乙肝两对半 ppt课件
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乙肝两对半的解读PPT课件
性传播(Sexually transmission) ：性滥交、同性恋和异性恋之间的亲 密性行为是重要的乙肝病毒传播途径，这种传播亦包括家庭夫妻间的传 播，夫妻之间的无防御措施的性行为传播率大概在14%左右，具体引人 而异。因乙肝病人的唾液中可以查到乙肝病毒，在接吻时有可能会由于 皮肤粘膜破损造成传染。因此在口腔有破损（如溃疡，咬伤，牙龈出血
可见大三阳和小三阳的区别主要在病毒复制活跃程度上，但并不表示“大三阳”一定比“小三阳”病 情严重，临床研究证实，有些小三阳患者更容易转化为肝癌。在治疗上，如果是乙肝患者且HBVDNA含 量高，大三阳和小三阳的区别不大，都要以抗病毒治疗为主，辅助抗炎保肝，抗纤维化治疗。 Visible big 3 this world and small 3 this world difference is mainly in the viral replication activity, but it doesn't mean the "big 3 this world" than "small 3 this world" the disease is severe, clinical studies have confirmed that some small 3 this world are more likely to be converted into liver cancer patients. In treatment, if is hepatitis b patients and hbvdn乙a肝co两nt对en半t h的ig解h,读the difference between big 3 this world and4 small 3 this world is not big, to give priority to with antiviral therapy, anti-inflammatory, protecting liver, auxiliary anti fibrosis treatment.
乙肝两对半PPT课件
前S蛋白/抗前S蛋白：前S：出现在急性HBV感染的最早期,在
HBsAg消失之前消失,是病毒清除的最早迹象。抗前S是最早出现的抗 体，前S抗体参与病毒清除机制。最早出现抗前S，可能是病毒将清 除最早标志物。在暴发性肝炎，出现抗前S可能预示垂危中的生机。
HBV的抗原抗体系统HBcAg和抗HBc1
HBcAg：是病毒核壳的结构蛋白，包裹在病毒的核心中，不
Dane’s 颗粒 小球形颗粒 管形颗粒
乙肝病毒（HBV）是一种DNA病毒，乙肝病毒对人的肝脏“情有独 衷”，在生物学上它是嗜肝DNA病毒科（hepadnavividae）家族中 的一员。这个家族中的病毒成员在哺乳动物和鸟类的身上也都有 发现，它们的结构、基因序列和复制策略都非常相似，但是它们 之间却不会互相交叉。
核心颗粒的表面才是病毒真正的衣壳，由乙肝病毒的核心抗原 （HBcAg）组成。HBeAg为HBcAg的可溶性成份，两者约有75%的 氨基酸序列相同，但二级结构不同，各有特异的抗原决定族。临 床上在血液中只检测其可溶性成份。而HBcAg在肝细胞内更容易 被检测到。Dane颗粒中的中心部位就是环状并且有缺口的DNA双 链和依附在上面的DNA聚合酶。
园形颗粒和管形颗粒是HBsAg的空壳，而Dane颗粒中存在乙肝病 毒核酸（即DNA）。 Dane颗粒是具有感染性的完整的HBV颗粒，呈球形，Dane颗粒直 径只有42纳米，乙肝病毒有包膜和核心两个部分，外壳厚7—8纳 米，就是HBsAg（乙肝表面抗原）。核心颗粒直径28纳米，呈二 十面体立体对称。
HBV的抗原抗体系统HBsAg和抗HBs2
抗HBs：是一种保护性抗体，出现在急性感染的后期（约半数在
HBsAg（－）后数月才可检出。6－12个月后逐步达到高峰，持续多 年后逐步下降。部分人终身不产生抗HBs。
乙肝两对半定性测定ppt课件
影响检测结果的因素
3.操作技术的影响 3.1 加样吸嘴的洁净 与否和吸量的准确性， 直接影响检测结果。
常见模式及临床意义
HBsAg HBsAb
HBeA g
+
－
+
+
－
－
+
－
－
+
－
－
+
－
+
+
－
－
HBeA b
HBcAb
临床意义
－
+
急性或慢性乙型肝炎感染；提示HBV 复制，传染性强－大三阳
+
+
急性HBV感染趋向恢复；慢性HBsAg 携带者；传染性弱－小三阳
夹心法 HBsAg
HBeAg
夹心法 HBeAb
HBeAb
竞争法 HBeAb
HBcAb
竞争法 HBcAg
标记或结合物 HBsAb HBsAg
结果判断 显色(+) 显色(+)
HBeAb
显色(+)
HBeAb及中和抗 原
HBcAb
不显色(+) 不显色(+)
结果判定
2.酶标仪判定：用酶标仪单波长450nm 或双波长450nm/630nm测定各孔OD 值，根据OD值判定结果
b
临床意义
－
+
+
－
+ 非典型性或亚临床型HBV感染
－
+
－
－
－
注射过乙肝疫苗有免疫力；既往感染； 假阳性
－
+
－
+
+ 急性HBV感染后康复
如何看懂乙肝两对半ppt课件
13
慢性HBV感染临床诊断小结
携带者
慢性乙肝
隐匿性慢性乙 肝
乙肝 肝硬化
乙肝相关肝 癌
HBeAg+ HBeAg-
乙肝
乙肝
代偿期
失代偿期
HBV携带 者(HBV
DNA+)
非活动性 HBsAg携带者 (HBV DNA－)
轻、中、重
·
活动期和静止期
14
HBV的复制过程
HBV DNA 聚合酶
e
cap
3.5kb
·
3
双股DNA 核心
DNA多聚酶
有逆转录酶活性 有合成DNA功能
脂质双层
外
PreS1
衣
壳 外壳 PreS2
蛋白
HBsAg
HBcAg
内衣壳 HBeAg
乙肝病毒Dane颗粒结构模式图
·
4
·
5
乙肝五项（二对半）及HBV DNA的临床意义
方法：ELISA或RIA检测。
HBsAg：最先出现，急性肝炎，慢性肝炎和携带者。 1-4个月消失，持续6个月为慢性肝炎。
RNA pregenome
修补正链
宿主RNA聚合酶
Ccc DNA
·
15
·
16
HBV的抗原抗体系统HBsAg和抗HBs1
HBsAg ：组装病毒外模的主蛋白（外膜蛋白包括主蛋白、中蛋
白、大蛋白）。外模蛋白与其相应的抗体形成复合物与一些肝外 疾病有关。
HBsAg: 只具有抗原性，无传染性
急性自限性HBV感染：感染HBV后1－2周（11－12周）HBsAg 出现，持续1－6周（20周）。
代偿性肝硬化
病毒感染
慢性肝炎
慢性HBV感染临床诊断小结
携带者
慢性乙肝
隐匿性慢性乙 肝
乙肝 肝硬化
乙肝相关肝 癌
HBeAg+ HBeAg-
乙肝
乙肝
代偿期
失代偿期
HBV携带 者(HBV
DNA+)
非活动性 HBsAg携带者 (HBV DNA－)
轻、中、重
·
活动期和静止期
14
HBV的复制过程
HBV DNA 聚合酶
e
cap
3.5kb
·
3
双股DNA 核心
DNA多聚酶
有逆转录酶活性 有合成DNA功能
脂质双层
外
PreS1
衣
壳 外壳 PreS2
蛋白
HBsAg
HBcAg
内衣壳 HBeAg
乙肝病毒Dane颗粒结构模式图
·
4
·
5
乙肝五项（二对半）及HBV DNA的临床意义
方法：ELISA或RIA检测。
HBsAg：最先出现，急性肝炎，慢性肝炎和携带者。 1-4个月消失，持续6个月为慢性肝炎。
RNA pregenome
修补正链
宿主RNA聚合酶
Ccc DNA
·
15
·
16
HBV的抗原抗体系统HBsAg和抗HBs1
HBsAg ：组装病毒外模的主蛋白（外膜蛋白包括主蛋白、中蛋
白、大蛋白）。外模蛋白与其相应的抗体形成复合物与一些肝外 疾病有关。
HBsAg: 只具有抗原性，无传染性
急性自限性HBV感染：感染HBV后1－2周（11－12周）HBsAg 出现，持续1－6周（20周）。
代偿性肝硬化
病毒感染
慢性肝炎
乙肝两对半的意义PPT课件
●抗-HBs为保护性抗体（中和抗体） 其出现标志着HBV感染进入恢复期
●抗-HBs 对相同 HBsAg亚型的HBV再感染有免 疫力，但对不同亚型的HBV保护力不完全。
.
5
（3）HBeAg
HBeAg是HBcAg的降解产物HBV Βιβλιοθήκη 基因前C区C区 表达
HBeAg
前C / C 蛋白 切割、加工
HBcAg
＋
＋
＋
＋
＋
＋
＋
＋
＋
＋
抗-HBc
＋ ＋ ＋ ＋
＋
有过HBV感染，目前有无传染性应结合 HBV DAN结果
.
21
“两对半”分析举例
HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-HBe
＋
＋
＋
＋
＋
＋
＋
＋
＋
＋
抗-HBc
＋ ＋ ＋ ＋
＋
HBV感染的恢复期，有免疫力，无传染性
.
22
“两对半”分析举例
HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-HBe
仍阳性
可能与前C基因变异有关
易加重病情、易演变为肝硬化 . α-干扰素疗效亦较差 8
乙肝
（5）HBcAg
●HBcAg主要存在于HBV感染的肝细胞内或DANE颗粒 核心中，到血液中即被降解为HBeAg。
一般血清学方法检测不到HBcAg，而只能检测到抗-HBc
.
9
（6）抗-HBc
持续时间：6～18个月
抗HBc-IgM：是HBV近期感染或慢性感染者病毒活动的标志
抗HBc-IgG：凡“有过” HBV感染者均可阳 性
可终身阳性
HBcAg的免疫原性最强
●抗-HBs 对相同 HBsAg亚型的HBV再感染有免 疫力，但对不同亚型的HBV保护力不完全。
.
5
（3）HBeAg
HBeAg是HBcAg的降解产物HBV Βιβλιοθήκη 基因前C区C区 表达
HBeAg
前C / C 蛋白 切割、加工
HBcAg
＋
＋
＋
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＋
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抗-HBc
＋ ＋ ＋ ＋
＋
有过HBV感染，目前有无传染性应结合 HBV DAN结果
.
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“两对半”分析举例
HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-HBe
＋
＋
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＋
＋
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＋
抗-HBc
＋ ＋ ＋ ＋
＋
HBV感染的恢复期，有免疫力，无传染性
.
22
“两对半”分析举例
HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-HBe
仍阳性
可能与前C基因变异有关
易加重病情、易演变为肝硬化 . α-干扰素疗效亦较差 8
乙肝
（5）HBcAg
●HBcAg主要存在于HBV感染的肝细胞内或DANE颗粒 核心中，到血液中即被降解为HBeAg。
一般血清学方法检测不到HBcAg，而只能检测到抗-HBc
.
9
（6）抗-HBc
持续时间：6～18个月
抗HBc-IgM：是HBV近期感染或慢性感染者病毒活动的标志
抗HBc-IgG：凡“有过” HBV感染者均可阳 性
可终身阳性
HBcAg的免疫原性最强
乙肝两对半检验报告解读教学讲义PPT
个人卫生
保持良好的个人卫生习惯，勤洗手、避免与他人共用餐具等物品 ，以降低病毒传播风险。
防护措施
在公共场所、医院等地方，应采取必要的防护措施，如佩戴口罩、 保持社交距离等，以降低感染风险。
避免接触血液和体液
避免直接接触乙肝患者的血液和体液，尤其是皮肤有破损时更应注 意防护。
THANKS
感谢观看
判断传染性
HBeAg阳性表示病毒正在复制， 并且具有传染性。若HBeAg阴性 ，则表示病毒复制相对较低，传 染性较弱。
评估治疗效果
监测抗病毒治疗的效果
在接受抗病毒治疗后，患者需要定期 进行乙肝两对半检验，以监测治疗效 果。若治疗后HBsAg、HBeAg等指 标逐渐降低，则表明治疗有效。
指导后续治疗方案
CHAPTER
04
乙肝两对半检验报告的注意事 项
报告的时效性
01
乙肝两对半检验报告的有效期通 常为1-2个月，超过这个时间，报 告的结果可能不再准确反映受检 者的乙肝病毒感染状态。
02
如果在报告有效期内，受检者出 现乙肝病毒感染症状或接触过乙 肝病毒携带者，建议重新进行乙 肝两对半检验。
报告的准确性
选择正规的医疗机构进行乙肝两对半 检验，以确保检验结果的准确性。
在进行乙肝两对半检验前，应避免饮 酒、过度疲劳或服用可能影响肝脏功 能的药物，以免影响检验结果。
报告的隐私保护
乙肝两对半检验报告涉及个人隐私，应妥善保管，避免泄露 个人信息。
如发现报告结果异常，应及时咨询专业医生，并遵循医生的 建议进行治疗和复查，以免延误病情。
乙肝两对半检验报告解 读教学讲义
CONTENTS
目录
• 乙肝两对半检验报告概述 • 乙肝两对半检验报告解读 • 乙肝两对半检验报告的临床意义 • 乙肝两对半检验报告的注意事项 • 乙肝两对半检验报告的后续处理建议
乙肝两对半检测相关问题 PPT课件
变异率高 ，自然变异和免疫逃避，变异无 地域性。
HBsAg抗原性发生改变，不能被野生型 HBsAb所识别。 此时用一般的国产试剂盒可能 检不出。
能导致HBsAg阴性的S区变异
145甘氨酸
精氨酸
aa124 半胱氨酸
酪氨酸
aa129 谷氨酸 天冬氨酸
aa131 苏氨酸 天冬氨酸
aa131 蛋氨酸 苏氨酸 aa122-124 插入氨基酸 前S1/S2部分缺失
乙肝两对半免疫学检测相关问题研讨
HBV感染的实验室检测是目前国内最为常见的 检验项目，也是医患纠纷产生较多的领域之一。
乙肝两对半： HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb。
检测结果：定性、半定量、定量。 试剂原材料：抗原（天然抗原、重组抗原）、抗
体（单抗、多抗、Fab）。 就一定漏检。很多时 候野生型与突变型是混合存在的，这种情况虽然有突变， 同样可以检出 。
4)RF引起的假阳性
RF是一种自身抗体，能和多种动物IgG的Fc段结 合。由于固相抗体和标记抗体均为IgG，双抗体夹心 法测抗原可能有RF的干扰，产生假阳性。
固相IgG
固 相 载 体
固相McAb
标记McAb
固 相 载 体
人抗鼠抗体
Human Anti-Mouse Antibodies (HAMA)
HAMA效应的假阴性模式:
Figure 3-6 How HAMA generates a false negative
3) S基因突变引起的HBsAg漏检：
基因突变引起“a”决定簇内部一个或多个 氨基酸置换、缺失或插入，HBsAg 蛋白质氨 基酸组成发生改变，导致其抗原性产生变化。
产生HAMA的原因：
HBsAg抗原性发生改变，不能被野生型 HBsAb所识别。 此时用一般的国产试剂盒可能 检不出。
能导致HBsAg阴性的S区变异
145甘氨酸
精氨酸
aa124 半胱氨酸
酪氨酸
aa129 谷氨酸 天冬氨酸
aa131 苏氨酸 天冬氨酸
aa131 蛋氨酸 苏氨酸 aa122-124 插入氨基酸 前S1/S2部分缺失
乙肝两对半免疫学检测相关问题研讨
HBV感染的实验室检测是目前国内最为常见的 检验项目，也是医患纠纷产生较多的领域之一。
乙肝两对半： HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb。
检测结果：定性、半定量、定量。 试剂原材料：抗原（天然抗原、重组抗原）、抗
体（单抗、多抗、Fab）。 就一定漏检。很多时 候野生型与突变型是混合存在的，这种情况虽然有突变， 同样可以检出 。
4)RF引起的假阳性
RF是一种自身抗体，能和多种动物IgG的Fc段结 合。由于固相抗体和标记抗体均为IgG，双抗体夹心 法测抗原可能有RF的干扰，产生假阳性。
固相IgG
固 相 载 体
固相McAb
标记McAb
固 相 载 体
人抗鼠抗体
Human Anti-Mouse Antibodies (HAMA)
HAMA效应的假阴性模式:
Figure 3-6 How HAMA generates a false negative
3) S基因突变引起的HBsAg漏检：
基因突变引起“a”决定簇内部一个或多个 氨基酸置换、缺失或插入，HBsAg 蛋白质氨 基酸组成发生改变，导致其抗原性产生变化。
产生HAMA的原因：
乙肝的诊断ppt课件
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乙肝病毒脱氧核糖核酸（HBV-DNA）
乙肝病毒（HBV）的蛋白质分子包裹着病毒脱 氧核糖核酸（HBV-DNA）形成了球形的病毒 颗粒。位于病毒外层的，就是常说的乙肝表面 抗原，而病毒的遗传物质HBV-DNA则与核心 抗原相结合，位于病毒颗粒内部。
在临床上，有这种完整病毒结构的颗粒才具有 感染性和复制能力。我们通常所说的乙肝病毒 就是指这种颗粒。
16
乙肝表面抗原 （HBsAg ）续三
注意事项： HBsAg是乙肝早期诊断的指标，但不是
唯一指标，应该结合流行病学，临床表现和实 验室检查进行综合判断。
17
2、乙肝表面抗体（抗-HBs ）
抗-HBs是人体感染乙肝病毒后产生的最主要 的保护抗体，一般在发病较早期出现。
抗-HBs的出现，表示有乙肝病毒感染或接种 过乙肝疫苗。
22
乙肝e抗体（抗-HBe ）续
综上所述，乙肝e抗体阳性的乙肝病毒携带者 通过乙肝病毒DNA(HBV-DNA)检测，可以分 为两大类：一类是病毒低复制，传染性低；另 一类是病毒复制伴有活动性肝病，HBV-治疗。
23
5、乙肝核心抗体（抗-HBc ）
如果发病后6个月还不消失，一般认为容易演 变成乙肝病毒慢性携带者。
15
乙肝表面抗原 （HBsAg ）续二
有相当一部分人感染了乙肝病毒后不会发病， 医学上称无症状HBsAg携带者。
如果这类人再感染甲，丙，丁，戊，庚型肝炎 病毒时，单凭HBsAg阳性与否来诊断乙肝，就 有可能造成误诊。
另有5%-10%的人感染乙肝病毒以后，在发病 早期就能清除HBsAg,在这种病人血清中， HBsAg检测是阴性的，而抗-HBc-IgM阳性， 如果单凭HBsAg阳性与否作出乙肝的诊断，就 有可能漏诊。
乙肝病毒脱氧核糖核酸（HBV-DNA）
乙肝病毒（HBV）的蛋白质分子包裹着病毒脱 氧核糖核酸（HBV-DNA）形成了球形的病毒 颗粒。位于病毒外层的，就是常说的乙肝表面 抗原，而病毒的遗传物质HBV-DNA则与核心 抗原相结合，位于病毒颗粒内部。
在临床上，有这种完整病毒结构的颗粒才具有 感染性和复制能力。我们通常所说的乙肝病毒 就是指这种颗粒。
16
乙肝表面抗原 （HBsAg ）续三
注意事项： HBsAg是乙肝早期诊断的指标，但不是
唯一指标，应该结合流行病学，临床表现和实 验室检查进行综合判断。
17
2、乙肝表面抗体（抗-HBs ）
抗-HBs是人体感染乙肝病毒后产生的最主要 的保护抗体，一般在发病较早期出现。
抗-HBs的出现，表示有乙肝病毒感染或接种 过乙肝疫苗。
22
乙肝e抗体（抗-HBe ）续
综上所述，乙肝e抗体阳性的乙肝病毒携带者 通过乙肝病毒DNA(HBV-DNA)检测，可以分 为两大类：一类是病毒低复制，传染性低；另 一类是病毒复制伴有活动性肝病，HBV-治疗。
23
5、乙肝核心抗体（抗-HBc ）
如果发病后6个月还不消失，一般认为容易演 变成乙肝病毒慢性携带者。
15
乙肝表面抗原 （HBsAg ）续二
有相当一部分人感染了乙肝病毒后不会发病， 医学上称无症状HBsAg携带者。
如果这类人再感染甲，丙，丁，戊，庚型肝炎 病毒时，单凭HBsAg阳性与否来诊断乙肝，就 有可能造成误诊。
另有5%-10%的人感染乙肝病毒以后，在发病 早期就能清除HBsAg,在这种病人血清中， HBsAg检测是阴性的，而抗-HBc-IgM阳性， 如果单凭HBsAg阳性与否作出乙肝的诊断，就 有可能漏诊。
乙肝两对半的解读课件
乙肝两对半中某项指标阳性
总结词
可能存在乙肝病毒感染或疫苗接种史
详细描述
注意事项
需要进一步检查肝功能和乙肝病毒 DNA，以确定是否需要治疗。同时， 需要定期复查乙肝两对半，以监测病 情变化。
乙肝两对半中某项指标阳性表示受检 者体内可能存在乙肝病毒感染或曾经 接种过乙肝疫苗。
04 乙肝两对半与疾病状态的关系
这五项指标的变化可以反映乙型肝炎病 毒在体内的感染状态和免疫状况，对于 诊断、治疗和预后评估具有重要意义。
HBsAg阳性表示病毒在体内复制活跃， 具有传染性；HBsAb阳性表示机体已产 生免疫力，对病毒有一定的抵抗力。
乙肝两对半异常的疾病状态
HBsAg和HBcAb阳性
HBsAg和HBeAg阳性
表示病毒在体内复制活跃，具有传染性， 可能存在慢性肝炎或肝硬化。
表示病毒在体内大量复制，传染性强，可 能存在慢性肝炎或肝硬化。
HBsAb和HBcAb阳性
HBeAb和HBcAb阳性
表示机体已产生免疫力，对病毒有一定的 抵抗力，但病毒仍在体内复制，可能存在 慢性肝炎或肝硬化。
表示病毒复制减弱，传染性降低，但机体 仍存在免疫应答，可能存在慢性肝炎或肝 硬化。
乙肝两对半正常与异常的疾病状态比较
肝脏有损害的药物。
谢谢
THANKS
乙肝两对半的检测意义
01
判断是否感染HBV
通过检测HBsAg和HBcAb，可以确定个体是否感染了HBV。HBsAg阳
性表示正在感染HBV，而HBcAb阳性则表示曾经感染过HBV。
02 03
评估病情
HBeAg和HBeAb的检测可以用来评估病情的严重程度。HBeAg阳性表 示病毒复制活跃，传染性强，而HBeAb阳性则表示病毒复制受到抑制 ，传染性降低。
乙肝五项指标二对半ppt课件
·
11
9
9、急性感染早期或者慢性乙肝 表面抗原携带都传染性弱。
09.12.2020
·
12
10
10、慢性乙肝表面抗原携带者易转阴 或者是急性感染趋向恢复。
09.12.2020
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13
11
11、早期乙肝惑染或者慢性携带者， 传染性强。
09.12.2020
·
14
12
12、急性乙肝感染趋向恢复。 或者为慢性携带者。
09.12.2020
·
15
09.12.2020
·
4
2
2、急性乙肝感染阶段或是慢性 乙肝表面抗原携带者。 传染性弱些。
09.12.2020
·
5
3
3、乙肝已趋向恢复，属于慢性携带者。 传染性弱，长期持续此状态可转变为 肝癌。
09.12.2020
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6
4
4、既往感染过乙肝，现仍有免疫力， 属于不典型恢复期。 也可能为急性乙肝感柒期。
乙肝五项指标(二对半)的说明
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
乙肝五项正常检验结果
1.
乙肝表面抗原
(HBsAg)
2.
乙肝表面抗体
(HBsAb)
3.
乙肝e抗原(HBeAg)
4.
乙肝e抗体(HBeAb)
5.
乙肝核心杭体
09.12.2020
(HBcAb)·
2
乙肝检验结果
09.12.2020
·
3
1
1、俗称三大阳: 说明患者是慢性肝炎，有传染性. 处于活动期。
09.12.2020
·
7
5
5、既往有乙肝感染。 属于急性感染恢复期，少数人仍有传染性
(精选课件)ELISA2-乙肝两对半PPT幻灯片
(450nm处测定吸光度)。
.
结果判断及解释
COV=2.1 × OD阴性对照（ OD阴性对照低于0.05 按0.05计算）
阳性：OD样品≥COV 阴性：OD样品＜COV
检测有效性
OD阴性对照≤0.10，OD阳性对照≥1.0 OD空白对照≤0.015（双波长检测）
15
.
e抗体检测(竞争抑制法)
1. 准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 2. 配洗涤液：用纯化水按1:25将浓缩洗液稀释； 3. 加样品：每孔50ul，同时设阳性对照、阴性
12
.
e抗原检测(夹心法)
1. 准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 2. 配洗涤液：用纯化水按1:25将浓缩洗液稀释； 3. 加样品：每孔50ul，同时设阳性对照、阴性
对照和空白对照（不加样品）； 4. 加酶结合物：每孔50ul（空白对照不加）； 5. 孵育：贴上封膜，37 ℃反应30min；
13
6. 洗板：洗板机5次，每次洗液在孔中滞留 时间10-15s，并注满反应微孔；
.
7. 显色：先加显色液A50ul，再加入显色液 B50ul，贴上封膜，37℃反应15min(避 光)；
（注：显色从加入第一滴显色液B开始计时）
8. 终止：加终止液50ul；
9. 判读：终止反应后10min内完成。
14
处测定吸光度)。 8
.
结果判断及解释
COV=2.1×OD阴性对照 阳性：OD样品≥COV 阴性：OD样品＜COV
检测有效性
OD阴性对照≤0.10， OD阳性对照≥1.0 OD空白对照≤0.04（双波长检测）
9
.
表面抗体检测(夹心法)
1. 准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 2. 配洗涤液：用纯化水按1:25将浓缩洗液稀释； 3. 加样品：每孔加50ul，同时设阳性对照、阴
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宿主RNA聚合酶
修补正链
Ccc DNA
HBV的抗原抗体系统HBsAg和抗HBs1
白、大蛋白）。外模蛋白与其相应的抗体形成复合物与一些肝外 疾病有关。 HBsAg: 只具有抗原性，无传染性 急性自限性HBV感染：感染HBV后1－2周（11－12周）HBsAg 出现，持续1－6周（20周）。 ASC（HBV携带者）和CHB（慢性乙型肝炎）的HBsAg可持续 多年甚至终身。高滴度的HBsAg常表示病毒的高复制水平，低滴 度的HBsAg可能在感染恢复期时病毒低复制；或者在组织病变高 度活动时病毒和抗原已被部分清除。 少数可因病毒变异，以致HBsAg的抗原性有改变，与试剂抗体 的亲和性降低 。 HBsAg负反馈调节肝内CCCDNA的合成；目前认为其滴度与 肝内CCCDNA的量呈正相关。滴度与乙肝病毒的基因型有关.
乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV) 的结构
Dane’s 颗粒 小球形颗粒 管形颗粒
HBV属嗜肝脱氧核糖核酸病毒，其完整的病毒颗粒（即 Dane 颗粒）直径42nm。包括二部分：1、包膜蛋白即 乙型肝炎表面抗原(HBsAg) ，在肝细胞内合成，大量 释放于血循环中，其本身只有抗原性而无感染性。2、 核心部分：包括双股环状DNA，DNA聚合酶（DNA-P）， 核心抗原及E抗原，为病毒复制的主体，有传染性。
HBV感染的转归
急性HBV感染
婴儿期感染 85%~95 %
成年期感染 5%~10%
慢性HBV感染
慢性乙型肝炎
5年发生率12%~25%
肝硬化
5年发生率5%~15% 5年发生率20%~23%
肝细胞癌
肝移植
肝功能衰竭
慢性HBV感染的自然病程
免疫耐受 HBeAg HBV DNA 免疫清除 非活动或低复制期
HBsAg
再活动
anti-HBe
ALT
肝组织无明显异常 肝组织坏死炎症表现 活动性慢性乙型肝炎 肝硬化 肝组织无明显异常 肝组织坏死炎症 活动性慢性乙型肝炎 肝硬化
Lok ASF. N Engl J Med 2002; 346(22):1682 Yim HJ, Lok AS. Hepatology, 2006,43:S173-S181
研究Dane颗粒DNA结构发现，DNA分子 含有约3，200个核苷酸。它包括两个链； 一个长度固定的负链和另一长度不定的 正链。由于DNA生物合成是在多聚酶作 用DNA引物生长末端3′－OH与加入的脱 氧核苷酸的5'-磷酸基形成磷酸二脂键完 成的，因此，链的增生按5'-3'顺序进行， 而且加到链上的每种脱氧核苷酸是按模 板DNA的碱基配对互补规律进行，长链 在1,800或1,818核苷酸附近有一个制品。
后二者为HBV复制过程中过剩的病毒外 壳（HBsAg），不含核酸。 要认识乙肝，在我看来首先要知道什么 是乙肝病毒Dane 颗粒。 Dane 颗粒的来历：1970年D S Dane（戴 恩）在肝炎患者血清中发现具有传染性 的颗粒，称为Dane颗粒 （Dane‘particle），电子显微镜下可以 看到，HBsAg在乙肝患者血循环中以三 种形式存在，即园形颗粒、管形颗粒和 Dane颗粒。
乙肝病毒感染后基本无法从人体内完全清除。一则 cccDNA可能在患者肝内存活多年，二则乙肝病毒基因 很早就可能和肝细胞核整合。 微量HBVDNA对肝脏的影响：与癌变可能有关，乙肝病 毒再激活有关。
HBV DNA检测
HBVDNA聚合酶链反应PCR HBV DNA定性和定量检测：反映病毒复制 情况或水平，定量检测可判断复制程度、传 染性大小、抗病毒疗效。 PCR因方法和试剂的灵敏性有一检测的阈值， 不能表达极低复制水平的感染，因而并不能 代替血清标志物的检测。事实上HBVM的检 测与HBVDNA一样重要。在诊断、治疗及 预后的判断 等方面HBVDNA都不能替代。
慢性HBV感染临床诊断小结
携带者
慢性乙肝
隐匿性慢性乙 肝
乙肝 肝硬化
乙肝相关肝 癌
HBeAg+ 乙肝
HBeAg乙肝
代偿期
失代偿期
HBV携带 者(HBV DNA+)
非活动性 HBsAg携带者 (HBV DNA－)
轻、中、重
活动期和静止期
HBV的复制过程
HBV DNA 聚合酶
e cap
3.5kb
RNA pregenome
Dane’s 颗粒 小球形颗粒 管形颗粒
乙肝病毒（HBV）是一种DNA病毒，乙 肝病毒对人的肝脏“情有独衷”，在生物 学上它是嗜肝DNA病毒科 （hepadnavividae）家族中的一员。这个 家族中的病毒成员在哺乳动物和鸟类的身 上也都有发现，它们的结构、基因序列和 复制策略都非常相似，但是它们之间却不 会互相交叉。
浅谈乙肝两对半
乙肝两对半的最初来由
。。。
Blumberg 于1965年在澳大利亚土著人 血清中发现澳大利亚抗原 (表面抗原）.
HBV在我国感染率及发病率均高.
乙肝病毒两对半是我国约定俗成的俗称， 国际上统称乙型肝炎病毒血清标志。
乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV) 的结构
这个家族中的病毒成员除了对具体的器 官具有特异性，它们对寄主也同样有 “种族要求”，比如HBV就只对人和猩 猩有易感性。 乙型肝炎病毒（HBV）为专一的嗜肝病 毒，HBV感染者血清经电镜检查有3种病 毒颗粒：①Dane颗粒（HBV颗粒），外 壳蛋白为HBsAg，核心含有HBV-DNA及 HBVDNAp（DNA-多聚酶）、HBcAg、 HBeAg；②小球形颗粒；③管形颗粒。
核心颗粒的表面才是病毒真正的衣壳， 由乙肝病毒的核心抗原（HBcAg）组成。 HBeAg为HBcAg的可溶性成份，两者约 有75%的氨基酸序列相同，但二级结构 不同，各有特异的抗原决定族。临床上 在血液中只检测其可溶性成份。而 HBcAg在肝细胞内更容易被检测到。 Dane颗粒中的中心部位就是环状并且有 缺口的DNA双链和依附在上面的DNA聚 合酶。
短链的5'-末端通过长达250-300个核苷酸 的碱基配对而维持分子的环状结构。 DNA多聚酶作用不断延长短链3′端以修 补缺口。缺口可能与HBV的DNA在感染 细胞内的整合有关。 总而言之，Dane颗粒是一个完整的乙肝 病毒颗粒，存在于乙肝病毒携带者或乙 肝病人的血清或肝细胞中，它只能在电 子显微镜下才能被看到，临床上我们检 测乙肝病毒的抗原、抗体以及它的DNA 来判g的空壳， 而Dane颗粒中存在乙肝病毒核酸（即 DNA）。 Dane颗粒是具有感染性的完整的HBV颗 粒，呈球形，Dane颗粒直径只有42纳米， 乙肝病毒有包膜和核心两个部分，外壳 厚7—8纳米，就是HBsAg（乙肝表面抗 原）。核心颗粒直径28纳米，呈二十面 体立体对称。