岛津液相色谱培训-定量基础知识
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(完整)岛津SPDC 高效液相色谱的使用精品PPT资料精品PPT资料
目录
一.操作准备 二.仪器组成 三.操作过程 四.注意事项
By 孙毅
一.操作准备
1.1流动相的配制
用高纯度的试剂配制流动相， 必要时照紫外分光光度法进行 溶剂检查，应符合要求；水为 新鲜制备的高纯水，可用超级 纯水器制得或用重蒸馏水。对 规定pH值的流动相，应使用 精密pH计进行调节。配制好 的流动相应通过0.45μm适宜 的滤膜滤过，用前脱气。应配 制足量的流动相数设置
如用单泵运行，泵【模式】钩 选“等浓度洗脱”（双泵运行 勾选“二元高压梯度洗脱”） ，点【高级】选项卡中“泵” 选项，设置泵A流速（一般为 1.000ml/min）和压力限制最大 值、最小值。如需双泵（如梯 度洗脱等），点【LC时间程序 】设置梯度洗脱表，单击“下 载”将设置传输到仪器，使用 新名称保存方法文件。
3.2泵的操作
等绿灯不再闪烁时代表清 洗完成，以顺时针方向尽 量旋转排液阀旋钮，关闭 排液阀。按“pump”键， 开始泵的运行。
By 孙毅
三.操作过程
3.3工作站的使用
双击桌面Lcsolution 15c 】图标，确认已经开启LC 系统后，启动【LC实时 分析”工作站。启动【LC 实时分析】工作站后，确 保分析仪器的所有单元（ 泵、柱温箱和检测器）都 已连至系统控制器。确保 所有单元上都没有显示任 何错误消息。
By 孙毅
一.操作准备
1.2样品溶液的配制
样品用规定溶剂配制成供试溶液。供试溶液在注入色 谱仪前，一般应经0.45μm或适宜的滤膜滤过。必要 时，在配制供试溶液前，样品需经提取净化，以免对 色谱系统产生污染。
By 孙毅
一.操作准备
1.3检查仪器状态
检查色谱柱是否适用于本次试验，色谱柱进出口 位置是否与流动相的流向一致，原保存溶剂与现用流 动相能否互溶，流动相的pH值与该色谱柱是否相适 应，仪器是否完好，仪器的各开关位置是否处于关断 的位置。
一.操作准备 二.仪器组成 三.操作过程 四.注意事项
By 孙毅
一.操作准备
1.1流动相的配制
用高纯度的试剂配制流动相， 必要时照紫外分光光度法进行 溶剂检查，应符合要求；水为 新鲜制备的高纯水，可用超级 纯水器制得或用重蒸馏水。对 规定pH值的流动相，应使用 精密pH计进行调节。配制好 的流动相应通过0.45μm适宜 的滤膜滤过，用前脱气。应配 制足量的流动相数设置
如用单泵运行，泵【模式】钩 选“等浓度洗脱”（双泵运行 勾选“二元高压梯度洗脱”） ，点【高级】选项卡中“泵” 选项，设置泵A流速（一般为 1.000ml/min）和压力限制最大 值、最小值。如需双泵（如梯 度洗脱等），点【LC时间程序 】设置梯度洗脱表，单击“下 载”将设置传输到仪器，使用 新名称保存方法文件。
3.2泵的操作
等绿灯不再闪烁时代表清 洗完成，以顺时针方向尽 量旋转排液阀旋钮，关闭 排液阀。按“pump”键， 开始泵的运行。
By 孙毅
三.操作过程
3.3工作站的使用
双击桌面Lcsolution 15c 】图标，确认已经开启LC 系统后，启动【LC实时 分析”工作站。启动【LC 实时分析】工作站后，确 保分析仪器的所有单元（ 泵、柱温箱和检测器）都 已连至系统控制器。确保 所有单元上都没有显示任 何错误消息。
By 孙毅
一.操作准备
1.2样品溶液的配制
样品用规定溶剂配制成供试溶液。供试溶液在注入色 谱仪前，一般应经0.45μm或适宜的滤膜滤过。必要 时，在配制供试溶液前，样品需经提取净化，以免对 色谱系统产生污染。
By 孙毅
一.操作准备
1.3检查仪器状态
检查色谱柱是否适用于本次试验，色谱柱进出口 位置是否与流动相的流向一致，原保存溶剂与现用流 动相能否互溶，流动相的pH值与该色谱柱是否相适 应，仪器是否完好，仪器的各开关位置是否处于关断 的位置。
岛津液相色谱仪教材课件
，采用适当 的预处理方法，如萃取、 净化、浓缩等，以去除干 扰物质，提高分离效果。
分离条件优化
根据复杂样品的性质，调 整色谱条件，如流动相组 成、流速、进样量等，实 现样品的最佳分离。
多组分分析
采用多维色谱技术，对复 杂样品中的多个组分进行 分离和检测，提高分析效 率。
instrument性能验证与评价
准确度。
应用领域拓展
环境监测
利用岛津液相色谱仪对环境中的有机污染物进行 定性和定量分析，为环境保护提供有力支持。
食品安全
应用于食品中农药残留、添加剂、毒素等有害物 质的检测，保障食品安全。
生物医药
用于药物代谢、生物标志物分析以及蛋白质、核 酸等生物大分子的分离分析。
仪器发展趋势
便携化
开发小型化、便携式的岛津液相色谱仪，方便现场快速检测和应 急响应。
04
药物分析
用于药物的分离、纯化和含量 测定，为药物研发和质量控制
提供有力支持。
食品安全
用于食品中农药残留、添加剂 、有害物质的检测，保障食品
安全。
环境监测
用于水体、土壤、空气等环境 样品中有机污染物的检测，为
环境监测提供数据支持。
生命科学
应用于生物样品中蛋白质、核 酸等大分子的分离分析，推动
生命科学研究。
与质谱仪的比较
质谱仪和液相色谱仪在样品处理和检测原理上存在较大差异。质谱仪主要通过将 样品离子化后，根据离子的质量荷比进行分离和检测，适用于对样品进行定性和 结构分析。而岛津液相色谱仪则主要用于样品的分离和定量分析。
尽管质谱仪在定性分析方面具有优势，但在定量分析方面，岛津液相色谱仪具有 更高的灵敏度和准确性。此外，岛津液相色谱仪可以与质谱仪联用，实现样品的 分离、定量和定性分析，提高了分析的全面性和可靠性。
分离条件优化
根据复杂样品的性质，调 整色谱条件，如流动相组 成、流速、进样量等，实 现样品的最佳分离。
多组分分析
采用多维色谱技术，对复 杂样品中的多个组分进行 分离和检测，提高分析效 率。
instrument性能验证与评价
准确度。
应用领域拓展
环境监测
利用岛津液相色谱仪对环境中的有机污染物进行 定性和定量分析，为环境保护提供有力支持。
食品安全
应用于食品中农药残留、添加剂、毒素等有害物 质的检测，保障食品安全。
生物医药
用于药物代谢、生物标志物分析以及蛋白质、核 酸等生物大分子的分离分析。
仪器发展趋势
便携化
开发小型化、便携式的岛津液相色谱仪，方便现场快速检测和应 急响应。
04
药物分析
用于药物的分离、纯化和含量 测定，为药物研发和质量控制
提供有力支持。
食品安全
用于食品中农药残留、添加剂 、有害物质的检测，保障食品
安全。
环境监测
用于水体、土壤、空气等环境 样品中有机污染物的检测，为
环境监测提供数据支持。
生命科学
应用于生物样品中蛋白质、核 酸等大分子的分离分析，推动
生命科学研究。
与质谱仪的比较
质谱仪和液相色谱仪在样品处理和检测原理上存在较大差异。质谱仪主要通过将 样品离子化后，根据离子的质量荷比进行分离和检测，适用于对样品进行定性和 结构分析。而岛津液相色谱仪则主要用于样品的分离和定量分析。
尽管质谱仪在定性分析方面具有优势，但在定量分析方面，岛津液相色谱仪具有 更高的灵敏度和准确性。此外，岛津液相色谱仪可以与质谱仪联用，实现样品的 分离、定量和定性分析，提高了分析的全面性和可靠性。
液相色谱基础知识
电导检测器
原理： ☼ 原理：根据物质在某些介质中电离后所产生的电 导变化来测定电离物质含量。 导变化来测定电离物质含量。广泛应用于 离子色谱法。 离子色谱法。
☼ 优点：对流动相流速和压力的改变不敏感，可用 优点：对流动相流速和压力的改变不敏感，
梯度洗脱。 梯度洗脱。 缺点：对温度变化敏感，每升高1℃, ℃,电导率增加 ☼ 缺点：对温度变化敏感，每升高 ℃,电导率增加 2%-2.5%。
液相色谱基础知识
■ 溶剂等级
☼鬼峰的出现
洗脱曲线
☺水/MeOH梯度 ODS ODS柱 1ml/min在 0~10Mins内 MeOH 0~100% 线性变化后 保持15Min
鬼峰
液相色谱基础知识
■ 溶剂等级
在微量分析和梯度洗脱时建议使用HPLC级溶剂和纯化水 级溶剂和纯化水 在微量分析和梯度洗脱时建议使用
0.001~9.999
岛津VP系列液相色谱仪 岛津VP系列液相色谱仪 VP
柱塞和密封圈的关系
水 出口单 向阀 密封圈 吸液移动 柱塞杆 送液移动 入口单 向阀 泵头清洗流路 流动相
岛津VP系列液相色谱仪 岛津VP系列液相色谱仪 VP
手动进样阀7725i原理
岛津VP系列液相色谱仪 岛津VP系列液相色谱仪 VP
☺无在线脱气机应注意：
1 每天脱气 2 如使用氦脱气，对混合好的溶剂脱气时间不能过长。
液相色谱基础知识
梯度形式的选择
洗脱模式：高压梯度
低压梯度 用两台输液泵将两种流动相混合并进入系统 常压下用比例阀将流动相混合，单泵进入系统
☺线性梯度:洗脱时，流动相的浓度变化和时间成线性变化（增或减） ☺指数梯度:洗脱时，流动相的浓度变化和时间成指数关系（增或减） ☺折线梯度:洗脱时，流动相的浓度变化和时间无规则变化
原理： ☼ 原理：根据物质在某些介质中电离后所产生的电 导变化来测定电离物质含量。 导变化来测定电离物质含量。广泛应用于 离子色谱法。 离子色谱法。
☼ 优点：对流动相流速和压力的改变不敏感，可用 优点：对流动相流速和压力的改变不敏感，
梯度洗脱。 梯度洗脱。 缺点：对温度变化敏感，每升高1℃, ℃,电导率增加 ☼ 缺点：对温度变化敏感，每升高 ℃,电导率增加 2%-2.5%。
液相色谱基础知识
■ 溶剂等级
☼鬼峰的出现
洗脱曲线
☺水/MeOH梯度 ODS ODS柱 1ml/min在 0~10Mins内 MeOH 0~100% 线性变化后 保持15Min
鬼峰
液相色谱基础知识
■ 溶剂等级
在微量分析和梯度洗脱时建议使用HPLC级溶剂和纯化水 级溶剂和纯化水 在微量分析和梯度洗脱时建议使用
0.001~9.999
岛津VP系列液相色谱仪 岛津VP系列液相色谱仪 VP
柱塞和密封圈的关系
水 出口单 向阀 密封圈 吸液移动 柱塞杆 送液移动 入口单 向阀 泵头清洗流路 流动相
岛津VP系列液相色谱仪 岛津VP系列液相色谱仪 VP
手动进样阀7725i原理
岛津VP系列液相色谱仪 岛津VP系列液相色谱仪 VP
☺无在线脱气机应注意：
1 每天脱气 2 如使用氦脱气，对混合好的溶剂脱气时间不能过长。
液相色谱基础知识
梯度形式的选择
洗脱模式：高压梯度
低压梯度 用两台输液泵将两种流动相混合并进入系统 常压下用比例阀将流动相混合，单泵进入系统
☺线性梯度:洗脱时，流动相的浓度变化和时间成线性变化（增或减） ☺指数梯度:洗脱时，流动相的浓度变化和时间成指数关系（增或减） ☺折线梯度:洗脱时，流动相的浓度变化和时间无规则变化
液相色谱定量基础知识
A4 AIS
C1/CIS C2 /CIS C3 /CIS C4 /CIS
浓度比: 目标 / 内标
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内标法
试样配制：准确称取一定量的试样Wi，加入一定量内
标物WS 计算式：
wi fi Ai
ws f s As
定量分析的基本要求
❖ 需要有纯物质作标准 ❖ 被定量组分峰要与其它峰达到基线分离 ❖ 符合定性参数要求 ❖ 选择合适的定量方法
4
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定量分析基本公式
在某些条件限定下，被测组分的浓度与检测器的 响应值成正比的关系。（蒸发光散射检测器浓度 与峰面积不成线性，分别取对数后成线性 ）
wi fi Ai wi wi fi ' Ai '
fi fi '
wi wi Ai '
wi
Ai
wi
wi Ai ' 1
Ai
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标准加入法特点
1. 不需另外选择内标物 2. 进样量不必十分准确，操作简单 3. 两次色谱条件完全相同以保证校
第三部分 定量基础知识
1
1
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定性方法
❖色谱峰的定性鉴别 通过保留值(通常是保留时间)进行定性 需要指定保留时间误差范围（时间窗、时间带）
岛津液相维修培训
压力异常
现象：无压力，流动相不流动 可能原因
1、保险丝断或电源问题 2、柱塞杆折断 3、泵头内有空气或流动相不足 4、单向阀损坏 5、漏液 6、压力传感器损坏(流动相流动正常，但无压力)
压力异常
现象：压力持续偏高或不断上升 1、流速设定过高 2、保护柱或柱子筛板堵塞 3、流动相使用不当或有缓冲盐析出 4、色谱柱选择不当 5、进样阀损坏 6、线路过滤器堵塞
性样品和有机溶剂
其他问题
脱气： 除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡
气泡对测定的影响： 1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和 峰面积 2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形 3）检测器中的气泡产生基线波动
其他问题
脱气的目的
1. 防止由气泡的产生引起的故障 2. 防止由溶解（在液体中的）气体量
的变动引起的检测不稳定程度 1）示差折射率检测器 *使折射率变化 2）UV检测器（200nm以下） *溶解氧气有吸收 3）荧光检测器 *溶解氧气有消光作用
交叉污染的原因
手动进样法
• 便捷的方法（不需清洗）
•
1.进样状态下插入微量注射器
•
2.切到装填状态
•
3.注入样品
•
4.切回到进样状态
液相色谱容易出问题的部件
手动进样器
• 操作注意点：
塑料箍
• 1）插针应插到底
• 2）进样应使用液相色谱
专用平头进样针
• 3）清洗应使用专用针口 弹簧 不锈钢套 清洗器
管线材料
• 不锈钢 (可用于所有连接)
– 能承受几千 kg/cm2 压力 – 酸性或高浓度盐环境中易腐蚀 (尤其在pH小于2时)
• PEEK (可用于所有连接)
– 能承受高达 250 kg/cm2压力 – 可在整个PH范围(pH 1-14)内使用 – 不适用于高溶解性溶剂如氯仿等
岛津气相色谱培训资料
岛津气相色谱培训资料一、岛津气相色谱仪的构成岛津气相色谱仪主要由进样口、色谱柱、检测器和数据处理系统四部分组成。
进样口用于样品的输入，色谱柱用于样品的分离，检测器用于检测分离后的成分，数据处理系统用于对检测结果进行数据处理和分析。
进样口：进样口是将待测样品引入色谱仪的通道，进样口的设计和性能直接关系到样品的进样量和进样的精度。
岛津气相色谱仪通常采用自动进样器，可实现样品的自动化进样，提高分析效率。
色谱柱：色谱柱是对样品进行分离的部件，色谱柱的种类和性能直接影响到样品的分离效果和分辨率。
岛津气相色谱仪常用的色谱柱有毛细管柱、填料柱等，色谱柱的选择和使用需要根据待测样品的特点和要求来确定。
检测器：检测器是对分离后的成分进行检测和定量的部件，岛津气相色谱仪常用的检测器有火焰离子化检测器（FID）、电子捕获检测器（ECD）、氮磷检测器（NPD）等，不同的检测器适用于不同类型的样品检测。
数据处理系统：数据处理系统是对检测结果进行数据处理和分析的部件，岛津气相色谱仪常用的数据处理系统有色谱工作站等，数据处理系统能够实现对检测结果的自动化处理和分析，提高分析的效率和准确度。
二、岛津气相色谱仪的操作步骤1. 样品准备：对待测样品进行适当的预处理和制备，使其适合于气相色谱分析。
预处理的方法包括溶解、稀释、提取等。
2. 进样操作：将准备好的样品通过进样口引入气相色谱仪，可选择手动进样或自动进样，根据需要设定进样量和进样速度。
3. 色谱条件设定：根据样品特性和分析要求，设定色谱柱温度、流动相流速、检测器温度等色谱条件。
4. 检测操作：启动检测器进行检测，并记录检测过程中的数据和结果。
5. 数据处理：对检测结果进行数据处理和分析，根据需要绘制色谱图谱、计算峰面积、定量分析等。
6. 结果评价：根据分析结果对样品进行评价和判定，得到分析结果和结论。
三、岛津气相色谱仪的常见故障及处理方法1. 进样口堵塞：进样口堵塞会影响样品进样的速度和精度，需定期清洗和维护进样口，保持其畅通。
岛津20AT-液相培训
A: 池子、透镜污染
B: 灯老化
日常维护
紫外检测器
故障：样品池污染
现象：样品池和参比池能量相差较大
检查方法：设定250nm波长，通甲醇或水，查看SMPL EN
和 REF EN，如两者相差较大，则样品池受污。
措施：1.轻微污染时,用针筒注入异丙醇，清洗样品池; 2.如污染严重， 拆开样品池，将透镜等放入异丙醇 中超声波清洗。
流动相的选择
乙腈的毒性是甲醇的5倍，是乙醇的25倍。 价格是甲醇的6~7倍。 100%甲醇的冲洗强度相当于89%的乙腈/ 水。 截止波长乙腈190、甲醇205、正己烷210、 乙醚220、四氢呋喃225、二氯甲烷245、 氯仿245nm。
缓冲盐流动相注意点
(1)现配现用.低温下密封保存一般不超过3天。
的5~10倍（最少3倍），这样才能完全置换 定量环内的流动相，消除管壁效应，确保 进样的准确度及重复性。
注意事项：
①样品溶液进样前必须用0.45µm滤膜过滤，以减少微粒对进 样阀的磨损。 ②转动阀芯时不能太慢，更不能停留在中间位置，否则流动 相受阻，使泵内压力剧增，甚至超过泵的最大压力；再转 到进样位时，过高的压力将使柱头损坏。
高压泵
进样器 色谱柱 检测器 软件
流动相的选择
在正相色谱中，溶剂的强度随极性的增强
而增加；在反相色谱中，溶剂的强度随极 性的增强而减弱。 正相色谱的流动相通常采用烷烃加适量极 性调整剂。 反相色谱的流动相通常以水作基础溶剂， 再加入一定量的能与水互溶的极性调整剂， 如甲醇、乙腈、四氢呋喃等。
串联式往复泵
单向阀结构
单向阀原理
吸液冲程
宝石球
出口单向阀
排液冲程
抛光面
岛津液相色谱操作培训课件——基础知识
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HPLC vs GC
液相色谱：以液体作为流动相 的色谱分离方法
) 适用于高沸点、大分子、强极性和热 稳定性差的化合物的分析
) 流动相具有运载样品分子和选择性分 离的双重作用
气相色谱：以气体作为流动相的色谱 分离方法
岛津液相色谱操作培训 ---基础知识
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2
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岛津HPLC的历史
1969 1972 1978 1981 1982 1984 1991 1997 2000 2004
) 适用于沸点较低、热稳定性好的中小分子化 合物的分析
) 流动相只起运载样品分子的能力
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HPLC分类
正相模式 (NP-LC) 反相模式 (RP-LC) 反相离子对色谱 (IPC) 离子交换色谱 (IEC) 尺寸排阻色谱 (GPC / GFC)
THECNLOGY BREAKTHROUGH
LC-20A Prominence
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LC-20A Prominence
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岛津GPC基础知识及注意事项
排阻极限 (聚苯乙烯)
1.5x103(GPC-801), 5x103(GPC-802), 2x104(GPC8025), 7x104(GPC-803), 4x105(GPC-804), 4x106(GPC-805), 4x107(GPC-806)，4x107 (mixed gel，GPC-80M), 2x108(GPC-807)
MW与RT之间的关系
排阻极限 渗透极限
GPC柱
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GPC术语
排阻极限
排阻极限是指不能进入凝胶颗粒孔穴内部的最小分子的 分子量。所有大于排阻极限的分子都不能进入凝胶颗粒 内部，直接从凝胶颗粒外流出，所以它们同时被最先洗 脱出来。排阻极限代表一种凝胶能有效分离的最大分子 量，大于这种凝胶的排阻极限的分子用这种凝胶不能得 到分离。随固定相不同，排阻极限范围约在 400至 60×106之间。
主要用于生命科学领域 以水溶液为流动相 常用固定相填料：亲水性有机凝胶(葡聚糖，琼脂糖，
聚丙烯酰胺等)
4
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GPC用途
高聚物的分子量及其分布是高聚物最基本的参数 之一。高聚物的许多性质是与分子量有关的。例 如冲击强度、模量、拉伸强度、耐热、耐腐蚀性 都与高聚物的分子量和分子量分布有关。
GPC色谱柱选择
按照样品所溶解的溶剂来选择柱子所属系列
THF、氯仿、DMF 必须选择合适的溶剂来溶解聚合物
按照样品分子量范围来选择柱子型号
样品分子量应该处在排阻极限和渗透极限范围内，并 且最好是处在校正曲线线性范围内
1.5x103(GPC-801), 5x103(GPC-802), 2x104(GPC8025), 7x104(GPC-803), 4x105(GPC-804), 4x106(GPC-805), 4x107(GPC-806)，4x107 (mixed gel，GPC-80M), 2x108(GPC-807)
MW与RT之间的关系
排阻极限 渗透极限
GPC柱
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GPC术语
排阻极限
排阻极限是指不能进入凝胶颗粒孔穴内部的最小分子的 分子量。所有大于排阻极限的分子都不能进入凝胶颗粒 内部，直接从凝胶颗粒外流出，所以它们同时被最先洗 脱出来。排阻极限代表一种凝胶能有效分离的最大分子 量，大于这种凝胶的排阻极限的分子用这种凝胶不能得 到分离。随固定相不同，排阻极限范围约在 400至 60×106之间。
主要用于生命科学领域 以水溶液为流动相 常用固定相填料：亲水性有机凝胶(葡聚糖，琼脂糖，
聚丙烯酰胺等)
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GPC用途
高聚物的分子量及其分布是高聚物最基本的参数 之一。高聚物的许多性质是与分子量有关的。例 如冲击强度、模量、拉伸强度、耐热、耐腐蚀性 都与高聚物的分子量和分子量分布有关。
GPC色谱柱选择
按照样品所溶解的溶剂来选择柱子所属系列
THF、氯仿、DMF 必须选择合适的溶剂来溶解聚合物
按照样品分子量范围来选择柱子型号
样品分子量应该处在排阻极限和渗透极限范围内，并 且最好是处在校正曲线线性范围内
液相色谱基础知识---岛津
液相色谱基础知识
流动相的选择
采用 ¡ HPLC¡ 级溶剂 避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂 对试样有适宜的溶解度 溶剂粘度要小 与检测器相匹配
HPLC Business Dept Shimadzu Corporation
溶 剂 等 级
水的等级
纯化水 蒸馏水 去离子水
碳酸钙颗粒
HPLC Business Dept Shimadzu Corporation
液相色谱基础知识
二、定义 色谱法(Chromatography)：利用组分在两相 间分配系数不同而进行分离的技术 流动相：携带样品流过整个系统的流体 固定相：静止不动的一相
HPLC Business Dept Shimadzu Corporation
HPLC Business Dept Shimadzu Corporation
进样器
自动进样器 手动进样器
原理：（六通阀） 注入方式：
1）全量注入 2）部分注入
HPLC Business Dept Shimadzu Corporation
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甲醇
HPLC Business Dept Shimadzu Corporation
乙睛
正己烷
溶 剂 等 级
鬼峰的出现
e rv u C nt e i ad Gr
水 / 甲醇梯度
ODS 柱 总流速1 ml/min, 在10分钟 之内甲醇比例由0升到 100%，维持10分钟
HPLC Business Dept Shimadzu Corporation
仪器培训_岛津HPLC操作规程培训
岛津LC-10AT型高效液相色谱仪操作规程一、操作前准备1、准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。
2、根据待检样品的需要更换合适的层析柱（注意方向）。
3、配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤膜过滤。
4、检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
二、操作过程1、按次序打开泵、检测器、脱气机、控制器电源，确认仪器各单元启动后；打开计算机电源，运行软件Class-VP，设置检测运行参数（流速、样品运行采样时间、检测波长、保护压力值等）。
2、更换流动相并排气泡：将溶剂滤头放入装有准备好的流动相的储液瓶中，逆时针转动泵的排液阀180°（打开排液阀）；按泵的[purge]键，3min后自动停止；将排液阀顺时针旋转到底（关闭排液阀），按如下操作。
3、点击开（关）泵至“instrument on”（图标为下沉状态），使泵运行。
检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。
观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。
运行（平衡）30分钟后按如下操作。
4、点击“蓝色箭头（single run）”，设置好数据保存路径，设置好数据（Data）名称。
5、然后点击“Start”，等待屏幕下的变化，当出现“waiting for trigger”时可以进样。
6、进样针取样时不能有气泡。
7、进样针取样量至少40 L以上。
8、先将进样针放入进样阀，然后将阀向上扳，将样品注入，然后再向下扳，在显示屏左边出现“绿线”，说明仪器开始记录数据并运行正常。
9、进样全部结束后，先点击开（关）泵至“instrument off”（图标为弹起状态），泵即停止运行。
10、用层析柱保护溶液冲洗柱后，关闭软件Class-VP，关闭电脑，最后关闭各单元组件电源（关闭仪器）。
三、注意事项1、必须在仪器熟练操作者指导下进行操作。
2、运行过程中发现问题及时与仪器维护人联系。
岛津气相色谱仪基础知识
F2 毛细柱
8
气相色谱基本控制参数
温度 压力（流量） 温度、压力（流量）的时间程序
9
第二部分 载气部分
载气纯度的重要性
载气不纯带来的问题：
载气中氧的存在导致固定相氧化，损坏色谱柱，改变样品的 保留值。
载气中水的存在导致部分固定相或硅烷化担体发生水解，甚 至损坏柱子。
气体中有机化合物或其它杂质的存在产生基线噪音和拖尾现 象。
Rtx-1 Rtx-1ms Rtx-5 Rtx-5ms Rxi-5ms Rtx-35 Rtx-35ms Rxi-17 Rtx-50 Rtx-1301 Rtx-624 Rtx-1701
Rtx-200
50% cyanopropylmethyl/ 50% phenylmethyl polysiloxane
色谱法特点
分离效率高 分析速度快 检测灵敏度高 样品用量少 选择性好 多组分同时分析 易于自动化
6
气相色谱构成示意图
气相色谱主机 温度控制区
钢瓶 He,N2
载气 控制
进样口
载气控制：手动、数字
色谱柱
检测器
数据 处理
进样口：分流/不分流进样口、填充柱进样口、程序升温进样口
DB-200 DB-210 DB-225
DB-Wax
DB-FFAP
SGE Alltech
BP1
BP5 BPX5
BPX35 BPX608 BPX50
AT-1 AT-1MS AT-5 AT-5MS SE-54 AT-35
岛津企业管理（中国）有限公司 分析中心
第一部分 色谱原理和基本构成
色谱起源
石油醚
色素 碳酸钙颗粒
色谱 组分
3
岛津液相色谱培训-定量基础知识
Nam e
150
150
mAU
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6 M in u t e s
8
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mAU
16 16
16
Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
峰面积处理参数
17 17
17
Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
27 27
27
Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
理论塔板数, N
Rt Area H W1/2 W
28 28
28
中国/日本药典 : N = 5.54 x ( Rt / W 1/2 )2 美国药典 : N = 16 x ( Rt / W )2
7
7
Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
外标法
浓度 C1 A2 C2 面积 A1 A4 A3 A2 A1 A4 C4 C1 C2 C3 浓度 C4
8
8
峰面积
标准曲线
A3 C3
Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
面积归一化 外标法 内标法 标准加入法
6
6
Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
面积归一化法
岛津GC基础知识
GC基础知识
岛津国际贸易（上海）有限公司 分析中心
第一部分
色谱原理和基本构成
色谱法的起源
石油醚
色素
碳酸钙颗粒
玻璃柱
3
Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
色谱法的定义和分类
色谱是通过组分在流动相和固定相之间分配比的差异 进行分离的。 根据流动相的状态，色谱法分类
39
Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
膜厚对毛细柱分离的影响
CBP1-W25-100 膜厚 1um
40
CBP1-W25-500 膜厚 5um
36
Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
毛细柱选择-内径
0.25mm口径柱具有较高的柱效， 用于标准的GC/MS应 用和分流/无分流分析。 0.32mm口径柱中等柱效，多用于无分流进样。 0.53mm口径柱，可以替代填充柱，适合于痕量分析。
15
Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
第二部分
载气部分
保证载气纯度的措施
保证载气纯度在99.999%以上。 加装载气净化装置。 10%的钢瓶气保有量。
17
Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
SPL-无分流进样和 OCI以及PTV-无分流进样的比较
氨基甲酸盐农药的热解现象
SplitlessSPL
岛津国际贸易（上海）有限公司 分析中心
第一部分
色谱原理和基本构成
色谱法的起源
石油醚
色素
碳酸钙颗粒
玻璃柱
3
Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
色谱法的定义和分类
色谱是通过组分在流动相和固定相之间分配比的差异 进行分离的。 根据流动相的状态，色谱法分类
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Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
膜厚对毛细柱分离的影响
CBP1-W25-100 膜厚 1um
40
CBP1-W25-500 膜厚 5um
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Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
毛细柱选择-内径
0.25mm口径柱具有较高的柱效， 用于标准的GC/MS应 用和分流/无分流分析。 0.32mm口径柱中等柱效，多用于无分流进样。 0.53mm口径柱，可以替代填充柱，适合于痕量分析。
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第二部分
载气部分
保证载气纯度的措施
保证载气纯度在99.999%以上。 加装载气净化装置。 10%的钢瓶气保有量。
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SPL-无分流进样和 OCI以及PTV-无分流进样的比较
氨基甲酸盐农药的热解现象
SplitlessSPL
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10 10
10
面积 A1 AIS
面积比: 目标/ 内标
Calibration curve
A4 /AIS A3 /AIS A2 /AIS A1/AIS
Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
内标法特点
多用在国际标准和规定比较严格的方法中
特点： • 1）进样量不严格要求 • 2）只对所测组分作校正 • 3）必须在样品中加一内标组分 • 4）操作较为繁琐 • 5）选择内标物比较困难
11 11
11
Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
选择内标物应注意
• 理化性质与待测物相近 • 色谱响应与待测物相近 • 与待测物有良好的分离，但不能相距太远 • 与待测物的峰面积比为0.7-1.3最好，因此要 根据待测物的浓度确定内标物的添加量
Nam e
150
150
mAU
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Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
峰面积处理参数
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岛津液相色谱培训 ---定量基础知识
岛津国际贸易（上海）有限公司
分析中心
1
1
Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
定性方法
色谱峰的定性鉴别 通过保留值(通常是保留时间)进行定性 需要指定保留时间误差范围（时间窗、时间带）
在相同的分析条件下 保留时间相同并不肯定是同样的组份 保留时间不同肯定不是同样的组份
7
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Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
外标法
浓度 C1 A2 C2 面积 A1 A4 A3 A2 A1 A4 C4 C1 C2 C3 浓度 C4
8
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峰面积
标准曲线
A3 C3
Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
4
4
Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
定性确证
仅仅通过保留时间并不能完全确证该物质
通过加入标准物确认 通过改变色谱条件确认 光谱和质谱信息也可以作为进一步确证手段 其他仪器方法确证
5
5
Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
定量分析的基本要求
需要有纯物质作标准 被定量组分峰要与其它峰达到基线分离 符合定性参数要求 选择合适的定量方法
3
3
Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
定量分析基本公式
被测组分的浓度与检测器的响应值，在某些条件限定下 成正比的关系。
外标法特点
是实验室最常用的定量方法，定量结果准确
特点： 1）不需所有峰都流出或被检测到 2）需要标准样品 3）进样量必须准确 4）仪器必须有良好的稳定性 5）只对所测组分作校正
9
9
Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
内标法
浓度 目标 内标 C1 CIS A2 AIS C2 CIS A3 AIS C3 CIS A4 AIS C4 CIS C1/CIS C2 /CIS C3 /CIS C4 /CIS 浓度比: 目标 / 内标
Ci= fi Ai Ci= fi Hi
Ci： fi : Ai： Hi： 组分浓度, 响应因子，与组分的物理化学性质和检测器的性质有关 组分响应面积 组分响应高度
实际修饰公式： Y=aX+b
2
2
Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
定量方法
面积归一化 外标法 内标法 标准加入法
6
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面积归一化法
不能作为准确定量的方法，仅在特定情况下使用
公式：
Ai Ci % = × 100 % ∑ Ai
特点： 1）无需做校正，简便，快速 2）进样量不严格要求 3）所有组分都流出并且被检测到 4）所有组分的响应因子都相同
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Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
数据处理参数
积分参数：（Width, Slope, Drift, T.DBL等） 定性参数：保留时间及允许误差（时间窗，时间带） 定量参数：
定量方法：外标法、内标法、面积归一法等 曲线点数：一点或多点 曲线拟合：线性、折线、曲线
基本积分参数
Width：半峰宽，峰的半高宽，排除峰宽小于最小峰宽的峰 Slope：斜率，用来判断出峰起点、终点以及滤除低平噪声 Drift：漂移，判断相邻峰的积分方式
设定值为0时，积分仪将自动判断 如Drift与基线至峰谷连线较接近时，积分面积值可能变化较大
T.DBL：时间变参，根据时间自动改变峰宽和斜率 Minimum area：最小峰面积，排除面积小于该值的峰
15tional Trading (Shanghai) Co. Limited
峰面积处理参数
200 S p e c tr u m M a x P l o t p n a _ 6 (1 :4 ) P N A_ L e v e l _ 3 _ p a c . d a t 200
18 18
18
Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
Slope的设定
Slope Slope
Slope<峰斜率，作为峰计算 Slope
Slope>峰斜率，作为噪声滤除 Slope
Slope≈峰斜率，积分不稳定，须手动设定
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面积 A1 AIS
面积比: 目标/ 内标
Calibration curve
A4 /AIS A3 /AIS A2 /AIS A1/AIS
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内标法特点
多用在国际标准和规定比较严格的方法中
特点： • 1）进样量不严格要求 • 2）只对所测组分作校正 • 3）必须在样品中加一内标组分 • 4）操作较为繁琐 • 5）选择内标物比较困难
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选择内标物应注意
• 理化性质与待测物相近 • 色谱响应与待测物相近 • 与待测物有良好的分离，但不能相距太远 • 与待测物的峰面积比为0.7-1.3最好，因此要 根据待测物的浓度确定内标物的添加量
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峰面积处理参数
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分析中心
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定性方法
色谱峰的定性鉴别 通过保留值(通常是保留时间)进行定性 需要指定保留时间误差范围（时间窗、时间带）
在相同的分析条件下 保留时间相同并不肯定是同样的组份 保留时间不同肯定不是同样的组份
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外标法
浓度 C1 A2 C2 面积 A1 A4 A3 A2 A1 A4 C4 C1 C2 C3 浓度 C4
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峰面积
标准曲线
A3 C3
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定性确证
仅仅通过保留时间并不能完全确证该物质
通过加入标准物确认 通过改变色谱条件确认 光谱和质谱信息也可以作为进一步确证手段 其他仪器方法确证
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定量分析的基本要求
需要有纯物质作标准 被定量组分峰要与其它峰达到基线分离 符合定性参数要求 选择合适的定量方法
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定量分析基本公式
被测组分的浓度与检测器的响应值，在某些条件限定下 成正比的关系。
外标法特点
是实验室最常用的定量方法，定量结果准确
特点： 1）不需所有峰都流出或被检测到 2）需要标准样品 3）进样量必须准确 4）仪器必须有良好的稳定性 5）只对所测组分作校正
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内标法
浓度 目标 内标 C1 CIS A2 AIS C2 CIS A3 AIS C3 CIS A4 AIS C4 CIS C1/CIS C2 /CIS C3 /CIS C4 /CIS 浓度比: 目标 / 内标
Ci= fi Ai Ci= fi Hi
Ci： fi : Ai： Hi： 组分浓度, 响应因子，与组分的物理化学性质和检测器的性质有关 组分响应面积 组分响应高度
实际修饰公式： Y=aX+b
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定量方法
面积归一化 外标法 内标法 标准加入法
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面积归一化法
不能作为准确定量的方法，仅在特定情况下使用
公式：
Ai Ci % = × 100 % ∑ Ai
特点： 1）无需做校正，简便，快速 2）进样量不严格要求 3）所有组分都流出并且被检测到 4）所有组分的响应因子都相同
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数据处理参数
积分参数：（Width, Slope, Drift, T.DBL等） 定性参数：保留时间及允许误差（时间窗，时间带） 定量参数：
定量方法：外标法、内标法、面积归一法等 曲线点数：一点或多点 曲线拟合：线性、折线、曲线
基本积分参数
Width：半峰宽，峰的半高宽，排除峰宽小于最小峰宽的峰 Slope：斜率，用来判断出峰起点、终点以及滤除低平噪声 Drift：漂移，判断相邻峰的积分方式
设定值为0时，积分仪将自动判断 如Drift与基线至峰谷连线较接近时，积分面积值可能变化较大
T.DBL：时间变参，根据时间自动改变峰宽和斜率 Minimum area：最小峰面积，排除面积小于该值的峰
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峰面积处理参数
200 S p e c tr u m M a x P l o t p n a _ 6 (1 :4 ) P N A_ L e v e l _ 3 _ p a c . d a t 200
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Slope的设定
Slope Slope
Slope<峰斜率，作为峰计算 Slope
Slope>峰斜率，作为噪声滤除 Slope
Slope≈峰斜率，积分不稳定，须手动设定