT/IAA 激素调控
2)香蕉（banana）用量为150-200ml／L。用黄熟的小香蕉，加入培养基后变为紫色。对pH值的缓冲作用大。主要在兰花的组织培养中应用，对发育有促进作用。
3)马铃薯(potato) 去掉皮和芽后，加水煮30min，再经过过滤，取其滤液使用。用量为150—200g／L。对pH值缓冲作用也大。添加后可得到健壮的植株。
Chaptor 3 培养基
培养基的成分培养基的配制培养基的筛选
培养基的成分、配制和筛选
培养基(culture medium)的配制是组培
工作的核心。外植体之所以能沿着不同的
组培途径生长、分化，其主要原因就在于
培养基中的物质成分对细胞的生长发育起
着定向调控作用。
在离体培养条件下，不同种植物的组织对营养有不同的要求，甚至同一种植物不同部位的组织对营养的要求也不相同。因此，在建立一项新的培养系统时，首先必须找到一种合适的培养基，培养才有可能成功。
培养基的成分、配制和筛选
（4）、固化剂：支撑作用，不提供营养； Agar：多糖类物质，40℃凝固，用量
（0.7-1.0）%；不凝原因：①PH<5不凝；②长时间高压灭菌；

常用培养基配方及应用

常用培养基配方及应用常用培养基配方及应用:1. Luria-Bertani培养基(LB)LB培养基是一种常用的细菌培养基，主要用于培养大肠杆菌等革兰氏阴性菌。

LB培养基的配方如下:- 水：1L- Bacto Tryptone：10g- 酵母浸粉：5g- NaCl：10gLB培养基可用于细菌的生长和传代。

由于配方简单，成本低廉，因此广泛被用于分子生物学实验室中。

2. 当归黄芪培养基当归黄芪培养基是一种用于植物组织培养的培养基，主要用于植物的快速繁殖和植株再生。

其配方如下:- 水：1L- 蔗糖：30g- 白芷酸：3.0mg- 黄芪苷：1.0mg- 当归酮：1.0mg- 植物生长素：添加适量当归黄芪培养基为植物提供了合适的营养物质和生长因子，促进了植物细胞的生长和分化。

3. 液体基底培养基液体基底培养基适用于细胞培养和组织工程等生物医学领域的应用。

其配方如下:- 水：1L- 葡萄糖：25g- 酪蛋白水解物：6g- 酵母浸粉：2g- 天然海藻酸钠：1g- 乳酸钠：0.1g- 枸橼酸钠：0.1g- 氯化钾：0.1g- 氯化钠：0.1g- 磷酸二氢钠：0.5g液体基底培养基提供了细胞生长所需的营养物质和生长因子，促进了细胞的增殖和生长。

4. Sabouraud培养基Sabouraud培养基是一种常用的真菌培养基，用于培养和鉴定真菌。

其配方如下:- 水：1L- 麦芽提取物：4g- 葡萄糖：40g- 氯化钠：5g- 石蜡油：20mLSabouraud培养基提供了真菌生长所需的营养物质和抑制细菌生长的条件，用于分离和培养真菌菌株。

常用培养基的应用范围广泛，可以满足不同类型的生物学研究需求。

例如，LB 培养基可以用于细菌遗传转化、RNA或蛋白质的表达分析等；当归黄芪培养基可以用于植物组织培养和再生；液体基底培养基适用于细胞培养和组织工程等；Sabouraud培养基可以用于分离和培养真菌。

这些培养基除了提供营养物质外，还可根据需要添加不同的生长因子、抗生素等，以满足特定实验需求。

常用25种培养基详细配方

常用25种培养基详细配方以下是常用的25种培养基的详细配方：1. LB培养基（Luria-Bertani medium）-天然培养基：10g蛋白胨，5g酵母粉，10gNaCl，添加适量蒸馏水，pH值调至7.0。

- 固体培养基：添加15g agar。

2. TSA培养基（Tryptic Soy Agar）-17g蛋白胨，3g酵母提取物，5gNaCl，添加适量蒸馏水，pH值调至7.3-7.5- 固体培养基：添加15g agar。

3. NB培养基（Nutrient Broth）-8g蛋白胨，2g胰蛋白胨，5gNaCl，添加适量蒸馏水，pH值调至7.4 - 固体培养基：不添加agar。

4. R2A培养基（Reasoner's 2A medium）- 0.5g peptone，0.5g casein hydrolysate，0.5g yeast extract，0.5g glucose，0.5g soluble starch，0.3g dipotassium phosphate，0.05g magnesium sulfate，0.3g sodium pyruvate，10μg m anganese sulfate，添加适量蒸馏水，pH值调至7.2-7.4- 固体培养基：添加15g agar。

5. BHIS培养基（Brain Heart Infusion with 20% Sucrose）- 37.5g BHIS培养基，10g sucrose，添加适量蒸馏水，pH值调至7.5- 固体培养基：添加15g agar。

6. PDA培养基（Potato Dextrose Agar）-200g马铃薯，20g葡萄糖，添加适量蒸馏水，pH值调至5.6- 固体培养基：添加20g agar。

7. MRS培养基（de Man Rogosa Sharpe medium）- 10g peptone，10g beef extract，4g yeast extract，20g glucose，5g sodium acetate，2g dipotassium phosphate，0.02g magnesium sulfate，添加适量蒸馏水，pH值调至6.2-6.6- 固体培养基：添加20g agar。

农杆菌介导的转化所用基本培养基配方

农杆菌介导的转化所用基本培养基配方
1. 无机盐基础培养基：无机盐主要提供细胞生长所需的元素和离子。

常用的基础培养基包括Murashige和Skoog培养基（MS培养基）。

MS培
养基中含有较高浓度的无机盐，可以促进农杆菌的生长和转化效率。

2.碳源：碳源为农杆菌提供能量和碳源。

常用的碳源包括葡萄糖、果糖、蔗糖等。

3.氮源：氮源为农杆菌提供氮元素，促进细胞生长和代谢活性。

常用
的氮源包括氨态氮（氨水、胆固醇等）和硝酸态氮。

4.维生素：维生素是促进细胞生长和代谢活性的必需物质。

常用的维
生素包括硫胺素、核黄素、叶酸等。

5.激素：植物生长激素可以促进植物细胞的增殖和分化，常用的植物
生长激素包括激动素、生长素等。

除了基本培养基成分外，为提高农杆菌介导的转化效率，还可以添加
一些辅助物质，例如：
1.亚硫酸类：亚硫酸类物质可以抑制农杆菌生长，同时也可以促进DNA转化和表达。

例如，L-半胱氨酸和亚硫酸钠等。

2.胆盐：胆盐可以增加细胞膜的通透性，提高DNA转化效率。

常用的
胆盐有胆固醇和胆酸钠等。

3.缓冲剂：缓冲剂可以维持培养基的pH稳定，常用的缓冲剂包括葡
萄糖酸和磷酸盐等。

总结起来，农杆菌介导的转化所用的基本培养基配方包括无机盐基础
培养基、碳源、氮源、维生素和激素等成分。

为提高转化效率，还可以添
加亚硫酸类物质、胆盐和缓冲剂等辅助物质。

不同实验室和实验目的可能会有些许差异，在实际操作中可以根据需要进行相应的调整。

培养基配方及配制方法

造就基配方1 斜面菌种保管造就基1.1PDA造就基（马铃薯葡萄糖琼脂造就基）称取200g马铃薯,洗净去皮切碎,加水1000ml煮沸0.5h,纱布过滤,滤液补足1000ml,再加15g葡萄糖和15-20g琼脂,充分消融后趁热纱布过滤,分装试管,每试管约5-10ml（视试管大小而定）,121℃灭菌20分钟阁下后掏出试管摆斜面,冷却后贮存备用.麦芽汁的制备：干麦芽起首进行破碎摧毁（不克不及太粗,也不必太细.太粗影响糖化效力,细致影响过滤速度）,按麦芽重量的3~4倍加水,搅拌平均后,37℃阁下浸泡1小时,然后徐徐加温至55~63℃（在升温进程中应不竭搅拌使温度平均）,保温4~6小时（用0.02摩尔/升碘液测定为黄色至无色时）,糖化停止.在糖化进程中,应每小时搅拌一次.取过滤后的清液,加1.8%琼脂,分装试管,每试管约5-10ml（视试管大小而定）,121℃灭菌20分钟阁下后掏出试管摆斜面,冷却后贮存备用.2基菌落总数检测将胰蛋白胨5.0g.酵母浸膏2.5g.葡萄糖1.0g.琼脂15.0g 参加蒸馏水1000ml中,煮沸消融后,调pH,然后在121℃下灭菌15min,掏出,稍微冷却后,带热倒入造就皿中.3志贺氏菌检测3.1 GN增菌液制法：将上述物品参加蒸馏水中,加热消融煮沸,调pH为7.0,分装,在115℃高压灭菌15min.3.2 HE琼脂制法：将上述前七种成分参加400ml蒸馏水中作为基本液,将琼脂参加到600ml蒸馏水中加热消融,参加甲液乙液到基本液中,调pH,再参加指导剂,并与琼脂液归并,待冷却至50~55℃,倾泻浇平板.注1：此造就基不克不及高温灭菌.注2：甲液的设置设备摆设：硫代硫酸钠：34g,柠檬酸铁钠：4g,蒸馏水：100ml.注3：乙液的设置设备摆设：去氧胆酸钠：10g,蒸馏水：100ml.注4：Andrade指导剂的设置设备摆设：酸性复红：0.5g,1mol/l的氢氧化钠溶液：16ml,蒸馏水：100ml.将酸性复红消融于蒸馏水中,参加氢氧化钠溶液,数小时后如复红褪色不全,再加氢氧化钠溶液1~2ml.3.3 SS琼脂3.3.1 基本造就基：成分：牛肉膏：5g,胨：5g,三号胆盐：3.5g,琼脂：17g,蒸馏水：1000ml.制法：将牛肉膏蛋白胨,三号胆盐参加到400ml蒸馏水中,将琼脂参加到600ml蒸馏水中,煮沸使其消融,然后液混杂,于121℃下灭菌15min,保管备用.3.3.2 完整造就基成分：基本造就基：1000ml,乳糖：10g,柠檬酸钠：8.5g,硫代硫酸钠：8.5g,10%柠檬酸铁溶液：10ml,1%中性红溶液：2.5ml,0.1%煌绿溶液：0.33ml.制法：加热熔化基本造就基,按比例参加处染料以外的所有成分,搅拌平均,调pH7.0,参加中性红溶液和煌绿溶液,混杂平均后浇平板.注1：配制好的造就基宜当日运用,或保管于冰箱48h内运用.注2：煌绿溶液配好后,应在10日内运用.注3：可以购置SS琼脂的湿润造就基.3.4 麦康凯琼脂成分：蛋白胨：17g,胨：3g,猪胆盐（牛.羊胆盐）：5g,氯化钠：5g,琼脂：17g,蒸馏水：1000ml,乳糖：10g,0.01%结晶紫水溶液：10ml,0.5%中性红水溶液：5ml.制法：将蛋白胨.胨.猪胆盐.氯化钠消融于400ml蒸馏水中,调pH7.2,将琼脂参加到600ml蒸馏水中加热消融,将两液混杂平均,于121℃下灭菌15min备用.临用时加热熔化琼脂,趁热参加乳糖,等冷却到50~55℃时,参加结晶紫和中性红水溶液,搅拌平均后浇平板.注：结晶紫和中性红水溶液配好后,须经高压灭菌.3.5 伊红美蓝琼脂（EMB）成分：蛋白胨：10g,乳糖：10g,磷酸氢二钾：2g,琼脂17g,2%伊红Y溶液：20ml,0.5%美蓝溶液：10ml,蒸馏水1000ml,pH7.1.制法：将蛋白胨.磷酸盐.琼脂消融于蒸馏水中,调pH,于121℃下灭菌15min备用.临用时加热熔化琼脂,并参加乳糖,冷却至50~55℃时参加伊红和美蓝溶液,混杂平均后浇平板.3.6 三精铁琼脂成分：蛋白胨：20g,牛肉膏：5g,乳糖：10g,蔗糖：10g,葡萄糖：1g,氯化钠：5g,六水硫酸亚铁铵：0.2g,硫代硫酸钠：0.2g,琼脂：12g,酚红：0.025g,蒸馏水：1000ml,pH7.4.制法：将除琼脂和酚红以外的各类成分消融于蒸馏水中,调pH,然后参加琼脂,加热消融,参加0.2%酚红水溶液12.5ml,摇匀,分装时量多一点,于121℃下灭菌15min,搁高层斜面备用.成分：蛋白胨：1g,牛肉膏：0.3g,氯化钠：0.5g,1.6%溴甲酚紫酒精溶液：0.1ml,葡萄糖：1g,琼脂：0.3g,蒸馏水：100ml,pH7.4.制法：将蛋白胨,牛肉膏,氯化钠参加水中,调pH后,参加琼脂,煮沸消融,再参加指导剂和葡萄糖.分装,于121℃下灭菌15min,备用.3.7 半固体管成分：蛋白胨：1g,牛肉膏：0.3g,氯化钠：0.5g,琼脂：0.35~0.4g,蒸馏水：100ml,pH7.4.制法：将上述成分溶于水中,加热煮沸,并调pH后分装小试管,121℃高压灭菌15min,竖立凝固备用.3.8 尿素琼脂成分：蛋白胨：1g,氯化钠：5g,葡萄糖1g,磷酸二氢钾：2g,0.4%酚红溶液：3ml,琼脂：20g,蒸馏水：1000ml,20%尿素：100ml,pH7.2±0.1.制法：将除尿素和琼脂以外的成分派好,调pH,参加琼脂后加热使其熔解并分装小瓶,121℃高压灭菌15min,冷却至50~55℃后,参加经由滤灭菌的尿素溶液,最终尿素浓度为2%,最终的pH应为7.2±0.1.分装于灭菌试管内,搁斜面备用.3.9 西蒙氏柠檬酸盐琼脂成分：氯化钠：5g,七水硫酸镁：0.2g,磷酸二氢铵：1g,磷酸氢二甲：1g,柠檬酸钠：5g,琼脂：20g,蒸馏水：1000ml,0.4%溴麝喷鼻草酚蓝溶液：40ml,pH6.8.制法：先将盐类消融于水中,调pH,再加琼脂,加热熔解,然后参加指导剂,混杂平均后分装试管,121℃下灭菌15min,搁成斜面.实验办法：挑取少量琼脂造就物接种,于36℃±1℃造就4天,天天不雅察成果,阳性者斜面上有菌落发展.造就基由绿色转为蓝色.3.10 氰化钾（KCN）造就基成分：蛋白胨：10g,氯化钠：5g,磷酸二氢钾：0.225g,磷酸氢二钠：5.64g,蒸馏水：1000ml,0.5%氰化钾溶液：20ml,pH7.6.制法：将除氰化钾以外的成分派好分装,121℃灭菌15min,放在冰箱内使其充分冷却,每100ml造就基参加0.5%氰化钾溶液 2.0ml （最后浓度为1:10000）,分装于12mm×100mm灭菌试管,每管约4ml,连忙用橡皮塞塞紧,放在4℃冰箱内,至少可保管两个月,同时将不加氰化钾的造就基作为对比造就基,分设备用.实验办法：将琼脂造就物接种于蛋白胨水内成作为稀释菌液,挑取1环接种于氰化钾造就基,别的挑取1环接种于对比造就基,在36℃±1℃下造就1~2天,不雅察成果,若有细菌发展,则为阳性,经2天后不发展则为阴性.注：氰化钾是剧毒物资,运用时应当心,切勿感染,以免中毒.炎天禀装造就基应在冰箱内进行,实验掉败的重要原因是封口不严,氰化钾逐渐分化,变成氢氰酸气体逸出,乃至药物浓度下降,细菌发展,造成假阳性现象.3.11 氨基酸脱羧酶实验造就基成分：蛋白胨：5g,酵母浸膏：3g,葡萄糖：1g,蒸馏水：1000ml,1.6%溴甲酚紫乙醇溶液：1ml,L-氨基酸或DL-氨基酸：0.5g或1g/100ml,pH6.8.制法：除氨基酸以外的所有成分加热消融后,分装每瓶100ml,分离参加各类氨基酸：赖氨酸.精氨酸和鸟氨酸.L-氨基酸按0.5%参加,DL-氨基酸按1%参加.再调pH6.8,对比造就基不加氨基酸.分装于灭菌的小试管内,每管0.5ml,上面滴加一层液体白腊.115℃高压灭菌10min.实验办法：从琼脂斜面上挑取造就物接种,于36℃±1℃下造就18~24h,不雅察成果,氨基酸脱羧酶阳性者因为产碱,造就基应呈紫色.阴性者因为碱性物资产生,但因葡萄糖产酸而是造就基变成黄色,对比管应为黄色.3.12 蛋白胨水（靛基质实验用）制法：将上述成飞混杂平均,分装小管,121℃灭菌15min.靛基质试剂：柯凡克试剂：将5g对二氨基甲醛溶于75ml戊醇中,然后慢慢参加浓盐酸25ml.欧-波试剂：将1g对二氨基苯甲醛溶于90ml95%的乙醇内,然后慢慢参加浓盐酸20ml.实验办法：挑取少量接种物接种,在36℃±1℃下造就1~2天,须要时可造就4~5天,参加柯凡克试剂约0.5ml,轻摇试管,阳性者试剂层呈深红色,或参加欧-波试剂,沿管壁流下,笼罩于造就液概况,阳性者接触面上呈玫瑰红色.注：蛋白胨应含有丰硕的色氨酸,每批蛋白胨买来后运用已知菌种实验.3.13 糖发酵管成分：牛肉膏：5g,蛋白胨：10g,氯化钠：3g,十二水磷酸氢二钠：2g,0.2%溴麝喷鼻草酚蓝溶液：12ml,蒸馏水：1000ml,pH7.4.葡萄糖发酵管按上述成分派好后,按0.5%参加葡萄糖,分装于有一个倒置小管的小试管内,121℃灭菌15min.其他各类糖发酵管可按上述成分派好后,分装每瓶100ml,121℃灭菌15min,另将各类糖类配好10%溶液,一同灭菌,将5ml糖溶液参加到100ml液体造就基中,以无菌操纵分装小试管.注：蔗糖不纯,加热后会自行水解者,应采取过滤法除菌.实验办法：从琼脂斜面上挑取小量造就物接种,于36℃±1℃,一般不雅察2~3天,迟缓反响需不雅察14~30天.3.14 5％乳糖发酵管成分：蛋白胨：0.2g,氯化钠：0.5g,乳糖：5g,2%溴麝喷鼻草酚蓝水溶液：1.2ml,蒸馏水：100ml,pH7.4.制法：除乳糖以外的各成分消融于50ml蒸馏水内,调pH,将乳糖消融于别的50ml蒸馏水中,分离于121℃灭菌15min,将两者混杂,以无菌操纵分装到小试管中.注：在此造就基内,大部分乳糖迟缓发酵的细菌可于1天内发酵.。

农杆菌介导的转化所用基本培养基配方

农杆菌介导的转化所用基本培养基配方农杆菌介导的转化所用基本培养基配方一、NB培养基配方（基本培养基）N6大量：（mg/l）母液：10X，1L（mg）硝酸钾KNO3硫酸氨（NH4）2SO4 磷酸二氢钾KH2PO4 硫酸镁MgSO4·7H2O 氯化钙CaCl2·2H2O 2830463400185166283004630400018501660B5微量：（mg/l）母液：100X，1L（mg）硼酸H3BO4硫酸锰MnSO4·H2O硫酸锌ZnSO4·7H2O 碘化钾KI钼酸钠Na2MoO4·2H2O 硫酸铜CuSO4·5H2O 氯化钴CoCl2·6H2O 37.5820.750.250.0250.02530075820075252.52.5铁盐：（mg/l）母液：100X，1L（mg）硫酸亚铁FeSO4·7H2O乙二胺四乙酸二钠Na2EDTA 27.837.327803730肌醇：（mg/l）母液：100X，1L（mg）肌醇Myo-inositol 100 10000有机成分：（mg/l）母液：50X，1L（mg）盐酸硫胺素ThiamineHCl盐酸吡哆醇PyridoxineHCl 尼克酸Niacin水解酪蛋白Casamino acids 谷氨酰胺Glutam脯氨酸Proline ine甘氨酸Glycine 101130025050025005050150001250025000100蔗糖Sucrose 30000mg/l琼脂Phytagel 2400mg/lpH 5.8-5.9注意：有机成分不能高压灭菌，须用滤器抽滤，分装后-20℃保存二、AAM培养基配方大量：（mg/l）母液：10X，1L（mg）磷酸二氢钾KH2PO4 硫酸镁MgSO4·7H2O 氯化钾KCl氯化钙CaCl2·2H2O 170370294044017003700294004400微量：（mg/l）母液：100X，100ml（mg）硫酸锰MnSO4·H2O钼酸钠Na2MoO4·2H2O 硼酸H3BO4硫酸锌ZnSO4·7H2O 碘化钾KI硫酸铜CuSO4·5H2O 氯化钴CoCl2·6H2O 7.580.25320.750.03870.02575825300200753.872.5铁盐：（mg/l）母液：100X，1L（mg）硫酸亚铁FeSO4·7H2O乙二胺四乙酸二钠Na2EDTA 27.837.327803730肌醇：（mg/l）母液：100X，1L（mg）肌醇Myo-inositol 100 10000维生素：（mg/l）母液：100X，1L（mg）盐酸硫胺素ThiamineHCl 盐酸吡哆醇PyridoxineHCl 尼克酸Niacin 0.50.50.5505050氨基酸：（mg/l）甘氨酸Glycine精氨酸Arginine谷氨酰胺Glutamine 7.5 174 876水解酪蛋白Casamino acids 500mg/l乙酰丁香酮Acetosgringone 100μΜ葡萄糖Glucose 68500mg/l蔗糖Sucrose 30000mg/l注意：AAM培养基不能高压灭菌，须用滤器抽滤，分装后-20℃保存三、YEB固体培养基(pH 7.0)酵母提取物蛋白胨牛肉膏蔗糖硫酸镁添加：Kan 50 mg/L Rif 50 mg/L 1.0g／Ｌ5.0g／Ｌ5.0g／Ｌ5.0g／Ｌ0.5g／Ｌ四、LB固体培养基(pH 7.0-7.2)酵母提取物蛋白胨NaCl添加： Kan 50 mg/L Rif 50 mg/L 5g／Ｌ10g／Ｌ10g／Ｌ五、MS培养基配方大量：（mg/l）母液：20X，1L（mg）硝酸铵NH4NO3硝酸钾KNO3磷酸二氢钾KH2PO4硫酸镁MgSO4·7H2O 氯化钙CaCl2·2H2O 16501900170370440330003800034008800微量：（mg/l）母液：100X，1L（mg）硫酸锰MnSO4·4H2O 硫酸锌ZnSO4·7H2O 硼酸H3BO4碘化钾KI钼酸钠Na2MoO4·2H2O 硫酸铜CuSO4·5H2O 氯化钴CoCl2·6H2O 22.38.66.20.830.250.0250.025223086062083252.52.5铁盐：（mg/l）母液：100X，1L（mg）硫酸亚铁FeSO4·7H2O乙二胺四乙酸二钠Na2EDTA 27.8537.2527853725肌醇：（mg/l）母液：100X，1L（mg）肌醇Myo-inositol 100 10000维生素：（mg/l）母液：100X，1L（mg）盐酸硫胺素ThiamineHCl 盐酸吡哆醇PyridoxineHCl 尼克酸Niacin 0.40.50.5405050甘氨酸Glycine 琼脂Phytagel 蔗糖Sucrose pH 5.8-5.9 2 mg/l 8000 mg/l 30000mg/l。

常用作物遗传转化的组织培养基的配置

MS 大量元素×20MS 微量元素×200MS 有机×200MS 铁盐×200氢氧化钠的配置：称4g NaOH粉末放到蒸馏水中，溶解后再定容到100ml即可。

改良MS （MS＇）×20MS＇有机（与MS相同）×200N6 大量×20N6 微量×200N6 有机与MS有机相同N6铁盐与MS铁盐相同W14 大量×20W14 微量×200W14铁盐与MS铁盐相同W14有机与MS有机相同接种小麦花药的程序1.准备工作；培养基﹑用灭过菌的一水配75﹪酒精，棉花，95﹪，火柴，酒精灯，直镊，托盘，烧杯或塑料盒，放烧过镊子的皿底，装75﹪酒精的瓶子，将超净工作台打开吹15分钟，然后擦干净即可使用。

2.把样品拿到准备间内去叶，注意尖上留一点小叶，避免酒精渗进去。

把一天的量弄够，上午做不完的用保鲜膜包好放入4℃冰箱，下午再用。

3.消毒：将去叶的样品拿到超净工作台上，先用75﹪的酒精棉擦2次放入托盘中，再用酒精棉擦第3次后放入盒中或烧杯中准备接种。

4.点着酒精灯：把皿底及镊子烧好备用，再把三角瓶皮筋拆下，拿到灯前用火烧一下封口纸，再斜着拿瓶把纸打开，用火烧一下瓶口，然后把烧好的三角瓶尽量往超净工作台里面放，避免污染。

5.用75﹪酒精壶喷一下双手消毒，把样品外衣剥掉露出长穗，面对有棱的一面，先用直镊剥去外壳露出花药，每一个花苞有3个花药，将其用弯镊轻轻地夹起磕到三角瓶中，每瓶3个穗子大概100个花药。

6.接好后，将镊子及三角瓶瓶口和封口纸烧一下，把三角瓶斜着拿用封口纸盖好，系上皮筋写上名称及日期，放在培养箱中暗培养。

观察：15—20天开始观察，只要出了愈伤就赶快把它转到分化培养基上。

愈伤越小越好。

小麦花药诱导培养基（PH 5.8）小麦花药分化培养基（PH 5.8）小麦花药壮苗培养基（PH 5.8）小麦幼穗消毒步骤：1、.用75﹪酒精快速冲洗几秒钟，主要清洗根部。

培养基配方及配置

培养基配⽅及配置培养基配⽅及配置根据其作⽤不同，培养基分为：诱导培养基增殖培养基⽣根培养基根据其营养⽔平不同，培养基可分为基本培养基和完全培养基。

基本培养基（就是通常称呼的培养基）主要有MS、White、N6、B5 、改良MS、Heller、Nitsh、SH、Miller等。

完全培养基就是基本培养基的基础上，根据试验的不同需要，附加⼀些物质，如⽣长调节物质和其他复杂有机物质等。

N6培养基特点：1974年朱⾄清等为⽔稻等⽲⾕类作物花药培养⽽设计成分简单KNO3 和(NH4)2SO4含量⾼⼴泛应⽤于⼩麦、⽔稻及其它植物的花药培养等White培养基特点：1943年由Ｗhite为培养番茄根尖⽽设计的。

1963年⼜作了改良，称作Ｗhite改良培养基。

特点：⽆机盐含量较低适⽤：⽣根培养。

B5培养基特点：含较低的铵双⼦叶植物尤其⽊本植物组培可选择MS培养基特点：⽆机盐、离⼦浓度⾼，硝酸盐含量较⾼。

MS培养基是⽬前应⽤最多最普遍的培养基。

⽆机盐的浓度较⾼，能保证组织培⽣长所需的矿物质营养。

并且因为离⼦浓度⾼，在配制、贮存、消毒过程中，即使有些成分略有出⼊，也不致影响培养基中的离⼦平衡培养基配⽅明细表：培养基成分：⼀、⽆机盐：氮枝叶⽣长需要氮素，缺氮⽼叶先发黄；氮过量，枝叶过度茂盛。

磷缺磷，植株⽣长缓慢，⽼叶暗紫⾊。

钾促进花卉⽣长健壮，增强抗性，茎秆挺拔。

缺钾，叶尖、叶缘枯焦，叶⽚呈皱曲状，⽼叶发黄或⽕烧状。

钴缺钴，叶⽚失绿⽽卷曲，整个叶⽚向上弯曲凋枯。

⼆、有机物碳⽔化合物：选⽤种类：蔗糖（或葡萄糖、果糖）等蔗糖浓度：2%～3%，胚培养为4%～15%⼤⽣产时可⽤⽩糖糖在培养基的作⽤：1）为细胞提供合成新物质的碳⾻架2）为细胞的呼吸代谢提供底物和能量3）维持渗透压维⽣素种类：VB1（盐酸硫胺素）、VB6（盐酸吡哆醇）、VB3（烟酸）、Vc（抗坏⾎酸浓度：0.1－1.0mg/L作⽤：VB1 促愈伤组织产⽣，提⾼活⼒VB6 促根⽣长Vc 防组织褐变VB3 与植物代谢和胚的发育有关系氨基酸：⽢氨酸、精氨酸、⾕氨酸、⾕氨酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等等。

一组织培养——培养基的配置

III.磷盐 KH2PO4 IV. 铁盐 Na2 EDTA Fe SO4 ·7H2O 37.5 27.8 170
V.有机（mg/L）
甘氨酸盐酸硫胺素 B1 盐酸吡哆醇 B6 烟酸肌醇
2.0 0.1 0.5 0.5 100
附加成分 ( g/L ) 蔗糖琼脂 30 8.0
PH = 5.8～6.2
三、培养基的配制
1、母液的配制（储备液的配制） 2、培养基的配制
1、储备液配制
MS培养基组成成份 20×储备液1（大量元素） NH4NO3 KNO3 CaCl2.2H2O MgSO4.7H2O KH2PO4 200×储备液2（微量元素） KI H3BO3 MnSO4.4H2O ZnSO4.7H2O Na2MoO4.2H2O CuSO4.5H2O CoCl2.6H2O 200*储备液3（铁盐） FeSO4.7H2O Na2.EDTA.2H2O 1升储备液用量（mg） 33000 38000 8800 7400 3400 166 1240 4460 1720 50 5 5 5560 7460 20000 100 100 20 400 每升培养基取用量（mL） 50
• 包扎刀柄，弯嘴镊子； • 写上各组标记； • 交给陈老师，统一灭菌。
2、培养基配制及灭菌（1人/组，12瓶/组）
• MS基本培养基的配制大量元素 30.0mL 蒸馏水500mL 微量元素 3.0mL 加入搪瓷缸中 + 蔗糖18.0g 铁盐 3.0mL 琼脂4.8g 有机 3.0mL 电磁炉加热煮沸融化琼脂后，加水定容至582mL（用量筒）。 • 加不同激素浓度(0.5、1、2mg/L)MS培养基的配制取200mL烧杯3个，分别吸取0.1mg/mL 2,4-D溶液烧杯1: 2,4-D溶液1mL+MS基本培养基194mL 烧杯2: 2,4-D溶液2mL+MS基本培养基194mL 搅拌混匀烧杯3: 2,4-D溶液4mL+MS基本培养基194mL 用NaOH调pH至5.8,再加水定容至200mL(用量筒)。 • 分装：50mL三角瓶，约20-30mL/瓶，盖上封口膜，用牛皮纸包扎。 • 灭菌：标上激素浓度和姓名，统一放置灭菌。 • 保存：灭菌后，每组带托盘取培养基，放于316培养架上。