霍乱弧菌检验程序

霍乱弧菌检验程序

一、检查对象

一天内腹泻三次或三次以上的病人。

二、标本采集及处理

1、采集时间：在未服用抗生素前采样。

2、采集方式：用棉拭子或采便管从肛门插入直肠3—5厘

米取样，必须看到有粪便黏附才可：对于自然排出的水样便、呕吐物及保存液保存的标本可直接接种分离或吸取

0.5ML、成形大便取黄豆左右大小。

3、标本送检：标本采集后应立即送检。若不能立即送检，

可保存于碱性蛋白胨水中尽快送检验。24小时以上才能送检的标本，应使用文一腊二氏保存液保存。

4、标本处理：将标本直接分离接种于4号琼脂及放入

8—10ML碱性蛋白胨水中增菌。

“两管三板”：

送检标本马上接种一个4号琼脂平板、同时碱性蛋白胨水培养管增菌；—8小时后接种增菌管内标本于第二块4号琼脂平板，同时转种第二管碱性蛋白胨水；6—8小时后继续接种第二管碱性蛋白胨水的标本于第三块4号琼脂平板上。

三、检验程序：

1、弧菌形态：

弧菌生长快、菌落大、培养4—5小时，原划线处有菌苔生长，8—10小时可长出小菌落，16小时菌落直径可达2毫米。菌落略带灰色、半透明、扁平、稍隆起、光滑湿润，培养时间延长或室温放置后，菌落略带黄色，中心厚而周围透明，培养基含亚碲酸钾使得菌落成灰色，中心形成黑色金属碲沉淀。在平皿上挑取典型菌落做玻片凝集试验。

2、玻片凝集试验：

首先要注意抗原抗体比例和保证抗原（菌株）的纯洁性，使用O1群和O139群两种诊断血清。如未获单个菌落，可挑取可疑菌苔边缘透明部分做玻片凝集。注意，凝集的菌落应以生理盐水作对照，检查有无自然凝集；然后用此玻片显微镜下看动力（动力活泼如流星样）；再将此玻片革兰氏染色看弧菌形态。

3、弧菌分型：

稻叶型和小川型诊断血清做玻片凝集试验进一步分型。四、报疫程序：

一旦发现阳性可疑标本立即用铁罐保存，通知送检科室，确认病人资料；上报医院总值班2460或2560，派车送海珠区防疫站确证。

五、标本处理：

发现Ⅱ号菌阳性可疑标本，即送标本往防疫站确认。余下的碱性胨水管、直划板等放置于专用铁盒内，留待防疫反馈讯息后，浸5%戊二醛消毒水30分钟后交工人煮沸1小时再清洗或弃置。同时要登记于烈性传染病登记本和强毒菌株及污染物品处理登记本。