体外放射配体结讲义合分析
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体外放射分析-精品医学课件
一、RIA定义
RIA是以抗原抗体的免疫反应为基础，利用非标记抗原 (unlabeled antigen) （标准抗原或待测抗原）与定量的核素标 记抗原(radionuclide labeled antigen)同有限量的特异性抗体 (specific antibody)进行竞争性免疫结合反应(competitive immune binding reaction) ，通过测定放射性复合物的量来计 算出Ag量的一种超微量分析技术。
在固相载体上完成，达到平衡后形成固相的Ag.Ab 复合物， 可与游离部分分离。
➢此方法具有操作简便，迅速，分离效果好，非特异性结合
低等优点。
5．葡萄球菌A蛋白分离法（SPA分离法）
➢多数金黄色葡萄球菌细胞壁中含有A蛋白以共价键的形式
连接在细胞壁上。由于SPA与IgG中的Fc段可发生特异性结 合，经离心分离B与F。
非特异性结合产生的放射性计数
➢结合率：B/T、B/B0、B/F
NSB(Non-specific binding):非特异结合,标记 抗原除了要和特异性抗体结合以外，还要和一些 杂质蛋白或容器的管壁等结合，对我们的分析结 果产生影响。NSB管是用蒸馏水代替特异性抗体， 在相同条件下反应后测得的放射性计数。
[L]+[*L]+[B]=[LB]+[*LB] 2、非竞争性结合分析
Sp.Ab1+Ag=SpAb1.Ag+*Ab2=Sp.Ab1. Ag.*Ab2+*Ab2
四、体外放射分析的概述
（三）放射性测量 放射性测量是定量的基础
第一节 放射免疫分析
(Radioimmunoassay，RIA)
1959年美国的Berson和Yalow 将核 技术与免疫学技术相结合建立了放射免 疫分析法，并首先用于测定血浆胰岛素 浓度，由于该法对医学的巨大贡献， 1977年Yalow获得了Nobel医学奖。
核医学体外放射分析技术课件
有效地排除非特异性物质对结合反应的干 扰。
二、结合反应动力学规律
• 遵守质量作用定律 • [L]+[B] 适当的实验条件 [LB]
衍生设计出两种方法学
• 1、竞争结合（competitive binding) • 过量的配体与有限量的结合剂发生竞争性
结合反应。 • 2、非竞争结合（non-competitive binding) • 过量的结合剂与有限量的配体，在非竞争
的条件下发生结合反应。
衍生设计出两种方法学
• 1、竞争结合（主要应用：放射免疫分析）
• [L]+ [L*]+[B] [LB] +[L*B]
• 2、非竞争结合
•结合在试管 或包被珠上
• Sp.Ab1+Ag Sp.Ab1.Ag
• Sp.Ab1.Ag +Ab2* Sp.Ab1.Ag.Ab2*+Ab2*
优点
• 慢性淋巴细胞性甲状腺炎： • 早期：T3,T4升高，然后降低，
TSH,TGAB,TPOAB升高。 • 甲状腺肿瘤：TG升高。 • 全身性疾病：心血管疾病、肿瘤等： • T3下降，rT3、TSH升高。
（二）肾上腺疾病
• 皮质醇增多症： • ACTH\COR正常情况下有节律分泌，检测
可以与单纯性肥胖区分。 • 原发性醛固酮增多症：尿游离皮质醇
• 反应误差关系 • 精密度图
• 2、准确度：测的值与其标称值之间的 相符程度。
• 3、灵敏度（sensitivity): • 4、特异性(specificity) • 5、稳定性(stability)
（三）质量评价
• 内部质量控制 • 外部质量控制
三、以配体与受体间结合反应 为基础的分析系统
二、结合反应动力学规律
• 遵守质量作用定律 • [L]+[B] 适当的实验条件 [LB]
衍生设计出两种方法学
• 1、竞争结合（competitive binding) • 过量的配体与有限量的结合剂发生竞争性
结合反应。 • 2、非竞争结合（non-competitive binding) • 过量的结合剂与有限量的配体，在非竞争
的条件下发生结合反应。
衍生设计出两种方法学
• 1、竞争结合（主要应用：放射免疫分析）
• [L]+ [L*]+[B] [LB] +[L*B]
• 2、非竞争结合
•结合在试管 或包被珠上
• Sp.Ab1+Ag Sp.Ab1.Ag
• Sp.Ab1.Ag +Ab2* Sp.Ab1.Ag.Ab2*+Ab2*
优点
• 慢性淋巴细胞性甲状腺炎： • 早期：T3,T4升高，然后降低，
TSH,TGAB,TPOAB升高。 • 甲状腺肿瘤：TG升高。 • 全身性疾病：心血管疾病、肿瘤等： • T3下降，rT3、TSH升高。
（二）肾上腺疾病
• 皮质醇增多症： • ACTH\COR正常情况下有节律分泌，检测
可以与单纯性肥胖区分。 • 原发性醛固酮增多症：尿游离皮质醇
• 反应误差关系 • 精密度图
• 2、准确度：测的值与其标称值之间的 相符程度。
• 3、灵敏度（sensitivity): • 4、特异性(specificity) • 5、稳定性(stability)
（三）质量评价
• 内部质量控制 • 外部质量控制
三、以配体与受体间结合反应 为基础的分析系统
放射性配体与受体结合分析实验(RBA)方法
但由于受体数量有限又是可逆反但由于受体数量有限又是可逆反应因此应因此rl受体配体复合物的增加不是直线上升受体配体复合物的增加不是直线上升而是一条上升先快后慢的曲线最后绝大部分受体与配体而是一条上升先快后慢的曲线最后绝大部分受体与配体结合时结合时rl的增加就非常缓慢渐趋水平即受体已经的增加就非常缓慢渐趋水平即受体已经饱和了此即饱和曲线饱和了此即饱和曲线
2、制备膜受体
大鼠断头取脑 分离出目标组织 加10倍体积（V / W）冰冷的缓冲液 用组织匀浆机匀浆3次，每次数秒钟，制成组织匀浆液 组织匀浆液用低温高超离心机离心（12000转/分）3次， 每次20分钟 弃上清液，沉淀（膜受体）放-80度超低温冰箱保存备用 注意： 注意：该项操作所需试剂或仪器 仪器： 仪器：手术器械、组织匀浆机、制冰机、超低温冰箱、低 温高超离心机 试剂： 试剂：超纯水
图2 [RT]对饱和曲线影响 对饱和曲线影响
数学表达
law)： 质量作用定律 (Mass action law)： 受体和配基的结合反应服从可逆反应的质 量作用定律，可用下式表示: 量作用定律，可用下式表示: k1, v1 [R]+[L] －－－－ [RL] k2, v2
（ 1）
上式中，[R]和 为游离受体和游离配基的浓度，[RL]为复合物 上式中，[R]和[L] 为游离受体和游离配基的浓度，[RL]为复合物 浓度，v1和v2为结合速率和解离速率 k1和k2为结合速率常数 为结合速率和解离速率， 浓度，v1和v2为结合速率和解离速率，k1和k2为结合速率常数 (association rate constant) 和解离速率常数 (dissociation rate constant)。 constant)。
实验材料与仪器
实验材料
2、制备膜受体
大鼠断头取脑 分离出目标组织 加10倍体积（V / W）冰冷的缓冲液 用组织匀浆机匀浆3次，每次数秒钟，制成组织匀浆液 组织匀浆液用低温高超离心机离心（12000转/分）3次， 每次20分钟 弃上清液，沉淀（膜受体）放-80度超低温冰箱保存备用 注意： 注意：该项操作所需试剂或仪器 仪器： 仪器：手术器械、组织匀浆机、制冰机、超低温冰箱、低 温高超离心机 试剂： 试剂：超纯水
图2 [RT]对饱和曲线影响 对饱和曲线影响
数学表达
law)： 质量作用定律 (Mass action law)： 受体和配基的结合反应服从可逆反应的质 量作用定律，可用下式表示: 量作用定律，可用下式表示: k1, v1 [R]+[L] －－－－ [RL] k2, v2
（ 1）
上式中，[R]和 为游离受体和游离配基的浓度，[RL]为复合物 上式中，[R]和[L] 为游离受体和游离配基的浓度，[RL]为复合物 浓度，v1和v2为结合速率和解离速率 k1和k2为结合速率常数 为结合速率和解离速率， 浓度，v1和v2为结合速率和解离速率，k1和k2为结合速率常数 (association rate constant) 和解离速率常数 (dissociation rate constant)。 constant)。
实验材料与仪器
实验材料
体外放射分析【40页】
者为竞争性，后者为饱和分析。
以酶与底物间的酶促反 应为基础的分析方法
主要有两类方法
放射酶分析法：以酶为结合剂，测量配 体的含量；
酶的放射化学测定：以放射性标记的底 物为配体，测定酶的活性。
竞争性蛋白质结合分析
基本技术
标准品
质的要求 与待测配体属同类物质 与待测配体有同等的活性和亲和能力 纯度高，不含其它杂质、稳定性好
半对数坐标系制图法
制图方法简便，但易导致主观误差。
B/F (%)
Log X
质量控制
Bo％、NSB％、ED50、RER、CV、 精密度图、质控样品等。
主要方法
放射免疫分析、免疫放射分析、放射受体分析、 受体放射分析、蛋白质竞争结合分析等。
其中以放射免疫分析和免疫放射分的测量，而且可用于具有生物活性的小 分子物质的检测，如血药浓度测定等。
基本原理
竞争性结合分析 放射免疫分析是体外放射分析最有代表性的一
反应原理
Ligand + Receptor + L*
L.R L*.R
受体放射分析
受体放射分析(receptor radioassay) 是以分析受体的数量和性质为目的 一定量受体只能与一定量的标记配体（受体激
动剂和阻断剂）结合，受体具有一定的饱和度 根据复合物的最大放射性及所用标记配体的比
已知Ag浓度
非竞争性分析
免疫放射分析是典型的非竞争性体外放 射分析。它应用标记抗体作为示踪剂， 在反应系统中加入过量的标记抗体、待 测物（或标准品）进行全量反应，未结 合的标记抗体通过加入免疫吸附剂而去 掉，因此，溶液中放射性与待测物的浓 度呈正相关。
基本类型
以抗原抗体间的免疫反应为基础的分析技术
以酶与底物间的酶促反 应为基础的分析方法
主要有两类方法
放射酶分析法：以酶为结合剂，测量配 体的含量；
酶的放射化学测定：以放射性标记的底 物为配体，测定酶的活性。
竞争性蛋白质结合分析
基本技术
标准品
质的要求 与待测配体属同类物质 与待测配体有同等的活性和亲和能力 纯度高，不含其它杂质、稳定性好
半对数坐标系制图法
制图方法简便，但易导致主观误差。
B/F (%)
Log X
质量控制
Bo％、NSB％、ED50、RER、CV、 精密度图、质控样品等。
主要方法
放射免疫分析、免疫放射分析、放射受体分析、 受体放射分析、蛋白质竞争结合分析等。
其中以放射免疫分析和免疫放射分的测量，而且可用于具有生物活性的小 分子物质的检测，如血药浓度测定等。
基本原理
竞争性结合分析 放射免疫分析是体外放射分析最有代表性的一
反应原理
Ligand + Receptor + L*
L.R L*.R
受体放射分析
受体放射分析(receptor radioassay) 是以分析受体的数量和性质为目的 一定量受体只能与一定量的标记配体（受体激
动剂和阻断剂）结合，受体具有一定的饱和度 根据复合物的最大放射性及所用标记配体的比
已知Ag浓度
非竞争性分析
免疫放射分析是典型的非竞争性体外放 射分析。它应用标记抗体作为示踪剂， 在反应系统中加入过量的标记抗体、待 测物（或标准品）进行全量反应，未结 合的标记抗体通过加入免疫吸附剂而去 掉，因此，溶液中放射性与待测物的浓 度呈正相关。
基本类型
以抗原抗体间的免疫反应为基础的分析技术
体外放射配体结合分析
实
验
AFP放射免疫（快速法）测定
AFP放射免疫（快速法）测定
实验报告
姓名 学号 期、班级 实验名称 实验原理 实验方法（步骤） 实验结果 讨论*
AFP放射免疫（快速法）测定
加样
100 μl 100 125 μI-AFP l 抗体 AFP 缓 冲 液
100μl AFP 10ng/ml
100μl AFP 25ng/ml
单克隆抗体涂被固相载体，形成固相
抗体，通常为试管底部； 试管内加入标准品或待测样品，形成 固相抗原抗体复合物 加入放射性核素标记的单克隆抗体， 形成固相抗体-抗原-*抗体复合物 剩余的标记单克隆抗体则留于液相中， 通过洗管洗去 测量试管中的放射性计数，经标准曲 线就可查出待测物含量
反应式
*Ag+ Ab + Ag *Ag-Ab+ *Ag
限量
Ag-Ab + Ag
Ag: 待测抗原 *Ag: 标记抗原 Ab: 抗体 Ag-Ab: 抗原抗体复合物 *Ag-Ab: 标记抗原抗体复合物
放射免疫分析技术原理示意
标准曲线
基本试剂
标准抗原
标记抗原
即标准品，与 待测物具有相同 的化学结构、免 疫学活性， 是RIA的示综剂， 125I，纯度高，合适的 比活性，标记后抗原 免疫活性不受破坏 特异性高，滴 度高，亲和力大
固相-Ab1+Ag （待测） 固相-Ab1-Ag +*Ab2
固相-Ab1-Ag -*Ab2+*Ab2
基本特点
标记物为抗体，不影响抗原的免疫活性 使用的是单克隆抗体，特异性明显提高 单克隆抗体为大分子物质，碘化标记抗体比
抗原容易，产物比较稳定
检测灵敏度较RIA高，且检测范围扩大 操作更为简便、快速 抗体用量大，成本较高 仅适用于蛋白质类大分子物质的检测
受体的放射配体结合分析法【58页】
3、 雌激素受体类 主要为雌激素（ER）。
（三） 受体亚型
受体亚型是指受体分子结构上既有部分相同，也存在 一定差别，它们对同一配体具有不同的亲和力，生物 学上具有不同的效应。
1、用药理学方法可见到，同一种受体的几种激动剂 （拮抗剂）对各亚型都有作用，但作用有相对的选择 性。如，对于α肾上腺受体，哌唑嗪对血管平滑肌收缩 的用较拮弱抗（作α用2）强，（而α1育）亨，宾对则胃相肠反道。平滑肌舒张的拮抗作 2、用放射配体结合分析法可观察到，同一种受体的某 些激动剂（拮抗剂）对各亚型都有特异性结合能力， 但是亲和力不同。
细胞核、浆 、膜 3.受体的增溶和进一步纯化
沉淀：完整细胞、核受体
图8.10 分离细胞组分的一般方法
四、温育 条件
缓冲液
通过多次预实验确定 某个受体的最适离子 强度和pH
时间与温度
最适的时间为完全平 衡时间
温度根据目的不同而 不同（0—37OC）
结合配体和游离配体的分离
目 的 ： B/F的 分 离 ， 一般RIA的分离方法可用于RBA 注意配体与受体的解离速度
5、 识别能力（Recognition）和生物效应一致性
受体与配体的特异性结合保证了受体对机体内成千上万 生物活性物质的高度识别能力。这种能力与配体引起的 生理（药理）效应相一致。表现在：（1）、在组织分 布上的一致。（2）、在浓度上的一致。受体主要存在 于相应配体发挥生理或药理效应的器管，称之为靶器管。 有的配体生理或药理效应广泛，而另一些配体的作用则 有明显的器管专一性。配体和受体结合的有效浓度通常 也应该和该配体发挥生理或药理作用的浓度一致。
图8.8 Scatchard作图中的正负协同作用 （1） 无协同作用；（2）负协同作用；（3）正协同作用
（三） 受体亚型
受体亚型是指受体分子结构上既有部分相同，也存在 一定差别，它们对同一配体具有不同的亲和力，生物 学上具有不同的效应。
1、用药理学方法可见到，同一种受体的几种激动剂 （拮抗剂）对各亚型都有作用，但作用有相对的选择 性。如，对于α肾上腺受体，哌唑嗪对血管平滑肌收缩 的用较拮弱抗（作α用2）强，（而α1育）亨，宾对则胃相肠反道。平滑肌舒张的拮抗作 2、用放射配体结合分析法可观察到，同一种受体的某 些激动剂（拮抗剂）对各亚型都有特异性结合能力， 但是亲和力不同。
细胞核、浆 、膜 3.受体的增溶和进一步纯化
沉淀：完整细胞、核受体
图8.10 分离细胞组分的一般方法
四、温育 条件
缓冲液
通过多次预实验确定 某个受体的最适离子 强度和pH
时间与温度
最适的时间为完全平 衡时间
温度根据目的不同而 不同（0—37OC）
结合配体和游离配体的分离
目 的 ： B/F的 分 离 ， 一般RIA的分离方法可用于RBA 注意配体与受体的解离速度
5、 识别能力（Recognition）和生物效应一致性
受体与配体的特异性结合保证了受体对机体内成千上万 生物活性物质的高度识别能力。这种能力与配体引起的 生理（药理）效应相一致。表现在：（1）、在组织分 布上的一致。（2）、在浓度上的一致。受体主要存在 于相应配体发挥生理或药理效应的器管，称之为靶器管。 有的配体生理或药理效应广泛，而另一些配体的作用则 有明显的器管专一性。配体和受体结合的有效浓度通常 也应该和该配体发挥生理或药理作用的浓度一致。
图8.8 Scatchard作图中的正负协同作用 （1） 无协同作用；（2）负协同作用；（3）正协同作用
受体的放射配体结合分析法
受体的放射配体结合分析法第⼋章受体的放射配体结合分析与应⽤第⼀节概述受体（receptor）是细胞膜上或细胞内的⼀些能与⽣物活性物质相互作⽤并引起特异性⽣物效应的蛋⽩质。
受体与配体结合后，通过受体特定的信号传递系统，引起细胞的特定反应，是⾼等动物适应环境、协调机体各种细胞功能的关键性分⼦。
⽤放射性核素标记的配体（radioligand）与相应的受体进⾏特异结合反应，从⽽对受体进⾏定性和定量，此即为受体的放射配体结合分析法（radioligand binding assay of receptors, RBA）。
定量的RBA是在已知配体与受体反应的基础上，通过结合反应得知⼀定量的组织或细胞能与该放射性配体结合的受体数，称结合位点数（number of binding sites）。
亲和⼒则以平衡解离常数表⽰。
定性RBA 则通过反应量效关系、某些参数的变化等判断受体的类型、单位点或多位点系统、受体与配体相互作⽤的特点等。
RBA出现前，虽然提出了受体的⼀些基本概念，如配体占领学说、激动剂和拮抗剂、配体结合反应的质量作⽤定律等，但对受体的研究主要靠观察受体激动剂或拮抗剂的⽣理效应或药理效应。
20世纪60年代，由于放射性探测的灵敏度⾼、核素标记物不改变配体的构型，可⽤来直接观察配体在亚细胞组分中的分布，并进⾏精确定量。
RBA使受体的研究从间接观察进⼊了直接观察，从宏观进⼊微观，许多不易或⽆法⽤⽣理（或药理）效应进⾏观察的受体得以精确定量，并进⽽对受体分⼦进⾏纯化，分析结构。
受体的研究从20世纪70年代已经扩展到了神经递质、激素、细胞因⼦的作⽤机制、细胞⽔平的调控机制、疾病的发病机制及疾病的诊断等⽅⾯，渗透到了许多学科领域，受体的研究进⼊了分⼦⽣物学⽔平。
⾃20世纪80年代以来，随着新技术、新⽅法的应⽤，受体的研究取得了长⾜的进展。
例如，利⽤基因克隆技术测定受体分⼦的⼀级结构，上百种受体的氨基酸序列得以阐明，测出某种受体的不同亚型在氨基酸序列上的差别，为受体亚型的确定奠定了基础；⽤点突变技术确定受体结合位点在分⼦中的位置；利⽤单克隆抗体、荧光和酶等⾮放射性标记物来定位受体，丰富了受体的研究⽅法。
体外放射分析
三、放射免疫分析的分离方法
分离方法的基本要求 ● 尽可能使结合与游离部分完全分开 ● 分离效果稳定，不受外界干扰 ● 非特异性结合尽可能小 ● 操作简便、分离迅速、适应大量样品分析、 重复性好 ● 分离部分适应自动化测量和数据处理
常用分离方法
● 双抗体法---- 免疫分离法 ● 非特异性沉淀法 ● 吸附分离法 ● 固相抗体法 ● 其他 葡萄球菌 A 蛋白沉淀法、 层析电泳法、屏蔽计数法
双抗体法----免疫分离法 + 抗原 第一抗体 可溶性复合物 + 第二抗体体
可沉淀复合物 双抗体法分离原理示意图
四、放射免疫分析的质量控制
质控目的：对分析误差进行经常性的 检查
质控内容：实验室内质控 实验室间质控
● ● ● ● ● ● 标准曲线的质量检查 各未知样品分析结果的可靠性检查 整批实验的精密度检验 批内漂移的检验 整批实验偏差检验 长期漂移的检验（批间质控）
● Woof 作图
F KD F SB B max B max
● Lineweaver-Burk 作图
1 1 KD 1 SB B max B max F
● Hill 作图（Logit 作图）
四、受体在医学研究中的应用 ----受体与疾病
疾病时受体的变化
● 受体数目的变化 ● 受体亲和力的变化 ● 受体特异性的变化 ● 受体的自身抗体 ● 受体-效应器偶联机理异常
[RT-RL][LT-RL] == --------------[RL]
SB/F
Slope=-1/Kd
Bmax
SB fmol/ml Scatchard 作图
受体最大结合容量的表示方式
１ 胞浆及胞膜等的受体含量: fmol/mg蛋白 ２ 胞核的受体含量: fmol/mgDNA ３ 完整细胞受体的含量: 结合位点/细胞(site/cell)或fmol/106cell
体外放射分析
四. 放射免疫分析的质量控制 一般包括以下几个方面： 一般包括以下几个方面： 最高结合率(B0 (B0％ 1．最高结合率(B0％)指不加非标记抗原时标记抗原与 抗体的结合率，一般要求在30 50％。 30～ 抗体的结合率，一般要求在30～50％。 非特异性结合率(NSB (NSB％ 2．非特异性结合率(NSB％)指不加抗体时标记抗原与非 特异性物质的结合率，一般要求＜ 10％。 特异性物质的结合率，一般要求＜5～10％。 截距a 斜率b 3．标准曲线直线回归的参数 截距a、斜率b和相关系数 是标准曲线的主要质控指标，要求a 值稳定， 0.99。 r是标准曲线的主要质控指标，要求a、b值稳定，r＞0.99。 ED25、ED50及 指标准曲线的结合率在25％、50 25％、 4．ED25、ED50及ED75 指标准曲线的结合率在25％、50 75％时对应的抗原浓度值，它反映标准曲线的稳定性， ％及75％时对应的抗原浓度值，它反映标准曲线的稳定性， 有助于批间结果的比较。 有助于批间结果的比较。 反应误差关系(RER)是评价RIA整批误差的综合指标， (RER)是评价RIA整批误差的综合指标 5．反应误差关系(RER)是评价RIA整批误差的综合指标， RER应 0.04。 RER应＜0.04。 连续测定10批以上高、 10批以上高 6．质控图 连续测定10批以上高、中、低三种已知浓度 的质控血清(QCS)，求出各自的均数±标准差(X±SD)，并画 的质控血清(QCS)，求出各自的均数±标准差(X±SD)， (QCS) (X 出质控图，以后每次进行RIA时均要同时测定此高、 RIA时均要同时测定此高 出质控图，以后每次进行RIA时均要同时测定此高、中、低 QCS，将测得值标在图上。WHO要求在一次实验中 要求在一次实验中， QCS，将测得值标在图上。WHO要求在一次实验中，有下列情 况之一者，其结果应予舍弃： 三种QCS中有一个测定值＞ QCS中有一个测定值 况之一者，其结果应予舍弃：①三种QCS中有一个测定值＞ 3SD； 三种QCS中在同一方向上有二种＞2SD②三种QCS QCS中在同一方向上有二种 QCS均在 3SD；②三种QCS中在同一方向上有二种＞2SD②三种QCS均在 方向＞1SD。 同-方向＞1SD。
最新核医学第四章体外配体结合分析幻灯片课件
核医学第四章体外配体结合分 析
概述
20世纪60年代,Berson和yalow,放射免疫分析(RIA),诺贝尔奖. 20世纪70年代,Engvall和Wecman,酶标记免疫分析(EIA) 80年代时间分辨荧光免役分析(TRFIA) 化学发光免役分析(CLIA) 电化学发光免役分析(ECLIA) 微粒体发光免役分析(MLEIA)
Ab 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml
待测2 0.1ml
0.1ml
0.1ml
分离试剂 2ml
摇均匀后，放置待其竞争结合反应达平衡后
2ml 2ml
2ml
2ml
2ml
测总射线（可以测2-3管求均值）
去除上清液测B；也可求出F 画出标准曲线
从标准曲线查出待测品的Ag含量
11.发OFFER 12.入职：接待报到，办理入职 13.新员工关怀（一定时间内关怀问候）
30
课程大纲
❖ 招聘体系的建立 ❖ 招聘中的责任分配 ❖ 招聘的渠道 ❖ 面试的方式 ❖ 面试前的准备 ❖ 结构化的面试技巧 ❖ 面试结束及后续评估 ❖ 面试中的几个问题
聘…… 5.挑选简历+搜索简历 6.用人部门确认简历合格，HR电话预约面试 7.发面试邮件、短信（如暂时联系不上，后续跟踪） 8.面试：用人部门侧重岗位技术；HR侧重内在品质 9.汇总意见：录用、不录用、暂放。录用者填写《面试评价表》+《面试问
题记录》 10.核薪谈薪；确认入职时间，领导审批确认录用。
三、分离方法
（一）液相分离技术
1.双抗体沉淀法 2.聚乙二醇法(PEG) 3.葡萄球菌A蛋白(SPA)沉淀法 4.活性炭吸附法
（二）固相分离技术
概述
20世纪60年代,Berson和yalow,放射免疫分析(RIA),诺贝尔奖. 20世纪70年代,Engvall和Wecman,酶标记免疫分析(EIA) 80年代时间分辨荧光免役分析(TRFIA) 化学发光免役分析(CLIA) 电化学发光免役分析(ECLIA) 微粒体发光免役分析(MLEIA)
Ab 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml
待测2 0.1ml
0.1ml
0.1ml
分离试剂 2ml
摇均匀后，放置待其竞争结合反应达平衡后
2ml 2ml
2ml
2ml
2ml
测总射线（可以测2-3管求均值）
去除上清液测B；也可求出F 画出标准曲线
从标准曲线查出待测品的Ag含量
11.发OFFER 12.入职：接待报到，办理入职 13.新员工关怀（一定时间内关怀问候）
30
课程大纲
❖ 招聘体系的建立 ❖ 招聘中的责任分配 ❖ 招聘的渠道 ❖ 面试的方式 ❖ 面试前的准备 ❖ 结构化的面试技巧 ❖ 面试结束及后续评估 ❖ 面试中的几个问题
聘…… 5.挑选简历+搜索简历 6.用人部门确认简历合格，HR电话预约面试 7.发面试邮件、短信（如暂时联系不上，后续跟踪） 8.面试：用人部门侧重岗位技术；HR侧重内在品质 9.汇总意见：录用、不录用、暂放。录用者填写《面试评价表》+《面试问
题记录》 10.核薪谈薪；确认入职时间，领导审批确认录用。
三、分离方法
（一）液相分离技术
1.双抗体沉淀法 2.聚乙二醇法(PEG) 3.葡萄球菌A蛋白(SPA)沉淀法 4.活性炭吸附法
（二）固相分离技术
体外放射分析(检验)-检验核医学
一 体外放射分析的概述
（一）特异性结合
1、抗原与抗体 2、配体与受体 3、底物与酶 4、激素与血浆结合球蛋白
（二）结合反应动力学规律
[L]+[B]=[LB]
1、竞争性结合分析 [L]+[*L]+[B]=[LB]+[*LB]
2、非竞争性结合分析
Sp.Ab1+Ag=SpAb1.Ag+*Ab2=Sp.Ab1. Ag.*Ab2+*Ab2
滴度：
结合50%标记抗原时血清的稀释度
单克隆抗体
特点：
特异性高 抗体成分专一 可反复制备
制备：
1、免疫小鼠，制备脾细 胞悬液
2、选择培养，用HAT培 养基筛选杂交瘤细胞
3、检测抗体 4、克隆化
（三）分离方法
1、分离方法的要求
1、使结合部分与游离部分尽可能完全分开 2、分得的成分便于作放射性操作 3、分离效果不受外界干扰因素影响 4、操作简便、分离迅速、重复性好 5、试剂来源广泛、价廉易得
（Radio Receptor Assay, RRA）
[L]+[*L]+[B]=[LB]+[*LB]
（一）放射免疫分析原理
*Ag+Ag+Ab =(*Ag—Ab)+(Ag—Ab)+*Ag + Ag
0
条件：
Max
Min
放射
性计
数
1、 *Ag定量、足量
2、 Ab限量 *Ag>Ab
Ag与*Ag-Ab成反比！
体外放射分析指在体外实验条件下，以特
异结合反应为基础，以放射性测量为手段， 对生物活性物质进行超微量分析的总称。
特点：灵敏度高、特异性强、精密度好、
核医学体外放射分析ppt课件【可编辑全文】
误差分类
系统误差：原因是确定因素如试剂变性，称量不准， 批号不同。 随机误差：原因属偶然，难以确定，测量结果忽高 忽低呈双向围某数值波动。 过失误差：过失造成的误差，结果失真无规律性可 查。 质控目的：找出误差原因、采取必要措施，保证实 验结果的可信性。
质控分类
实验室内质控
实验室间质控
常用的质控指标：灵敏度、特异性、精密度、偏差、准 确度、稳定性、临床有效性。
d=NSB
4、五参logistic数模型：
a—b Y= --------------- + d
x [1+(----)b]E
c
引入了一个不对称因子E。
E计算机能求出。
可用于非平衡反应系统
5、四参数单位点质量作用定律模式：
按质量作用定律导出的模式 优点：①质量作用定律，稳健回归拟合；
②适于平衡和非平衡系统； ③个别坏点对曲线影响小。
大于±3SD不得超过1%
如果有下列情况之一发生，说明实验失败、 应舍弃该批数据：
1） 三个QC样品有一个SD大于3SD 2） 三个QC样品有二个SD大于2SD 3） 三个QC样品都同侧超出1SD
后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用
资料仅供参考，实际情况实际分析
主要经营：课件设计，文档制作，网络软件设计、 图文设计制作、发布广告等
QC—H 首
QC—M QC—L
QC首 首样品 品QC尾
2SD A B D 尾样
A区：准确区
B区：正偏差区
C区：负偏差区
D区：不精密区
意义：一种简便，直观、有效地评价精密度和偏倚的 方法。
5、Cusum图：把每批实验的QC测定值与靶值相减后 做图。 评价： 1）小斜线连续上升或下降提示有正、负偏差 2）小斜线的斜率反映偏差的大小 3）斜线两端点落差的绝对值超出QC的3SD说明有偏 差出现，超出5SD说明有明显偏差，数据不可靠。
体外分析技术放射免疫分析
体外分析技术放射免疫分析体外分析技术是指在试管内进行反应从而测定某生物活性物质的超微量分析技术。
该类技术的特点是高灵敏度和高特异性，广泛用于临床和科学研究的很多领域。
应用最多的是：放射免疫分析、免疫放射分析、受体的放射配基结合分析及非放射性免疫分析。
一、原理放射免疫分析法(radioimmunoassay,RIA)的基本原理是，限量标记抗原［*Ag］和可变量的非标记待测抗原［Ag］与定量的特异抗体［Ab］发生竞争结合反应，通过测定复合物的放射性来计算出待测非标记抗原的量。
这一过程可用下式表示：*Λg+Λg+Ab< »［ΛgΛb］*+［ΛgΛb］上述式中，Ab的分子数少于*Ag,因此即使系统中没有Ag,仅有*Ag,当反应达到平衡时，绝大部分(因为是可逆反应，不会是100%)Ab将形成*AgAb复合物。
如果系统中加入Ag,则Ag与*Ag竞争结合Ab,形成AgAb,*AgAb将减少。
Ag越多则*AgAb越少。
实践和理论推导都证明，*AgAb和Ag呈二次方程的函数关系，如以Ag为横坐标，*AgAb(B)或*AgAb占加入总*Ag的％(B%)为纵坐标，是一条斜率逐步由大变小的下降曲线。
如以游离的*Ag(F)或游离*Ag占加入总*Ag的％(F%)为纵坐标，则是一条斜率逐步由大变小的上升曲线。
也可以*AgAb∕*Ag的比值(R)为纵坐标，也是一条斜率逐步由大变小的上升曲线。
分析中，首先以不同量的已知标准品Ag和定量*Ag及限量Ab进行竞争结合反应，得到以B或B%、F或F%、或R为纵坐标的剂量效应曲线(也称标准曲线)，然后以未知样品测得的B或B%、F或F%、或R从曲线上查出相应的剂量。
二、试剂盒基本试剂试剂盒由国家批准的生产单位提供，提供R1A的主要试剂、操作方法、保存条件及保存期限。
使用者应按说明书的要求合理使用。
如果临床工作需要，使用者可以对试剂稀释度、操作步.骤等进行适当修改，但应当对改变了的方案进行精密度、准确度、灵敏度等考核，并作详细记录。
第八章 受体的放射配体结合分析技术
第八章
受体
受体的放射配体结合分析 技术
是细胞膜或细胞内的大分子，它的作用是 和细胞外的信息分子呈特异性结合，然后 将信息转变为细胞效应，因此受体的功能 是识别和信息转导。
受体的进一步解释:受体是细胞膜或细胞内的一些 能首先与生物活性分子(药物,毒素,神经递质,激素 和抗原)相互作用的分子,它们具有三个相互关联的 功能:
（2）从受体变化寻找疾病的病因
主要包括免疫学异常和遗传缺陷的疾病。 很多自身免疫疾病是由于受体的自身抗体 引起的，如乙酰胆碱受体的抗体所致的重 症肌无力，促甲状腺受体的抗体所致的弥 漫性毒性甲状腺肿等。 根据这些自身抗体对受体的作用，可将其 分为封闭性和刺激性两大类。
封闭性抗体能通过与受体结合，竞争性地抵制 配基与受体相互作用；此时尽管激动剂的水平是 正常的，也不能引起应有的生理效应，因为受体 已被自身抗体占领；
这种内源性配基对标记配基，起着干扰作 用。就很多受体来说，另一个可能性是标 记配基的亲和力的下降等于或超过结合部 位数目的增加，这时组织量结合效应曲线 可能向下曲折。为了得到更精确并可重复 的结合数据，正式实验应该选用线性范围 内的组织浓度。
其次，还应该确定专一结合是否限于已知 含有这些受体的组织或器官。
(1)识别和结合,即通过高亲和力的特异过程,识别并 结合与其结构上具有一定互补性的分子-配基 (2)转导信号:受体和配基相互作用产生信号,传递到 效应器,如酶,离子通道等,使它们的活性或构象发生 与导致生理效应相适应的变化.
(3)产生相应的生物效应:效应的强度与体外实验所测得的激 动剂亲和力的大小相应.
然而，由于遗传缺陷的内因存在，或在感染等外 因作用下，机体不能免疫麻痹自身抗原，破坏了 原有的免疫动态平衡，发生了对受体的病理免疫 反应，因而表现为自身免疫病。 受体的自身抗体有下列作用：
受体
受体的放射配体结合分析 技术
是细胞膜或细胞内的大分子，它的作用是 和细胞外的信息分子呈特异性结合，然后 将信息转变为细胞效应，因此受体的功能 是识别和信息转导。
受体的进一步解释:受体是细胞膜或细胞内的一些 能首先与生物活性分子(药物,毒素,神经递质,激素 和抗原)相互作用的分子,它们具有三个相互关联的 功能:
（2）从受体变化寻找疾病的病因
主要包括免疫学异常和遗传缺陷的疾病。 很多自身免疫疾病是由于受体的自身抗体 引起的，如乙酰胆碱受体的抗体所致的重 症肌无力，促甲状腺受体的抗体所致的弥 漫性毒性甲状腺肿等。 根据这些自身抗体对受体的作用，可将其 分为封闭性和刺激性两大类。
封闭性抗体能通过与受体结合，竞争性地抵制 配基与受体相互作用；此时尽管激动剂的水平是 正常的，也不能引起应有的生理效应，因为受体 已被自身抗体占领；
这种内源性配基对标记配基，起着干扰作 用。就很多受体来说，另一个可能性是标 记配基的亲和力的下降等于或超过结合部 位数目的增加，这时组织量结合效应曲线 可能向下曲折。为了得到更精确并可重复 的结合数据，正式实验应该选用线性范围 内的组织浓度。
其次，还应该确定专一结合是否限于已知 含有这些受体的组织或器官。
(1)识别和结合,即通过高亲和力的特异过程,识别并 结合与其结构上具有一定互补性的分子-配基 (2)转导信号:受体和配基相互作用产生信号,传递到 效应器,如酶,离子通道等,使它们的活性或构象发生 与导致生理效应相适应的变化.
(3)产生相应的生物效应:效应的强度与体外实验所测得的激 动剂亲和力的大小相应.
然而，由于遗传缺陷的内因存在，或在感染等外 因作用下，机体不能免疫麻痹自身抗原，破坏了 原有的免疫动态平衡，发生了对受体的病理免疫 反应，因而表现为自身免疫病。 受体的自身抗体有下列作用：
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