In_【企业诊断】第六章临床生化诊断试剂盒的选择与评价临床生化诊断试剂盒的选择
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类繁多，有液体型、粉剂型、片剂型，有单一试剂、双试剂、干试剂、多 试剂等。生产厂、供应商也很多。纵观近 20 多年来的发展，临床生化体外诊断试剂盒的分类和发 展历史可用下图 6-1 表示。
图 6-1 临床生化诊断试剂盒分类和发展史
一、液体型试剂和粉（片）剂型试剂
（二）粉（片）剂型试剂 所谓粉剂型及片剂型试剂，即是将试剂的各组分用球磨技术粉碎成粉剂或混合后压成片剂，使 用前再加入指定的溶液复溶成液体试剂。干粉试剂如果在冻干分装前是液体型的，则其各组分是相 当均匀的；但如果用固体原料研磨后制成粉剂或片剂，则存在许多问题：①要使试剂各组分混合得 非常均匀，技术难度很大；②分装过程中的称量误差及复溶时加水量的准确性影响试剂的瓶间差； ③水质优劣对试剂的稳定性和测定的可靠性有相当大的影响。
（一）液体型试剂 无论是单试剂还是双试剂型试剂，目前乃至今后仍以液体型为主要剂型。其优点是液体型试剂 的试剂组分高度均一，瓶间差异小，测定重复性好和使用方便；它也无需加入任何辅助试剂及蒸馏 水，避免了外源性水质对试剂的影响，性能较稳定，测定结果较为准确。缺点是液体型试剂（尤其 是酶试剂）保存时间较短，不便于运输。 1．液体单试剂 所谓液体单试剂就是将某种生化检验项目所用到的试剂科学地混合在一起， 组成为一种试剂。应用时，只须将标本和试剂按一定比例混合，即可进行相应的生化反应，然后用 适当的方法检测结果。应用十分方便。为了简化测定操作程序，提高工作效率，一度大多数试剂厂 家都生产单试剂，以满足用户的需要。如测定葡萄糖和胆固醇的酶法试剂等。这些试剂的广泛使用，
二、其它类型试剂
为了适应生化分析仪和测定方法学的进步，近年来研究了许多新型的试剂盒，主要有以下几种。 （一）快速反应试剂盒 快速反应试剂盒主要是为了适应生化分析的技术进步，缩短反应时间，提高工作效率。如血液 葡萄糖快速测定试剂盒。其试剂成分及浓度为磷酸盐缓冲液 100mmol/ L，pH7.4±0.1，葡萄糖氧 化酶 > 40u / ml，变旋酶 > 0.2u / ml，过氧化物酶 > 2.5u / ml，4-氨基安替比林 0.5 mmol/ L， 4-羟基苯甲酸 4 mmol/L，亚铁氰化钾 1mg / L，叠氮钠 0.4g / L。同一般葡萄糖氧化酶法试剂相 比是明显增加了葡萄糖氧化酶及过氧化物酶用量，更主要是增加了变旋酶，可使反应加快，3～4 分钟后即生成最终颜色。再如快速胆固醇试剂盒，用的是 pH6.6±0.2，250mmol/ L 磷酸盐缓冲液， 胆固醇酯酶为 250u / L，胆固醇氧化酶 250 u/L，过氧化物酶 4000u / L，4-氨基安替比林 0.3mg / L，DHBS 8mmol/ L。样品与试剂比例是 1:100。37℃反应 2 分钟即可完成反应。可以明显看出是 加大胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶等效应酶用量，从而使反应加速。目前要求这种快速反应的试剂用 户还不多，但它是一种发展趋势。
2．液体双试剂 所谓液体双试剂就是将某些生化检测项目所用到的试剂，按用途科学地分成 两类，分别配成两种试剂，通常第一试剂加入后可起到全部或部分消除某些内源性干扰的作用，第 二试剂为启动被检测物质反应的试剂，两种试剂混合后才共同完成被检项目的生化反应。然后用适 当的方法检测结果。双试剂型试剂盒，它保持了单试剂的优点，增强了抗干扰能力和试剂的稳定性， 提高了测定的准确性，代表了诊断试剂盒剂型研制的主要发展方向。
第六章 临床生化诊断试剂盒的选择与评价
随着自动生化分析仪的研制成功和普遍使用，推动了体外诊断试剂商品化的进程，商品试剂与 标准液按检测项目组合成一套放在一个包装盒内叫试剂盒（reagen kit），或叫试剂组合（reagen set）。与自动化分析仪匹配的试剂盒的研制、生产和供应走向产业化的道路，它无疑是临床生化发 展史上一个巨大的技术进步。但是，试剂盒的质量，将严重影响测定结果的正确性。为了增强识别 试剂质量的能力，提高拒用劣质试剂的自觉性，掌握有关试剂盒的质量标准和质量评价是十分有益 的。
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充分显示出酶法试剂无毒性、操作简便快速、测定结果可靠等优点。但对有些生化检验项目来说， 单试剂存在抗干扰能力差的缺点，给测定结果带来相当大的分析误差。例如，甘油三酯测定的一步 法试剂，由于未消除样品中的游离甘油，使测定结果中包括了内源性甘油（平均约为 0.11mmol/L）， 会给甘油三酯的测定值带来较大的误差。类似的情况还见于维生素 C 和尿酸及胆红素对 Trinder 反应的干扰，内外源性 NH4+对尿素酶法测定的干扰，以及内源性丙酮酸对 ALT、AST 测定的干扰等。 选用时值得注意。
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（二）一步法试剂盒 这是随着方法学的改进，特别是免疫技术的进步，利用特异性抗体参与反应的新型试剂。如高 密度脂蛋白（HDL）测定。以往多采用超速离心法和沉淀法使 HDL 从其他脂蛋白中分离后再测定 HDL 中胆固醇，沉淀法操作繁琐，必须预先处理才能用生化分析仪分析。近年来采用抗低密度脂蛋白和 极低密度脂蛋白血清预先抑制 LDL 及 VLDL，然后再测定 HDL，这样就减少沉淀预处理，直接测定出 高密度胆固醇。类似的试剂盒还有肌酸激酶（CK）及其同工酶 CK-MB 的测定。 （三）多项同测组合试剂盒 这类型试剂主要是用于三点双项同测终点法、三点双项同测连续监测法和三点双项同测终点速 率法测定的试剂盒。很明显这类试剂同以往单试剂和双试剂有明显不同。随着双试剂的应用，临床 生化分析仪的分析方法也相应发展，其中有一种分析方法是在同一比色杯中，先后加入两种试剂与 检品中的两种被检物发生反应，在各反应达到平衡期时分别测定，整个测定过程进行三次比色，测 定两个项目，称为三点双项同测终点法。例如甘油三脂、胆固醇同时测定法。该法的第一试剂为 Tris 缓冲液，含胆固醇酯酶、ATP、MgCl2、过氧化物酶、磷酸甘油氧化酶、甘油激酶、脂肪酶、4氨基安替吡啉、2-羟 3.5-氯苯磺酸钠、Triton-X 等，第二试剂为 Tris 缓冲液，其中含胆固醇氧化 酶。当血清或标准液（包括甘油三酯和胆固醇）与第一试剂混合后立即进行第一次比色（510nm） 得空白吸光度。37℃作用 5 分钟后进行第二次比色，为甘油三酯与酶试剂反应终点的吸光度，又是 胆固醇测定的空白吸光度。然后加入第二试剂，37℃作用 5～10 分钟，进行第三次比色，为胆固醇 与酶试剂反应终点的吸光度。 甘油三酯浓度=[A2（样品）-AB（样品）]/[A2（TG -A 标准） B（TG 标准）]×甘油三酯标准的浓度 总胆固醇浓度=[A3（样品）-A2（样品）]/[A3（TC -A 标准） 2（TC 标准）]×胆固醇标准的浓度 （四）卡式试剂盒 试剂首先装入试剂瓶，瓶上充分使用编码技术，而后根据编码启动调配、使用及更换储存。其 特点是：①卡式试剂瓶上条码令使用者可快捷准确地输入试剂数据，如测试数量、批号、有效期， 保证正确识别试剂。②试剂装载后能自动调配，可消除潜在误差，并节省操作时间。③持续不断地 监察仪器上已装载的试剂存量，并在供应量不足时通知使用者。试剂装载使用时间可长达一个月。 ④所有卡式试剂盒大小划一，有利储存。卡式试剂设计较独特，可防止试剂蒸发及降解，能确保试 剂装载后的稳定性更长，从而节省成本。⑤标签根据测试类别以颜色编码，便于使用者识别。 （五）浓缩试剂盒 上述卡式试剂盒就是采用的浓缩试剂，使用时自动完成稀释，而后用于测定。浓缩试剂便于工 作、储存、运输、装载等优越性是很明显的，浓缩试剂便于监控、减少校正次数、提高工作质量。 在浓缩试剂基础上又组成双试剂及多项同测组合试剂，又体现出它们所具有的特点及优越性。以后
图 6-1 临床生化诊断试剂盒分类和发展史
一、液体型试剂和粉（片）剂型试剂
（二）粉（片）剂型试剂 所谓粉剂型及片剂型试剂，即是将试剂的各组分用球磨技术粉碎成粉剂或混合后压成片剂，使 用前再加入指定的溶液复溶成液体试剂。干粉试剂如果在冻干分装前是液体型的，则其各组分是相 当均匀的；但如果用固体原料研磨后制成粉剂或片剂，则存在许多问题：①要使试剂各组分混合得 非常均匀，技术难度很大；②分装过程中的称量误差及复溶时加水量的准确性影响试剂的瓶间差； ③水质优劣对试剂的稳定性和测定的可靠性有相当大的影响。
（一）液体型试剂 无论是单试剂还是双试剂型试剂，目前乃至今后仍以液体型为主要剂型。其优点是液体型试剂 的试剂组分高度均一，瓶间差异小，测定重复性好和使用方便；它也无需加入任何辅助试剂及蒸馏 水，避免了外源性水质对试剂的影响，性能较稳定，测定结果较为准确。缺点是液体型试剂（尤其 是酶试剂）保存时间较短，不便于运输。 1．液体单试剂 所谓液体单试剂就是将某种生化检验项目所用到的试剂科学地混合在一起， 组成为一种试剂。应用时，只须将标本和试剂按一定比例混合，即可进行相应的生化反应，然后用 适当的方法检测结果。应用十分方便。为了简化测定操作程序，提高工作效率，一度大多数试剂厂 家都生产单试剂，以满足用户的需要。如测定葡萄糖和胆固醇的酶法试剂等。这些试剂的广泛使用，
二、其它类型试剂
为了适应生化分析仪和测定方法学的进步，近年来研究了许多新型的试剂盒，主要有以下几种。 （一）快速反应试剂盒 快速反应试剂盒主要是为了适应生化分析的技术进步，缩短反应时间，提高工作效率。如血液 葡萄糖快速测定试剂盒。其试剂成分及浓度为磷酸盐缓冲液 100mmol/ L，pH7.4±0.1，葡萄糖氧 化酶 > 40u / ml，变旋酶 > 0.2u / ml，过氧化物酶 > 2.5u / ml，4-氨基安替比林 0.5 mmol/ L， 4-羟基苯甲酸 4 mmol/L，亚铁氰化钾 1mg / L，叠氮钠 0.4g / L。同一般葡萄糖氧化酶法试剂相 比是明显增加了葡萄糖氧化酶及过氧化物酶用量，更主要是增加了变旋酶，可使反应加快，3～4 分钟后即生成最终颜色。再如快速胆固醇试剂盒，用的是 pH6.6±0.2，250mmol/ L 磷酸盐缓冲液， 胆固醇酯酶为 250u / L，胆固醇氧化酶 250 u/L，过氧化物酶 4000u / L，4-氨基安替比林 0.3mg / L，DHBS 8mmol/ L。样品与试剂比例是 1:100。37℃反应 2 分钟即可完成反应。可以明显看出是 加大胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶等效应酶用量，从而使反应加速。目前要求这种快速反应的试剂用 户还不多，但它是一种发展趋势。
2．液体双试剂 所谓液体双试剂就是将某些生化检测项目所用到的试剂，按用途科学地分成 两类，分别配成两种试剂，通常第一试剂加入后可起到全部或部分消除某些内源性干扰的作用，第 二试剂为启动被检测物质反应的试剂，两种试剂混合后才共同完成被检项目的生化反应。然后用适 当的方法检测结果。双试剂型试剂盒，它保持了单试剂的优点，增强了抗干扰能力和试剂的稳定性， 提高了测定的准确性，代表了诊断试剂盒剂型研制的主要发展方向。
第六章 临床生化诊断试剂盒的选择与评价
随着自动生化分析仪的研制成功和普遍使用，推动了体外诊断试剂商品化的进程，商品试剂与 标准液按检测项目组合成一套放在一个包装盒内叫试剂盒（reagen kit），或叫试剂组合（reagen set）。与自动化分析仪匹配的试剂盒的研制、生产和供应走向产业化的道路，它无疑是临床生化发 展史上一个巨大的技术进步。但是，试剂盒的质量，将严重影响测定结果的正确性。为了增强识别 试剂质量的能力，提高拒用劣质试剂的自觉性，掌握有关试剂盒的质量标准和质量评价是十分有益 的。
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充分显示出酶法试剂无毒性、操作简便快速、测定结果可靠等优点。但对有些生化检验项目来说， 单试剂存在抗干扰能力差的缺点，给测定结果带来相当大的分析误差。例如，甘油三酯测定的一步 法试剂，由于未消除样品中的游离甘油，使测定结果中包括了内源性甘油（平均约为 0.11mmol/L）， 会给甘油三酯的测定值带来较大的误差。类似的情况还见于维生素 C 和尿酸及胆红素对 Trinder 反应的干扰，内外源性 NH4+对尿素酶法测定的干扰，以及内源性丙酮酸对 ALT、AST 测定的干扰等。 选用时值得注意。
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（二）一步法试剂盒 这是随着方法学的改进，特别是免疫技术的进步，利用特异性抗体参与反应的新型试剂。如高 密度脂蛋白（HDL）测定。以往多采用超速离心法和沉淀法使 HDL 从其他脂蛋白中分离后再测定 HDL 中胆固醇，沉淀法操作繁琐，必须预先处理才能用生化分析仪分析。近年来采用抗低密度脂蛋白和 极低密度脂蛋白血清预先抑制 LDL 及 VLDL，然后再测定 HDL，这样就减少沉淀预处理，直接测定出 高密度胆固醇。类似的试剂盒还有肌酸激酶（CK）及其同工酶 CK-MB 的测定。 （三）多项同测组合试剂盒 这类型试剂主要是用于三点双项同测终点法、三点双项同测连续监测法和三点双项同测终点速 率法测定的试剂盒。很明显这类试剂同以往单试剂和双试剂有明显不同。随着双试剂的应用，临床 生化分析仪的分析方法也相应发展，其中有一种分析方法是在同一比色杯中，先后加入两种试剂与 检品中的两种被检物发生反应，在各反应达到平衡期时分别测定，整个测定过程进行三次比色，测 定两个项目，称为三点双项同测终点法。例如甘油三脂、胆固醇同时测定法。该法的第一试剂为 Tris 缓冲液，含胆固醇酯酶、ATP、MgCl2、过氧化物酶、磷酸甘油氧化酶、甘油激酶、脂肪酶、4氨基安替吡啉、2-羟 3.5-氯苯磺酸钠、Triton-X 等，第二试剂为 Tris 缓冲液，其中含胆固醇氧化 酶。当血清或标准液（包括甘油三酯和胆固醇）与第一试剂混合后立即进行第一次比色（510nm） 得空白吸光度。37℃作用 5 分钟后进行第二次比色，为甘油三酯与酶试剂反应终点的吸光度，又是 胆固醇测定的空白吸光度。然后加入第二试剂，37℃作用 5～10 分钟，进行第三次比色，为胆固醇 与酶试剂反应终点的吸光度。 甘油三酯浓度=[A2（样品）-AB（样品）]/[A2（TG -A 标准） B（TG 标准）]×甘油三酯标准的浓度 总胆固醇浓度=[A3（样品）-A2（样品）]/[A3（TC -A 标准） 2（TC 标准）]×胆固醇标准的浓度 （四）卡式试剂盒 试剂首先装入试剂瓶，瓶上充分使用编码技术，而后根据编码启动调配、使用及更换储存。其 特点是：①卡式试剂瓶上条码令使用者可快捷准确地输入试剂数据，如测试数量、批号、有效期， 保证正确识别试剂。②试剂装载后能自动调配，可消除潜在误差，并节省操作时间。③持续不断地 监察仪器上已装载的试剂存量，并在供应量不足时通知使用者。试剂装载使用时间可长达一个月。 ④所有卡式试剂盒大小划一，有利储存。卡式试剂设计较独特，可防止试剂蒸发及降解，能确保试 剂装载后的稳定性更长，从而节省成本。⑤标签根据测试类别以颜色编码，便于使用者识别。 （五）浓缩试剂盒 上述卡式试剂盒就是采用的浓缩试剂，使用时自动完成稀释，而后用于测定。浓缩试剂便于工 作、储存、运输、装载等优越性是很明显的，浓缩试剂便于监控、减少校正次数、提高工作质量。 在浓缩试剂基础上又组成双试剂及多项同测组合试剂，又体现出它们所具有的特点及优越性。以后