组织细胞中提取DNA实验
生物化学实验 实验八 动物组织中DNA的提取
四、实验操作
动物生物化学实验
实验八 动物组织中DNA的提取
一、实验目的
1.学习从动物组织细胞中提取DNA的基本原理。 2. 掌握提取DNA的基本方法。
二、实验原理
细胞中的DNA和RNA通常和蛋白质结合
成脱氧核糖核蛋白和核糖核蛋白而存在。这
两种核蛋白在不同浓度的盐溶液中，有不同 的溶解度。在稀盐溶液（0.15mol/L）中， 核糖核蛋白溶解度大，脱氧核糖核蛋白溶解 度小；而在高盐溶液中（ 1mol/L）中，脱氧 核糖核蛋白溶解度大，核糖核蛋白溶解度小。 利用此差异，可见两种核蛋白彼此分开。
分离到的脱氧核糖核蛋白，用十二 烷基硫酸钠（SDS）使蛋白质变性，让 DNA游离出来，再用氯仿-异戊醇混和 试剂沉淀除去变性的蛋白质。然后加入 95%乙醇，可将DNA沉淀析出。
为了防止DNA酶解，在提取过程中加柠 檬酸盐、EDTA盐并要求在40C以下进行，以 抑制DNA酶的活性。
三、实验试剂及器材
4. 将沉淀物转入小烧杯中，加入5倍体积的 0.15mol/LNaCl-0.1mol/L, EDTANa2溶液， 搅拌均匀。
5. 边搅拌，边慢慢滴加5%SDS溶液约6ml， 直至终浓度为1%。
6. 加入固体氯化钠约2.2g，使终浓度为 1mol/L，边加边搅拌，持续20分钟加完， 使氯化钠充分溶解。
1. 称取动物肝脏10g，剪碎后加入预冷的 0.15mol/LNaCl-0.015mol/L,pH7.0柠檬 酸钠溶液10ml，在组织捣碎机中捣成匀 浆。
动物组织核酸的提取实验报告
动物组织核酸的提取实验报告
动物组织细胞中的核糖核酸(RNA)与脱氧核糖孩酸(DNA)大部分与蛋白质结合形成核蛋白。
核蛋白可被三氯醋酸沉淀，再用95%乙醇加热可以除去附着在沉淀上的脂类杂质，然后用10%NaCl溶液提取出核酸的钠盐，加入醇可使核酸钠沉淀析出。
先用水由动物肝中提出核蛋白，再籍酚将核酸与蛋白质之间的结合键断裂，并用乙醚抽提去蛋白质及其它杂质，最后用乙醇将核酸沉淀。
核酸(RNA、DNA)可被硫酸水解产生磷酸。
有机碱和戊糖。
此三类化合物可用下列方法鉴定之。
1、磷酸:能与钼酸试剂作用生成磷钼酸，后者在还原剂的作用下。
还原成兰色的钼兰。
常用的还原剂有氨基苯磺酸、氯化亚锡，维生素C等。
H3PO4＋12H2Mo04→H3PO4·12Mo03+12H20H3P04·12Mo03
H3P04·6Mo03·3Mo205
2、嘌呤碱:能与苦味酸作用形成针状结晶
3、戊糖:
(⑴)核糖:经与强酸(盐酸与硫酸)共热生成糠醛，后者可与3;5二羟甲基苯缩合成绿色化合物。
(2)脱氧核糖:在强酸中加热，可生成o一羟基y一酮基戊醛，后者再与二苯胺作用生成一蓝色化合物。
组织细胞DNA提取
组织/细胞DNA提取一．组织准备取10-20mg新鲜或解冻组织用PBS洗一下，用剪刀尽可能剪成碎块，对于一些坚硬组织也可以进行液氮研磨。
转移组织在 1.5ml微量离心管中再加入500ul预热的TNES （T:10mmol/LTris-HCl,N:NP40表面活性剂,E:1mmol/LEDTA;通过螯合金属离子配体抑制DNA酶的活性，S:1%SDS;离子型表明活性剂；①溶解细胞膜蛋白从而破坏细胞膜；②解聚细胞里的核蛋白；③与蛋白形成复合物）和10mg/mL3ul蛋白酶K(分解蛋白质，破坏细胞膜）。
颠倒混匀，放置55度孵育1-24h。
二．蛋白质沉淀1.先用离心机13000g离心8min，小心移取含DNA的上清液到新标记好的离心管中2.再加入500ul异丙醇，轻柔颠倒混合溶液直至形成白色线状DNA絮状物，再在离心机上13000g离心8min，弃掉上清（不要碰到白色沉淀）3.为了充分去除蛋白质，可用酚氯仿（苯酚：强蛋白变性剂&氯仿：蛋白变性剂，与水不溶，与苯酚互溶，可以带走残余的酚/能降低分子表明张力，减少抽提过程中泡沫的产生，同时有助于离心后保持三相稳定）进行第二次抽提：1）向弃上清后的离心管里加100ul DNA酶free H2O，再加100ul酚氯仿充分混匀2）在13000g离心8min小心移取上清液（最上层：水相；含DNA，中层：变性蛋白，下层有机溶剂相；含脂类杂质）到新标记的离心管4.再加入等体积500ul50%的异丙醇，上下翻转混合均匀，同样再13000g离心8min，小心弃去上清5.再加入1ml70%乙醇（洗涤可去除残余的盐离子）洗涤后13000g离心8min，弃掉上清。
然后瞬离一下，用针尖去尽多余液体，开盖挥干2min6.最后再加100-200ulDNA酶freeH2O ,55度溶解，测浓度。
dna提取及测定实验报告
dna提取及测定实验报告DNA 提取及测定实验报告一、实验目的本次实验的主要目的是掌握从生物样本中提取 DNA 的方法，并对提取的 DNA 进行浓度和纯度的测定，以了解样本中 DNA 的质量和数量。
二、实验原理DNA 是遗传信息的携带者，存在于细胞核和线粒体等细胞器中。
在提取 DNA 的过程中，需要破碎细胞，使 DNA 释放出来，然后通过一系列的化学和物理方法去除蛋白质、RNA 等杂质，从而获得纯净的DNA 。
DNA 在 260nm 处有特征性的吸收峰，其吸收值与 DNA 的浓度成正比。
同时，通过测定 260nm 和 280nm 处的吸光度比值（A260/A280），可以评估 DNA 的纯度。
纯 DNA 的 A260/A280 比值约为 18。
三、实验材料和仪器1、实验材料新鲜的动物肝脏组织裂解液（包含 TrisHCl、EDTA、NaCl 等）蛋白酶 K无水乙醇氯仿：异戊醇（24:1）RNA 酶TE 缓冲液（TrisHCl、EDTA）2、实验仪器高速冷冻离心机移液器恒温水浴锅紫外分光光度计微量移液器离心管玻璃棒四、实验步骤1、样本处理称取约 05g 新鲜的动物肝脏组织，用剪刀剪碎后放入匀浆器中，加入适量的裂解液，充分匀浆。
2、消化蛋白质将匀浆液转移至离心管中，加入蛋白酶 K 至终浓度为100μg/ml，在 55℃水浴锅中孵育 1-2 小时，期间不时轻轻搅拌，以充分消化蛋白质。
3、去除蛋白质和 RNA加入等体积的氯仿：异戊醇（24:1），轻轻颠倒离心管充分混匀，然后在 4℃下以 12000rpm 离心 15 分钟。
吸取上清液至新的离心管中，加入 2 倍体积的无水乙醇，轻轻颠倒离心管，可见白色的 DNA 沉淀出现。
4、洗涤 DNA将沉淀用 70%的乙醇洗涤 2 次，每次在 4℃下以 12000rpm 离心 5 分钟，去除上清液。
5、溶解 DNA待乙醇挥发干净后，加入适量的 TE 缓冲液溶解 DNA ，置于 4℃冰箱保存备用。
DNA提取方法和步骤
DNA提取方法和步骤DNA提取是生物学实验中常见的操作步骤，用于从细胞或组织中提取纯化DNA。
DNA提取的主要目的是获得纯净的DNA样品，以便进行后续的实验，如PCR、限制酶切、测序等。
下面我们将详细介绍DNA提取的方法和步骤。
1.细胞破碎：将待提取DNA的细胞或组织进行破碎，以释放细胞内的DNA。
细胞破碎的方法有很多种，包括机械破碎、酶解、热破碎等。
其中，常用的方法是机械破碎，如用搅拌器或超声波振荡器将样品强力搅拌或振荡，以破坏细胞膜和细胞壁。
2.蛋白质除去：细胞破碎后，通过蛋白酶的作用，将细胞内的蛋白质降解，并与蛋白质结合的DNA一同除去。
常用的蛋白酶有蛋白酶K、丝氨酸蛋白酶等。
需要注意的是，蛋白酶的适宜浓度和作用时间需要根据实验的要求进行优化。
3.DNA纯化：在蛋白质除去后，将细胞产生的碱基、RNA等杂质与DNA分离。
常用的纯化方法有酚/氯仿方法、盐方法和硅胶柱法等。
其中，酚/氯仿方法是最早被使用的DNA纯化方法，其基本原理是将DNA与蛋白质、RNA等杂质分离，从而得到纯净的DNA。
酚/氯仿方法的步骤如下：a.向破碎细胞溶液中加入等体积的酚/氯仿混合液，轻轻摇晃离心管混匀，使DNA分配在有机相和水相之间。
b.离心管在高速离心机中离心15分钟，使混合液分为有机相、界面层和水相三个层次。
c.使用移液器将上清液（水相）转移到新的离心管中，注意避免吸入有机相。
d. 向上清液中加入1倍体积的冰冷异丙醇（Isopropanol），使DNA沉淀。
使用移液器轻轻颠倒离心管使DNA沉淀。
e.在-20℃冷冻保存30分钟或在室温下沉淀15分钟，以便DNA更好地沉淀。
f.在高速离心机中离心DNA沉淀，沉淀时间约为10分钟，沉淀结束后将上清液倒掉。
g.用70%乙醇洗涤DNA沉淀，然后在室温下晾干。
h.使用适量的缓冲液（如TE缓冲液）重新溶解DNA。
4.DNA沉淀：将纯化后的DNA样品进行沉淀，以去除残留的盐、酚、异丙醇等。
植物组织中dna的提取及鉴定实验报告
植物组织中dna的提取及鉴定实验报告实验目的：1、了解植物组织中DNA的提取和鉴定方法；2、学习DNA凝胶电泳和显色的实验操作；3、掌握实验数据处理和分析方法。
实验原理：DNA提取：DNA提取是从生物体组织中分离出DNA分子的过程。
植物组织的DNA提取主要采用CTAB法，其基本步骤如下：1. 将植物样本冷冻在液氮或在-80℃的冰箱中保存。
2. 取出植物组织并磨碎，用盐水淋洗去表面的杂质。
3. 加入抑制物质，如PVP（聚乙烯吡咯烷酮）和β-多聚糖。
4. 加入CTAB提取缓冲液，破解细胞壁并溶解细胞质。
5. 加入丙酮使DNA沉淀。
6. 安排离心管，离心沉淀。
7. 用乙醇洗涤、重悬DNA。
DNA鉴定：鉴定常用的方法包括电泳、吸光度法、荧光PCR 等。
本实验采用琼脂糖凝胶电泳法，基本步骤如下：1. 制备琼脂糖凝胶。
2. 调制电泳缓冲液。
3. 加载DNA样品。
4. 进行电泳。
5. 显色染色。
实验材料：1、植物样本（如玉米叶片、小麦胚芽等）2、CTAB提取缓冲液（含CTAB，EDTA，NaCl，Tris-HCl等）3、琼脂糖4、电泳缓冲液5、DNA标准品6、DNA分子量标记实验步骤：1. 取少量植物样本，将其用盐水淋洗，除去表面污垢和杂质。
2. 装入离心管并加入CTAB提取缓冲液，放在60℃水浴中孵育20分钟。
3. 加入冷丙酮沉淀DNA，离心5分钟。
4. 加入70%乙醇，洗涤DNA，离心5分钟。
5. 将DNA重悬于1 x TE缓冲液中，放在冰箱中储存。
6. 取一定体积的DNA样品，加入适量电泳缓冲液稀释。
7. 制备含DNA分子量标记的DNA样品，混合后加入琼脂糖凝胶槽中。
8. 加载DNA样品，与分子量标记一起进行琼脂糖凝胶电泳。
9. 进行电泳10-20分钟，直至DNA分子离子迁移完毕。
10. 取出琼脂糖凝胶，进行染色与分析。
实验结果：通过电泳可见DNA样品的带状图谱，观察带状图谱的大小、稠密程度、条带间距和条带的清晰度等特征，进而分析DNA样品的品质和纯度。
动物组织细胞基因组DNA提取
动物组织细胞基因组DNA提取一、实验原理真核生物的一切有核细胞（包括培养细胞）都能用来制备基因组DNA。
真核生物的DNA 是以染色体的形式存在于细胞核内，因此，制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。
提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。
蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA（乙二胺四乙酸二钠）存在下保持很高的活性。
在匀浆后提取DNA的反应体系中，SDS可破坏细胞膜、核膜，并使组织蛋白与DNA分离，EDTA则抑制细胞中Dnase的活性；而蛋白酶K可将蛋白质降解成小肽或氨基酸，使DNA 分子完整地分离出来。
二、仪器及试剂1. 仪器：恒温水浴锅、台式离心机、紫外分光光度计（GeneQuant）、移液器、玻璃匀浆器、离心管（灭菌）、吸头（灭菌）2. 试剂：（1）细胞裂解缓冲液：Tris (pH8.0) 100 mmol/LEDTA (pH 8.0) 500 mmol/LNaCL 20 mmol/LSDS 10%胰RNA酶20ug/ml（2）蛋白酶K：称取20mg蛋白酶k溶于1ml灭菌的双蒸水中，?C20℃备用。
（3）TE缓冲液（pH 8.0）：高压灭菌，室温贮存。
（4）酚?氯仿?异戊醇（25:24:1）、（5）异丙醇、冷无水乙醇、70%乙醇、灭菌水。
三、操作步骤1. 取新鲜或冰冻动物组织块0.1g（0.5cm3），尽量剪碎。
置于玻璃匀浆器中，加入1ml的细胞裂解缓冲液匀浆至不见组织块，转入1.5ml 离心管中，加入蛋白酶K （500ug/ml）20μl，混匀。
在65℃恒温水浴锅中水浴30min，也可转入37℃水浴12～24h，间歇振荡离心管数次。
于台式离心机以12000 rpm离心5min，取上清液入另一离心管中。
DNA提取 Protocol
DNA提取是将生物体中的DNA分子从细胞或组织中分离出来，并将其纯化成为一个可进行分析的过程。
下面是DNA提取的实验原理、所需试剂和耗材、实验仪器、准备工作、实验方法、注意事项、常见问题及解决方法。
一、实验原理DNA提取的实验原理是基于DNA分子的特性，它具有以下几个特点：1.DNA分子是细胞核中的主要遗传物质，它与蛋白质等其他物质结合成染色体。
2.DNA分子具有极性，即亲水基团和疏水基团。
在细胞中，DNA分子的疏水基团与蛋白质结合，亲水基团暴露于水中。
3.在一定浓度的氯化钠溶液中，DNA分子会从细胞中释放出来，并与蛋白质等其他物质分离。
4.通过加入一些化学试剂，如苯酚、氯仿等，可以将DNA分子进一步纯化，去除蛋白质等杂质。
二、所需试剂和耗材1.试剂：o氯化钠：用于溶解细胞中的DNA分子。
o苯酚：用于沉淀DNA分子。
o氯仿：用于去除蛋白质等杂质。
o乙醇：用于沉淀和洗涤DNA分子。
o氢氧化钠、盐酸：用于调整pH值。
2.耗材：o移液器及枪头：用于精确加样。
o离心管和盖子：用于混合和离心溶液。
o过滤器：用于过滤溶液中的杂质。
o无菌水：用于稀释和配制溶液。
o无菌塑料袋：用于保存样品。
三、实验仪器1.实验室搅拌器：用于混合溶液。
2.高速冷冻离心机：用于离心和分离DNA分子。
3.水浴锅：用于加热溶液。
4.无菌工作台或超净工作台：用于进行无菌操作。
5.分光光度计：用于测量DNA浓度和质量。
6.电泳仪和电泳槽：用于分析DNA样品。
7.显微镜：观察细胞生长状态和DNA提取过程。
四、准备工作1.仔细阅读实验步骤和注意事项，了解所需的试剂和耗材及其使用方法。
2.准备好所需的试剂和耗材，并确保它们处于保质期内。
3.检查实验室内是否具备上述实验仪器，并确保其正常运行。
4.用70%乙醇擦拭实验台面，以确保无菌环境。
5.用高压蒸汽灭菌法灭菌所有的实验器具，包括离心管、移液器等，需在适当的压力和温度下进行灭菌处理，以消除所有潜在的污染源。
dna的粗提取实验报告
dna的粗提取实验报告DNA的粗提取实验报告引言DNA（脱氧核糖核酸）是生物体中负责遗传信息传递的分子，它的提取是进行分子生物学实验的基础步骤之一。
本实验旨在通过简单的方法提取DNA，并观察提取效果。
材料与方法材料：- 植物组织（如洋葱、豆芽等）- 高渗盐溶液（含有盐分的溶液，如食盐溶液）- 咖啡过滤纸- 酒精（酒精浓度为70%）- 水方法：1. 将植物组织切碎，使细胞破裂，释放DNA。
2. 将切碎的植物组织放入一个容器中，加入高渗盐溶液，搅拌均匀。
3. 将搅拌后的溶液过滤，使细胞碎片和其他杂质被滤掉，得到澄清的液体。
4. 将澄清的液体倒入一个试管中，加入等量的酒精，并缓慢倾斜试管，使酒精与液体缓慢混合。
5. 观察酒精与液体的交界面，可以看到白色的DNA沉淀。
6. 使用酒精漂浮在DNA沉淀上方的方法，将DNA转移到另一个容器中。
7. 加入适量的水，溶解DNA。
结果与讨论通过上述方法，我们成功地从植物组织中提取到了DNA。
观察到的白色沉淀物就是DNA，其形状呈线状或颗粒状。
实验过程中，我们注意到以下几个现象：1. 细胞破裂：切碎植物组织的过程中，细胞膜被破坏，使DNA从细胞内释放出来。
这一步骤的重要性在于提供了DNA的来源。
2. 高渗盐溶液：高渗盐溶液的作用是破坏细胞膜和核膜，使DNA从细胞内释放出来。
高渗盐溶液中含有盐分，可以改变细胞内外的渗透压，进而破坏细胞膜和核膜。
3. 过滤：通过过滤，我们可以去除细胞碎片和其他杂质，得到澄清的液体。
这一步骤的目的是减少后续操作中DNA沉淀的杂质。
4. 酒精沉淀：加入酒精后，DNA会从溶液中沉淀出来。
酒精与溶液的混合过程中，DNA会聚集在交界面上形成白色沉淀物。
这是因为DNA在酒精中不溶，而且比较重，所以会沉淀下来。
5. DNA的溶解：将DNA从酒精中转移到水中后，加入适量的水，使DNA溶解。
DNA在水中溶解后，呈现出透明的溶液。
本实验采用的是粗提取方法，所得到的DNA并不纯净。
实验七 植物组织中DNA的提取
五、思考题：
核酸提取过程中的注意事项？
核酸提取过程中的注意事项： （1）避免过酸过碱或高温环境，合适的T：0－4℃，
而CTAB溶于异丙醇。
三、实验材料、仪器和试剂：
1、实验材料：三叶草
2、仪器：
(1)电热恒温水浴锅 (3)液氮罐 (2)离心机 (4)研钵等
3、试剂： （1）CTAB分离缓冲液：
2%CTAB，1.4M NaCl，
20mM EDTA，100mM Tris-HCl (pH8.0),0.2%巯基乙醇共100ml
pH4-9；
（2）防止机械力的切割作用，避免剧烈振荡；
（3）防止核酸酶的降解作用，可加入抑制剂－EDTA， 柠檬酸钠；
（4）整个操作步骤应尽量简化，缩短实验过程，降 低，减少核酸变性、降解、机械切割的机会。
终于下课了！！
5、用开口较大的滴管取出上层水相于另一离心管中，加入2/3体 积预冷的异丙醇，轻轻混匀，使DNA沉淀，并与CTAB分离。 （注意现象）
4、加入等体积的氯仿－异戊醇，轻轻摇动，混匀， 4000r/min，离心10分钟。
6、收集DNA：
（1）如呈可见的丝状DN状，再2000r/min离心2min，小心倒去 上清液。
（2）洗涤缓冲液：75%乙醇，100mM
乙酸铵共100ml
（3）氯仿：异戊醇＝24：1
（4）异丙醇
四、实验步骤：
（一）植物组织DNA的提取：
1、取8mlCTAB分离缓冲液加入离心试管中，于60℃水浴预热。 2、称取2g新鲜叶片于预冷的研钵中，加入液氮研磨细粉末。 3、将叶片粉末直接加入预热的CTAB分离液中，混匀，60℃水浴 保温30分钟。 4、加入等体积的氯仿－异戊醇，轻轻摇动，混匀，4000r/min， 离心10分钟。
dna粗提取实验流程
dna粗提取实验流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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DNA提取实验报告
DNA提取实验报告实验报告：DNA提取实验一、引言DNA提取是生物学实验中常见且重要的步骤，可以从细胞或组织中分离出DNA分子，并将其用于后续的分子生物学研究。
DNA提取可以用于基因组测序、PCR、限制性酶切、基因重组等实验。
本实验旨在通过一系列步骤，从土壤样品中提取纯度较高的DNA。
二、材料与方法材料：1.细菌培养基和试管2.无菌吸管和无菌离心管3.无菌培养皿和微量移液器4.DNA提取试剂盒（包括溶液、溶剂和酶等）5.离心机和冷冻干燥机方法：1.准备土壤样品，将其称取0.5克加入细菌培养基中。
2.震荡培养皿，使土壤样品均匀悬浮在细菌培养基中。
3.将培养皿放入震荡器中，在37°C恒温下震荡培养24小时。
4. 从培养液中取出2ml用无菌离心管离心2分钟，根据菌落情况可调整离心时间。
5. 倒出上清液后，加入0.5ml TE溶液进行洗涤。
6. 离心2分钟后，倒出上清液，加入0.5ml溶胀液进行洗涤。
7. 在离心后，倒出上清液，加入0.5ml各种试剂进行洗涤和裂解。
8.将洗涤和裂解好的液体转移到另一个无菌离心管中，用冷冻干燥机中15分钟。
9.用无菌离心管接着进行DNA纯化、酶切和PCR等实验。
三、结果与讨论本实验成功从土壤样品中提取到了较高纯度的DNA，提取的DNA量为300ng/ul。
通过电泳检测，可以看到DNA条带较为清晰，没有明显的降解。
这说明提取步骤中的洗涤和裂解等操作都较为有效，成功地去除了样品中的杂质和抑制物，使得提取的DNA纯度较高。
此外，实验中使用的试剂盒也起到了很好的作用，提供了高效的DNA提取试剂和相关酶。
DNA提取实验中有几个关键的步骤，包括洗涤、裂解和纯化。
洗涤过程中，TE溶液可以有效去除土壤样品中的盐类和细胞残渣，溶胀液可以去除蛋白质和脂类等杂质。
裂解过程中，酶的作用可以有效裂解细胞壁和细胞膜，释放DNA分子。
纯化过程中，通过离心和冷冻干燥等操作，可以将DNA分子重积到离心管底部，并去除杂质。
动物组织和细胞中核酸的提取和测定_
实验九动物组织和细胞中核酸的提取和测定第一部分动物组织和细胞中DNA和RNA的提取【实验目的】学习从组织和细胞中提取DNA和RNA的方法【实验原理】1.从动物组织和细胞中提取DNADNA存在于细胞核中。
提取DNA的方法首先需要温和裂解细胞及溶解DNA的技术，接着需采用化学和酶学方法，除去杂蛋白、RNA及其他的大分子。
本实验在EDTA（螯合二价阳离子以抑制Dnase）存在的情况下，用蛋白酶K消化真核细胞和组织，用去垢剂（如SDS，十二烷基磺酸钠）溶解细胞膜并使蛋白质变性。
核酸通过有机溶剂抽提得以纯化，污染的RNA通过RNase消化清除。
这个方法可产生十微克至数百微克的DNA，适用于标准琼脂糖凝胶上的Southern分析，可用作PCR反应的模板，以及用于构建基因组DNA文库。
2.从动物组织和细胞中提取RNARNA存在于细胞质及核中，是一种极易降解的核酸分子。
为了快速从细胞中分离完整的RNA，许多方法都用到了高浓度的强变性剂硫氰酸胍使细胞破裂。
高浓度的硫氰酸胍还使细胞内的各种RNA 酶失活，使释放出的RNA不被降解。
细胞裂解后存在于裂解溶液内的有RNA，核DNA，蛋白质和细胞残片，通过酚，氯仿等有机溶剂处理，离心，使RNA最终与其它细胞组分分离开来。
【实验材料】1.实验器材研钵和研棒，匀浆机，橡胶刮棒，低温冷冻离心机，恒温水浴，宽口移液管，锤子，塑料袋，涡旋。
2.实验试剂(1)裂解缓冲液：10mmol/L Tris-Cl(PH8.0)，0.1mol/L EDTA(PH8.0)，0.5%(m/V)SDS，20µg/mg无Dnase 的胰RNase，裂解缓冲液的前三种成分可预先混合并于室温保存。
RNase在用前适量加入。
(2)溶液D(变性液)：4mol/L硫氰酸胍，25mmol/L柠檬酸钠.2H20，0.5%(m/V)月桂基肌酸钠，0.1mol/L β-巯基乙醇，将250g硫氰酸胍、0.75mol/L(PH7.0)柠檬酸钠17.6ml和26.4ml10%(m/V)月桂基肌酸钠溶于293ml水中.加入搅拌子于磁力搅拌器上65℃混匀,直至完全溶解。
实验报告DNA提取实验步骤及结果分析
实验报告DNA提取实验步骤及结果分析实验报告：DNA提取实验步骤及结果分析一、引言DNA提取是分子生物学研究中的关键步骤之一，能够从样本中纯化出DNA，用于后续的分析和实验。
本实验旨在探究DNA提取的步骤和方法，并对提取结果进行分析和评估。
二、实验步骤1. 样本准备：选择合适的样本进行DNA提取，如植物组织、动物组织或微生物培养物。
样本应储存于-80℃的冰箱中，以防止DNA降解。
2. 细胞破碎：将样本取出，加入细胞破碎缓冲液，使用均质机或研钵等方法将细胞破碎，使细胞膜被破坏，释放DNA。
3. 蛋白酶处理：加入蛋白酶，将样本中的蛋白质降解，以去除蛋白质的干扰。
4. 酚/氯仿提取：加入等体积的酚/氯仿混合液，混匀后离心，使混合液分为上下两层，上层为DNA上清液。
5. DNA沉淀：将DNA上清液转移至新离心管中，加入等体积的冷异丙醇，轻轻颠倒混匀，待DNA逐渐沉淀出来。
6. 洗涤：使用70%的乙醇洗涤DNA沉淀物，以去除异丙醇和其他杂质。
7. 重溶：将洗涤后的DNA沉淀物用适量的TE缓冲液重溶，使其溶解。
8. 定量和纯化：使用紫外可见分光光度计测定DNA的浓度，并使用凝胶电泳验证DNA的纯度和完整性。
三、结果分析通过以上步骤，我们成功提取了DNA，并进行了初步的纯化。
下面是对实验结果进行分析和评估：1. DNA提取效果评估：- 可见分光光度计测定DNA浓度：根据光度计读数，我们可以计算出DNA的浓度。
通常，越高的读数代表着更高的DNA浓度。
- 凝胶电泳：通过凝胶电泳，我们可以观察到DNA在琼脂糖凝胶上的迁移情况。
理想情况下，DNA应该呈现出清晰的条带，并且没有明显的降解现象。
2. 实验结果评价：- DNA浓度：根据光度计读数，我们可以评估DNA提取的效果。
如果浓度较高，说明提取效果较好；如果浓度较低，说明可能存在提取效果不佳或DNA被降解的情况。
- DNA完整性：通过观察凝胶电泳结果，我们可以评估提取的DNA是否完整。
动物组织细胞基因组DNA提取
动物组织细胞基因组DNA提取一、实验原理真核生物的一切有核细胞（包括培养细胞）都能用来制备基因组DNA。
真核生物的DNA 是以染色体的形式存在于细胞核内，因此，制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、月旨类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。
提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。
蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA（乙二胺四乙酸二钠）存在下保持很高的活性。
在匀浆后提取DNA的反应体系中，SDS可破坏细胞膜、核膜，并使组织蛋白与DNA分离,EDTA则抑制细胞中Dnase的活性;而蛋白酶K可将蛋白质降解成小肽或氨基酸，使DNA 分子完整地分离出来。
二、仪器及试剂1. 仪器：恒温水浴锅、台式离心机、紫外分光光度计（GeneQuant）、移液器、玻璃匀浆器、离心管（灭菌）、吸头（灭菌）2. 试剂：（1）细胞裂解缓冲液：Tris（pH8.0）100mmol/LEDTA（pH8.0）500mmol/LNaCL20mmol/LSDS10%胰RNA酶20ug/ml(2)蛋白酶K：称取20mg蛋白酶k溶于1ml灭菌的双蒸水中，C20°C备用。
(3)TE缓冲液(pH8.0):高压灭菌，室温贮存。
(4)酚？氯仿？异戊醇(25:24:1)、(5)异丙醇、冷无水乙醇、70%乙醇、灭菌水。
三、操作步骤1.取新鲜或冰冻动物组织块0.1g(0.5cm3)，尽量剪碎。
置于玻璃匀浆器中，加入1ml的细胞裂解缓冲液匀浆至不见组织块，转入1.5ml离心管中，加入蛋白酶K(500ug/ml)20pl,混匀。
在65C恒温水浴锅中水浴30min,也可转入37C水浴12〜24h,间歇振荡离心管数次。
于台式离心机以12000rpm离心5min,取上清液入另一离心管中。
2•加2倍体积异丙醇，倒转混匀后，可以看见丝状物，用100ul吸头挑出，凉干，用200ulTE 重新溶解。
动物组织提取实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握从动物组织中提取DNA的基本原理和方法。
2. 熟悉实验操作流程，包括组织处理、裂解、纯化、沉淀和溶解等步骤。
3. 学习使用酚-氯仿法提取DNA，并掌握相关试剂和仪器的使用。
二、实验原理动物组织中的DNA主要以染色体的形式存在于细胞核内。
提取DNA的目的是将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，同时保持DNA分子的完整性。
本实验采用酚-氯仿法提取DNA，其原理如下：1. 使用SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K处理组织，破坏细胞膜，使蛋白质变性并溶解。
2. 加入酚和氯仿/异戊醇，通过酚的变性作用和氯仿/异戊醇的相容性，使蛋白质和DNA分离。
3. 通过离心，将蛋白质和杂质与DNA分离。
4. 用乙醇沉淀DNA，得到纯净的DNA。
三、实验材料1. 实验动物：小鼠或鸡2. 试剂：SDS、蛋白酶K、酚、氯仿/异戊醇、乙醇、TE缓冲液、NaCl、EDTA、液氮、离心机、移液器、玻璃匀浆器、离心管、吸头等四、实验步骤1. 组织处理- 称取适量动物组织（如肝脏、肌肉等），用液氮迅速冷冻。
- 将冷冻的组织移入研钵中，加入适量的裂解缓冲液（含SDS、蛋白酶K、NaCl、EDTA等），用研钵研磨至匀浆状。
- 将匀浆移入离心管中，加入等体积的酚和氯仿/异戊醇，充分混匀。
- 4℃下静置30分钟，待蛋白质变性沉淀。
2. 离心分离- 将离心管以12,000 rpm离心10分钟，弃去上清液。
- 将沉淀中加入适量的TE缓冲液，充分混匀。
- 再次以12,000 rpm离心10分钟，弃去上清液。
3. DNA沉淀- 向沉淀中加入适量的乙醇，混匀后静置2-3分钟。
- 将沉淀移入新的离心管中，以12,000 rpm离心5分钟。
- 弃去上清液，用75%乙醇洗涤沉淀1次。
- 将沉淀干燥，加入适量的TE缓冲液溶解。
4. DNA纯化- 将溶解的DNA溶液通过0.22 μm滤膜过滤，去除杂质。
- 使用紫外分光光度计测定DNA浓度。
组织DNA提取原理和步骤详细
裂解细胞膜、核膜
DNP 苯酚、氯仿
DNA（RNA） RNA酶 Protase Ｋ 苯酚、乙醇
纯DNA 紫外定量
Ⅰ机械法 Ⅱ物理法 Ⅲ化学法
各种组织细胞破碎方法
细胞破碎方法
1匀浆法
2捣碎法 3研磨法 1超声法 2反复冻融法 3冷热交替法 4低渗裂解 1有机溶剂 2去垢剂 3酶解法
凝胶电泳法： 基因组DNA电泳，在电场中泳动慢，如果发生降解，可出现 电泳图谱脱尾现象； 总RNA电泳，观测各条带的含量，提示是否存在RNA降解； 如加样槽中存在条带，可能是DNA污染。
核酸的贮存——DNA保存 (storage)
1）短期贮存： 4℃或-20℃存放于TE（tris和EDTA）缓冲液中。 TE缓冲液的pH与DNA 贮存有关，pH为8时，可减少 DNA脱氨反应，pH低于7.0时DNA容易变性。
应用
机体软组织
动物韧性组织 细菌、酵母 细胞混悬液 培养细胞 细菌、病毒 红细胞 细菌、酵母 组织、培养细胞 细菌、酵母
破裂细胞 、释放核酸
DNA酚抽提法示意图
DNA鉴定(DNA identification)
浓度鉴定(concentration) 纯度鉴定(purity) 完整性鉴定(integrity)
紫外分光光度法： 在260nm和280nm处测定DNA溶液的光吸收，纯的 DNA， A260与A280之比应在1.80；低于此值表明制备 物中留有蛋白质成份。高于此值表明有RNA的残留量。 纯的RNA A260与A280之比应在2.0。 A260/A280比值是纯度检测的重要指标。
完整性鉴定(integrity identification)
基因组dna的提取实验报告
基因组dna的提取实验报告一、实验目的本实验旨在学习基因组DNA的提取方法，掌握DNA提取实验的基本步骤和技巧。
二、实验原理DNA提取是生物学中最基础的实验之一，其目的是从细胞或组织中分离出DNA。
DNA提取的原理是利用化学试剂破坏细胞膜和核膜，使细胞内部的DNA裸露出来，并通过特定方法纯化出来。
三、实验材料1. 细菌培养液2. TE缓冲液（10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0）3. 蛋白酶K溶液（20 mg/mL）4. 洗涤缓冲液（10 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, pH 8.0）5. 氢氧化钠（NaOH）溶液（0.2 M）6. 氯化钾（KCl）溶液（1 M）7. 高盐缓冲液（5 M NaCl, 1 M Tris-HCl, pH 8.0）8. 等体积异丙醇9. 离心管10. 微量离心管四、实验步骤1. 取细菌培养液0.5 mL，离心10分钟，将上清液倒掉。
2. 加入0.5 mL TE缓冲液和20 μL蛋白酶K溶液，室温下孵育10分钟。
3. 加入0.6 mL洗涤缓冲液，混匀后离心1分钟。
4. 倒掉上清液，加入0.2 mL氢氧化钠溶液，轻轻颠倒混匀，室温下孵育5分钟。
5. 加入0.3 mL氯化钾溶液，轻轻颠倒混匀后离心1分钟。
6. 将上清液转移到新的离心管中，加入等体积异丙醇，轻轻颠倒混匀后放置于-20℃冷冻箱中保存至少30分钟。
7. 离心10分钟后将上清液倒掉，并用70%乙醇洗涤沉淀一次。
8. 将沉淀用TE缓冲液重悬即可。
五、实验注意事项1. 实验过程中要注意无菌操作。
2. 操作过程中要避免DNA的降解和污染。
3. 实验前应做好必要的准备工作，并按照步骤进行操作。
六、实验结果通过本实验，成功提取出了细菌的基因组DNA，并经过浓度检测和质量检测，证明提取的DNA质量较好，可以用于后续实验。
七、实验总结本次实验通过对基因组DNA的提取方法进行学习和实践，掌握了基本的操作技巧和注意事项。
动物医学 生化实验《实验五 动物组织中DNA的制备》课件
柠檬酸盐，EDห้องสมุดไป่ตู้A等螯合剂 除DNase 所需 Mg2＋，降低该酶活性。
【 试剂 】 1．NaCl–柠檬酸钠 。 2. NaCl– EDTANa2 。 3．5% SDS 。 4．氯仿–异戊醇溶液 。 5．0.01mol/LNaOH 。 6．95％乙醇 。
实验五 动物组织中DNA的制备
【原理】 将肝脏组织细胞破碎提取细胞核中DNA。 脱氧核糖核蛋白和核糖核蛋白在不同盐溶液
中具不同的溶解度。在0.15mol/L NaCl的稀盐 溶液中核糖核蛋白的溶解度最大，脱氧核糖核蛋 白的溶解度则最小 。在1mol/L NaCl的浓盐溶 液中，脱氧核糖核蛋白的溶解度增大，核糖核蛋 白的溶解度则明显降低。
【器材】 1．玻璃匀浆器。 2 ．离心机 。 3 ．30ml离心管。 4 ．加样枪。
【材料】 肝脏
【操作】 1.取1g肝，置入玻璃匀浆器，加入2ml
0.15mol/L NaCl–0.015mol/L柠檬酸钠溶液， 匀浆，使细胞充分破碎，再加该溶液至5ml。 2 .转移至5ml离心管中，6 000r/min离心 15min。弃上清，沉淀中加入4倍体积 0.15mol/L NaCl–0.015mol/L柠檬酸钠溶液 搅匀， 6 000r/min离心15min ，弃上清， 留沉淀。
3.将沉淀中加入5倍体积0.015 mol/L NaCl–0.1 mol/L EDTANa2 溶液，搅 拌溶解。边搅边滴加5%SDS溶液，至 SDS的终浓度达1%为止。此时溶液变 粘稠。加5mol/L NaCl使终浓度达 1mol/L，溶液由稠变稀。
4 .将溶液转入30ml塑料离心管中，加入等 体积的氯仿–异戊醇溶液振荡混匀，静止 10min。3 000r/min离心10min 。
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7) 室温12000rpm离心8～10min（若分层效果不好可适当延长时间）；
8) 用宽口吸头小心移取上清400μL，注意不要取中间白色层（若上清仍混浊，可再重复3～8抽提1次）；
9) 向上清中加入1/10体积的NaAc，温和地充分混匀，再向溶液中加入2.5倍体积的无水乙醇，室温放置5～10min或-20℃放置30min以上；
2) 加入RNase酶（10mg/ml）16μL，37℃水浴消化1h；
3) 向消化液中加入等体积的酚：氯仿：异戊醇，温和地上下颠倒混匀5～8次，室温放置5min；
4) 室温12000rpm离心8～10min（若分层效果不好可适当延长时间）；
5) 用宽口吸头小心移取上清500μL，注意不要取中间白色层；
14) 向沉淀中加入30～50μL的无菌水或TE溶液溶解DNA样品；
3 DNA样品的电泳检测
取样品5μL做电泳检测，观察样品提取的质量,并拍照。
备注：
结果与讨论：
实验记录人签名：
检测项目名称：
样品信息：
实验目的：
操作人:
辅助人:
日期：
实验仪器使用：
超净工作台 电热水浴锅 电热恒温保养箱 隔水式恒温 通风橱 制冰机 台式离心机
0.5M Tris pH8.0
0.5M EDTA pH8.0
3M NaAc ph5.2
ddH2O
10% SDS
以上试剂均高压灭菌。
组织匀浆缓冲液：
100mM NaCl
方法
1 样品处理：
1) 取相应组织0.5～1g（50mg），剪碎，加入5ml(2mL)组织匀浆缓冲液，置于组织研磨器中进行研磨，形成匀浆液；
2) 取1ml已研磨好的匀浆液转入1.5ml离心管，5000rpm离心1～2min，弃上清；
3) 向沉淀中加入1ml组织匀浆缓冲液，迅速重悬后，5000rpm离心1～2min，弃上清；
1mM EDTA pH8.0
Tris平衡酚（pH8.0）：氯仿：异戊醇=25：24：1
氯仿：异戊醇=24:1
无水乙醇
耗材：所用的离心管、吸头等耗材均需高压灭菌。
备注:
10mM Tris pH8.0
25mM EDTA pH8.0
消化缓冲液：
200mM NaCl
20mM Tris pH8.0
50mM EDTA pH8.0
TE缓冲液：
10mM Tris pH8.0
10) 室温12000rpm离心5～8min，弃上清；
11) 向沉淀中加入1ml70～75％的乙醇，温和地上下颠倒混匀5～8次；
12) 室温12000rpm离心2～5min，弃上清；
13) 将离心管轻轻在滤纸上磕几下，以除去残留的液体，短暂离心后用吸头小心取出残留液体,之后将离心管敞口室温放置15min左右或在37℃放置15min左右至无明显的乙醇气味即可；
4) 向沉淀中加入350μL无菌水，迅速重悬后，再加入350μL消化缓冲液，混匀后进行下一步操作。
2 DNA抽提
1) 向上述悬液中加入40μL 10%SDS，10μL蛋白酶K（20mg/ml），温和地上下颠倒混匀8～10次，于50～55℃水浴消化3～5h或消化过夜，其间应不时温和地上下颠倒混匀液体；
台式冷冻离心机 气浴恒温振荡器 水浴式恒温振荡器 超声破碎仪 电泳仪 PCR仪
检测的基本流程：
DNA病毒检测基本流程：DNA制备→PCR扩增→电泳检测。
RNA病毒检测基本流程：RNA制备→反转录→PCR扩增→电泳检测。
试剂
5M NaCl