RP_HPLC法测定中药丁香中丁香酚的含量_余小平
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海峡药学 , 2004, 16 ( 2) : 56 - 57.
作者简介 : 余小平 ( 19602) , 男 , 浙江衢州人 , 副主任药师 , 研究方
[ 3 ห้องสมุดไป่ตู้ 林玉叶. 芩连喉咽清片的质量标准研究 [ J ]. 湖南中医杂志 ,
向 :药品质量研究及检验 。
2004, 20 ( 3) : 73 - 74.
第 27卷 第 4期 2 0 0 9年 4月
中 华 中 医 药 学 刊
CH IN ES E ARCH IVES O F TRAD IT IONAL CH IN ES E M ED IC IN E
Vol. 27 No. 4 Ap r. 2 0 0 9
RP2HPLC法测定中药丁香中 丁香酚的含量
丁香酚对照品 (批号 : 7252200208,由中国药品生物制 品检定所提供 ,供含量测定用 ) ,乙腈 、甲醇为色谱纯 ,水为 纯化水 ,中药丁香市购 3批 ,本所标本室提供一批 ,均由浙 江省衢州市药品检验所宋健锋主管中药师鉴定为 Eugen ia ca ryophylla ta Thunb. 的干燥花蕾 。 2 色谱条件
入液相色谱仪 ,以外标法分别计算含量 ,丁香酚平均含量 1317% , RSD = 0133%。含量测定重复性良好 。 415 稳 定 性 实 验 精 密 量 取 上 述 同 一 份 供 试 品 溶 液 20μL ,分别在 0、2、4、6、8、10、12、22、24h测定峰面积 , RSD = 0142%。峰面积无明显变化 ,结果说明供试品溶液 24h 内稳定 。
本实验建立的黄芩 、牡丹皮 、桂枝 、甘草专属性特征成
声 40m in,放冷 ,定容 ,经微孔滤膜滤过 ,进样 10μL ,按含量 分的薄层色谱鉴别方法 ,其阴性对照均无干扰 ,可作为哮喘
测定项下操作 ,分别进样测定 ,计算加样回收率 。结果 :黄 宁颗粒的定性鉴别指标 。
芩苷的加样回收率为 10313% , RSD 为 111%。
880
第 27卷 第 4期 2 0 0 9年 4月
中 华 中 医 药 学 刊
CH IN ES E ARCH IVES O F TRAD IT IONAL CH IN ES E M ED IC IN E
Vol. 27 No. 4 Ap r. 2 0 0 9
填料 : Hypersil, 粒 度 : 5μm , 大 连 依 利 特 分 析 仪 器 公 司 ) ; N2000色谱工作站 (浙江大学智能信息工程研究所 ) ;电子 天平 : M ettler AE240;紫外分光光度计 : 岛津 UV2450; 超声 波清洗器 。
表 1 丁香中丁香酚回收率测定结果 ( n = 9)
样品含量 对照品加入量 测得量 回收率 平均值 RSD
(m g)
(m g)
(%) (%) (%) (%)
1. 244 1. 571 1. 299 1. 208 1. 233 1. 306 1. 390 1. 432 1. 530
0. 900 0. 900 0. 900 1. 126 1. 126 1. 126 1. 351 1. 351 1. 351
含量 ,结果见表 1。
液 (21∶10∶69)为流动相 ,黄芩苷峰峰形良好 ,达到基线分
表 1 样品含量测定结果
离 ,阴性样品无杂质峰干扰 。
中
批号
平均含量 (mg /袋 )
RSD ( % )
华
中
031123
185. 9
1. 2
医
031128
192. 6
1. 5
药
031209
187. 1
1. 6
3110 黄芩药材中黄芩苷含量测定 按药典方法对黄芩
高效液相色谱测定黄芩苷流动相选择 ,在反相 C18柱
319 样品含量测定 精密吸取供试品溶液和对照品溶液 上 ,用甲醇一水 (45∶55) ,甲醇一水一冰醋酸 ( 45 ∶55 ∶011)
各 10μL ,注入液相色谱仪 ,测定色谱峰面积 ,以外标法计算 不同系统选择试验 ,结果选择乙腈一甲醇 - 磷酸盐缓冲溶
余小平
(衢州市药品检验所 ,浙江 衢州 324002)
摘 要 :目的 :建立 RP2HPLC测定丁香中丁香酚的含量 。方法 : 采用 Hypersil C18 色谱柱 ( 5μm , 416mm × 200mm) ,以甲醇 2水 (65∶35)为流动相 ,流速 110mL ·m in - 1 ,紫外检测器于 280nm 测定 。结果 :线性范围丁香酚 1414～12916μg·mL - 1 , r = 019999,样品溶液在 24h内稳定 ,平均回收率为 10010% RSD ( n = 9)为 0132%。结论 : 本法简便 、快速 ,结果准确 、可靠 ,重复性好 。
416 加样回收率测定 取丁香的细粉 9份 ,每份约 0108g, 分别置于 50mL 量瓶中 ,精密量取线性关系项下对照品贮 备液 210、215、310mL 各 3 份 ,另取贮备液 510mL1 份作为 对照品溶液 ,按溶液制备项下制备供试液和对照液 ,精密量 取各 20μL注入液相色谱仪 ,记录峰面积 ,按外标法计算回 收率 ,其结果见表 1。 417 样品测定 按溶液制备项下制备供试品溶液和对照 品溶液 ,照上述色谱条件各精密量取 20μL 注入液相色谱 仪 ,记录峰面积 ,按外标法计算含量见表 2。
流动相选择 ,实验中选择不同比例的甲醇 - 水做流动 相时 ,以甲醇 - 水 (65∶35)为流动相 ,系统适应性指标最理 想 ,加大甲醇比例保留时间相应缩小 。
色谱柱 :依利特 Hypersil C18 5μm , 416mm ×200mm ,流 动相 :甲醇 2水 ( 65 ∶35 ) ,检测波长 : 280nm ,流速 : 110mL · m in - 1 ,柱温 :常温 ,进样量 : 20μL。 3 溶液制备 311 对照品溶液 精密称取丁香酚对照品约 18mg,置于 50mL量瓶中 ,加入乙腈溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,再精密量取 5mL置于 25mL量瓶中 ,加流动相溶解稀释至刻度 ,摇匀。 312 供试品溶液 取丁香用粉碎机粉碎 ,过 3号药筛 ,精 密称取丁 香 细 粉 约 0113g, 置 于 50mL 量 瓶 中 , 加 乙 腈 约 40mL超声 20m in后 ,放冷至温 ,加乙腈稀释至刻度 ,摇匀 , 过滤 ,再精密量取滤液 5mL ,置 25mL 量瓶中 ,加流动相溶 解稀释至刻度 ,摇匀 ,即得 。 313 阴性空白溶液 取上述丁香细粉 ,置烘箱中 105℃加 热挥发至不含丁香酚 ,按供试品溶液制备项制备空白溶液 。 4 方法与结果 411 系统适用性试验 取阴性溶液 ,对照品溶液、供试品溶 液 ,按上述色谱条件分别进样 20μL,记录色谱图 ,结果理论板 数以丁香酚计可达 8000以上 ,丁香酚与杂质峰的分离良好 ,分 离度分别为 912和 519,杂质对测定无干扰。见图 1。
关键词 : HPLC法 ;丁香 ;丁香酚 ;含量测定 中图分类号 : R917 文献标识码 : A 文章编号 : 1673 - 7717 (2009) 04 - 0880 - 02
D eterm ina tion of the Con ten t of Eugenolin in Flos Caryophylli by RP2HPLC
(A ) 对照品 (B )及供试品 (C)色谱图 图 1 阴性空白溶液
412 线性关系 精密称取丁香酚对照品 180mg置于 50mL 量瓶中 ,加乙腈溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,作为贮备液 ;精密 量取贮备液 5mL 置于 50mL 量瓶中 ,加乙腈溶解并稀释至
间扫描 , 丁 香 酚 在 215nm 和 280nm 波 长 处 有 最 大 吸 收 , 280nm 波长处杂质峰少 ,选择 280nm为测定波长 。
YU Xiao2p ing
(Quzhou Institute for D rug Control, Quzhou 324002, Zhejiang, China)
Ab s tra c t: O bjective: To determ ine the content of eugenol in flos caryophylli by RP2HPLC. M ethods: The column: Hy2 persil C18 column ( 5μm , 416 mm ×200mm ) ; The mobile phase: M ethanol - water ( 65 ∶35 ) ; The flow rate: 110mL · m in - 1 ; The detection wavelength: 280nm. R esu lts: Thelinear response ranges wad 1414～12916μg·mL - 1 ( r = 019999) of eugenol; The samp le solution is steady w ithin 24h. The average recoveries were 100. 0% , RSD ( n = 9) was 0132%. Con2
1. 965 1. 948 1. 912 2. 252 2. 218 2. 172 2. 452 2. 466 2. 401
99. 94 98. 88 99. 88 99. 78 99. 93 99. 85 100. 02 99. 87 99. 39
99. 72
0. 36
表 2 样品测定结果 (标示量 % , n = 3)
批号
1 2 3 4
丁香酚 ( % )
13. 7 11. 9 14. 0 14. 4
RSD ( % )
0. 33 0. 27 0. 32 0. 20
5 讨 论
本试验采用高效液相色谱法 2紫外检测法丁香中丁香
酚的含量 ,灵敏度高 ,准确性和精密度好 ,操作简便 ,色谱峰
分离优良 ,回收率高 。
波长选择 ,丁香酚流动相溶液 ,在 200～400nm 波长之
318 加 样 回 收 率 试 验 精 密 称 取 已 知 准 确 含 量 为 药材进行含量测定 ,结果所用黄芩药材符合规定 。
18110mg /袋的本品 011g,共 5 份 ,分别精密加入黄芩苷对 4 讨 论
照品溶液 (浓度为 015936mg /mL ) 5100mL ,加甲醇 95mL ,超
酚 ,其它有滴定 、比色等法测定 [2 ] ,有关高效液相色谱法直 接测定丁香中丁香酚的含量国内未见报道 ,本实验采用 HPLC法测定丁香酚含量 ,方法简单易行 ,快速 ,结果准确 , 可作为丁香的质量控制方法 。 1 仪器及试药
高效液相色谱仪 (日本岛津公司的 LC210AD 泵 , SPD 2 10A 紫外检测器 ) ; 色谱柱 : C18 色谱柱 ( 416mm ×200mm ,
clusions: This method is simp le, rap id, accurate and reliable.
Ke y wo rd s: RP2HPLC; flos caryophylli; eugenol; content determ ination.
丁香是桃金娘科植物丁香 Eugen ia ca ryophy lla ta Thunb 的干燥花蕾 。性味辛 ,温 。具有温中降逆 ,补肾助阳之功 效 。主治脾虚寒 ,呃逆呕吐 ,食少吐泻 ,心腹冷痛 ,肾虚阳 痿 。丁香中主要含挥发油 ,油中主要成分为丁香酚 ,其它含 有少量的乙酰丁香酚 、β—丁香烯等成分 ,药理研究证明 , 丁香酚具有抗菌 、健胃 、降血压作用 。现行国家药品标准含 量测定 [1 ] ,采用正已烷提取气相色谱法测定丁香中丁香
学
刊
收稿日期 : 2008 - 11 - 21
方法学研究结果表明 ,采用高效液相色谱法对方中黄 芩中黄芩苷进行含量测定 ,操作简便 ,结果准确 ,重复性好 , 能够有效地控制产品质量 。 参考文献 [ 1 ] 马开. HPLC 测定蝉蜕止咳颗粒中黄芩苷和汉黄芩素含量
[ J ]. 中成药 , 2004, 26 ( 4) : 278 - 230. [ 2 ] 朱坤福. 高效液相色谱法测黄芩颗粒剂中黄芩苷的含量 [ J ].
作者简介 : 余小平 ( 19602) , 男 , 浙江衢州人 , 副主任药师 , 研究方
[ 3 ห้องสมุดไป่ตู้ 林玉叶. 芩连喉咽清片的质量标准研究 [ J ]. 湖南中医杂志 ,
向 :药品质量研究及检验 。
2004, 20 ( 3) : 73 - 74.
第 27卷 第 4期 2 0 0 9年 4月
中 华 中 医 药 学 刊
CH IN ES E ARCH IVES O F TRAD IT IONAL CH IN ES E M ED IC IN E
Vol. 27 No. 4 Ap r. 2 0 0 9
RP2HPLC法测定中药丁香中 丁香酚的含量
丁香酚对照品 (批号 : 7252200208,由中国药品生物制 品检定所提供 ,供含量测定用 ) ,乙腈 、甲醇为色谱纯 ,水为 纯化水 ,中药丁香市购 3批 ,本所标本室提供一批 ,均由浙 江省衢州市药品检验所宋健锋主管中药师鉴定为 Eugen ia ca ryophylla ta Thunb. 的干燥花蕾 。 2 色谱条件
入液相色谱仪 ,以外标法分别计算含量 ,丁香酚平均含量 1317% , RSD = 0133%。含量测定重复性良好 。 415 稳 定 性 实 验 精 密 量 取 上 述 同 一 份 供 试 品 溶 液 20μL ,分别在 0、2、4、6、8、10、12、22、24h测定峰面积 , RSD = 0142%。峰面积无明显变化 ,结果说明供试品溶液 24h 内稳定 。
本实验建立的黄芩 、牡丹皮 、桂枝 、甘草专属性特征成
声 40m in,放冷 ,定容 ,经微孔滤膜滤过 ,进样 10μL ,按含量 分的薄层色谱鉴别方法 ,其阴性对照均无干扰 ,可作为哮喘
测定项下操作 ,分别进样测定 ,计算加样回收率 。结果 :黄 宁颗粒的定性鉴别指标 。
芩苷的加样回收率为 10313% , RSD 为 111%。
880
第 27卷 第 4期 2 0 0 9年 4月
中 华 中 医 药 学 刊
CH IN ES E ARCH IVES O F TRAD IT IONAL CH IN ES E M ED IC IN E
Vol. 27 No. 4 Ap r. 2 0 0 9
填料 : Hypersil, 粒 度 : 5μm , 大 连 依 利 特 分 析 仪 器 公 司 ) ; N2000色谱工作站 (浙江大学智能信息工程研究所 ) ;电子 天平 : M ettler AE240;紫外分光光度计 : 岛津 UV2450; 超声 波清洗器 。
表 1 丁香中丁香酚回收率测定结果 ( n = 9)
样品含量 对照品加入量 测得量 回收率 平均值 RSD
(m g)
(m g)
(%) (%) (%) (%)
1. 244 1. 571 1. 299 1. 208 1. 233 1. 306 1. 390 1. 432 1. 530
0. 900 0. 900 0. 900 1. 126 1. 126 1. 126 1. 351 1. 351 1. 351
含量 ,结果见表 1。
液 (21∶10∶69)为流动相 ,黄芩苷峰峰形良好 ,达到基线分
表 1 样品含量测定结果
离 ,阴性样品无杂质峰干扰 。
中
批号
平均含量 (mg /袋 )
RSD ( % )
华
中
031123
185. 9
1. 2
医
031128
192. 6
1. 5
药
031209
187. 1
1. 6
3110 黄芩药材中黄芩苷含量测定 按药典方法对黄芩
高效液相色谱测定黄芩苷流动相选择 ,在反相 C18柱
319 样品含量测定 精密吸取供试品溶液和对照品溶液 上 ,用甲醇一水 (45∶55) ,甲醇一水一冰醋酸 ( 45 ∶55 ∶011)
各 10μL ,注入液相色谱仪 ,测定色谱峰面积 ,以外标法计算 不同系统选择试验 ,结果选择乙腈一甲醇 - 磷酸盐缓冲溶
余小平
(衢州市药品检验所 ,浙江 衢州 324002)
摘 要 :目的 :建立 RP2HPLC测定丁香中丁香酚的含量 。方法 : 采用 Hypersil C18 色谱柱 ( 5μm , 416mm × 200mm) ,以甲醇 2水 (65∶35)为流动相 ,流速 110mL ·m in - 1 ,紫外检测器于 280nm 测定 。结果 :线性范围丁香酚 1414～12916μg·mL - 1 , r = 019999,样品溶液在 24h内稳定 ,平均回收率为 10010% RSD ( n = 9)为 0132%。结论 : 本法简便 、快速 ,结果准确 、可靠 ,重复性好 。
416 加样回收率测定 取丁香的细粉 9份 ,每份约 0108g, 分别置于 50mL 量瓶中 ,精密量取线性关系项下对照品贮 备液 210、215、310mL 各 3 份 ,另取贮备液 510mL1 份作为 对照品溶液 ,按溶液制备项下制备供试液和对照液 ,精密量 取各 20μL注入液相色谱仪 ,记录峰面积 ,按外标法计算回 收率 ,其结果见表 1。 417 样品测定 按溶液制备项下制备供试品溶液和对照 品溶液 ,照上述色谱条件各精密量取 20μL 注入液相色谱 仪 ,记录峰面积 ,按外标法计算含量见表 2。
流动相选择 ,实验中选择不同比例的甲醇 - 水做流动 相时 ,以甲醇 - 水 (65∶35)为流动相 ,系统适应性指标最理 想 ,加大甲醇比例保留时间相应缩小 。
色谱柱 :依利特 Hypersil C18 5μm , 416mm ×200mm ,流 动相 :甲醇 2水 ( 65 ∶35 ) ,检测波长 : 280nm ,流速 : 110mL · m in - 1 ,柱温 :常温 ,进样量 : 20μL。 3 溶液制备 311 对照品溶液 精密称取丁香酚对照品约 18mg,置于 50mL量瓶中 ,加入乙腈溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,再精密量取 5mL置于 25mL量瓶中 ,加流动相溶解稀释至刻度 ,摇匀。 312 供试品溶液 取丁香用粉碎机粉碎 ,过 3号药筛 ,精 密称取丁 香 细 粉 约 0113g, 置 于 50mL 量 瓶 中 , 加 乙 腈 约 40mL超声 20m in后 ,放冷至温 ,加乙腈稀释至刻度 ,摇匀 , 过滤 ,再精密量取滤液 5mL ,置 25mL 量瓶中 ,加流动相溶 解稀释至刻度 ,摇匀 ,即得 。 313 阴性空白溶液 取上述丁香细粉 ,置烘箱中 105℃加 热挥发至不含丁香酚 ,按供试品溶液制备项制备空白溶液 。 4 方法与结果 411 系统适用性试验 取阴性溶液 ,对照品溶液、供试品溶 液 ,按上述色谱条件分别进样 20μL,记录色谱图 ,结果理论板 数以丁香酚计可达 8000以上 ,丁香酚与杂质峰的分离良好 ,分 离度分别为 912和 519,杂质对测定无干扰。见图 1。
关键词 : HPLC法 ;丁香 ;丁香酚 ;含量测定 中图分类号 : R917 文献标识码 : A 文章编号 : 1673 - 7717 (2009) 04 - 0880 - 02
D eterm ina tion of the Con ten t of Eugenolin in Flos Caryophylli by RP2HPLC
(A ) 对照品 (B )及供试品 (C)色谱图 图 1 阴性空白溶液
412 线性关系 精密称取丁香酚对照品 180mg置于 50mL 量瓶中 ,加乙腈溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,作为贮备液 ;精密 量取贮备液 5mL 置于 50mL 量瓶中 ,加乙腈溶解并稀释至
间扫描 , 丁 香 酚 在 215nm 和 280nm 波 长 处 有 最 大 吸 收 , 280nm 波长处杂质峰少 ,选择 280nm为测定波长 。
YU Xiao2p ing
(Quzhou Institute for D rug Control, Quzhou 324002, Zhejiang, China)
Ab s tra c t: O bjective: To determ ine the content of eugenol in flos caryophylli by RP2HPLC. M ethods: The column: Hy2 persil C18 column ( 5μm , 416 mm ×200mm ) ; The mobile phase: M ethanol - water ( 65 ∶35 ) ; The flow rate: 110mL · m in - 1 ; The detection wavelength: 280nm. R esu lts: Thelinear response ranges wad 1414～12916μg·mL - 1 ( r = 019999) of eugenol; The samp le solution is steady w ithin 24h. The average recoveries were 100. 0% , RSD ( n = 9) was 0132%. Con2
1. 965 1. 948 1. 912 2. 252 2. 218 2. 172 2. 452 2. 466 2. 401
99. 94 98. 88 99. 88 99. 78 99. 93 99. 85 100. 02 99. 87 99. 39
99. 72
0. 36
表 2 样品测定结果 (标示量 % , n = 3)
批号
1 2 3 4
丁香酚 ( % )
13. 7 11. 9 14. 0 14. 4
RSD ( % )
0. 33 0. 27 0. 32 0. 20
5 讨 论
本试验采用高效液相色谱法 2紫外检测法丁香中丁香
酚的含量 ,灵敏度高 ,准确性和精密度好 ,操作简便 ,色谱峰
分离优良 ,回收率高 。
波长选择 ,丁香酚流动相溶液 ,在 200～400nm 波长之
318 加 样 回 收 率 试 验 精 密 称 取 已 知 准 确 含 量 为 药材进行含量测定 ,结果所用黄芩药材符合规定 。
18110mg /袋的本品 011g,共 5 份 ,分别精密加入黄芩苷对 4 讨 论
照品溶液 (浓度为 015936mg /mL ) 5100mL ,加甲醇 95mL ,超
酚 ,其它有滴定 、比色等法测定 [2 ] ,有关高效液相色谱法直 接测定丁香中丁香酚的含量国内未见报道 ,本实验采用 HPLC法测定丁香酚含量 ,方法简单易行 ,快速 ,结果准确 , 可作为丁香的质量控制方法 。 1 仪器及试药
高效液相色谱仪 (日本岛津公司的 LC210AD 泵 , SPD 2 10A 紫外检测器 ) ; 色谱柱 : C18 色谱柱 ( 416mm ×200mm ,
clusions: This method is simp le, rap id, accurate and reliable.
Ke y wo rd s: RP2HPLC; flos caryophylli; eugenol; content determ ination.
丁香是桃金娘科植物丁香 Eugen ia ca ryophy lla ta Thunb 的干燥花蕾 。性味辛 ,温 。具有温中降逆 ,补肾助阳之功 效 。主治脾虚寒 ,呃逆呕吐 ,食少吐泻 ,心腹冷痛 ,肾虚阳 痿 。丁香中主要含挥发油 ,油中主要成分为丁香酚 ,其它含 有少量的乙酰丁香酚 、β—丁香烯等成分 ,药理研究证明 , 丁香酚具有抗菌 、健胃 、降血压作用 。现行国家药品标准含 量测定 [1 ] ,采用正已烷提取气相色谱法测定丁香中丁香
学
刊
收稿日期 : 2008 - 11 - 21
方法学研究结果表明 ,采用高效液相色谱法对方中黄 芩中黄芩苷进行含量测定 ,操作简便 ,结果准确 ,重复性好 , 能够有效地控制产品质量 。 参考文献 [ 1 ] 马开. HPLC 测定蝉蜕止咳颗粒中黄芩苷和汉黄芩素含量
[ J ]. 中成药 , 2004, 26 ( 4) : 278 - 230. [ 2 ] 朱坤福. 高效液相色谱法测黄芩颗粒剂中黄芩苷的含量 [ J ].