实验四 化脓性球菌和肠道杆菌的病原学检测(1)
〖医学〗脓汁中病原性球菌和粪便中致病性杆菌的鉴定
金
表
黄
皮
色
葡
葡
萄
萄
球
球
菌
菌
观察菌落特点
脓汁标本在血平板上经过24小时的培养，已 经长出菌落，首先观察菌落的特点： • 菌落的形态； • 光滑程度； • 色素的产生情况； • 细菌的溶血情况。
形态学鉴定
革兰染色，观察细菌的染色性状和排列特点。
G-球菌
双球菌 结合临床进行判断
G+菌链状排列或成对排列
新乡医学院 微生物学教研室
凝固酶
❖ 是指能使含有枸橼酸钠或肝素抗凝剂的人或 兔的血浆发生凝固的酶类物质。
❖ 致病性葡萄球菌大多能产生凝固酶 ❖ 凝固酶分为两种：游离凝固酶、结合凝固酶
方法
❖ 试管法
适合于游离凝固 酶的检查
❖ 玻片法
适合于结合凝固 酶的检查
试管法凝固酶试验
原理
协同因子
游离凝固酶 类似凝血酶原物质
操作内容
1 革兰染色： 每台2张玻片，染1张球菌和1张杆菌；
2 血浆凝固酶实验： 每台1张玻片；
3 玻片凝集反应： 每台1张玻片；
4 接种双糖铁培养基： 每台2管双糖铁培养基（穿刺+斜面 ）。
观察内容
1 脓汁标本细菌在血平板上的生长现象； 2 肠杆菌在SS平板上生长的菌落特点； 3 肠杆菌在双糖铁培养基上生长的特点。
如果介于12－20mm之间时应重复试验。
结果判断
菌落特点：形态；色素；溶血； 革兰染色的特点：判断形态，排列和染色； 根据溶血判断链球菌的种类；根据生化反应 区别肺炎双球菌和甲链。
G+菌葡萄串状排列
首先观察菌落特点：色素；溶血情况；
进一步鉴定： 血浆凝固酶实验； 耐热核酸酶实验； 甘露醇的发酵
肠道杆菌检验(实验)
肠道杆菌检验(实验)一、实验目的本实验的主要目的在于检测食品和水中的肠道杆菌，以此评估其是否达到安全要求。
通过本实验，可以了解肠道杆菌的常见特点和检测方法，培养学生科学的实验技能能力。
二、实验原理肠道杆菌是一种典型的大肠杆菌，被广泛应用于食品和水质检测中。
它主要存在于动物肠道中，也能够存在于它们的排泄物中，因此如果食品和水受到动物排泄物的污染，就会存在肠道杆菌。
通过检测肠道杆菌的存在和检测数量，可以判断食品和水的卫生质量是否达到安全要求。
肠道杆菌在营养富含的培养基上易于生长，并可以通过简单的染色方法进行检测。
常用的检测方法包括在培养基上培养并计数，或者利用PCR技术进行定量和鉴定。
三、实验步骤1. 实验准备(1) 肠道杆菌检测脱氧胆酸琼脂培养基、营养琼脂培养基、氧气酒精灯、电热板、灭菌器、微孔过滤膜、灭菌钳等。
(2) 检测器具：恒温培养箱、显微镜等。
(3) 检测样品：需要检测的食品或水样品。
2. 实验操作(1) 样品处理：对待检测的食品或水样品进行处理，如筛选、稀释等等，以达到最佳的检测效果。
(2) 复制脱氧胆酸琼脂培养基和营养琼脂培养基，用微孔过滤膜将样品过滤到培养基上，放入恒温培养箱中进行培养。
(3) 测量生长：在一定时间后，观察脱氧胆酸琼脂培养基中的菌落数量，判断是否存在肠道杆菌，并计算出菌量。
(4) 进行染色：将培养细胞染色，观察细胞形态，以鉴定是否存在肠道杆菌。
四、实验注意事项(1) 实验过程中需要注意卫生，防止污染样品。
(2) 营养琼脂培养基和脱氧胆酸琼脂培养基必须进行灭菌处理。
(3) 实验过程需要严格按照实验操作步骤进行，以免影响结果。
五、实验结果及分析通过检测食品和水中的肠道杆菌，在不同的培养基上进行培养和计数，可以判断食品和水是否满足卫生要求。
如果检测出的肠道杆菌数量较高，则说明食品或水存在严重的卫生问题，需要及时采取措施加以解决。
通过本实验可以培养学生的科学思维能力，提高其对卫生的认识和保健意识。
医学微生物实验 - 实验四病原性球菌
2020/4/19
2020/4/19
2020/4/19
纸片法
• 材料：
• 1、菌种：葡萄球菌、大肠杆菌、痢疾 杆菌、绿脓杆菌
• 2、培养基：普通琼脂平板 • 3、抗生素滤纸片：每片含药量：青霉
素1单位，其它抗生素为10微克
2020/4/19
绿 脓 杆 菌
2020/4/19
葡 萄 球பைடு நூலகம்菌
2020/4/19
大 肠 杆 菌
2020/4/19
2020/4/19
2020/4/19
2020/4/19
2020/4/19
葡 萄 球 菌
2020/4/19
链
球
不完全溶血
菌
2020/4/19
完全溶血 不溶血
2020/4/19
肺炎链球菌 草绿色溶血环
可疑败血症细菌鉴定
标本采集
增菌培养 平板划线分离 药敏鉴定
培养特征 涂片镜检
鉴定
2020/4/19
细菌检测及鉴定常用方法
• 镜检（ G+球菌） • 培养（ G+球菌） • 生化反应（ G-杆菌） • 血清学诊断 • 动物实验 • 核酸诊断等快速诊断
2020/4/19
病原性球菌实验内容
• 病原性球菌的形态观察 葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌
• 病原性球菌的培养特性 ✓ 普通平板菌落形态的观察 ✓ 血平板上溶血特性的观察
血浆凝固酶的种类及检测方法
结合血浆凝固酶 （纤维蛋白原受体）
游离血浆凝固酶 纤维蛋白原
2020/4/19
纤维蛋白原
颗粒状凝固
纤维蛋白 胶状凝固
药敏试验
（抗生素敏感试验）
2020/4/19
球菌和肠道杆菌病原学检测
【意义】1.抗体滴度 ＞200IU/ml以上，新近有可能反复感染过乙型溶 血型链球菌 2.作为风湿活动期、风湿性关节炎、风心病、急性肾小 球肾炎、的辅助诊断。
生化反应鉴定
【注意事项】
无菌操作
挑取细菌培养平板上的单个菌落进行生化鉴定。
致病性球菌的主要生物学性状
鉴别要点
菌落特征 溶血 颜色 革兰染色
生化反应鉴定
3. 甘露醇发酵试验 【原理】致病性葡萄球菌多含有分解甘露醇的酶类，能发 酵甘露醇产酸，培养基由紫色变为黄色。 【操作】细菌分别接种甘露醇单糖发酵管，经37℃孵育 18-24h观察结果。 【结果】金黄色葡萄球菌为阳性，表皮葡萄球菌为阴性
血浆凝固酶试验和甘露醇发酵试验可区分致病性 和非致病性葡萄球菌
本次实验课结束
交作业，值日同学留下 下周再见！
2
1
3
链球菌菌落形态
血平板：灰白色圆形凸起
的细小菌落，不同菌株溶 血不一。
化脓性链球菌
草绿色链球菌
肺炎链球菌菌落
生化反应鉴定
1. 血浆凝固酶试验
示教
【原理】致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，使血浆中纤维蛋 白原变为不溶性纤维蛋白，附于细胞表面生成凝块。 【操作】取生理盐水各1滴分别滴于载玻片上，用接种环挑取 细菌，混合后观察有无自凝现象。取1滴兔血浆混匀分别滴 于载玻片上,观察有凝固现象（3-5s）。 【结果】金黄色葡萄球菌为阳性，表皮葡萄球菌为阴性
第 一 次
可疑菌落 形态、色素、溶血 菌落特点 血浆凝固酶、触酶、菊糖发酵、 甘露醇发酵、胆汁溶菌、 小白鼠毒力试验 鉴定试验
第 二 次
生化结果观察
第三次
荚膜染色
结果讨论与分析
常见致病性球菌染色特点
实验四病源性球菌和杆菌PPT讲稿
血清学鉴定（玻片凝集反应）
伤寒诊断血清
+ 未知菌1
伤寒诊断血清
+
未知菌2
？
？
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结果：
双糖铁 葡 乳 尿 H2S 靛 动力 血清学 未知菌1
未知菌2
结论：
未知菌1：？
未知菌2：？
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当前你正在浏览到的事第三十二页PPTT，共三十八页。
葡萄糖 乳糖 H2S
大肠杆菌 ⊕
⊕
-
尿素 -
靛基质 动力 双糖铁
+
+ + /⊕
变形杆菌 ⊕
-+
+
+/- + - /⊕
乙型副伤
寒杆菌
⊕
- ++
-
-
+ -/⊕
伤寒杆菌 +
- +/-
-
-
+ -/+
痢疾杆菌 +
--
-
+/- - -/+
当前你正在浏览到的事第二十八页PPTT，共三十八页。
4. 肠道杆菌未知菌1和未知菌2的鉴定
实验四病源性球菌和杆菌课件
当前你正在浏览到的事第一页PPTT，共三十八页。
二、实验内容
1.自己动手观察链球菌、脑膜炎双球菌的形态;示教观 察结核杆菌、白喉杆菌的形态。
2.观察肠道杆菌的双糖发酵，鉴别培养基（ss培养 基）的生化反应。
3.化脓性球菌的鉴定
⑴三种葡萄球菌的色素观察
⑵乙型链球菌的溶血现象观察 ⑶抗“O”实验。
大肠杆菌
医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测
掌心对掌心搓擦
2.手指交错掌心对手背搓擦 3.手
指交错掌心对掌心搓擦
两手互握互搓指背 6.指尖在掌心中搓擦
5.拇指在掌中转动搓擦
医务人员洗手指征
0 1 接触传染病患者之后。 0 3 接触病人的血液、体液、分泌物
和排泄物之后。
0 5 接触旧钱币之后。 0 7 进行微生物操作或作血、尿等生
化、免疫测定之后。
器材准备
自然界中的微生物
01
已经发现的微生物大约13 万5千种，被认为非常危 险的有600种，在人间传 染的病原微生物380种。 这些微生物存在于地球的 各个角落，从寒冷的极地 到炎热的赤道，从4.2千 米地层深处到85千米高空 （芽孢）,均有它们的踪 迹。
02
空气、水、土壤、人体的 体表以及与外界相通的腔 道，均有不同种类和数量 的微生物存在。
血琼脂平板培养
涂片染色镜检
挑取可疑菌落
生化反应
↑
纯培养 动物实验
药敏实验
血液、穿刺液 → 肉汤增菌培养 → 培养液涂片染色境检
常见肠道致病菌的检查程序P48：
粪便 → SS琼脂、伊红美蓝平板培养 → 挑取可疑菌落
↑
↓ 血清学鉴定
血、骨髓 → 增菌培养
双糖铁培养基 染色镜检
生化反应
0 1
平板划线分离法：
T：采样时间(分钟)。
组号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
空气的细菌学检查
地点
时间(min)
卫生间
15
食堂
15
门诊大厅
15
呼吸科病房
15
呼吸科ICU
15
外科病房
15
外科ICU
15
病原生物学综合性实验一脓汁和粪便标本中病原菌的检测解析
综合性实验一脓汁和粪便标本中病原菌的检测从临床标本中分离细菌的目的是为了查找与疾病有关的病原菌，这对于临床治疗及预后调查是很有价值的。
所以，在分离时应掌握以下原则，以便指导检出病原菌，避免漏诊误诊。
1．了解微生物在人体的分布。
人体的很多部位与外界相通，存在正常菌群，分离时应注意标本中的菌群是正常菌群的污染，还是致病菌。
另外，机体的某些部位(如血液、骨髓)是无菌的，如检出细菌，应视为致病菌。
2．了解标本来源及临床情况，以便有目的地检出病原菌。
3．根据标本来源和可能存在的病原菌确定选用各种分离培养基，以提高检出率。
如血平板可用于化脓性链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎球菌等的分离。
常见的化脓性病原菌有葡萄球菌、链球菌、淋球菌、脑膜炎球菌、肺炎链球菌、结核杆菌、假单胞菌、流感杆菌等。
脓汁标本在做细菌分离培养的同时，均须直接涂片检查，观察是否有典型形态的菌体，芽胞有无，为临床提供最初的诊治依据。
粪便标本中常含有很多杂菌，应根据检验目的菌的不同而选择培养基(如SS、伊红美蓝平板，碱性蛋白胨水)，尽可能地抑制杂菌，以利于病原菌的检出。
粪便标本中常见的病原菌有志贺氏菌属、致病性大肠杆菌、弧菌属、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、艰难梭菌等。
粪便标本中因各种正常菌群含量甚多，仅以染色性和形态无法分辩是否为病原菌，因此，粪便标本一般不作直接涂片检查，只有检查霍乱弧菌、结核杆菌、疑似葡萄球菌或艰难梭菌引起的伪膜性肠炎，以及菌群失调时，才作直接涂片检查。
细菌鉴定工作的原则及基本方法是：1、必须用纯的细菌培养物作鉴定。
因为不同的细菌生化反应结果相差较大，而反应结果是以阳性或阴性表示的，一旦用混合菌做生化反应，结果不可分析。
2、鉴定方法的选择。
测定细菌特征的实验方法很多，应根据鉴定目的选择有价值的、快速简便的试验项目，既能完成鉴定，试验项目又尽可能少。
一、培养基的制备Preparation of Culture Media【实验目的】1了解细菌生长的基本营养条件。
化脓性球菌、粪便标本肠道致病菌的鉴定流程
化脓性球菌、粪便标本肠道致病菌的鉴定流程下载温馨提示：该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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肠道病原菌的分离与鉴定实验报告
肠道病原菌的分离与鉴定实验报告摘要本实验旨在分离、鉴定肠道病原菌，并深入了解肠道病原菌对人们健康的影响。
本实验采用选择性培养基和生化试剂对样品进行处理和鉴定，最终成功分离出大肠杆菌、沙门菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌等肠道病原菌。
引言肠道病原菌是导致肠胃疾病的主要病因之一。
一些细菌和病毒都可引起肠道感染，导致腹泻、呕吐、腹痛等不适症状。
有些肠道病原菌很难通过常规的培养方法进行分离和鉴定，因此对于其鉴定至关重要。
在临床和实验室中，肠道病原菌的鉴定是非常重要的。
在本实验中，我们将通过选择性培养基和生化试剂来分离和鉴定肠道病原菌。
材料与方法实验所需材料：-食品样品（牛肉、猪肉、家禽产品等）-选择性培养基（MacConkey agar, SS agar, XLD agar）-氯霉素（50μg/ml）-β-半乳糖苷酶-生化试剂（甲基红、青田霉素、麦芽糖、尿素、甲酸氢钠、甲酸亚铁、碳酸氢铵、硫代硫酸钠、氧化亚铁、硫酸铜、氯化铵、硝酸钴、聚苯乙烯乳胶、过氧化氢）实验步骤：1. 食品样品的处理：将样品切成小块，加入100 ml的含氯霉素（50μg/ml)的生理盐水中，放在室温下搅动10分钟，再将悬浮液离心10分钟，取沉淀制备10倍连续稀释液备用。
2. 分离培养：取三个不同的选择性培养基MacConkey agar、SS agar和XLD agar，分别接种均匀悬浮液并用无菌环展开，然后使其在37℃恒温箱中孵化24小时。
3. 生化识别：观察菌落的形态、颜色和表面涂膜，并用生化试剂行革兰染色、甲基红反应、青田霉素试验、尿素酶试验、甲酸氢钠氧化试验、甲酸亚铁还原试验、碳酸氢铵水解试验、硫代硫酸钠还原试验、氧化亚铁试验、硫酸铜凝集试验、氯化铵水解试验、硝酸钴试验、聚苯乙烯乳胶凝聚试验和过氧化氢试验，根据结果进行分类鉴定。
结果经过实验分离和鉴定，本实验成功分离出大肠杆菌和沙门菌等常见的肠道病原菌，并且还分离出一株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。
药物敏感试验和消毒灭菌
硫柳汞
0.01
生物制品防腐
氧化剂
高锰酸钾
0.1
皮肤、尿道、水果、蔬菜消毒
过氧化氢
3
皮肤、粘膜、创伤消毒
过氧乙酸
0.2～0.5
塑料、玻璃、人造纤维消毒
碘液
2.5
皮肤消毒
醇类
乙醇
70～75
皮肤、体温计消毒
酚类
石炭酸
3～5
地面、器皿表面和排泄物消毒
来苏
3～5
消毒与灭菌技术 化学消毒剂作用机制
损伤细菌细胞膜，增加其通透性（表面活性剂、脂溶剂等）
菌体成分氧化、水解或结构改变（氧化剂、卤素、醛、酚等）
干扰细菌酶系统和代谢（氧化剂、重金属盐类等）
促进菌体蛋白质变性凝固（酚、醇、醛、酸碱类等）
名称
浓度(%)
用途
重金属盐
红汞
2
皮肤、粘膜、小创面消毒
孵育：35ºC 16-18h，量取抑菌圈直径。
纸片应分布均匀，中心距离不小于24mm。
含菌平板必须避免过浓或过稀。
纸片贴完后应在15min内将平板反过来，置于37度温箱中。
纸片一旦接触培养基就不应再挪动位置。
要注意无菌操作。
注意事项
影响药敏结果的因素
培养基 应根据试验菌的营养需要进行配制。倾注平板时，厚度合适（约5-6mm），不可太薄，一般90mm直径的培养皿，倾注培养基18-20ml为宜。培养基内应尽量避免有抗菌药物的拮抗物质，如钙、镁离子能减低氨基糖苷类的抗菌活性，胸腺嘧啶核苷和对氨苯甲酸（PABA）能拮抗磺胺药和TMP的活性。 细菌接种量 细菌接种量应恒定，如太多，抑菌圈变小，能产酶的菌株更可破坏药物的抗菌活性。 药物浓度 药物的浓度和总量直接影响抑菌试验的结果，需精确配制。商品药应严格按照其推荐治疗量配制。 培养时间 一般培养温度和时间为37℃ ，8-18小时，有些抗菌药扩散慢如多粘菌素，可将已放好抗菌药的平板培养基，先置4℃冰箱内2~4小时，使抗菌药预扩散，然后再放37℃温箱中培养，可以推迟细菌的生长，而得到较大的抑菌圈。
医学微生物学实验脓汁以及粪便标本中病原菌检测
医学微生物学实验脓汁以及粪便标 本中病原菌检测
医学微生物学实验脓汁以及粪便标 本中病原菌检测
医学微生物学实验脓汁以及粪便标 本中病原菌检测
细菌的溶血现象
❖ 根据细菌对血平板中红细胞的溶解能力可分为以 下三种溶血类型
α（甲型）溶血:产生溶血素，不完全 性溶血，在血平板上菌落周围有1～2mm 半透明的草绿色溶血环。 β（乙型）溶血: 呈完全性溶血，在血 平板上菌落周围有2～4mm宽，界限分明， 无色透明的溶血环。 γ（丙型）溶血:不产生溶血素，在血 平板上的菌落周围无溶血环。
医学微生物学实验脓汁以及粪便标 本中病原菌检测
菌落特征P11 ❖ 大小：大(直径约3mm以上)，中(直径约1～3mm)，小(直
径约1mm以下)。
❖ 形状：圆形，卵圆形、假根形、丝状、不规则等。
❖ 边缘：整齐，锯齿状，波浪状，羽毛状。
❖ 表面：隆起、平坦、中心凸起、脐形凹陷；光滑或粗糙、 湿润或干燥。
医学微生物学实验脓汁以及粪便标 本中病原菌检测
细菌的纯培养
❖ 挑选单菌落: 脓汁标本在普通平板上有黄色、白色两种菌落，菌落 的色素是脂溶性的，是细菌本身的颜色。菌落直径 2mm左右、圆形、隆起、表面光滑、湿润、边缘整齐、 不透明。 粪便标本在伊红美蓝平板上，有紫黑色、淡粉红色两 种菌落，菌落颜色是水溶性的，不是细菌本身的颜色， 颜色的产生是因为大肠埃希菌分解乳糖产酸，酸使伊 红与美蓝结合，形成紫黑色具有金属光泽、大而隆起、 不透明的菌落；菌落直径2～3mm。致病菌不分解乳糖 ，菌落呈伊红的颜色，很淡的粉红色，半透明，直径 1～2mm。 ※选择平板上相同的菌落数多的、典型的、容易挑取的 单菌落，进行接种。
注意：只能横放，不得竖放。
医学微生物学实验脓汁以及粪便标 本中病原菌检测
脓汁和粪便标本中病原菌的检测1
9
10
丙 丁丙 丁
4
实验室器材 整齐有序
完整版pt
5
常用器材摆放顺序： 电源插座→试管架→酒精灯→污物盘。 试管架上器材： 按接种针、接种环、油性笔和打火机的顺序，分别 放置在试管架中间两行，靠近电源插座一侧。
※器材使用以后，必须放回原处，依次摆整齐。
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6
普通冰箱(3颗星***)
冷藏室(上柜）：
再扫地，实验室用紫外线灯照射1小时。
完整版pt
3
实验分组
❖ 俩俩相对4人为一组,组号编在电源插座上。 ❖ 每组按从前到后,从左到右的顺序，分别编号为
甲、乙、丙、丁。
甲 乙甲 乙甲 乙
1
2
3
丙 丁丙 丁丙 丁
讲
台
甲 乙甲 乙甲 乙
6
7
8
丙 丁丙 丁丙 丁
完整版pt
甲 乙甲 乙
4
5
丙 丁丙 丁
甲 乙甲 乙
→集中放在试管筐里，然后罩上硫酸纸，牛 皮纸，用橡皮筋扎好 →放入讲台边的高压灭 菌桶或高压灭菌筐内→送到高压灭菌室（洗 刷室）。 ❖ 请在 30分钟内完成。
完整版pt
21
完整版pt
22
培养基
培养基是用人工的方法，将多种营养物质，根据各 种微生物生长繁殖的需要而合成的一种营养制品。它的 主要成分是蛋白胨、牛肉膏、氯化钠和水，pH7.4～7.6。
涂片染色镜检
挑取可疑菌落
生化反应
↑
纯培养 动物实验
药敏实验
血液、穿刺液 → 肉汤增菌培养 → 培养液涂片染色境检
常见肠道致病菌的检查程序P48：
粪便 → SS琼脂、伊红美蓝平板培养 → 挑取可疑菌落
脓汁和粪便标本中病原菌的检测-1
医学微生物学实验室规则 Lab Safety Regulation
❖ 进入实验室必须穿白大衣，戴帽子。
❖ 书本、文具放在抽屉里。
❖ 实验室内不准吃东西、喝饮料，不准把任何东西放入嘴中，也不 要用手抚摸头脸等部位。
❖ 凡是废弃的细菌培养物、带菌材料，应放在指定地点等待灭菌处 理，不得随便乱放或用水冲洗。
power socket →test tube rack →Alcohol burner →kidney basin
test tube rack → inoculating needle , inoculating loop ； oil base pen , lighter.
refrigerator
11 甲 乙 丙 丁
甲 乙甲 乙甲 乙
左
1
2
3
丙 丁丙 丁丙 丁
讲
台 甲 乙甲 乙甲 乙
右
6
7
8
丙 丁丙 丁丙 丁
甲 乙甲 乙
4
5
丙 丁丙 丁
甲 乙甲 乙
9
10
丙 丁丙 丁
12 甲 乙 丙 丁
实验分组（44人）
❖ 两两相对4人为一个小组,组号编在电源插座上。 ❖ 每组按从前到后,从左到右的顺序，分别编号为甲乙丙丁。
即拔掉电源插头。 ❖ 当旋钮在0档位时，如果逆时针强行旋转，会导致旋钮
损坏。 ❖ 当旋钮旋转至◎档位时，如果继续顺时针旋转，会导致
旋钮损坏。
蒸馏水：配制培养基。 1‰新洁尔灭：怀疑病原菌污染，泡手3～5分钟。 玻片缸：浸泡用过的载玻片。 消毒抹布：擦拭实验台台面。
医学微生物学实验 综合性实验一
项目9：常见病原菌的病原学检查
项目9：常见病原菌的病原学检查【目的要求】掌握常见病原菌的检查方法和结果观察。
【实验内容】一、 常见化脓性球菌的检查（一）化脓性球菌的病原生物学检测程序在临床上，一般化脓性感染的诊断并不困难，有时为了确定病原菌种，选择用药，特别是疑似败血症患者须与其它发热性疾病进行鉴别诊断时，方进行必要的微生物学检查。
本实验通过脓汁病原菌检查这一系统实验过程，初步掌握化脓性球菌的检查程序和鉴定方法。
脓汁中病原球菌的检查程序 脓 汁↓ 肉眼观察直接涂片 分离培养（血琼脂平板）↓革兰氏染色 菌落观察 革兰氏染色大小 溶血现象 - +肾形 成 对 排列【材料】①脓汁(取自可疑化脓性球菌感染病人)或血液(取自可疑为败血症病人)不溶血草绿色溶血环透明溶血环矛头状成对排列球形链状排列球形葡萄状排列菊糖发酵试验胆汁溶菌试验甘露醇发酵试验血浆凝固酶试验②血琼脂平板③革兰氏染色液④家兔血清⑤去氧胆酸钠溶液(10％)⑥生理盐水⑦载物玻片，小试管等。
【方法】1．标本采集①一般用无菌棉棒(拭子)采取脓汁及病灶分泌物。
②取材如遇深部脓肿时，用碘酒及酒精棉球消毒患部皮肤，然后再以无菌棉拭子采取溃疡深处的分泌物。
③采取脓肿处的脓汁，如怀疑有厌氧菌，最好用注射器抽取脓汁立即送检。
④标本采取后应及时检查，如不能立即检验应置冰箱中保存，以防杂菌污染。
⑤对可疑为败血症的病人，按无菌操作采血5ml，立即注入葡萄糖肉汤培养基内增菌，12～18h后再作分离培养。
2．肉眼观察观察脓汁性状、色调、有无恶臭气味等，如脓汁带绿色时，可能有绿脓杆菌的感染，如有恶臭气味可能有厌氧菌感染。
3．染色镜检将脓汁直接涂片用革兰氏染色观察细菌形态、排列及染色性，在涂片上通常可见到革兰氏阳性暗紫色的球菌散在于蔷薇色的白细胞之间或其中。
4．分离培养将脓汁(或血液增菌材料)划线接种于血琼脂平板上，置37℃培养18—24h，观察划线上的菌落是一种或几种，有无溶血环，从菌落中选最适于钓菌的代表菌落观察，并用接种环取菌落的一部分作涂片，革兰氏染色，镜检，观察形态及染色性，结合菌落特点及涂片检查，即可初步识别。
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肺炎球菌
pneumococcus
G+双球菌，致病株有荚膜
脑膜炎球菌
meningococcus
G－双球菌
淋球菌
gonococcus
G－双球菌
巧克力平皿，5-10%CO2， 37℃24-48h，菌落小， 呈灰白色。
血浆凝固酶试验
玻片法 ① 取洁净载玻片一张，两端各加生理盐水一滴。 ② 灭菌接种环自血琼脂平板上挑取两种葡萄球 菌培养物少许，分别混悬于玻片上的生理盐水 成均匀的细菌悬液，观察有无自凝现象。 ③ 于每滴细菌悬液内，各加入兔血浆1d，混匀。 ④ 数秒后观察结果，若细菌呈颗粒状凝集时为 (+)，若无凝集时为(-)。
金葡菌 表葡菌 金黄色 ＋ ＋ ＋ 强 白色 － － － 弱或无
腐生葡萄球菌 白色或柠檬色 － － － 无
鉴别肺炎球菌与甲链
菊糖分解 胆汁溶菌实验
本次实验课结束
交作业，值日同学留下 下周再见！
G+球菌，呈葡萄串状排列
葡萄球菌
金黄色葡萄 球菌 血平 皿培 养基 白色葡萄球 菌 柠檬色葡萄 球菌
staphylococcus
金黄色色素 白色色素 柠檬色色素 致病力强 条件致病菌 条件致病菌
链球菌
streptococus
G+球菌，呈链状排列
链球菌
streptococus
血平 甲型溶血链球菌（草绿色溶血环） 皿培 乙型溶血链球菌 (无色溶血环) 养基 丙型溶血链球菌 (无溶血环)
微生物学试验
实验四 化脓性球菌和 肠道杆菌的病原学检测（1）
实验目的要求
1.掌握常见化脓性球菌的形态染色
特点 2.熟悉常见化脓性球菌的培养特征 3.熟悉血浆凝固酶试验、触酶试验 及抗“O”试验的原理、方法、结果 及意义 4.了解常见化脓性球菌的致病特点
葡萄球菌 staphylococcus
血浆凝固酶试验
【实验结果】金黄色葡萄球菌能导致血浆凝固 表皮葡萄球菌试验阴性
葡萄球菌
staphy性风湿热、风湿活动期、急性肾
小球肾炎
常见肠道杆菌在伊红美兰琼脂平板 （EMB）及SS培养基上的菌落特点
1. 大肠杆菌菌落：较大、圆形、光滑、不
透明，在EMB上形成深紫兰色菌落（因分解乳 糖产酸，与伊红美兰结合之故），在SS琼脂 平板上形成红色菌落(因分解乳糖产酸，中性 红指示剂变红)。 2. 伤寒杆菌和痢疾杆菌菌落：中等大、圆 形、光滑、半透明、在EMB上无色（因不分解 乳糖），在SS上无色或淡黄色。
鉴别致病性与非致病性 肠道杆菌
乳糖发酵试验，致 病菌多为阴性，非
致病菌多为阳性。
问题与讨论
1.如何鉴别致病性葡萄球菌与非致病性葡萄 球菌？ 2.如何鉴别肺炎球菌与甲型链球菌？ 3.什么是抗“O”试验，说明其临床意义？ 4.怎样鉴别致病性与非致病性肠道杆菌？
性 状 菌落色素 分解甘露醇 血浆凝固酶 a溶血素 致病性